免疫组化
免疫组化
什么是免疫组化免疫组化是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。
免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自影法等。
（一）免疫组织化学技术的基本原理免疫组织化学技术是用显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项技术。
即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半抗原去免疫小鼠等实验动物，制备特异性抗体，再用这种抗体（第一抗体）作为抗原去免疫动物制备第二抗体，并用某种酶（常用辣根过氧化物酶）或生物素等处理后再与前述抗原成分结合，将抗原放大，由于抗体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的，因此，还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来（常用显色剂DAB显示为棕黄色颗粒）。
通过抗原抗体反应及呈色反应，显示细胞或组织中的化学成分，在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。
组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。
免疫学的基本原理决定了免疫组织化学技术具有高度特异性，因此，免疫组织化学技术从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，如角蛋白（keratin）显示上皮成分，LCA显示淋巴细胞成分。
只有当组织细胞中存在交叉抗原时才会出现交叉反应。
ABC法或SP法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合，所以免疫组织化学技术又具有敏感性高的特点。
免疫组化 定义和原理
免疫组化定义和原理免疫组化，这听起来是不是有点高大上的名字呢？其实呀，它就像是微观世界里的一个超级侦探呢！那免疫组化到底是啥定义呢？简单来说，免疫组化就是一种利用抗原与抗体特异性结合的原理，来对组织细胞中的某些特定抗原进行定位、定性和定量研究的技术。
你可以把组织细胞想象成一个超级大的社区，里面住着各种各样的居民，这些居民呢就相当于不同的抗原。
而免疫组化就像是拿着特殊的“身份证”（抗体）去这个社区里找特定的居民（抗原）。
比如说，我们想找到社区里那个穿红衣服的居民（特定抗原），那我们就拿着专门识别穿红衣服居民的“身份证”（特异性抗体），在这个大社区（组织细胞）里找呀找。
再来说说它的原理吧。
这原理可有趣啦！抗原和抗体就像是一把锁和一把专门开这把锁的钥匙。
每一种抗原都有它独特的结构，就像每一把锁的锁芯都不一样。
而抗体呢，就是根据抗原的这个独特结构制造出来的特殊“钥匙”。
当我们把含有抗体的试剂放到组织切片上的时候，这个抗体就会像小侦探一样，在组织细胞这个微观世界里到处寻找和它匹配的抗原。
一旦找到了，它们就会紧紧地结合在一起，就像钥匙插进锁里一样严丝合缝。
那找到之后怎么能让我们看到呢？这时候就有一些神奇的“小助手”出场啦。
比如说，我们可以给抗体带上一个有颜色的标记，就像给小侦探戴上一个彩色的帽子。
当抗体和抗原结合的时候，这个有颜色的标记就会显示出来，我们就能在显微镜下看到啦，就像在社区里看到那个穿红衣服的居民头上顶着一个彩色的气球一样显眼。
还有一些更高级的标记方法，像用荧光标记，在特殊的光线下，结合的地方就会发出漂亮的荧光，就像在黑暗里发现了闪闪发光的宝藏一样。
免疫组化在医学上可帮了大忙呢！比如说在肿瘤的诊断中，它就像是一个火眼金睛的小助手。
肿瘤细胞就像是隐藏在正常细胞中的“小坏蛋”。
免疫组化可以通过检测肿瘤细胞特有的抗原，来确定这个肿瘤是良性的还是恶性的，是从哪里起源的。
这就好比是发现了一个捣乱的家伙，然后通过他身上的一些特殊标记，知道他是从哪个地方来的，是小偷小摸的小坏蛋（良性肿瘤），还是特别危险的大坏蛋（恶性肿瘤）。
(整理)免疫组化知识
免疫组织化免疫组织化学免疫组织化学（Immunohistochemistry）又称免疫细胞化学。
它是组织化学的分支，它是用标记的特异性抗体（或抗原）对组织内抗原（或抗体）的分布进行组织和细胞原位检测技术。
1．发展简史——1941年Coons首先用荧光素标记抗体一检测肺组织内的肺炎双球菌获得成功。
60年代Nakane建立酶标抗体技术铁蛋白标记Ab技术。
——70年代Stemberger改良上述技术，建立辣根过氧化物酶——抗体过氧化物酶（PAP）技术，使免疫细胞化学得到广泛应用。
——80年代Hsu等建立了抗生物素一生素（ABC）法之后，免疫金一银染色法、半抗原标记法、免疫电镜技术相继问世。
——90年代分子杂交技术、原位杂交技术、免疫细胞化学分类方法迅速发展。
——2000年各种免疫组化技术更加成熟，使免疫组化技术成为当今生物医学中形态、功能代谢综合研究的一项有力工具。
其应用范围深达医学各个学科，是目前生命科学工作者应该掌握的基本技术之一。
2．免疫组织化学的技术分类（1）根据染色方式分成：①贴片染色；②漂浮染色。
（2）根据Ag—Ab结合方式分成：①直接法；②间接法；③多层法。
