实验室标准操作程序的模板血清天冬氨酸氨基转移酶
门冬氨酸氨基移换酶(AST)测定的标准操作程序
门冬氨酸氨基移换酶(AST)测定的标准操作程序【应用范围】体外检测血清、血浆AST浓度测定。
【适用仪器】Olympus AU-2700全自动生化分析仪。
【程序改变】严格遵循仪器、试剂说明书及校准品使用说明。
【方法学原理】 ASTL-天门冬氨酸+ α-酮戊二酸草酰乙酸+ L-谷氨酸MDH(苹果酸脱氢酶)草酰乙酸+ NADH +H+ L-苹果酸+ NAD+ + H2O【试剂】试剂1(R1):L-天门冬氨酸试剂2(R2):α-酮戊二酸试剂稳定性与贮存:试剂避光保存于2-8℃,若无污染,可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
2.校准品:DiaSys TruCal U。
3. 质控品:Randox Assayed Multiseral Level 1 and Level 2【标本收集与准备】1.血清或血浆标本根据实验室标准采集程序采集标本,适用标本为血清或肝素抗凝血浆(肝素钠抗凝结果高0.5mmol/l),不可从正在静脉滴注手臂上采血,上机标本不能有凝块,样品采集后2天内离心标本,分离血清,血清或血浆标本室温保存4天,冷藏7天,冷冻保存6个月。
【操作步骤】1.仪器测定参数设置Test Name:Sample: Volume L DilutiR1 L DilutiR2Sec. ODMethod FirstLMeasuring Firs Last LMeasuring LastANo-Lag-Time: Onboard2.试剂准备:将准备好的试剂置仪器试剂盘中(8℃)。
3.校准校准物的准备:将校准物从冰箱取出,冻干校准物按说明书加入蒸馏水复溶,轻轻颠倒混匀3次,不可用力震摇,室温放置30分钟至完全溶解;液体校准物从冰箱取出,室温放置15分钟以平衡至室温。
校准物的选择尽可能选择配套仪器厂家校准品。
亦可将校准液复溶后分装保存于-20℃冰箱中,每周校准一次或更换试剂批次后进行校准。
上机校准程序:[1]入界面。
[2] 用光标键选欲校准项目,。
生化试剂SOP标准操作程序(魅力)
⽣化试剂SOP标准操作程序(魅⼒)ALT/GPT 丙氨酸氨基转移酶试剂盒临床意义:本试剂盒适⽤于体外临床检验,⽤于测定⼈⾎清中丙氨酸氨基转移酶的活⼒。
临床上,有许多疾病会导致⾎清中丙氨酸氨基转移酶活⼒增⾼。
如肝胆类疾病:包括传染性肝炎、肝癌、肝硬变活动期、中毒性肝炎、脂肪肝、胆管炎;⼼⾎管疾病:包括⼼肌梗塞、⼼肌炎、脑出⾎等。
⼀些药物和毒物也可以引起ALT活性升⾼:如氯丙嗪、异烟肼、奎宁、酒精、铅、汞、有机磷等。
因此,⾎清丙氨酸氨基转移酶活⼒的测定可⽤于这些致病的诊断和监测,特别是⽤于肝胆类疾病的诊断和肝功能检测⽅法原理:上海科华⽣物⼯程股份有限公司的丙氨酸氨基转移酶试剂盒以IFCC1(国际临床化学委员会)推荐法为基础设计,采⽤两步法测定:丙氨酸氨基转移酶L-丙氨酸+ α-酮戊⼆酸-----------------------→丙酮酸+ L-⾕氨酸乳酸脱氢酶丙酮酸+ β-NADH + H+---------------→L-乳酸+ H2O + NAD+底物L-丙氨酸和α-酮戊⼆酸在丙氨酸氨基转移酶催化下,⽣成丙酮酸和L-⾕氨酸.其中丙酮酸在乳酸脱氢酶的催化下,⽣成了L-乳酸,并同时引起了β-NADH的氧化,使波长340nm处的吸光度下降.在⼀定底物浓度范围内,β-NADH的氧化所引起的340nm处吸光度的下降速率与⾎清中丙氨酸氨基转移酶活⼒成正⽐。
样本:病⼈准备:应空腹取⾎。
样本类型:新鲜⽆溶⾎现象的⾎清或EDTA抗凝⾎浆。
最少样品量:0.2ml。
样本稳定性:⾎清中的ALT在2~8℃可稳定7天,不推荐使⽤冰冻保存的样本2。
仪器与试剂:仪器:魅⼒1800⽣化分析仪试剂:上海科华⽣物⼯程股份有限公司的丙氨酸氨基转移酶试剂盒试剂准备:丙氨酸氨基转移酶试剂盒为即开即⽤的液体双剂型,⽆需特殊准备。
试验⽤试管的直径在12~16mm。
试剂组份:参见试剂盒内说明书。
注意事项:1.此试剂为体外诊断⽤。
2.试剂有毒,不要⼊⼝,吞下有害,如误服(包括内部接触)应⽴即寻求医疗保护。
天门冬氨酸氨基转移酶测定的标准操作规程
天门冬氨酸氨基转移酶测定的标准操作规程【目的】体外检测血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST )的含量。
【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP ,室负责人监督落实。
2.本SOP 的改动,可由任一使用本SOP 的工作人员提出,并报经下述人员批准签字:室负责人、科主任。
