常规培养基的制作演示文稿

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演示文稿-培养基及其制备技术.

演示文稿-培养基及其制备技术.
A. 对于其它渠道有可能带入的过多的某种无机离子和 微量元素在发酵过程中必须加以考虑
例:铁离子 青霉素发酵中,铁离子的浓度要小于20μ g/ml 发酵罐必须进行表面处理
B、使用时注意盐的形式(pH的变化) 例:黑曲酶NRRL-330,生产α-淀粉酶,pH对酶活的影响
不加 加 K2HPO4 加 KH2PO4
NaNO3 + 4H2 → NH3 + 2H2O + NaOH
无机氮源被菌体作为氮源利用后,培养液中就留下了酸 性或碱性物质,这种经微生物生理作用(代谢)后能形成酸 性物质的无机氮源叫生理酸性物质,如硫酸胺,若菌体代谢 后能产生碱性物质的则此种无机氮源称为生理碱性物质,如 硝酸钠。正确使用生理酸碱性物质,对稳定和调节发酵过程 的pH有积极作用。
2、半固体培养基(semi-solid medium) 液体培养基中加入少量的凝固剂而使之呈半固体状态
的一类培养基。(0.2~0.7%琼脂)。常用于观察细菌运动 特征,噬菌体效价鉴定以及厌氧菌培养等。 3、液体培养基(liquid medium)
不含任何凝固剂,其组分均匀,呈液体状态,用途广 泛。常用于微生物生理代谢的各种研究,也是大规模工业 发酵生产上普遍采用的培养基。
4、产物抑制剂 在发酵过程中加入抑制剂会抑制某些代谢途径的进行,同
时刺激另一代谢途径活跃,以致可以改变微生物的代谢途 径,从而获得人们所需的某种产物或使正常代谢的某一代 谢中间物积累起来。
2ATP 葡萄糖
2ATP
亚硫酸氢钠
2ADP
2ADP
3-磷酸甘油醛
1,6-二磷酸果糖
NAD+
丙酮酸 NADH+H+
什么叫 做流加?
用法:前体使用时普遍采用流加的方法

培养基Microsoft PowerPoint 演示文稿 (2)

培养基Microsoft PowerPoint 演示文稿 (2)

菌液制备操作步骤1无菌操作从斜面取1接种环菌苔2至10ml营养肉汤培养1618小时3取1ml到9ml灭菌生理盐水中作系列稀释4取适宜稀释级1ml注碟培养作菌数计数1ml1ml9ml9ml5选择含10100个ml的菌液为供试菌液培养基灵敏度检查方法试验菌液支数接种量培养时间100cfuml品种ml1ml金黄色葡萄球菌硫乙醇酸盐12铜绿假单孢菌同上12枯草芽孢杆菌同上12同上12空白1支同上12白色念珠菌改良马丁黑曲霉同上空白1支同上结果判定
培养基的储存
商品脱水培养基应避光储存于25℃以下阴凉 干燥处; 植被好的培养基应保存在2~25℃避光环境, 有条件置4℃冰箱冷藏储备更好。 非密闭容器配制的培养基应在三周内使用, 若密闭容器配制的培养基则可保存一年。
适用性检查
1无菌性检查 方法:每批培养基随机不少于5支(瓶),培养14 天,应无菌生长。 本检查可在供试品的无菌性检查前或与供试品的无 菌检查同时进行。 2灵敏度检查 菌种:所用的菌株传代次数不得超过5代。 供试菌液制备:制成<100cfu/ml菌悬液。 检查方法:每种供试菌液分别接种2管相应的培养基。 结果判定:加菌的培养基管均应生长良好。
5)选择含10~100个/ml的菌液为供试菌液
培养基灵敏度检查方法
试验菌液 → 接种培养基 → 每管装量 → 支数→ 接种量 →培养时间 <100cfu/ml 品种 (ml) 1ml (天) 金黄色葡萄球菌 硫乙醇酸盐 12 2 1 3 铜绿假单孢菌 同上 12 2 1 3 枯草芽孢杆菌 同上 12 2 1 3 生孢梭菌 同上 12 2 1 3 空白1支 同上 12 1 -3 白色念珠菌 改良马丁 9 2 1 5 黑曲霉 同上 9 2 1 5 空白1支 同上 9 1 -5 结果判定:空白对照管应无菌生长,若加菌的Байду номын сангаас养基管均生长良好,判 该培养基的灵敏度检查符合规定。