（3）按标记物的性质分成：①免疫荧光技术（免疫荧光法）；②免疫酶技术（酶标抗体法、桥法、PAD法、ABC法）；③免疫金属技术（免疫铁蛋白法、免疫金染色法、蛋白A金法）。
3．标记物（1）必要性：组织细胞内Ag—Ab结合反应一般是不可见的，若在镜下检测，则必须具有可视性标记物。
（2）常用标记物①荧光素：最常用的是异硫一氰酸荧光素（Fluoresceinisothiocyanate，FITC）荧光显微镜下呈绿色荧光四乙基罗达明（rho—damineRB200）——荧光显微镜下发橙红色荧光；②酶：辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶。
③生物素：（Biotin）④铁蛋白金等：主要应用于免疫电镜。
其他：如同位素（因涉及污染和防护难一般不用）4．应用凡是组织细胞内具有抗原性的物质，如肽类、激素、神经递质、细胞因子、受体、表面抗原等等均可用免疫组织化学方法显示，因而目前在基础与临床科研中被广泛应用。
免疫组化的原理
免疫组化的原理
免疫组化是一种利用抗体与其特异性抗原结合的反应来检测或定位特定分子的方法。
它主要基于抗体的高度特异性与高亲和力，能够识别并结合到抗原上。
免疫组化的过程一般包括固定组织、抗原还原、孵育抗体、洗涤、孵育二次抗体和检测。
具体步骤如下：
1. 固定组织：将待检测的生物组织固定在载玻片上，通常使用形式固定剂或冷冻剂进行固定。
2. 抗原还原：对固定组织进行抗原还原处理，以破坏抗原与抗体结合时的形态学阻滞并使抗原更易于与抗体结合。
3. 孵育抗体：将含有特异性抗体的抗体溶液加到载玻片上的组织切片上，允许其与目标抗原结合。
此时，如果组织中存在目标抗原，抗体就会与其结合形成免疫复合物。
4. 洗涤：通过洗涤步骤去除未结合的抗体，减少干扰性信号的产生。
洗涤通常使用磷缓冲盐溶液或其他缓冲溶液进行多次冲洗。
5. 孵育二次抗体：加入标记有酶、荧光物质或放射性同位素等的二抗溶液，使其与已结合的抗原-一抗复合物发生反应。
二次抗体通常是对多种一抗的特异性抗体。
6. 检测：使用相应的技术，如酶标记法、荧光标记法或放射性
探测等，检测二次抗体与抗原-一抗复合物的结合情况。
通过信号的产生和可视化，可以确定抗原的存在位置以及其表达程度。
总的来说，免疫组化是一种通过利用抗体与抗原间的特异性反应，实现对目标抗原的检测和定位的方法。
其原理主要是通过抗原-抗体的结合来实现对特定分子的识别和鉴定。
免疫组化基本步骤
免疫组化基本步骤
免疫组化是一种在组织中检测特定蛋白质表达的方法，以下是免疫组化的基本步骤：
1. 取得组织样本：从活体或已固定的组织中，取出薄片状的组织样本。
可以使用福尔马林或其他固定剂来固定组织。
2. 去除蜡块：如果组织样本是固定在蜡块中，需要将薄片状的组织样本从蜡块中剥离。
可以使用刮片或其他工具进行此步骤。
3. 抗原恢复：组织样本经过固定处理后，抗原的结构可能会发生变化，影响抗原的免疫反应性。
因此，需要进行抗原恢复步骤。
抗原恢复的方法包括热处理、酶消化、酸碱处理等。
4. 抗体染色：选择适当的一抗体来检测目标抗原。
一抗可以是单克隆抗体或多克隆抗体，并且应该针对目标抗原具有高度的特异性。
一抗可以标记有荧光染料、酶、金标或其他物质。
5. 二抗染色：将与一抗起反应的二抗添加到组织样本中。
二抗可以与一抗结合并形成复合物，用于增强抗原的检测信号。
6. 可视化：根据二抗的标记物不同，可以使用荧光显微镜、酶标仪或其他工具来可视化抗原的表达情况。
荧光染料会发出荧光信号，而酶标记会产生染色反应。
7. 图像分析：对可视化的图像进行分析，可以使用计算机软件自动计算或手动计数标记的细胞或组织区域。
以上是免疫组化的基本步骤，但具体的操作方法可能会根据实验的具体要求而有所不同。
免疫组化操作步骤
免疫组化操作步骤
免疫组化是一种常用的实验技术，用于检测和鉴定生物样本中的特定分子。
下面我会给出大致的免疫组化操作步骤，供你参考。
1.样本处理：将生物组织或细胞样本获取并处理成合适的形式，如切片或细胞悬液。
2.预处理：对于组织样本，可以使用甲醛等固定剂或冰冻保存。
对于细胞样本，也可以用1%的乙醇醋酸钠或甲醛冷冻保存。
3.抗原结构暴露：对于组织样本，可以使用抗原恢复液如缓冲盐水或热诱导抗原恢复等来暴露抗原结构。
对于细胞样本，可以用洗涤缓冲液洗涤，以去除细胞外蛋白质，并暴露出内部抗原。
4.阻断非特异性结合：使用非特异性结合物（如牛血清白蛋白、大肠杆菌蛋白等）进行阻断，以减少非特异性的背景信号。
5.抗体结合：加入目标抗体，与待测分子特异结合。
6.洗涤：洗涤掉未与抗体结合的废液，减少背景信号。
7.二抗结合：加入辣根过氧化物酶标记的二抗，与目标抗体结合，形成目标抗体-二抗复合物。
8.再次洗涤：冲洗掉未与二抗结合的废液，减少背景信号。
9.底物添加：加入染色底物，辣根过氧化物酶催化产生可见信号。
10.反应停止：停止底物活性，如加入酸性溶液。
11.显微镜观察：将样本放置在玻璃载玻片上，使用显微镜观察并记录结果。
12.图像分析：使用光学显微镜或荧光显微镜等设备获取图像，使用图像分析软件进行定量分析。
需要注意的是，实际操作中会根据具体的实验目的和技术要求进行适当的修改和调整。
免疫组化在科学研究和临床诊断中都有广泛应用，可以用于检测肿瘤标志物、病原体、免疫相关分子等，对于疾病诊断和治疗具有重要意义。
免疫组化方法
免疫组化方法
免疫组化是一种常用的实验技术，用于检测组织或细胞中特定蛋白质
的表达和定位。
其基本原理是利用特异性抗体与目标蛋白质结合，再通过