【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h ,不饮酒24h 后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外,对于体检者,采血的季节都应做相关记录,因为样本中各项目的含量有季节性变动,为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.静脉采血除非是卧床的病人,一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布,会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟,一般从肘静脉取血,使用止血带的时间不超过1分钟,穿刺成功后立即松开止血带。
【仪器设备】日立600全自动生化分析仪,低速离心机一、检测原理底物L-天门冬氨酸与α-酮戊二酸在天门冬氨酸氨基转移酶(AST )作用下生成草酰乙酸,生成的草酰乙酸在苹果酸脱氢酶(MDH )作用下转化成L-苹果酸,同时伴随着NADH 的氧化,引起在波长340 nm 处吸光度下降,下降速率与血清中AST 活力成正比。
谷氨酸草酰乙酸酮戊二酸天门冬氨酸---L L AST +−−→−+α酮戊二酸苹果酸草酰乙酸-++-−−→−++++αNAD L H NADH MD H二、试剂1.试剂本科使用上海科华生物工程股份有限公司AST 试剂盒,为液体双试剂,各组分如分:R1:Tris 缓冲液、β-NADH 、乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶(MEDH )R2:L-天门冬氨酸、α-酮戊二酸2.校准要求输入理论因数或使用科华生物配套校准品。
校准频次:空白定标:每日需做试剂空白定标。
三、操作1.分析参数:详见参数表。
2.操作步骤:签收样本→离心→上机检测→审核报告→签发报告→标本保存。
血清天门冬氨酸氨基转移酶测定
血清天门冬氨酸氨基转移酶测定1. 实验原理:国际临床化学学会(IFCC)推荐的紫外连续监测法,酶偶联反应式为:L-天门冬氨酸+ -酮戊二酸A S T草酰乙酸+L-谷氨酸草酰乙酸+ NADH +H+MDH苹果酸脱氢酶L-苹果酸+NAD++H2O在340nm波长下,监测NADH的氧化速率,即吸光度的下降速率与AST活性呈正比。
2. 标本:2.1 病人准备:12小时禁食。
2.2 类型:血清,肝素或EDTA血浆。
3. 标本存放:3天内的活性损失:2~8℃保存:<8%;15~25℃保存:<10%;标本稳定性:-20℃保存至少可稳定3个月。
4. 标本运输:常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准:标本溶血、细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂:欧泰克AST测定试剂盒6.1.1 试剂组成Tris缓冲液pH7.8 80mmol/LL-天门冬氨酸240mmol/LMDH(苹果酸脱氢酶) ≥600U/LLDH(乳酸脱氢酶) ≥1200U/La-酮戊二酸12mmol/LNADH 0.18mmol/L6.1.2 试剂准备:试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存试剂保存于2~8℃,若无污染,可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示:当试剂有看得见的微生物生长,有浊度,或者未开盖的液体有沉淀时,表明试剂已变质,不能继续使用。
6.1.5 注意事项:试剂中含叠氮钠(0.95g/L)为防腐剂。
不可入口!避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂。
6.2 校准品:使用罗氏公司提供的复合校准品对自动分析仪进行校准,具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
6.3 质控品:具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
7. 仪器:日立7060生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数:参见生化检验日立7060生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤:参见生化检验日立7060生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制:在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析,以2S为质控警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。
血清天门冬氨酸氨基转移酶测定
