根系分泌物提取
不同木薯品种主要根系分泌物提取与鉴定
热带作物学报2022, 43(6): 1248 1258Chinese Journal of Tropical Crops不同木薯品种主要根系分泌物提取与鉴定韩笑1，杨慰贤1，覃锋燕1，范晓苏1，黎亮武1，黄凯1，阳太亿1，申章佑2，韦茂贵1,3*1. 广西大学农学院，广西南宁 530004；2. 广西农业科学院经济作物研究所，广西南宁 530004；3. 广西农业环境与农产品安全重点实验室，广西南宁 530004摘要：本研究通过对木薯根系分泌物进行提取、分离与鉴定，探究不同木薯品种根系分泌物的差异，为筛选抗化感耐连作木薯新种质提供参考。
以木薯组培苗琼脂培养基为试验材料，采用正交试验设计，结合GC-MS技术考察不同萃取材料和洗脱剂对木薯根系分泌物的提取和分离效果，选择最优方案测定‘新选048’‘南植199’和‘华南205’的根系分泌物。
结果表明：（1）木薯根系分泌物水溶性物质提取的最优方案为：用去离子水超声提取捣碎的琼脂培养基30 min，固液分离后用XAD-2萃取、无水乙醇洗脱，浓缩后用GC-MS检测，成功鉴定出包括有机酸类、醇类、酯类、酮类、醛类等26种有机化合物。
（2）醇溶性物质提取的最优方案为：用50%乙醇超声提取捣碎的琼脂培养基30 min，固液分离后用XAD-4萃取、无水乙醇洗脱，浓缩后用GC-MS检测，鉴定出包括有机酸类、醚类、酯类、酮类、醛类等15种有机化合物。
（3）不同品种根系分泌物的水溶性和醇溶性成分均有差异。
‘南植199’根系分泌物的主要水溶性物质有羟乙酸甲酯（相对含量为3.72%）、羟基丙酮（2.40%）、甲肼（1.79%）等，主要醇溶性物质有乙醇醛（18.89%）、羟基丙酮（2.47%）、甲酸（2.25%）等；‘新选048’的主要水溶性物质有甲酸（2.68%）、1,5-戊二醇（2.39%）、丙烯酸羟乙酯（2.01%）等，主要醇溶性物质有乙醇醛（17.00%）、甲酸（2.62%）、羟基丙酮（2.46%）等；‘华南205’的主要水溶性物质有甲酸（2.23%）、羟基丙酮（1.80%）、羟乙酸甲酯（1.43%）等，主要醇溶性物质有乙醇醛（16.58%）、甲酸（3.06%）、八氟戊醇（2.98%）等。
植物根系分泌物提取系统rootex110工作原理
Rootex110是一种用于提取植物根系分泌物的系统，其工作原理涉及到植物生长、根系代谢和物质运输等多个方面。
下面我将从植物根系分泌物的特点、Rootex110系统的结构和工作原理等方面详细介绍。
一、植物根系分泌物的特点植物根系分泌物是植物根系在生长过程中分泌出的一种具有重要生理功能的复杂液体。
它包含了多种生长激素、酶类、有机酸、蛋白质等成分，对植物的生长发育、土壤微生物活性、土壤结构形成等起着重要作用。
因此，研究植物根系分泌物对于揭示植物生长调控机制、改善土壤环境质量具有重要意义。
二、Rootex110系统的结构Rootex110系统由分泌物采集部件、样品处理部件、分析检测部件组成。
其中，分泌物采集部件包括采集装置、采集控制系统等，样品处理部件包括样品预处理装置、分离纯化装置等，分析检测部件包括分析仪器和数据分析系统等。
三、Rootex110系统的工作原理1. 样品采集：Rootex110系统通过精密的采集装置，在不破坏植物根系的情况下，实时、连续地采集植物根系分泌物。
采集控制系统可以根据需要进行时间、频率等参数的设定，以确保采集的准确性和稳定性。
2. 样品处理：采集到的植物根系分泌物样品需要经过一系列的预处理步骤，如去除杂质、浓缩、分离等，以得到纯净的样品。
3. 分析检测：经过样品处理后的植物根系分泌物样品，可以通过分析仪器进行多参数的检测和分析，如液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）、核磁共振（NMR）等，以获取各种成分的定量和定性信息。
四、应用前景及意义Rootex110系统的建立和应用，为植物根系分泌物研究提供了有效的技术手段和平台。
通过深入研究植物根系分泌物的成分、生理功能以及对土壤环境的影响，可以为植物生长调控、土壤改良和生态环境保护等方面提供科学依据和技术支撑。
同时，也为植物生长促进剂、土壤调理剂等产品的开发和应用提供了重要的数据支持和技术保障。
总之，Rootex110系统的工作原理涉及到植物生长、根系代谢和物质运输等多个方面，其建立和应用对于推动植物生长调控和土壤环境改善具有重要意义。
植物根系分泌有机酸的收集、分离及检测方法探析
植物根系分泌有机酸的收集、分离及检测方法探析摘要：根分泌物主要是以碳为基础的低分子化合物和高分子化合物。
植物分泌的有机酸主要有乙酸、草酸、柠檬酸、苹果酸、酒石酸和琥珀酸等, 它们调节细胞代谢, 为根际和微生物提供营养。
植物根系分泌有机酸的研究对于了解植物的根际效应具有重要的学术意义。
简述了根系分泌物有机酸的收集、分离和检测方法。
