常规电镜操作流程

常规电镜操作流程

以Spirit 120为例

1.电镜的日常维护

1.1如何加液氮

每天第一位使用的电镜的用户首先要检查电镜各项真空值是否正常，若正常可给电镜冷阱加注满液氮再观察使用。保持冷阱液氮液位的目的有二：（1）防止样品污染，（2）维持样品室真空度正常。

具体操作方法如下：将冷阱竖放置桌面上，向冷阱中倒入半罐液氮，待液氮表面平稳后，再将冷阱转移至电镜铜导线位置处，缓慢将铜导线放到冷阱中后放稳冷阱。完成以上步骤后再将冷阱中加满液氮，盖好盖子，冷却15分钟后再开始使用电镜。

1.2如何升/降高压

每日首位（最后一位）使用电镜的用户，需要给电镜升（降）高压，具体操作步骤如下：

（1）升高压（Sprit 120电镜为例）

在Workset_Setup界面中找到High Tension以及Filament两项。下拉菜单选中40 kV后，再点亮High Tension按钮（颜色由灰色变为黄色），观察Filament中Emission电流变化情况，待电流值基本不变后，点击High Tension下拉菜单旁边向右按钮，高压值由40 kV 增至60 kV，再次观察Filament中Emission电流变化情况，待电流值基本不变后，再点击High Tension下拉菜单旁边向右按钮增加高

压值，如此几次直至高压升至100 kV。

高压升至100 kV后，勾上High Tension界面最下端的Free high tension一项，更改升高压的步长为3 kV后，点击这一栏中向右按钮将高压升至103 kV，观察Filament中Emission电流变化情况，待电流值基本不变后，再点向右按钮将高压升至106 kV，如此几次直至高压升至115 kV。

高压升至115 kV后，再将每次加高压步长缩小至1 kV，点击向右按钮缓慢将高压升至120 kV。注意：每改变一次高压值均要等电流稳定后再继续升高压。电压升至120 kV后勾掉Free high tension这项。

（2）降高压（Sprit 120电镜为例）

在Workset_Setup界面中找到High Tension以及Filament两项。点击下拉菜单旁边向左按钮，将电镜高压由120 kV降至100 kV，观察Filament中Emission电流变化情况，待电流值基本不变后，再点击下拉菜单旁边向左按钮继续降电镜高压。高压降至20 kV后，点High Tension按钮（由黄色变为灰色），关闭电镜高压。

1.3如何做Cryo-cycle

每天最后一位使用完电镜的用户，需要给电镜做Cryo-cycle，主要目的是维持电镜良好的真空状态。

Cryo-cycle的具体操作步骤如下：（1）首先要检查物镜光阑是否退出、样品台是否归零、放大倍数是否降至是几十倍、光斑是否扩至最大。（2）保证以上步骤完成后，先关column，再关灯丝电流，再逐级降高压至20KV后再关掉High tension。（3）扶稳冷阱，缓慢将冷阱从电镜上转移至桌面，注意不要碰到铜导线。将多余的液氮倒回保温瓶中备用，冷阱放回制定位置平放保存。（4）点击Cryo-cycle，待出现倒计时且进行1分钟后再刷卡下机。

2.常温样品观察

2.1上样前准备

检查电镜真空状态，样品台是否归零，检查冷阱液氮液位。

2.2上样品

未通过中级以上考核用户需由已通过考核的陪同人上样。

2.3加灯丝电流

待Column真空值降到15以下后，点击Filament，按钮变为黄色即为开启状态。

2.4开Column

Column按钮灰色时为开启状态。

2.5低倍浏览样品大致情况

关灯后拿掉盖在电镜荧光屏上的黑色橡胶盖，调节电镜放大倍数至几百倍后移动样品台，快速浏览样品染色情况。点击Workset _search中的add，添加感兴趣区域到search界面。

2.6调整Z轴高度

几百倍下找到样品中的一个标志点（如脏东西），移动样品台使标志点处于荧光屏的正中心。顺时针旋转Magnification旋钮，调节电镜放大倍数至2000X至3000X，微缩光斑（逆时针旋转intensity）至充满荧光屏状态。点击Workset_stage界面右上方的小三角，打开隐藏界面，切换至control界面。点击control界面中的set alpha（变为黄色），使样品台倾转-15°，此时原处于荧光屏正中的标志物会偏移出中心位置，按右侧控制面板最右侧的Z axis的上键或下键，使标志物重回荧光屏的中心。再次点击set alpha（颜色由黄变灰），使样品台恢复为0°。

2.7插入侧插相机

顺时针旋转Magnification旋钮，调节电镜放大倍数至希望拍照倍数，同时逆时针旋转intensity按钮，缩拢光斑至满屏状态。荧光屏上盖上黑色橡胶盖，点击放在桌上的侧插相机控制手柄的绿色插入控制键（in），插入侧插相机。侧插相机控制界面选中live模式，移动样品台寻找合适的拍照位置。

2.8聚焦

打开侧插相机的傅里叶变换（Fourier Transform）窗口，旋转右侧控制面板focus旋钮（focus下旋钮控制每次调节的步长，上旋钮控制物镜电流），结合图像和FFT环的变化情况，找到正焦点。正焦时，图像颗粒边界模糊，FFT界面亮度均匀看不到环。欠焦时，图像颗粒边界为白色。过焦时，图像颗粒边界为黑色。找到正焦点后，点击下右侧控制面板的R2键重置defocus值为零，在此基础上调节focus旋钮至欠焦-3 μm左右观察样品（注：不同放大倍数下欠焦值设定不同，倍数越低，欠焦越大。50KX左右时，欠焦值调至-3

μm为宜）。

2.9拍照

找到合适区域点击侧插相机控制界面的Snapshot拍照。

2.10保存照片

点开侧插相机菜单栏中Acquisition settings项（形如DV）设置照片存储路径（Saving）和照片名称（Document Name_Snapshot）。

2.11下样前准备

点掉侧插相机的live关闭相机，点击放在桌上的侧插相机红色退出控制键（out），撤出侧插相机。逆时针旋转Magnification旋钮，降低放大倍数至几十倍，同时顺时针旋转intensity扩大光斑至最大。若使用了物镜光阑需退出。荧光屏上重新盖好黑色橡胶盖子。点击Workset界面stage_control中的holder项，使样品台归零。点击setup中的Column（变为黄色），关闭镜筒。点击Filament（变为灰色），关闭灯丝电流。Emission值为0后表示已经关闭。

2.12下样

未通过中级以上考核用户需由已通过考核的陪同人下样。

2.13刷卡下机并做实验记录登记