血清天门冬氨酸氨基转移酶测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目,确保检测结果的准确。
2 实验原理本试剂以国际临床化学联合会(IFCC)推荐方法为基础,所采用的反应原理与反应式如下。
⑴样本中的天门冬氨酸氨基转移酶催化L-天冬氨酸和α-氧代戊二酸氨基转移,生成草酰乙酸和L谷氨酸;⑵在还原型辅酶I(NADH+H+)和苹果酸脱氢酶(MDH)的存在下,草酰乙酸被还原为L-苹果酸,还原型辅酶I (NADH+H+)被氧化为辅酶I(NAD),从而使波长340 nm处的吸光度值下降。
通过对波长340 nm处吸光度值的下降速率进行监测,即可测得样本中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性L-天门冬氨酸+ -酮戊二酸AST草酰乙酸+L-谷氨酸草酰乙酸+ NADH +H+ MDH苹果酸脱氢酶L-苹果酸+NAD+3 标本3.1 病人准备:12小时禁食。
3.2 类型:血清。
3.3 标本存放:3天内的活性损失:2~8℃保存:<8%;15~25℃保存:<10%;标本稳定性:-20℃保存至少可稳定3个月。
3.4 标本运输:常温条件下保存运输。
3.5 标本拒收标准:标本溶血、细菌污染的标本。
4 实验材料4.1 试剂:上海复星长征医学科学有限公司AST试剂盒(沪食药监械(准)字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014)4.1.1 试剂组成试剂1(R1):乳酸脱氢酶>1365 U/L NADH 0.26mmol/ L-天冬氨酸300mmol/L Tris缓冲液 88mmol/L试剂2(R2):苹果酸脱氢酶>1635 U/L α氧代戊二酸36mmol/LTris缓冲液88mmol/L EDTA 5.0mmol/L 4.1.2 试剂准备:试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存:在2~8℃避光、密封的储存条件下,试剂盒自生产之日起有效期为12个月。
4.1.4 变质指示:当试剂有看得见的微生物生长,有浊度,或者未开盖的液体有沉淀时,表明试剂已变质,不能继续使用。
生化室标准操作程序
凤庆县人民医院质量管理体系文件生化室SOP文件编号:FQYY-LAB-SH-CZ-01~47第二版编制:鲁伟审核:李树荣批准:李树荣生效日期:2012年10月1日凤庆县人民医院检验科目录目录目录修订页临床标本采集程序1.目的:规范临床标本的采集,减少实验前的影响因素。
2.范围:适用于为协助疾病诊断和治疗而进行的临床生化样品采集活动。
临床样本包括血液、尿液、胸腹水等各种体液。
3.职责:临床生化实验室:指导临床各科室正确采集标本,提高实验结果的准确性。
4.程序:4.1 静脉血的采集:4.1.1 静脉血标本采集前病人应注意的问题:4.1.1.1 避免剧烈运动,一般主张抽血前24小时不做剧烈运动,清晨取血,住院病人可在起床前抽血,匆忙赶到门诊的人应至少休息15分钟后取血。
4.1.1.2 注意合理饮食。
除了急诊或其它特殊原因外,一般主张在禁食12小时后空腹取血,延长空腹时间(饥饿)或餐后血液的化学成分都会变化.饮酒对实验亦有影响。
4.1.1.3 药物的影响。
很多的药物进入人体后可影响某些化验项目的结果,病人在化验前应尽可能停服对实验有干扰的药物。
4.1.2 静脉血标本采集前医生、护士应注意的问题:4.1.2.1.检验申请单填写要求:检验申请单用钢笔或黑笔填写,使用正楷字,字迹清楚,填写完整。
填写内容包括:受检者姓名、性别、年龄、临床诊断、送检标本、检验项目、标本采集年月日时、申请医生及采样者签名。
4.1.2.2 采用一次性真空采血管,多项化验时应首先将血注入血常规管,然后是抗凝管(注意要正确使用抗凝剂),最后是非抗凝管。
4.1.2.3 采血时的体位建议以坐位5分钟后取血为宜,止血带使用应少于1分钟,以免引起血液淤滞,造成血管内溶血或血液某些成分的改变。
4.1.2.4 当一侧手臂输液时应从对侧手臂取血,以降低对血糖、血钾等实验结果的影响。
4.1.2.5 血标本应防止溶血,影响溶血的因素有:使用止血带时间过长;抗凝管使用不当或抗凝混合时过度振荡;容器污染;血液中泡沫注入试管;标本放置时间过长;突然受冷或受热及离心力过大等。
天门冬氨酸氨基转移酶测定
7.正常参考值:
男11~49U/L女11~40U/L(37℃)
建议各实验室建立自己的正常参考值范围
注意事项:
1.如果试剂变混浊或试剂空白吸光度值(340nm)小于1.0,试剂已失效。
2.如果标本中AST活力>700U/L(30℃)或>1000U/L(37℃),需用生理盐水稀释后测定,结果乘以稀释倍数。
测定管(T)
工作液
300μl
300μl
蒸馏水
15μl
-
标本
-
15μl