染色或荧光标记等方法来检测抗体与蛋白质的结合情况。
免疫组化方法主
要包括以下几个步骤：1.样品制备：将组织或细胞样品固定、切片或涂片
等处理，以便于后续的抗体结合和检测。
2.抗原修复：对于某些抗原易于
失活或难以检测的样品，需要进行抗原修复处理，如加热、酶解等，以恢
复抗原的结构和活性。
3.抗体结合：将特异性抗体加入样品中，与目标蛋
白质结合形成免疫复合物。
抗体可以是单克隆或多克隆，也可以是直接标
记或间接标记的。
4.洗涤：用缓冲液洗涤样品，去除未结合的抗体和杂质，以减少假阳性的干扰。
5.检测标记：将荧光标记、酶标记或金标记等标记
物加入样品中，与免疫复合物结合，以便于检测和定位。
6.显色或荧光：
通过染色或荧光显微镜等设备，观察样品中的免疫复合物的分布和定位，
以确定目标蛋白质的表达和定位情况。
总之，免疫组化方法是一种高灵敏度、高特异性的实验技术，广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物开
发等领域。
免疫组化简要步骤
免疫组化是一种用于检测细胞或组织中特定抗原的方法。
以下是免疫组化的简要步骤：
1. 样本固定：将待检测的组织样本或细胞样本固定在载玻片上，通常使用福尔马林或乙醇等化学物质进行固定。
2. 抗原恢复：对于一些组织样本，固定后的抗原可能会变性，需要进行抗原恢复步骤，以使抗原恢复其天然的形态和可检测性。
抗原恢复可以通过热处理、酶解或化学处理等方法实现。
3. 阻断非特异性结合：在进行免疫染色之前，需要使用一种非特异性抗体或蛋白质（如牛血清蛋白）来阻断非特异性结合位点，以减少假阳性结果。
4. 抗体结合：将特异性的一抗（一般为单克隆或多克隆抗体）加入样本中，与待检测的抗原结合。
一抗可以是直接标记的，也可以是未标记的。
5. 洗涤：洗涤去除未结合的一抗，以减少背景干扰。
6. 二抗结合：加入与一抗来源不同物种的二抗，该二抗能够与一抗结合并标记有荧光素、酶或其他可视化标记。
二抗的选择取决于一抗的
种类。
7. 再次洗涤：洗涤去除未结合的二抗。
8. 可视化：根据二抗的标记方式，使用荧光显微镜、酶标仪或其他适当的设备对样本进行可视化。
9. 分析和解释：观察和分析样本中的标记信号，并根据标记的位置和强度来解释结果。
需要注意的是，具体的免疫组化步骤可能会因实验目的、样本类型和使用的抗体等因素而有所不同。
以上步骤仅为一般性的简要流程，实际操作中可能会有一些细微的差异。
免疫组化原理步骤及试剂
免疫组化原理步骤及试剂免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是一种广泛应用于生物医学领域的实验技术，用于检测组织切片中特定抗原的分布和表达水平。
它结合了免疫学和组织学的原理，能够在组织切片上定位和检测抗原，并通过染色方法将抗原可视化，从而实现对抗原的定性和定量分析。
免疫组化实验的步骤通常包括固定、脱脂、抗原修复、抗体和检测步骤。
下面将详细介绍每个步骤的操作和常用试剂。
1.组织固定：组织固定的目的是保持组织结构完整并固定细胞的抗原。
常用的固定试剂包括10%中性缓冲福尔马林（10% neutral buffered formalin，NBF）和乙醇等。
2.脱脂：脱脂是将组织切片中的脂质去除，以提高抗体对抗原的结合效率。
常用的脱脂试剂包括二甲苯、甲醛和乙醚等。
3.抗原修复：抗原修复是为了使被固定的组织恢复原样，增强抗原的可检测性。
抗原修复的方法包括热处理、酶解法和pH调整等。
常用的抗原修复试剂包括热解剂例如EDTA缓冲液、Tris-EDTA缓冲液，酶解剂例如胰蛋白酶和蛋白酶K，以及甲酸、盐酸等酸性溶液。
4.抗体：5.检测：检测步骤用于将抗原-抗体复合物可视化。
这通常通过染色方法完成。
常用的染色方法包括免疫酶标记、免疫荧光和免疫金标记等。
免疫组化实验所需的试剂种类繁多，下面列举一些常用的试剂：1. NBF（10% neutral buffered formalin）：用于组织固定，保持组织形态完整。
2.二甲苯：用于脱脂步骤，去除组织中的脂质。
3.甲醛：用于脱脂步骤。
4.乙醚：用于脱脂步骤。
5.EDTA缓冲液：用于抗原修复的热解剂。
6. Tris-EDTA缓冲液：用于抗原修复的热解剂。
7.胰蛋白酶：用于抗原修复的酶解剂。
8.蛋白酶K：用于抗原修复的酶解剂。
9.盐酸：用于抗原修复的酸性溶液。
10.一抗：选择特异性良好的一抗抗体，常用的有多克隆和单克隆抗体。
11.二抗：用于检测一抗结合的抗体，常用的二抗有反兔、反小鼠或反人的多克隆抗体。
免疫组化定位
免疫组化定位
免疫组化定位是一种生物化学技术，用于检测和定位细胞或组织中特定蛋白质的存在和分布。
其原理是利用特定抗体与目标蛋白质结合，然后通过染色或荧光标记等手段进行可视化，从而确定目标蛋白质在组织中的位置。
免疫组化定位可以在细胞和组织级别上进行蛋白质定位分析。
一般的步骤包括固定细胞或组织样品、抗原修复、孔隙堵塞、抗体孵育、洗涤等，最后使用染色剂或荧光标记进行显色或荧光显微镜观察。
通过可视化的结果，可以确定目标蛋白质在细胞器、细胞膜、细胞核等位置的分布和表达情况。
免疫组化定位在生物医学研究中广泛应用，如研究细胞分化、细胞增殖、蛋白质相互作用等。
此外，免疫组化定位还可用于诊断疾病，如肿瘤细胞表面标记物的检测、病毒感染细胞的鉴定等。
通过免疫组化定位，可以在细胞和组织水平上观察和研究蛋白质的空间分布和功能定位，为生物医学研究和临床诊断提供重要信息。