培养基及制备PPT课件

培养基及制备PPT课件

0.01
0.05
0.2
0.03
0.1
0.3
0.05
0.15
第36页/共67页
第37页/共67页
改进后培养基 原培养基
改进后培养基的发酵结果
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表3-1 Plackett–Burman设计筛选影响Y-21生长的关 键培养基组分
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表3-2 Plackett–Burman设计12次试验确定9种变量的影响
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结果: 碳源:乙酸钠 0. 2% 氮源:氯化铵 0.2% 酵母膏0.03% 无机盐: 复合无机盐0.05%
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▪ 正交设计确定优化的配方
正交分析表
水平
1 2 3
A(乙酸钠)/% 0.2 0.3 0.4
因素 B(NH4Cl)/% C(酵母膏)/% D(无机盐)/%
0.1
产物 前体
发酵生产中常用的前体
前体
产物
• 青霉素G 物
• 青霉素V • 金霉素 • 链霉素 • 红霉素
苯乙酸及衍生
苯氧乙酸 氯化物 肌醇、精氨酸 丙酸、丙醇
• VB12 • 葫萝卜素
• L-异亮氨酸
• L-色氨酸 酸
• L-丝氨酸
钴化物 -紫罗兰酮 - 氨基酸 邻氨基苯甲
甘氨酸
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促进剂(promoter):既不是营养物,又不是前体, 却能提高产量的添加剂。
第8页/共67页
3.无机盐
构成菌体的成分,作为酶的组成部分、酶的激活剂或 抑制剂、调节渗透压、pH值和氧化还原电位等
第9页/共67页
4.微量元素
例A:铁离子 青霉素发酵中,铁离子的浓度要小于20μg/ml 发酵罐必须进行表面处理

培养基成分及配制课件

培养基成分及配制课件

2
硼酸
3
硫酸锰
4
硫酸锌
5
钼酸钠
6
硫酸铜
7
氯化钾
KI H3BO3 MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCL2.6H2O
用量(mg/L)
0.83 6.2 22.3 8.6 0.25 0.025 0.025
培养基成分及配制课件
1.大量元素
2021/8/25 培养基成分及配制课件
29
2021/8/25 培养基成分及配制课件
3. 肌醇(环己六醇)
促进糖类物质的相互转化和活性物质作用的发挥 促进愈伤组织生长以及胚状体和芽的形成 对组织细胞繁殖、分化的促进作用 使用浓度100 mg/L
注:用量过多则促褐变
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2021/8/25 培养基成分及配制课件
4. 氨基酸
是很好的有机氮源,可直接被细胞吸收利用。 培养基中最常用的氨基酸是甘氨酸,其他的如精氨酸、
在离体培养条件下,不同种植物的组织对营养有不 同的要求,甚至同一种植物不同部位的组织对营养 的要求也不相同,只有满足了它们各自的特殊要求, 它们才能很好地生长。因此,没有一种培养基能够 适合一切类型的植物组织或器官。
3
2021/8/25 培养基成分及配制课件
在建立一项新的培养系统时,首先必须找 到一合适的培养基,培养才有可能成功。在植 物组织培养历史进程中,事实上也紧密地伴随 着培养基的研制史。
谷氨酸、谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常 用。
31
2021/8/25 培养基成分及配制课件
5. 天然复合物
为了特殊的培养目的,在一部分培养基中还添加了 一些特殊成分,如水解酪蛋白,水解乳蛋白,酵母提取 物,胰蛋白胨,椰乳,西红柿汁,香蕉粉,橘子汁,可 可汁等天然复合物以及活性炭,渗透调节剂等。