混合,置37℃孵育90秒,在主波长340 nm/辅助波长410nm下连续监测1~3分钟各管吸光度变化,计算ΔA/min。
6.结果计算:
AST活性(U/L)=(D A测定/min-D A空白/min)×3376(340nm/410nm,1cm光径)
3.精密度:批内CV:1.8~3.5%批间CV:2.2~3.8%
NADH
0.18mmol/L
LDH
≥0.8KU/L
MDH
≥0.6KU/L
-
-
R2
L-门冬氨酸
200mmol/L
α-酮戊二酸
12mmol/L
使用方法:
1.仪器要求:适用于各类自动生化分析仪或半自动生化分析仪。
2.标本要求:样品为空腹新鲜血清、EDTA或肝素抗凝血浆,溶血会产生干扰。
3.稳定性与保存:试剂在2~8℃避光保存可稳定一年。单试剂工作液2~8℃避光保存可稳定一周。
R1
200μl
200μl
蒸馏水
15μl
-
标本
血清谷草转氨酶测定标准操作规程
血清天门冬氨酸氨基转移酶标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请:血清天门冬氨酸氨基转移酶(缩写AST);组合项目申请:血生化中心肌酶谱、或肝功能测定。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml,不抗凝,置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本应记录采集时间、送检时间、接收时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态,对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足:少于0.3ml的全血标本,或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本,包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。
2.2.2标本保存时间:室温(15~25℃)下可稳定48h,普通冰箱中(2~8℃)稳定7天。
-20℃保存稳定30天。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩,对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
2.2.3 已完成测试的标本保持完整的识别号,置4~8℃冰箱内保存7天。
2.3 标本采集的注意事项2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动,和12h 以上禁食空腹状态。
2.3.2 一般采用血清,也可以使用EDTA 、枸橼酸盐、草酸盐抗凝的血液标本,但肝素抗凝剂可引起反应液混浊。
3 方法原理测定反应以如下的原理进行:+DH+TA 酸+NAD +NADH+苹果草酰乙酸草酰乙酸谷氨酸酮戊二酸门冬氨酸−−→−+−−→−-+M S H α AST 催化L-天门冬氨酸的氨基转移至α-酮戊二酸,生成草酰乙酸和L-谷氨酸。
MDH 催化草酰乙酸还原的同时将NADH 氧化成NAD +。
19、天冬氨酸氨基转移酶标准操作规程(AST-SOP)
前言为使临床检验操作规范化,指导检验人员严格按规程进行正确的常规操作,保证检验质量,特制定本操作规程。
本规程的编写遵循了ISO 15189《医学实验室——关于质量和能力的特殊要求》及WS/T 227-2002《临床检验操作规程编写要求》的有关规定并结合产品实际情况制订,作为本产品的标准操作程序。
本规程从2007年5月2日起实施,每2年复审1次。
本规程由浙江伊利康生物技术有限公司编制。
本规程起草单位:伊利康生物技术有限公司技术部。
本规程主要起草人:蒙凯、蔡其浩。
本规程首次起草。
目录1 检验申请 (3)2 标本采集与处理 (3)3 试剂及成份 (4)4方法原理 (4)5 仪器 (4)6 校准液及校准模式 (4)7质控品与室内质控规则 (4)8标本检测步骤 (5)9 结果计算 (5)10 操作性能 (5)11试剂使用的注意事项 (5)12参考范围及医学决定水平 (5)13检验结果的报告及范围 (5)14临床意义 (6)15结果审核分析以及相关项目的联系 (6)16威胁生命的“紧急值”及报告规定. (6)17有关引用程序与文件 (6)18参考文献附录A XXX型全自动生化分析仪参数天门冬氨酸氨基转移酶测定标准操作规程1.检验申请单独检验项目申请:血清天门冬氨酸氨基转移酶(Apartate Aminotransferase,缩写(AST/GOT)测定;组合项目申请:肝功能测定项目组合。
临床医生根据需要提出检验申请。
2.标本采集与处理2.1 受检者的准备:病人空腹12h,不饮酒24h后。