免疫组化标准
免疫组化标准免疫组化（immunohistochemistry，IHC）是一种常用的实验技术，用于检测组织样本中特定蛋白质的表达水平和定位情况。
它结合了免疫学和组织病理学的原理和技术，通过特异性抗体对目标蛋白质进行识别并标记，使其在组织切片中可视化。
在进行免疫组化实验时，需要使用一系列试剂和设备。
以下是常见的免疫组化标准及相关参考内容：1. 标本制备：- 收集组织样本并将其固定在适当的组织固定剂中，如10%中性缓冲福尔马林溶液，并在适当时间内进行固定。
- 将固定的组织样本加工成薄切片，通常为4-5微米厚。
- 将切片贴附在玻片上，通常使用聚-L-赖氨酸涂层的玻片。
2. 抗原恢复：- 如果抗原已被固定或掩盖，需要进行抗原恢复步骤，以增强蛋白质的可检测性。
- 常用的抗原恢复方法包括热诱导抗原恢复、酶诱导抗原恢复和化学诱导抗原恢复。
3. 抗体选择：- 选择合适的一抗体，具有高度特异性和亲和力。
- 需要对一抗体进行充分的优化实验，包括适当的浓度和反应时间。
4. 标记物选择：- 常用的标记物有酶标记、荧光标记和金标记等。
- 选择合适的标记物需要考虑可视化要求、信号持久性和试剂耐久性等因素。
5. 染色步骤：- 彩色染色法：通常使用二抗（与一抗特异结合）来增强免疫反应，并使用染色剂如二亚甲基蓝（DAB）或新洋红等来产生可视化信号。
- 荧光染色法：使用荧光标记的二抗，通过荧光显微镜观察标志物的定位。
6. 阳性和阴性对照：- 需要同时进行阳性和阴性对照实验，以验证免疫反应的特异性和可重复性。
- 阳性对照通常是已知表达目标蛋白的组织样本，而阴性对照则是将一抗体或二抗体替换为非特异的抗体。
7. 图像分析：- 使用合适的显微镜观察和记录免疫组化染色结果。
- 可使用计算机软件进行定量和定位分析。
8. 数据分析和结果呈现：- 对结果进行统计学和图像分析。
- 将结果以数据表格、图形和图片的形式呈现。
以上是免疫组化标准及相关参考内容，这些步骤和指南可用于免疫组化实验的设计和执行，以确保获得准确、可靠和重复性的结果。
免疫组化是什么意思
免疫组化是什么意思免疫组化是一种常用于分析生物组织或细胞的实验技术，通过使用特定的抗体和染色试剂，可以检测和定位特定的蛋白质或分子在组织或细胞中的表达情况。
在医学、生物学和生物医学研究领域，免疫组化技术被广泛应用于诊断疾病、研究细胞生物学过程以及评估药物的疗效。
免疫组化的原理基于免疫学的核心概念，即抗原与抗体的特异性互相结合。
抗原是指能够诱导免疫系统产生抗体的分子，而抗体则是由免疫系统产生的特异性蛋白质，可以与抗原结合形成稳定的复合物。
免疫组化利用这一原理，使用特异性抗体与待检测的蛋白质结合，然后通过染色试剂的辅助作用，使该蛋白质在组织或细胞中形成可见的沉积物。
在实际操作中，免疫组化通常需要以下步骤：取得待检测的生物组织或细胞样品，首先进行固定和切片处理，以保持样品的形态结构。
然后将切片进行抗原修复处理，以恢复组织中蛋白质的三维结构，增强抗体与抗原的结合效果。
接下来，样品与特定的抗体进行孵育，抗体与待检测的蛋白质结合。
为了可视化抗原抗体复合物，通过染色试剂的作用，使抗原抗体复合物形成可见的染色沉积物。
染色沉积物的颜色和位置可以反映出目标蛋白质在组织或细胞中的表达情况。
通过免疫组化技术，研究人员可以获得目标蛋白质在组织或细胞中的空间分布信息。
例如，在肿瘤研究中，免疫组化技术可以检测癌细胞中增殖标记物的表达情况，帮助判断肿瘤的恶性程度以及预测患者的预后。
此外，免疫组化还可以用于研究细胞信号传导通路、免疫反应以及发育过程中关键分子的定位和表达。
然而，免疫组化技术也存在一些限制和挑战。
首先，由于不同抗体的特异性和亲和力可能存在差异，需要进行严格的抗体验证，确保其特异性和可靠性。
其次，免疫组化的结果通常是主观的，需要经验丰富的操作人员进行解读和分析。
此外，由于样品处理和染色过程中多个步骤的影响，免疫组化结果的重现性可能受到影响。
随着技术的发展和进步，免疫组化技术也不断更新和改进。
例如，引入了自动化设备和图像分析软件，可以提高实验的效率和结果的准确性。
免疫组化怎么做
免疫组化怎么做
免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是一种在组织切片中使用抗体标记的方法，用于检测和定位特定蛋白质在组织中的表达和分布情况。
下面是免疫组化的一般步骤：
1. 固定组织：采集组织样本后，使用适当的组织固定剂将组织固定，以保持其形态和结构。
2. 切片制备：将固定的组织样本进行蜡块包埋或冷冻切片，并进行切片制备，以获得薄片。
3. 抗原恢复：在切片上进行抗原修复，以恢复抗原的免疫活性。
这通常通过热处理（如在高压锅或微波炉中加热样本）或酶消化来实现。
4. 阻断非特异性结合：使用一定的阻断剂，如动物血清或蛋白质阻断剂，来阻断非特异性结合。
5. 一抗反应：将待检测的一抗加入切片中，使其与靶蛋白结合。
一抗通常是通过小鼠或兔子产生的单克隆或多克隆抗体。
6. 二抗反应：加入与一抗同种动物种属产生的二抗，如小鼠或兔子抗小鼠或兔子的二抗。
这些二抗可以与一抗结合，从而形成复合物。
7. 可视化：使用适当的检测系统（如酶标法、荧光法或金标法）来对二抗进行可视化，以显示靶蛋白的定位和表达情况。
8. 盖玻片：将切片洗涤并用透明包玻片覆盖。
9. 观察和分析：使用显微镜观察组织切片，检查靶蛋白的表达和分布情况。