培养基及其配制PPT课件

培养基及其配制PPT课件
氯是光合作用水光解的活化剂 微量元素的主要作用是作为酶的辅助因子或激活剂参与代谢
的调节。
第11页,共50页。
缺铁症状:叶面呈绿色网纹状失绿。随病势发展,叶片 失绿程度加重,出现整叶变为白色,叶缘枯焦,引起落 叶。严重缺铁时,新梢顶端枯死。
桃 树
第12页,共50页。
缺铜症状:
新梢顶端叶片的叶尖失绿 变黄,叶片出现褐色斑点至扩 大变成深褐色,引起落叶。
◆对生长,分化等有很好的促进作用 ◆主要分为脂溶性维生素和水溶性维生素
◆常用维生素有VB1和VB6
第18页,共50页。
5、肌醇
◆环己六醇
◆细胞壁的构建材料 ◆参与碳水化合物、磷脂代谢及离子平衡等生理 活动 ◆促进活性物质发挥作用
第19页,共50页。
6、氨基酸 ◆蛋白质的组成成分 ◆有机氮源
◆可直接被细胞吸收利用 ◆培养基中常用的是甘氨酸
❖ 所谓母液是欲配制液的浓缩液。
❖ 意义: ①保证各物质成分的准确性 ②配制时的快速移取 ③便于低温保藏。
第33页,共50页。
母液的配制方法: 单配法:将培养基配方中的各种成分分别配成一定浓
度的母液。一般用mg/ml 。
混配法:将几类营养成分按配方中的用量扩大一定倍
数称量,分别溶解后再混合成母液。
第42页,共50页。
化合物名称
NH4NO3 KNO3 (NH4)2SO4 NaNO3 KCl CaCl2•2 H2O
Ca(NO3)2•4H2O MgSO4•7H2O Na2SO4 KH2PO4 K2HPO4 FeSO4•7 H2O Na2-EDTA Na-Fe-EDTA FeCl3•6H2O Fe(SO4) 3 MnSO4•4 H2O ZnSO4•7 H2O Zn (螯合体) NiCl2•6H2O CoCl2•6 H2O CuSO4•5H2O AlCl3 MoO3

常规培养基的制作演示文稿

常规培养基的制作演示文稿
第三十一页,总共八十页。
1.6鸡蛋和动物血清
鸡蛋和动物血清对一部分细菌来说是必须营养 成分,可作为养料直接被细菌利用。
常用于制备特殊培养基,如Braid-Praker琼脂 培养结核杆菌的罗氏培养基和白喉棒状杆菌的 吕氏血清培养基等。
此外鸡蛋和血清还具有凝固剂作用,便于观察 细菌菌落形态和生长情况。
第二十九页,总共八十页。
1.5血液
培养基中加入血液,可增加蛋白质、多种氨基 酸、糖类、无机盐等营养成分,同时还能提供 辅酶、血红素等特殊生长因子,供某些对营养 要求高的细菌生长繁殖之用。
此外,含血液的培养基还可以用于观察细菌溶 血反应,作为细菌鉴定的一项指标。
第三十页,总共八十页。
血平板溶血现象
主要有蛋白胨、牛肉浸液、牛肉浸膏、糖醇类、 血液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐类 等。
第二十四页,总共八十页。
1.1蛋白胨:蛋白胨是培养基中作为氮源应用 最广泛的基本成分,它用于合成菌体蛋白质、 酶类以及细菌生长繁殖。
其特点是易溶于水,吸水性强,故须干燥密封 保存。
此外,蛋白胨受高热不凝固,遇酸不沉淀,在 培养基中具缓冲作用,并含有各种游离氨基酸, 易被细菌所利用。
第三十五页,总共八十页。
3.凝固物质
配制固体培养基的凝固物质有琼脂、明胶和蛋白、血清等,最常 用琼脂,特殊目的也可用明胶等。
琼脂是从石花菜等海藻中提取出来的一种胶状物质,属多 糖类,一般不被细菌分解利用,无营养价值。
琼脂在98摄氏度以上融化,在低于45摄氏度时则凝固成胶冻
状态。
用途不同的培养基中琼脂含量不同,固体培养基含量为2%-
液体培养基: 主要用于工业生产;
固体培养基: 主要用于分离、鉴定等;
半固体培养基: 主要用于观察、保藏菌种。