体检对象抽血前应有两周的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外,对于体检者,采血的季节都应做相关记录,因为样本中各项目的含量有季节性变动,为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2标本采集2.2.1除非是卧床的病人,一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布,会影响测试项目的浓度。
天冬氨酸氨基转移酶检验操作步骤
天冬氨酸氨基转移酶检验操作步骤下载提示:该文档是本店铺精心编制而成的,希望大家下载后,能够帮助大家解决实际问题。
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血清天门冬氨酸氨基转移酶速率法测定
血清天门冬氨酸氨基转移酶速率法测定1.实验原理Vitros AST试剂是一种干燥,多涂层的,在聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。
将一滴患者样品滴于干片上,样品就被分布层均匀地分布并渗透到下面的试剂层。
在磷酸吡哆醛的催化作用下,谷草转氨酶使天门冬氨酸的氨基向α-酮戊二酸转移生成谷氨酸和草酰乙酸,草酰乙酸在草酰乙酸脱羟酶的作用下生成丙酮酸和二氧化碳。
随后丙酮酸被丙酮酸氧化酶氧化生成乙酰磷酸酶和过氧化氢。
最后是过氧化氢与白色染剂在过氧化物酶的催化下生成一种有色染剂。
在37℃用反射仪可以测定白色染剂的氧化率,然后再将某一线性范围内反射强度变化率转化为以U/L为单位的酶活性度。
干片支撑层上的短波滤光剂可以减少入射光在有色染剂形成过程中的影响。
测定方式:速率法波长:670nm测试时间和温度:37℃约5分钟反应过程:AST,磷酸吡哆醛天门冬氨酸 + α-酮戊二酸————————→草酰乙酸 +谷氨酸草酰乙酸脱羟酶草酰乙酸————————→丙酮酸+二氧化碳丙酮酸氧化酶丙酮酸+磷酸盐+O2————————→过氧化氢+乙酰磷酸酶过氧化物酶过氧化氢+白色染剂————————→有色染剂2. 标本:2.1 病人准备:无特殊。
2.2 样品类型:血清;肝素锂/钠抗凝血浆。
2.3 标本采集与处理:样品采集后3天内以1000g最少离心10分钟,然后吸出血清。
特别要注意:样品不能含细胞物质,因为血小板中AST活性也很高,既使离心不足10分钟的新鲜血浆与新鲜血清的测试结果相比都有很大差异。
处理样品时要将其当成生物污染品。
3. 标本的存放:血清、血浆室温下最多3天;4~8℃冷藏最多1周;样品冷冻保存可达3个月。
4. 标本的运输:样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。
5. 标本拒收的标准:由于用草酸钾/氟化钠,枸掾酸和EDTA抗凝的标本结果负偏差>50%,因此不能使用。
此外,因为红细胞中AST活性很高,溶血标本也不能使用。
6. 试验材料:6.1 测试AST所需的物品包括:Vitros化学定标物Kit3;Vitros特制质控液;Vitros 7%BSA 稀释液。
血清天门冬氨酸氨基转移酶IFCC推荐方法测定
血清天门冬氨酸氨基转移酶IFCC推荐方法测定1. 实验原理:国际临床化学学会(IFCC)推荐的紫外连续监测法。
L-天门冬氨酸+ -酮戊二酸A S T草酰乙酸+L-谷氨酸草酰乙酸+ NADH +H+MDH苹果酸脱氢酶L-苹果酸+NAD++H2O2. 标本:2.1 病人准备:12小时禁食。
2.2 类型:血清,肝素或EDTA血浆。
3. 标本存放:3天内的活性损失:2~8℃保存:<8%;15~25℃保存:<10%;标本稳定性:-20℃保存至少可稳定3个月。
4. 标本运输:常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准:标本溶血、细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂:奥林巴斯AST测定试剂盒试剂1:;试剂2:6.1.1 试剂准备:试剂为即用式。
6.1.2 试剂稳定性与贮存试剂保存于2~8℃,若无污染,可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.3 变质指示:当试剂有看得见的微生物生长,有浊度,或者未开盖的液体有沉淀时,表明试剂已变质,不能继续使用。
6.1.4 注意事项:试剂中含叠氮钠(0.95g/L)为防腐剂。
不可入口!避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂。
6.2 校准品:使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准,具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