根据需要，可以使用计算机图像分析系统对切片进行定量分析。
以上是免疫组化的一般步骤，实际操作中可能会根据具体实验目的和试剂的不同进行一些微调和优化。
免疫组化标准
免疫组化标准
免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）是一种常用于诊断和研究的技术，用于检测细胞和组织中特定抗原的存在和定位。
在免疫组化中，标准化是非常重要的，以确保结果的准确性和可重复性。
免疫组化标准通常包括以下几个方面：
1. 抗体选择：根据研究或诊断的需要选择合适的抗体，并确保抗体具备高度特异性和敏感性，以避免非特异性或假阳性的结果。
2. 样本处理和预处理：对组织样本进行固定、切片和染色前的预处理非常重要。
标准化的预处理步骤包括脱水、脱脂、抗原恢复和阻断非特异性结合。
3. 正确的染色程序：免疫组化染色的步骤包括抗原恢复、阻断非特异性结合、一抗孵育、二抗孵育、显色和染色核红剂。
每个步骤的时间和温度都需要严格控制，以确保可重复性和一致性。
4. 阴性和阳性对照：标准化的免疫组化需要包括阴性和阳性对照样本。
阴性对照样本是未表达目标抗原的组织或细胞，阳性对照样本是已知表达目标抗原的组织或细胞。
这些对照样本可以用来验证染色方法的准确性和可靠性。
5. 标准化的评估和解释：标准化免疫组化的结果需要由经验丰
富的病理学家或研究人员进行评估和解释。
对于定量分析，可以使用计算机图像分析软件来标准化评估和解释结果。
总之，免疫组化的标准化是确保结果准确和可重复的关键步骤。
只有遵循标准化程序和步骤，才能获得可信赖的免疫组化结果。
免疫组化
第一抗体就是能和非抗体性抗原特异性结合的蛋白。
种类包括单克隆抗体和多克隆抗体；第二抗体是能和抗体结合，即抗体的抗体，其主要作用是检测抗体的存在，放大一抗的信号。
二抗是利用抗体是大分子的蛋白质具有抗原性的性质，去免疫异种动物，由异种动物的免疫系统产生的针对于此抗体的免疫球蛋白。
用抗AIV H5亚型血凝素单克隆抗体为包被抗体,兔抗AIV IgG为第二抗体。
免疫组化是融合了免疫学原理（抗原抗体特异性结合）和组织学技术（组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等），通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色，来对组织（细胞）内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。
样本是细胞或组织，要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。
elisa（酶联免疫吸附试验）用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别，操作上开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上，这就是“吸附”的含义。
免疫组化和elisa所用到的原理大致相同，只是因为所检测的样品不同，从而在操作方法上有所不同。
Elisa多用于定量分析，其灵敏度非常高。
western bolt先要进行SDS-PAGE，然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上，而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品，可以用于定性和半定量。
免疫学三大工具，免疫组化、Western、ELISA，分别用于定位，定性和定量。
以下western 和Elisa的区别不是原创，是找的资料。
western blotting 可以看到特异性的条带，但是定量比较烦elisa可以直接读出浓度，但是如果抗体有非特异性结合，那得到的数值就不可信。
WB只能半定量,但是可以检测细胞膜蛋白,这点ELISA做不到ELISA可用定量方法检测蛋白,也就是说可以观察不同浓度刺激物对目的蛋白的影响WB所检测的一般是抗原，而Elisa抗原抗体都可以检测。
免疫组化pdca案例
免疫组化pdca案例
免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是一种用于检测组织
标本中特定蛋白质的方法。
PDCA（Plan-Do-Check-Act）是一种持续
改进的管理方法。
结合免疫组化和PDCA方法，可以在临床和科研领
域中发挥重要作用。
举例来说，假设我们想要研究一种特定蛋白在肿瘤组织中的表
达情况，并且希望通过持续改进的管理方法来优化实验流程。
首先，我们需要制定计划（Plan）。
这包括确定研究的目的、
选择合适的抗体、优化染色条件等。
在这一阶段，我们需要考虑实
验的整体设计和所需的资源。
接下来是执行阶段（Do）。
在这个阶段，我们会进行免疫组化
实验，使用选择的抗体对肿瘤组织标本进行染色，并进行显微镜观察。
这个阶段需要严格控制实验条件，确保实验的可重复性和准确性。
然后是检查阶段（Check）。
在这个阶段，我们会评估实验结果，检查染色的质量和准确性。
我们会比较不同样本之间的差异，确保
实验结果的可靠性。
最后是行动阶段（Act）。
根据检查阶段的结果，我们可能需要调整实验方案，优化染色条件，或者重新选择抗体。
这个阶段的目标是持续改进实验流程，确保获得可靠的研究结果。