实验5细菌培养基的制作ppt课件

实验5细菌培养基的制作ppt课件
3、培养基的其它成分:凝固剂、抑制剂、 指示剂
4、培养基的种类和用途
(1)按用途分类:
基础培养基:培养营养要求不高的细菌,如普通平板 营养培养基:能满足营养需求较高细菌的生长,如血平板 鉴别培养基:含有某些特定的底物,用于鉴别细菌,如克
氏双糖培养基(KIA) 选择培养基:具有选择性抑制作用,用于选择性的培养目
细菌污染的器材:消毒灭菌后再洗刷 ★盛培养基试管和平皿:高压灭菌→趁热倒出→洗 涤剂洗刷→清水冲洗; ★吸管:3%来苏浸泡→清水冲洗; ★玻片和盖玻片:3%来苏和清洁液浸泡→清水冲洗; 染色后的玻片,应肥皂水煮沸10min再洗涤; ★含油脂的器皿:单独灭菌。
玻璃器皿灭菌前的准备
玻璃器皿在清洗、干燥后必须经正确的 包裹和加塞后才能进行灭菌处理。
用途:
1、适用于玻璃器 皿、粉剂等的灭
菌; 温度160~170℃, 时间2h。 2、用作烘干。 高压蒸汽灭菌后 的某些物品如平
板的烘干 温度 60 ℃
超净工作台
(四)实验方法
1、常用玻璃器材的准备
玻璃器材的清洗 ★新购置的玻璃器材:1%~2%盐酸浸泡→清水清 洗 ★用过的无污染器皿:洗涤剂洗刷→清水清洗
实验五 培养基的制作
(一)实验目的要求
1、掌握培养基的制作程序; 2、熟悉常用培养基的种类及用途; 3、掌握培养基的消毒灭菌技术。
(二)培养基的成分、种类和用途
1、培养基的概念:是指人工配制的适合细 菌生长繁殖的综合营养基质。
2、培养基的营养物质:蛋白胨、肉浸液、 牛肉膏、糖醇类、血液、鸡蛋和动物血清、 生长因子、无机盐类、水
程序:
称量;熔化;分装(试管);灭菌;保存
2.半固体培养基:在肉汤中加入0.2%~ 0.5%的琼脂即成。25ml肉汤中0.1g琼 脂粉。
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离杂交瘤细胞
鉴别培养基 利用各种细菌分解糖类和蛋白质 的能力及其代谢产物的不同,即生化反应能力 不同,在培养基中加入特定的作用底物和指示 剂,以此来区别各种细菌。主要用于检查各种 细菌的生化反应。
如伊红—美蓝培养基可鉴别大肠杆菌,其代谢 产物有机酸与伊红—美蓝结合,使菌落呈现绿 色金属
大肠杆菌EMB平板
胰蛋白胨是胰蛋白酶在碱性条件下消化蛋白质所获得 的分解产物,其中含有很多氨基酸和多肽,特别是富 含色氨酸,更适合作靛基质试验用的蛋白胨水。
1.2牛肉浸液
牛肉浸液是将新鲜不含脂肪、肌膜、肌腱等精 牛肉浸泡煮沸制成的肉汁。
包括两类浸出物。一类为含氮可溶性浸出物 (如肌酸、尿酸、腺苷酸、黄嘌呤、核苷酸、 尿素、谷氨酸、肌肽等),另一类为非含氮浸 出物质(如肝糖、磷酸己糖、乳糖、琥珀酸、 肌醇、脂肪与无机盐等)。
主要有蛋白胨、牛肉浸液、牛肉浸膏、糖醇类、 血液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐类 等。
1.1蛋白胨:蛋白胨是培养基中作为氮源应用 最广泛的基本成分,它用于合成菌体蛋白质、 酶类以及细菌生长繁殖。
其特点是易溶于水,吸水性强,故须干燥密封 保存。
此外,蛋白胨受高热不凝固,遇酸不沉淀,在 培养基中具缓冲作用,并含有各种游离氨基酸, 易被细菌所利用。
常规培养基的制作演示文稿
第一节 基本理论
培养基的定义: 培养基是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物
所需要的各种营养物质,由人工配制而成的营 养基质,它专供微生物培养、分离、鉴别、研 究和保存用。 培养基的用途: 主要用于繁殖及分离纯化细菌、传代和保存菌 种、鉴别细菌种属、研究细菌生理及生化特性、 制造菌苗、疫苗和其他微生物制剂等。
沙门氏菌BS琼脂
沙门氏菌Xห้องสมุดไป่ตู้D(木糖赖氨酸去氧胆酸盐)琼脂
显色培养基 细菌在生长繁殖过程中可合成和 释放某些特异性酶,按酶的特性,选用相应底 物和指示剂,将其配制在相关培养基中。根据 细菌反应后出现的菌落颜色变化,确定待分离 可疑菌株,有助于细菌快速诊断。
副溶血性弧菌
副溶API 20E
2.按物理性状分类