6.3 质控品:具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
7. 仪器:奥林巴斯AU2700生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数:参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤:参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制:在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II质控做为未知标本进行分析,以2S为质控警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。
质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。
11. 计算方法:以TruCal U复合校准品AST校准值校准仪器后,在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果。
天门冬氨酸氨基转移酶的测定
天门冬氨酸氨基转移酶的测定1.原理:ASTL—天门冬氨酸+a—酮戊二酸草酸乙酸+L—丙谷酸MOH草酸乙酸+NADH+ L—苹果酸+NAD+2.标本采集与处理:2.1受检者准备:病人必须空腹12小时,不饮酒24小时后采集血样。
2.2静脉采血:除非是卧床的病人,一般采血取坐位,从肘静脉取血,使用止血带的时间不超过1分钟,穿刺成功后立即松开止血带;2.3标本处理:2.3.1血清要迅速与血细胞分离,因红细胞中AST血清中AST的浓度高。
2.3.2血清中的AST能在室温(20—25℃)下保存24小时或者在4℃下保存1周。
2.3.3采血管要求:采血时要求使用一次性无菌注射器,一人一管,用后毁形,用500mg/L有效氯浸泡消毒30分钟,回收、焚烧、做好登记。
2.3.4标本拒收;接收标本应检查是否符合要求(有无溶血)试管是否填写完整,对不合格标本应重新采集。
3.试剂:3.1试剂成分与浓度(柏定生物工程(北京)有限公司)a—酮戊二酸12mmol/LNADH 0.18 mmol/L苹果酸脱氢酶(MOH) ≧1000U/L乳酸脱氢酶(LOH) ≧5000U/LL—天门冬氨酸 240 mmol/L3.2质控血清:应在测量未知样本的同时检测质控物并确保质控在可接受的范围内,并且结果必须在三个标准差范围内。
3.2.1质控品批号及范围:批号022431,范围*±2st和*±3s。
3.2.2保存环境:在2—8℃保存,有效期内稳定。
3.3试剂贮存及稳定性:试剂在2—8℃保存,可稳定至瓶签所示失效日期,复容后2—8℃可稳定一周.4.仪器:上海迅达公司的半自动生化分析仪XD811。
5.操作程序:5.1试剂准备:在室温中按瓶签标定的体积,定量加入新鲜去离子水,轻轻混匀至试剂完全溶解.5.2分析参数:方法:速率法;温度:37℃波长: 340 nm比色杯光径: 1cm5.3操作步骤:6.计算方法: 计算方法:样品中AST活动;AST(U/L)=A/分*FV1F= *1000=1746Vs*消光系数V1=反应总体积Vs=样品体积NADH在340㎜的毫克分子消光系数=6.37.1线性范围;1—1000U/L7.2如血清中AST活力超出范围,应用生理盐水稀释血清,重做,结果乘以稀释倍数。
天门冬氨酸氨基转移酶测定标准操作规程
天门冬氨酸氨基转移酶测定标准操作规程1.检验原理:(IFCC法)L-天冬氨酸和α-酮戊二酸在AST的作用下生成草酰乙酸和L-谷氨酸。
草酰乙酸在苹果酸脱氢酶作用下生成L-革果酸,同时还原型辅酶【(NADH)被氧化为氧化型辅酶I(NAZr),在340nm处测得吸光度呈下降趋势与AST活性成正比。
根据NADH吸光度下降程度计算AST的活力单位。
试剂内不含磷酸弼哆醛。
1.-天冬氨酸+α-酮戊二酸谷氨酸+草酰乙酸草酰乙酸+NADH+/T迎>L-苹果酸+Λ¼O'2.试剂主要组成成分时,-20°C保存7天,样本不可反复冻融!4.检验方法;仪器法(详见DF-603/DI-600标准操作规程)5.参考范围:6.检验结果的解释:6.1样本含量超出线性范围时,建议用0.9%(W∕V)的氯化钠溶液稀释样本。
6.2.单位换算:ukat∕L=U∕L*16.67×10^37.检验方法的局限性7.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7.2若试剂浑浊,或以水空白在34Onm处吸光度小于LoOO时不能使用。
7.3检验结果仅供参考,不作为临床诊断唯一依据。
8.试剂性能指标8.1试剂外观:无色透明液体,无悬浮物及沉淀。
8.2装量:不低于标识值。