总的来说，免疫组化PDCA案例可以帮助我们在研究特定蛋白在组织中的表达时，通过持续改进的管理方法，优化实验流程，提高实验结果的准确性和可靠性。
这种方法可以在肿瘤学、免疫学和其他医学研究领域发挥重要作用。
免疫组化是什么意思
免疫组化是什么意思免疫组化是一种在生物学领域中常用的实验技术方法，用于检测、定位和鉴定分子结构和细胞组分。
它通过使用抗体特异性地与目标分子或细胞相互作用，并利用染色剂、辅助试剂或其他检测方法来实现目标物质的可视化。
免疫组化技术的原理基于免疫学的基本原理，即抗原与抗体的特异性结合。
在免疫组化中，首先需要制备一种特异性抗体，这种抗体可以识别并与目标分子或细胞特异性结合。
抗体可以来源于动物体内产生的抗原抗体或通过体外合成的克隆抗体。
然后，将制备好的抗体标记上染色剂、荧光剂等标记物质，以便于目标物质的可视化。
在实验操作中，通常需要对待测标本进行固定、切片和免疫染色处理。
固定处理可以固定细胞和组织的结构，以保持其原有形态和抗原性。
切片处理是将固定好的组织切成薄片，通常采用切片机或冰冻切片技术。
免疫染色处理是将切片中的目标物质与特异性抗体结合，并利用标记物质使其可见。
免疫染色处理通常包括一系列的步骤，如抗原解脱、抗体孵育和可视化等。
抗原解脱是为了使目标物质（抗原）暴露在细胞或组织的表面，以便于抗体结合。
这一步骤可以通过煮沸、酸碱处理、酶消化等方法来实现。
抗体孵育是将制备好的抗体加到标本上，以特异性地与目标物质结合。
通常，抗体需要在孵育液中与标本反应一段时间，以确保充分结合。
最后，通过可视化方法来检测目标物质的存在和位置，如荧光显微镜、光学显微镜等。
免疫组化技术广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物研发等领域。
在生物医学研究中，免疫组化可以用于检测和定位特定蛋白质、细胞因子、受体和激素等，从而揭示其在生物学过程中的功能和相互作用。
在临床诊断中，免疫组化可以帮助医生确定疾病的类型和分级，如癌症的诊断和预后评估。
在药物研发中，免疫组化可以用于评估药物的效果和毒副作用，并帮助优化治疗方案。
总之，免疫组化是一种重要的实验技术方法，通过抗体的特异性结合和可视化检测，可以对分子结构和细胞组分进行定位和鉴定。
它在生物医学研究和临床诊断中具有重要的应用价值，为揭示生物学过程和疾病机制提供了有力的工具。
免疫组化及特殊染色
根据组织中蛋白质的降解程度 ，通过免疫组化染色可以推断 死亡时间，有助于法医学中的 死亡时间推断。
05
技术发展与展望
免疫组化技术的发展趋势
自动化与智能化
01
随着科技的进步，免疫组化技术正朝着自动化和智能化的方向
发展，以提高检测的准确性和效率。
多指标并行检测
02
通过多指标并行检测，能够更全面地揭示疾病的发生、发展机
80%
疾病预测
对特定蛋白的免疫组化染色可以 预测疾病的发病风险和进展趋势 ，有助于疾病的早期预防和治疗 。
法医学鉴定中的应用
死亡原因鉴定
通过免疫组化染色，可以检测 死者体内相关蛋白的表达水平 ，有助于推断死亡原因和死因 调查。
致伤工具推断
通过检测创口组织中特定蛋白 的表达，可以推断致伤工具的 类型和作用方式，为法医学鉴 定提供依据。
03
免疫组化与特殊染色的比较
技术特点比较
免疫组化
利用抗原-抗体反应原理，通过标记抗 体对组织或细胞内的抗原进行定位和 定性分析。具有高特异性和高敏感性。
特殊染色
利用不同化学染料对组织或细胞的不 同成分进行染色，以便观察组织或细 胞的形态和结构。具有简单易行、成 本低廉等优点。
应用范围比较
免疫组化
主要用于肿瘤诊断、鉴别诊断、预后评估等方面，也可用于某些感染性疾病、自身免疫性疾病等的诊 断。
特殊染色
广泛应用于病理学、组织学等领域，如观察细胞形态、鉴别细胞类型、检测组织内化学成分等。
优缺点比较
免疫组化
优点在于高特异性和敏感性，能够准确定位和定性分析组织或细胞内的抗原。缺点是操作复杂、成本较高，需要 专业技术人员操作。
药物研发与疗效评估
免疫组化原理及步骤
免疫组化原理及步骤免疫组化是一种常用于研究细胞和组织中蛋白质的定位、表达及定量的方法。
其原理基于抗原与抗体之间的特异性结合。
在进行免疫组化实验时，通常需经历如下步骤：1. 取样与制片：从待研究的组织或细胞中取得样本，并将其固定在载玻片或切片上，以便后续的实验处理。
2. 抗原恢复：某些样本经过固定处理后，可能会造成抗原的损失或掩盖。
因此，为了使抗原能更好地被抗体识别，常需要进行抗原恢复的步骤。
一般而言，常用的抗原恢复方法包括加热处理、酶解或化学处理等。
3. 阻断非特异性结合：为了避免非特异性的结合，需使用一些非特异性抗体或蛋白质（如牛血清白蛋白、胶原蛋白等）来阻断待测抗体结合样本中的非特异性位点。
4. 抗体标记与孵育：选择特异性与待测抗原结合的一抗体，并将其标记上可视化信号或发光染料等。
在将该标记抗体和样本一同孵育的过程中，待测抗原会与一抗体发生特异性结合。
5. 洗涤：通过洗涤步骤，去除与抗体无关的非特异性结合物，以减少背景信号的干扰。
6. 可视化和显色：对于免疫组化实验，最终需要将特异性结合的抗原或抗体定位，并使其可视化。
这可以通过结合染色剂、酶标记或荧光标记等方法实现。
7. 评价与分析：最后，通过显微镜观察和图像分析等手段，对标记结果进行定性或定量的评价与分析。
可以使用计算机软件进行图像处理和定量分析以获取更准确的数据。
总之，免疫组化的原理在于利用抗原与抗体的特异性结合来对蛋白质进行检测与定位。
