食品质量安全检验人员(微生物)培训班(20121204-1205)基础

气溶胶和飞溅 大容量培养 高浓度
BSL－2：安全设备 (一级屏障)
• 在BSL-1 设施的基础 上，增加: –高压灭菌锅 –眼睛清洗站
二级生物安全防护实验室
典型的二级生物安全水平实 验室（图片由CUH2A， Princeton，NJ，USA提供）。 在生物安全柜中进行可能发 生气溶胶的操作程序。门保 持关闭并贴上适当的危险标 志。潜在被污染的废弃物同 普通废弃物隔开。
微生物检验人员的工作规范
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无菌操作 生物安全
无菌操作（彻底灭菌、防止污染）
无菌及无菌操作的概念： 无菌是指在环境中一切有生命活动的微生物的营养细 胞及其芽孢或孢子都不存在的状态。 无菌操作是指在无菌环境下进行的细胞传代培养、植 物组织培养、细菌接种等操作,目的是防止微生物进入 人体组织或其他无菌范围。泛指在培养微生物的操作 中，所有防止杂菌污染的方法。 ●无菌环境（无菌室、超净工作台） ●无菌材料（培养基和试剂、器皿、用具的灭菌） ●防止污染，保持无菌状态
微生物检验人员的工作规范
9 无菌间使用要求 1）无菌间内应保持清洁，工作后用消毒液擦拭工 作台面，不得存放与实验无关的物品。 2) 无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采 用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在 1.0m处，照射时间不少于30min，灯管每隔两周需用 酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫 外线穿透的影响。 3)处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随 意出入，如需要传递物品，可通过传递窗传递。 4)定期对无菌间进行沉降菌的监测和记录。
实验室的分类、分级及适用范围
实验室各级定义及适用范围
一级生物安全防护实验室 实验室结构和设施、安全操作规 程、安全设备适用于对健康成年人已 知无致病作用的微生物，如用于教学 的普通微生物实验室等。
一级生物安全防护实验室
BSL－1： 不需要特殊的防护屏障、除需要 洗手池外，依靠标准的微生物操作 即可获得基本的防护水平。
二级生物安全防护实验室
基本生物安全设备
1、移液辅助器——避免用口吸的方式移液。有不同设计的多 种产品可供使用。 2、生物安全柜，在以下情况使用： —— 处理感染性物质；如果使用密封的安全离心杯，并在生 物安全柜内装样、取样，则这类材料可在开放实验室离心 —— 空气传播感染的危险增大时 —— 进行极有可能产生气溶胶的操作时（包括离心、研磨、 混匀、剧烈摇动、超声破碎、打开内部压力和周围环境压力不同 的盛放有感染性物质的容器、动物鼻腔接种以及从动物或卵胚采 集感染性组织）。 3、一次性塑料接种环，也可在生物安全柜内使用电加热接种 环，以减少生成气溶胶。 4、螺口盖试管及瓶子。 5、用于清除感染性材料污染的高压灭菌器或其他适当工具。 6、一次性塑料移液管，尽量避免使用玻璃制品。 7、在投入使用前，像高压灭菌器和生物安全柜等设备必须用 正确方法进行验收。应参照生产商的说明书定期检测。
最高防护实验室—— 四级生物安全防护实验室
实验室操作：在三级生物安全防护水平上增加气 锁入口、出口淋浴、污染物 安全设施 ：Ⅲ级BSC或Ⅱ级BSC并穿着正压服、 双开门高压灭菌器（穿过墙体）、经过滤的空气
一、食品微生物实验室的基本要求
3.2 人员 3.2.1 检验人员应具有相应的教育、微生物专业培训 经历，具备相应的资质，能够理解并正确实施检 验。 3.2.2 检验人员应掌握实验室生物检验安全操作知识 和消毒知识。 3.2.3 检验人员应在检验过程中保持个人整洁与卫生， 防止人为污染样品。 3.2.4 检验人员应在检验过程中遵守相关预防措施的 规定，保证自身安全。 3.2.5 有颜色视觉障碍的人员不能执行涉及到辨色的 实验。
3.5 培养基和试剂 3.5.1 培养基 培养基的制备和质量控制按照GB/T 4789.28 的规定执行。 3.5.2 试剂 检验试剂的质量及配制应适用于相关检验。对检验结果有重要影 响的关键试剂应进行适用性验证。 3.6 菌株 3.6.1 应使用微生物菌种保藏专门机构或同行认可机构保存的、 可溯源的标准或参考菌株。 3.6.2 应对从食品、环境或人体分离、纯化、鉴定的，未在微生 物菌种保藏专门机构登记注册的原始分离菌株（野生菌株）进行 系统、完整的菌株信息记录，包括分离时间、来源，表型及分子 鉴定的主要特征等。 3.6.3 实验室应保存能满足实验需要的标准或参考菌株，在购入 和传代保藏过程中，应进行验证试验，并进行文件化管理。
感染性材料的 操作在II级或III级 生物安全柜 呼吸道保护
在二级生物安全防 护水平上增加特殊 防护服、进入制度、 定向气流
三级生物安全防护实验室

典型的三级生物安全水平实验室。 实验室与公共通道分开并通过缓冲间（双门入 口或二级生物安全水平的基础实验室）或气锁 室进入。处理废弃物前，在实验室内先进行高 压灭菌以清除污染。应有非手控的水槽。形成 向内气流而且涉及感染性材料的全部工作应在 生物安全柜中进行。
实验室的分类、分级及适用范围
实验室分级
根据所操作的生物因子的危害程度 和采取的防护措施，将生物安全防 护水平分为四级。各级实验室的生 物防护水平依次为：一级最低，四 级最高。