8.3试剂空白8.3.1试剂空白吸光度:在34Onm处,光径ICm时,空白吸光度A2L0008.3.2试剂空白吸光度变化率:在34Onm处,光径ICm时,ΔA∕min≤0.0049.4线性区间:试剂的线性区间为[10-500]U∕L,在此线性区间内:a)线性相关系数r应不小于0.9900;b)[10-50]U∕L区间内,线性绝对偏差不超过±5U∕L;(50-500)U/L区间内,线性相对偏差不超过±10机8.5准确度:相对偏差应不大于±15%。
8.6分析灵敏度:在340nm处,光径Icm时,测量W/L的天门冬氨酸氨基转移酶时,吸光度变化4AU∕L∕min22Xl(Γ48.7精密度8.7.1批内精密度:CV≤5%8.7.2批间精密度:R≤10%9.临床意义:天门冬氨酸氨基转移酶(AST)亦称谷草转氨酶(GOT)属于转氨酶类,它能够通过氨基转移催化氨基与酮酸之间的相互转换。
血清天门冬氨酸氨基转移酶速率法测定
血清天门冬氨酸氨基转移酶速率法测定1.实验原理Vitros AST试剂是一种干燥,多涂层的,在聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。
将一滴患者样品滴于干片上,样品就被分布层均匀地分布并渗透到下面的试剂层。
在磷酸吡哆醛的催化作用下,谷草转氨酶使天门冬氨酸的氨基向α-酮戊二酸转移生成谷氨酸和草酰乙酸,草酰乙酸在草酰乙酸脱羟酶的作用下生成丙酮酸和二氧化碳。
随后丙酮酸被丙酮酸氧化酶氧化生成乙酰磷酸酶和过氧化氢。
最后是过氧化氢与白色染剂在过氧化物酶的催化下生成一种有色染剂。
在37℃用反射仪可以测定白色染剂的氧化率,然后再将某一线性范围内反射强度变化率转化为以U/L为单位的酶活性度。
干片支撑层上的短波滤光剂可以减少入射光在有色染剂形成过程中的影响。
测定方式:速率法波长:670nm测试时间和温度:37℃约5分钟反应过程:AST,磷酸吡哆醛天门冬氨酸 + α-酮戊二酸————————→草酰乙酸 +谷氨酸草酰乙酸脱羟酶草酰乙酸————————→丙酮酸+二氧化碳丙酮酸氧化酶丙酮酸+磷酸盐+O2————————→过氧化氢+乙酰磷酸酶过氧化物酶过氧化氢+白色染剂————————→有色染剂2. 标本:2.1 病人准备:无特殊。
2.2 样品类型:血清;肝素锂/钠抗凝血浆。
2.3 标本采集与处理:样品采集后3天内以1000g最少离心10分钟,然后吸出血清。
特别要注意:样品不能含细胞物质,因为血小板中AST活性也很高,既使离心不足10分钟的新鲜血浆与新鲜血清的测试结果相比都有很大差异。
处理样品时要将其当成生物污染品。
3. 标本的存放:血清、血浆室温下最多3天;4~8℃冷藏最多1周;样品冷冻保存可达3个月。
4. 标本的运输:样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。
5. 标本拒收的标准:由于用草酸钾/氟化钠,枸掾酸和EDTA抗凝的标本结果负偏差>50%,因此不能使用。
此外,因为红细胞中AST活性很高,溶血标本也不能使用。
6. 试验材料:6.1 测试AST所需的物品包括:Vitros化学定标物Kit3;Vitros特制质控液;Vitros 7%BSA 稀释液。
(完整word版)天门冬氨酸氨基转移酶检测标准操作规程
(完整word版)天门冬氨酸氨基转移酶检测标准操作规程科室:查验科题目:天门冬氨酸氨基转移酶检测标准操作规程页码: 1编号: 1第 0 次订正奏效日期:2012 年1 月1 日编写人拟订日期2012 年郑剑1 月1 日审查审查日期杜文卫2012年 1 月12 日同意同意日期2012杜文卫年 1 月12 日1、方法依照:深圳迈瑞生物医疗电子股份有限企业天门冬氨酸氨基转移酶测定方法2、合用范围合用于血清天门冬氨酸氨基转移酶的测定3、试剂仪器3.1 试剂:深圳迈瑞生物医疗电子股份有限企业原装试剂盒3.2 未开启的试剂盒避光保留于2℃— 8℃有效期一年。
试剂不能够冰冻。
4、操作程序4.1 方法原理ASTL—天门冬氨酸 +a—酮戊二酸草酸乙酸 +L —丙谷酸MOHL —苹果酸 +NAD +草酸乙酸 +NADH+4.2 样本要求新鲜血清或肝素血浆,样本采集后应赶快测定,一定避光保留,防止使用溶血样本。
4.3 上机操作4.3.1 试剂装载、校准、样品和质控血清剖析操作详见“ 《迈瑞 BS-220 全自动生化剖析仪标准操作、保护、养护规程》”4.3.2 校准“4.3.2.1 标准液的准备:校准品使用深圳迈瑞生物医疗电子股份有限企业配套冻干品,按说明书要求稀释后分装, -20℃冷冻保留,用前提早 15 分钟从冰箱拿出,复溶到室温后上机检测。
4.3.2.2 校准程序:每 30 天需要定标一次。
当有以下状况时需从头定标:1)换试剂批号或出现质控漂移时;2)当仪器做完养护后;3)仪器进行部件改换时。
每次试验前用准备好的校准品进行定标,定标通事后进行检测。
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ALT的医学决定水平分为20U/L、60U/L、300U/L3个水平。