在实验过程中，需要进行样本取样与制片、抗原恢复、非特异性结合阻断、抗体标记与孵育、洗涤、可视化和显色、评价与分析等一系列步骤。
这些步骤均为确保实验结果的准确性和可靠性所必需的。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
常见肺肿瘤的免疫组化标志物一、肺肿瘤的常用标志物1. CD15(LeuM1)---（阳性部位：细胞膜）是一种由半乳糖、岩藻糖和N-乙酰葡萄糖组成的碳水化合物抗原，又称半抗原χ，是粒/单核细胞相关抗原。
免疫组织化学表达：成熟粒细胞、激活的淋巴细胞（主要是T淋巴细胞）、R-S细胞、大多数腺癌等。
2. 癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）(CD66e)---（阳性部位：细胞膜/浆）癌胚抗原是表达于胎儿上皮细胞的一种糖蛋白，分子量为180kDa。
存于某些恶性肿瘤组织尤其是内胚层来源发肿瘤中，大多数胃肠道（包括胰腺）和肺腺癌均有表达，少量成人上皮细胞和良性肿瘤亦可表达。
CEA 主要用于标记上皮性肿瘤，尤其是腺上皮来源的腺癌。
3.嗜铬素A（chromogranin A，CgA）---（阳性部位：细胞浆）嗜铬素是位于神经分泌颗粒内的酸性糖蛋白家族，是一组可溶性酸性蛋白，分子量为76～120 kDa，分布广泛。
含量最丰富的是嗜铬素A，另两个是嗜铬素B和嗜铬素C。
几乎所有的神经内分泌肿瘤中均可检测到嗜铬素。
嗜铬素A不仅存在于神经内分泌细胞的分泌颗粒中，也广泛分布于所有含有颗粒的内分泌细胞和神经内分泌细胞来源的肿瘤细胞。
此抗体可以识别嗜铬素A抗原羧基末端的片段，而不与氨基末端的片段反应，主要用于标记神经内分泌细胞及其来源的肿瘤。
对小细胞癌进行抗原修复可提高检测的敏感性。
4.细胞角蛋白（cytokeratin pan，广谱 CK）--- AE1/ AE3（阳性部位：细胞浆）此抗体可以识别绝大部分酸性细胞角蛋白（Ⅰ型/低分子量）和碱性细胞角蛋白（Ⅱ型/高分子量）。
用于标记上皮及上皮来源的肿瘤，特别是对鉴别和判断转移性肿瘤是否为上皮源性具有一定的意义。
5.细胞角蛋白5/6（cytokeratin 5/6，CK5/6）---（阳性部位：细胞浆）在正常组织中，鳞状上皮和导管上皮的基底细胞以及部分的鳞状上皮生发层细胞、肌上皮细胞和间皮细胞阳性，腺上皮细胞阴性。
因此，可用于鳞癌和腺癌、间皮瘤和腺癌的鉴别诊断。
支气管上皮基底细胞、间皮；鳞癌、大细胞癌、移行细胞癌、间皮瘤阳性。
大多数腺癌为阴性。
6. 细胞角蛋白7（cytokeratin 7，CK7）---（阳性部位：细胞浆）CK7是分子量为54 kDa的一种碱性细胞角蛋白，存在于大多数正常组织的腺上皮和移行上皮细胞中，一般非上皮来源的细胞无表达。
在卵巢、乳腺和肺的腺癌呈阳性反应，而胃肠道的腺癌阴性。
7. 细胞角蛋白20（cytokeratin 20，CK20）---（阳性部位：细胞浆）CK20（46kDa）存在于正常的胃肠道上皮、移行上皮、Merkel细胞及其来源的肿瘤，而乳腺癌、肺癌和神经内分泌肿瘤不表达。
8. 细胞角蛋白（高分子量）（cytokeratin，HMW）---（阳性部位：细胞浆）高分子量细胞角蛋白抗体（34βE12）可以识别68kDa、58kDa、和50kDa的细胞角蛋白。
9.上皮膜抗原（epithelial membrane antigen，EMA）(MUC1)---（阳性部位：细胞浆）上皮膜抗原是一种高分子量（400 kDa）跨膜糖蛋白，广泛分布于各种上皮细胞及其来源的肿瘤。
癌细胞过表达MUC1与肿瘤侵袭有关，有意义的免疫反应性为膜阳性，如为纯粹的胞浆着色则为假阳性。
此抗体可以用于标记上皮及上皮源性肿瘤，EMA阳性表达的肿瘤包括大多数的癌、间皮瘤、滑膜肉瘤和上皮样肉瘤等，淋巴瘤、黑色素瘤和软组织肿瘤阴性表达。
（阳性部位：细胞膜）该抗体与间皮细胞表面的抗原反应，染色方式呈现一种特殊的“厚膜”方式，在鉴别间皮瘤与腺癌时有一定的参考价值：间皮瘤为厚膜型，腺癌为薄膜型或胞浆着色。
11.突触素（synaptophysin，Syn）---（阳性部位：细胞浆）突触素是分子量为38kDa的糖蛋白，主要存在于神经元突触前囊泡膜，是神经性和上皮性神经内分泌肿瘤的特异性标志之一，用于标记神经内分泌肿瘤。
12.甲状腺转录因子1（thyroid transcription factor-1，TTF-1）---（阳性部位：细胞核）TTF-1表达于甲状腺腺上皮和肺的上皮细胞中。
大多数肺的小细胞癌、腺癌、少部分大细胞癌、大多数非典型神经内分泌肿瘤免疫组化结果显示TTF-1阳性，而肺鳞癌及绝大多数典型类癌TTF-1阴性。
13.波形蛋白（Vimentin，Vim）---（阳性部位：细胞浆）波形蛋白分子量为57 kD，是原始的中间丝，分布极广，所有间(充)质细胞均有表达，此抗体的免疫原为猪的晶体，但可与人、大鼠和鸡的波形蛋白反应。
波形蛋白是正常间叶细胞及其来源的肿瘤的特异性标志，在许多上皮细胞及其肿瘤中可与细胞角蛋白共表达。
诊断用途：是一个有用的“对照标记”，即：如果波形蛋白未能较易地在非肿瘤性内皮细胞、纤维母细胞和其他间叶成分中检测到，则总的说来组织的免疫反应性未能得到适当的保存。
在间皮瘤与腺癌的鉴别诊断中，波形蛋白在间皮瘤的上皮细胞中更常见与细胞角蛋白共表达。
分子量45 kD和52 kD的人角蛋白抗原决定簇。
与正常分泌上皮而不是复层鳞状上皮反应。