生物安全防护水平（BSL）
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一级生物安全防护水平（BSL－1） 二级生物安全防护水平（BSL－2） 三级生物安全防护水平（BSL－3） 四级生物安全防护水平（BSL－4）
在二级生物安全防护 水平上增加特殊防护 服、进入制度、定向 气流
实验室的分类、分级及适用范围
实验室各级定义及适用范围 四级生物安全防护实验室
实验室结构和设施、安全操作规程、安全 设备适用于对人体具有高度的危险性，通过气 溶胶途径传播或传播途径不明，目前尚无有效 的疫苗或治疗方法的致病微生物及其毒素。与 上述情况类似的不明微生物，也必须在四级生 物安全防护实验室中进行。待有充分数据后再 决定此种微生物或毒素应在四级还是在较低级 别的实验室中处理。
ⅲ、无菌室仅用于培养基分装等无菌操作，不能进 行有菌标本的操作。 操作人员操作时应严格关门，并戴好专用的手套、 口罩、帽子、防护服 等个人防护装备
ⅳ、无菌室内应有空气过滤装置，并安装空调。
微生物检验人员的工作规范
无菌操作要求 食品微生物实验室工作人员，必须有严格的无菌观念，微生物实验的许多试验要求 在无菌条件下进行，主要原因是防止试验操作中人为污染样品。 1．接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。 2．进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间， 工作前经紫外线消毒后使用。 3．接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干 净。 4．进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的 器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。 5．从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平 皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。 6．接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中 取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。 7．接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与 杆的连接处。 8．吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。
一级生物安全防护实验室
实验室的分类、分级及适用பைடு நூலகம்围
实验室各级定义及适用范围
二级生物安全防护实验室
实验室结构和设施、安全操作规程、 安全设备适用于对人或环境具有中等潜在 危害的微生物。如临床检验实验室等。
普通微生物实验室加上使用生物安全柜。
BSL－2：安全设备 (一级屏障)
在BSL-1设施基础上增加: 生物安全柜（BSC，二级）：在涉及下例情况， 从事感染性生物因子工作时应该使用
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超净工作台或生物洁净室 微生物培养箱（36 ℃±1 ℃等 ） 天平：（ 感量0.1 g，0.01g） 电热干燥箱（干热灭菌） 高压灭菌锅（湿热灭菌） 生物安全柜（最重要的安全设备，形成最主 要的防护屏障） • 显微镜 • 水浴锅、冰箱、冰柜
微生物检测设施、设备一览
3.4 检验用品 3.4.1 常规检验用品主要有接种环（针）、酒精灯、镊子、剪刀、 药匙、消毒棉球、硅胶（棉）塞、微量移液器、吸管、吸球、试 管、平皿、微孔板、广口瓶、量筒、玻棒及L形玻棒等。 3.4.2 检验用品在使用前应保持清洁和/或无菌。常用的灭菌方法 包括湿热法、干热法、化学法等。 3.4.3 需要灭菌的检验用品应放置在特定容器内或用合适的材料 （如专用包装纸、铝箔纸等）包裹或加塞，应保证灭菌效果。 3.4.4 可选择适用于微生物检验的一次性用品来替代反复使用的 物品与材料（如培养皿、吸管、吸头、试管、接种环等）。 3.4.5 检验用品的储存环境应保持干燥和清洁,已灭菌与未灭菌 的用品应分开存放并明确标识。 3.4.6 灭菌检验用品应记录灭菌/消毒的温度与持续时间。
National food safety standard Food microbiological examination: General guidelines
3.1 3.2 3.3 3.4 3.5
环境 人员 设备 检验用品 培养基、试剂 及菌种
3.1 环境 3.1.1 实验室环境不应影响检验结果的准确性。 3.1.2 实验室的工作区域应与办公室区域明显分 开。 3.1.3 实验室工作面积和总体布局应能满足从事 检验工作的需要， 实验室布局应采用单方向工作 流程，避免交叉污染。 3.1.4 实验室内环境的温度、湿度、照度、噪声 和洁净度等应符合工作要求。 3.1.5 一般样品检验应在洁净区域[包括超净工作 台或洁净实验室]进行，洁净区域应有明显的标示。 3.1.6 病原微生物分离鉴定工作应在二级生物安 全实验室（ Biosafety level 2, BSL-2 ）进行。
实验室的分类、分级及适用范围
实验室各级定义及适用范围
三级生物安全防护实验室