增菌培养基 多为液体培养基,主要目的是增 加标本中目的菌数量,以提高目的菌检出率。
选择性培养基 在培养基中加入抑制物质,使 之具有选择性,有利于目的菌检出和识别,而 抑制其他非目的菌生长或者使其生长不佳。
加入青霉素等抗生素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真 菌
加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物 加入氨基嘌呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基:分
糖类是细菌生长繁殖所需的碳源、能源的基本成分。 最常用的单糖是葡萄糖、阿拉伯糖等;双糖是乳糖、
蔗糖等;多糖有菊糖和淀粉. 醇类有甘露醇、卫矛醇等。其他的糖类和醇类主要用
于发酵反应以及鉴定细菌。 糖不耐热,过久的高热会被破坏,在碱性及与氮源一
起高温情况下,破坏更快,制备这类培养基时,通常 不用高温,并与培养基中其他成分分别灭菌。
1.5血液
培养基中加入血液,可增加蛋白质、多种氨基 酸、糖类、无机盐等营养成分,同时还能提供 辅酶、血红素等特殊生长因子,供某些对营养 要求高的细菌生长繁殖之用。
固体培养基:含1.5-2%琼脂,用于细菌的分离、 鉴定、菌种保存及细菌疫苗制备等多方面
液体培养基
固体培养基
半固体培养基
液体培养基: 主要用于工业生产;
固体培养基: 主要用于分离、鉴定等;
半固体培养基: 主要用于观察、保藏菌种。
3.按成分分类
合成培养基 由化学物质和成分已知的各种物 质所组成,可以是无机盐和有机物质等。
一、培养基的分类
1.按用途分类: 基础培养基、营养培养基、增菌培养基 、选
择性培养基 、鉴别培养基 、显色培养基
基础培养基 含细菌所需最基本营养成分,可 供大多数细菌生长。常用的如含适量蛋白胨、 氯化钠、磷酸盐、pH7.2-7.6的营养肉汤和营 养琼脂。
营养培养基 基础培养基再加入一些其他营养 成分,如葡萄糖、血液、血清、酵母浸膏、生 长因子等,以满足营养要求较高的细菌生长繁 殖所需要的营养。
缺点:营养成分难以控制、实验结果的重复性较
差。
天然培养基如培养细菌的牛肉膏蛋白胨培养基; 血清、血浆、和组织提取液(如鸡胚和牛胚浸 液)。
合成培养基:
优点:化学成分及其含量明确、实验的可重复 性好;
缺点:配制繁琐、成本较高。
二、培养基的主要成分及其作用
1.营养物质:细菌在生长繁殖过程中所需要的 营养成分,因细菌种类不同而异,有的对营养 要求不高,仅需碳源、氮源即可;有的则要求 较高,除碳源、氮源外,还需要鸡蛋、血清、 血液等。
牛肉浸液可作为细菌氮源和碳源,但因含氮物 质较少,尚不能满足细菌生长需要。
1.3牛肉浸膏
为牛肉浸液经长时间加热,蒸发掉水分后浓缩 而成的膏状制品。
牛肉浸液中的不耐热物质如糖类等已被破坏, 因而其营养价值不如肉浸液,但其因不含糖和 使用方便,故可作肠道细菌鉴别培养基基础成 分。
1.4糖、醇类
天然培养基 由化学物质不完全清楚或各批物 质很难一致的天然物质所组成,如蛋白胨、牛 肉膏、血液、马铃薯等。
半合成培养基 由不明化学成分的天然物质和 已知化学成分的物质组成
天然培养基 化学成分不明确,主要用于工业生产;
合成培养基 化学成分明确,主要用于分类、鉴定。
天然培养基: 优点:取材便利、营养丰富、配制简便;
液体培养基 流体培养基 半固体培养基 固体培养基
液体培养基:不含凝固剂,利于菌体的快速繁殖、 代谢和积累产物
流体培养基:含0.05-0.07%琼脂粉,可降低空 气中氧进入培养基的速度,利于一般厌氧菌的 生长繁殖
半固体培养基:含0.2-0.8%琼脂粉,多用于细菌 的动力观察、菌种传代保存及贮运细菌标本材 料;
蛋白胨是动物或植物蛋白质经酶或酸碱分解而产生的 中间产物。
蛋白质消化越彻底,含氨基酸越多,越有利于细菌生 长繁殖。由于蛋白质来源不同,消化程度不同,制成 的胨质量相差很大。
通常的商品蛋白胨是由胃蛋白酶消化蛋白质而制成的 含胨、多肽及多种氨基酸的混合物,可供大多数细菌 生长需要。其缺点是含某些氨基酸较少。
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