该抗体识别许多细胞角蛋白共同的抗原决定簇，是上皮性肿瘤的一线标记。
免疫组织化学表达：正常组织有复层鳞状上皮和单纯腺上皮、平滑肌、淋巴结树突状细胞、浆细胞等；肿瘤主要有鳞癌、小细胞癌、肉瘤样癌/梭形细胞癌、腺癌、间皮瘤（纤维状细胞）、滑膜肉瘤、血管肿瘤、平滑肌肿瘤和浆细胞瘤等。
结蛋白分子量为53 kD的中间丝（骨骼蛋白），有三种单克隆抗体（D33, DER-11和DEB-5），与其他中间丝无交叉反应。
在平滑肌和横纹肌可检测到结蛋白，在肌纤维母细胞中亦有少量结蛋白。
在平滑肌组织中结蛋白含量要多于血管平滑肌。
诊断用途：识别平滑肌和横纹肌肿瘤。
17. MOC-31---为识别上皮细胞中一种功能未知的38 kDa 糖蛋白的单克隆抗体。
大多数腺癌为阳性，而间皮瘤通常为阴性。
18.表面活性蛋白（Surfactant proteins，SP）。
肺表面活性物质含有许多蛋白，包括10 kD的Clara细胞蛋白和表面活性蛋白A、B、C、D。
作为细支气管肺泡癌的标志。
19.α1-AT---细支气管肺泡癌Clara细胞型呈阳性表达。
二、恶性上皮性肿瘤1、鳞癌---发生于支气管上皮，有角化和/或细胞间桥的恶性上皮性肿瘤。
有四个亚型：①乳头状；②透明细胞型；③小细胞型；④基底细胞样绝大多数表达高分子角蛋白（34βE12），CK5/6和CEA，许多鳞癌表达低分子角蛋白（35βH11），较少表达TTF-1或CK7。
2、小细胞癌---由圆形、椭圆形或梭形小细胞组成的恶性上皮性肿瘤。
胞质很少，边界不清；核内可见细颗粒状染色质，核仁不明显或缺如；细胞核变形很明显；常有大量坏死和许多核分裂。
绝大多数小细胞癌CD56、Cg、SY阳性，神经内分泌标志表达率≥90%；小细胞癌常见TTF-1和CK阳性。
鉴别诊断：①淋巴瘤---小细胞癌显示为神经内分泌标志、TTF-1和CK阳性，LCA阴性。
② PNET---小细胞癌与PNET均可表达MIC-2（CD99），但小细胞癌TTF-1和CK阳性，而PNET则为阴性。
③ Merkel细胞瘤---本瘤CK20阳性，CK7、TTF-1阴性可与小细胞癌鉴别。
3、腺癌---具有腺样分化和产生黏液的恶性上皮性肿瘤。
呈腺泡样、乳头状、细支气管肺泡细胞样或实性伴有黏液的生长方式，可混合存在。
有下列亚型：①腺癌，混合亚型；②腺泡样腺癌；③乳头状腺癌；④细支气管肺泡细胞癌包括非粘液型、粘液型、混合性非粘液性与粘液性或中间型。
非粘液型细支气管肺泡癌又包括Ⅱ型肺泡细胞型和Clara细胞型，前者SP、TTF-1等阳性，后者Clara蛋白及α1-AT阳性，有助于与其它腺癌鉴别诊断。
⑤实性腺癌伴有粘液产生⑥胎儿型腺癌⑦黏液性（“胶样”）腺癌⑧黏液性囊腺癌⑨印戒细胞腺癌⑩透明细胞腺癌腺癌的免疫组化特征与其亚型和分化程度有关，典型的上皮性标志为：AE1/AE3，，EMA和CEA。
CK7阳性高于CK20，TTF-1阳性率较高，尤其是在分化好的腺癌（在TTF-1阳性病例中，甲状腺球蛋白阴性有助于排除甲状腺癌）。
表面活性蛋白（Surfactant apoprotein，SP）较TTF-1为低，但要注意的是转移性肿瘤细胞也可能吸附一些SP。
在黏液性肿瘤中，尤其是黏液型BAC可能有例外，即TTF-1阴性，而CK7和CK20往往阳性。
鉴别诊断：①转移性腺癌---有原发灶病史，在肺内常为多个病灶。
如为单个病灶，则鉴别较为困难。
肺腺癌有组织学亚型的异质性，尤其是存在BAC成分时可明确诊断；60%表达表面活性蛋白（SP-A，pro-SP-B，pro-SP-C），70%表达TTF-1；CK7（+）/CK20（－），仅黏液性BAC为TTF-1（－）/ CK20（+）。
转移性腺癌多为均质性，TTF-1阴性（除外甲状腺癌：黏液染色阴性，甲状腺球蛋白阳性）。
肾细胞癌：AE1/AE3、CK7弱阳性，Vim强阳性。
结肠腺癌：CK7（－）/CK20（+），CDX-2阳性。
乳腺癌：ER（+）。
卵巢癌：雌二醇受体、CA125、Vim、钙粘蛋白、抑制素（+）；CEA（－）。
前列腺癌：PSA（+）。
②上皮型恶性间皮瘤---根据临床、巨检、镜检、免疫组化和电镜特点进行鉴别。
免疫组化方面主要包括腺癌特异标志TTF-1、普通标志CEA、CD15或MOC31；间皮瘤标志calretinin（钙视网膜蛋白）和CK5/6。
③不典型腺瘤样增生---发生于肺周边部的局灶性病变，通常＜5mm，表现为衬覆肺泡或呼吸性细支气管的不典型细胞呈轻—中度局限性增生，无间质炎症和纤维化。
不典型腺瘤样增生表达SPA，CEA，MMPs，E-钙粘蛋白，β-catenin，CD44v6和TTF-1。
一般认为，不典型腺瘤样增生是细支气管肺泡细胞癌的癌前病变，TP53阳性是细支气管肺泡细胞癌的早期标志之一。
④非粘液型细支气管肺泡细胞癌---一般大于5mm，明显的细胞分层，细胞密集，柱状细胞排列拥挤，微乳头丛生；细胞核重叠，染色质较粗，可见核仁。
4、大细胞癌---未分化的非小细胞肺癌，缺乏小细胞癌、腺样或鳞状分化的细胞和结构特征。
大细胞癌的分化表型并无特征性，大多表现为腺分化，也可为鳞分化。
有少数大细胞癌具有腺、鳞、神经内分泌三相分化表型。
免疫组化：AE1/AE3几乎全部阳性，EMA70%阳性，35& 538;H11近70%阳性。
部分病例亦可表达CEA、CK7、及Vim。
其亚型有：①大细胞神经内分泌癌---常表达神经内分泌标志CgA、Syn和NCAM（CD56），50%可表达TTF-1。