9生物参考区间
5~40U/L
10临床意义
AST广泛存在于心肌、肝和骨骼肌,其中心肌含量最高,心肌梗死后6~12h开始增高,16~48h达到高峰,2~6d后恢复正常。各种急性肝炎、中毒性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、肝癌、胸膜炎、肾炎、肺炎等也可引起轻度增高。正常人AST/ALT比值为1.15。肝炎时AST和ALT一样明显升高,急性期由于ALT清除率较慢,往往ALT大于AST。恢复时也是ALT较慢,AST/ALT比值<1。如转氨酶升高且AST/ALT比值>1常说明有慢性肝炎的可能。肝硬化时AST/ALT比值明显升高(>3)。
第一节血清天冬氨酸氨基转移酶测定
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1检测方法和原理
天冬氨酸氨基转移酶(AST)多分布于心、肝及骨骼肌胞浆的线粒体中,AST与其同工酶m-AST的测定常用于心肌梗死和于肝胆疾病的诊断。采用速率法检测,检测原理为:天冬氨酸与α-酮戊二酸在AST作用下生成草酰乙酸,草酰乙酸加还原型辅酶Ⅰ(NADH),在苹果酸脱氢酶(MDH)作用下转化成L-苹果酸和氧化型辅酶Ⅰ(NAD+)。利用NADH在340nm波长有特征性吸收峰,可连续监测NADH被氧化速率,而求出AST活力。
11参考文献
深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司ALT测定试剂盒说明书。
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4.4.2运行:确认样本已经转载在样本盘上,点击【开始】。
4.5检测后标本保存
样本检测完毕后,保存于标本冷库内,按当天日期放好,保存期为7d。
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5定标程序
5.1定标液准备和储存
每瓶准确加5.0ml蒸馏水复融,轻轻旋转摇匀,室温放置30分钟待充分溶解后分装,-20℃可保存20d,2-8℃可稳定24h
3试剂和设备
3.1试剂
采用深圳迈瑞双液体试剂,有R1和R2两种试剂。
3.1.1试剂组成:R1试剂Tris缓冲液100mmol/L;L-天冬氨酸300mmol/L;LDH≥900U/L;R2试剂:α-酮戊二酸60mmol/L;NADH 0.9mmol/L。
3.1.2试剂准备:直接使用。
3.1.3试剂保存:未开启的试剂盒在2℃~8℃保存有效期为一年。试剂开瓶后应避光保存,在2℃~8℃可稳定28天。试剂不可冰冻。
严格按标500~3500r/min离心6~10min,分离血清上机测定。若标本不能及时测定,将分离的血清于2℃~8℃保存。
4.4标本检测
4.4.1样本申请
点击主菜单【日常操作】中的【样本申请】子菜单,或按F1键,或点击快捷按钮【样本申请】,即可进入“常规测试样本申请”面,选择样本盘号,样本号,点击需要做的测试项目,点击【申请】。
5.2定标条件
在室内质控失控、更换仪器主要零配件、进行仪器大保养后和定期定标时均需定标。
5.3定标程序
将复融后的定标液放在2号样本盘的相应项目的指定位置,点击开始即可运行。
6质量控制程序
6.1控制品准备和储存
平时保存在冰箱冷冻室,启用前取出,室温放置30min后使用,2-8℃可稳定72h。
6.2每天早上进行质控
3.1.4注意事项:接触皮肤、粘膜后应立即用清水冲洗。
3.2质控品
英国郎道公司(RANDOX)的血清质控物。
3.3校准品
英国郎道公司(RANDOX)的血清校准品。
3.4仪器
迈瑞BS-320全自动生化分析仪。
4操作程序
4.1检测过程流程
签收样品→离心→上机检测→审核报告→签发报告→标本保存。
4.2样品签收
6.3质控操作程序
与样本测试程序相同,待质控完成后将数据传输至质控软件。
7性能参数
本法线性范围为4~350U/L;紧密度:批内变异系数:≤3.5﹪;批间变异系数:≤5.0﹪;准确度:测定质控血清,测定结果在靶值范围内;分析灵敏度:本试剂盒的检测低限不高于4U/L。
对于超过测定线性范围的结果,用生理盐水对标本进行稀释再检测,结果乘以稀释倍数。
2标本采集及干扰因素
2.1采血要求及方法
空腹不抗凝静脉血2~3ml。
2.2标本保存
室温保存,及时送检。血清ALT在20~25℃可稳定24h,在2~8℃储存可稳定7d。
-20℃冰冻保存可稳定30d。
2.3注意事项
推荐选用血清,避免溶血,红细胞中ALT比血浆高约7倍,溶血时红细胞内ALT可进入血浆,导致结果偏高。胆红素>427.5μmol/L(25mg/dl)、血红蛋白>5g/L(500mg/dl)、三酰甘油>13mmol/L(500mg/dl)有明显干扰。标本避免脂血、溶血、黄疸。