关键词：根分泌物; 有机酸; 收集; 分离; 检测;Abstract：Root exudates include low molecular compounds, high molecular compounds, and primarily carbon-based compounds. The organic acids secreted by plants are mainly acetic acid, oxalic acid, citric acid, malic acid, tartaric acid and succinic acid, which regulate cell metabolism and provide nutrients for the rhizosphere and microorganisms. The study of plant root exudates of organic acids has important academic significance for understanding the rhizosphere effects of plants. This paper briefly described the methods of collection, separation and detection of organic acids in root exudates.Keyword：root exudates; organic acid; collection; separation; detection;0、引言根际作为植物、微生物和土壤之间的交互作用区域, 是根-土界面微生态系统的物质基础和核心内容。
一种新型根系分泌物收集装置与收集方法的介绍
一种新型根系分泌物收集装置与收集方法的介绍一、本文概述本文旨在介绍一种新型根系分泌物收集装置及其收集方法。
随着农业科技的不断发展，根系分泌物作为植物与土壤环境互作的重要媒介，其在植物生长、养分吸收和土壤微生物活动等方面的重要作用日益凸显。
因此，开发一种高效、精确的根系分泌物收集装置和方法，对于深入研究根系分泌物在植物生长和土壤环境中的作用机制，以及优化作物种植和土壤管理策略具有重要意义。
本文所介绍的新型根系分泌物收集装置，通过独特的设计和创新的收集技术，实现了对根系分泌物的精准收集，为相关研究提供了有力的工具。
本文还将详细介绍该装置的组成、工作原理以及使用方法，以期为相关领域的研究人员提供有益的参考。
二、新型根系分泌物收集装置的设计随着科学技术的不断进步，我们设计了一种新型根系分泌物收集装置，该装置结合了生物学、化学和工程学等多学科的知识，旨在实现对植物根系分泌物的高效、精准收集。
根系培养区是装置的核心部分，设计有特殊的培养容器，能够模拟植物自然生长环境，同时提供稳定的营养供给和光照条件。
培养容器采用透明材料制成，便于观察植物的生长情况。
分泌物收集系统是该装置的关键部分，它利用植物根系分泌物中的化学物质特性，通过吸附、过滤和浓缩等步骤，实现对分泌物的有效收集。
该系统采用了新型的吸附材料，具有高吸附性能和长使用寿命，能够显著提高分泌物的收集效率。
控制系统则负责整个装置的自动化运行，包括光照、温度、湿度等环境参数的调控，以及分泌物收集过程的控制。
通过智能传感器和自动化设备的配合，控制系统能够实现对植物生长环境的精确调控，保证分泌物收集的稳定性和可靠性。
新型根系分泌物收集装置的设计充分考虑了植物生长的特点和分泌物收集的需求，通过科学的结构设计和技术创新，实现了对根系分泌物的高效、精准收集，为植物生理生态学研究提供了有力支持。
三、新型根系分泌物收集方法的介绍在深入研究和理解传统根系分泌物收集方法的基础上，我们开发了一种新型根系分泌物收集装置与方法，该方法在收集效率、操作简便性和样本代表性等方面具有显著优势。
人参根系分泌物的提取及鉴定
人参根系分泌物的提取及鉴定张爱华;彭洪利;雷锋杰;张连学【摘要】[目的]鉴定人参根系分泌物中的化学物质,为研究人参化感作用的发生及其连作障碍提供科学依据.[方法]采用灭菌复合基质复配无土栽培人参,对人参根系分泌物进行原位收集,依次用蒸馏水和乙醇提取人参根系分泌物,合并后用有机溶剂萃取,获得水层及有机相石油醚层和乙酸乙酯层,用HPLC和GC-MS检测水层和2层有机相的物质组成.[结果]人参根系分泌物石油醚层中含有1,3-二氧戊环,4-甲基,4-乙基-2-十五烷、乙基柠檬酸、棕榈酸乙酯和二十五烷等20种化合物,其中,烷烃类物质占46.56％,有机酸酯类物质占22.75％,酚酸类物质占13.78％,烷烃衍生物占3.59％,吡喃类物质占5.39％.乙酸乙酯层中含有丁基柠檬酸、邻苯甲二酸二丁酯和单(2-乙基己基)邻苯二甲酸酯等9种化合物,其中,烷烃类物质占22.77％,有机酸酯类物质占63.71％,酚酸类物质占13.52％.人参根系分泌物水层中含有微量人参皂苷.[结论]采用无土栽培基质可避免人参栽培中微生物的干扰,能很好地培养收集人参根系分泌物,人参根系分泌物中含有人参皂苷及烷烃类物质、有机酸酯类物质和酚酸类物质.【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2014(042)007【总页数】6页(P191-196)【关键词】人参;根系分泌物;人参皂苷;HPLC;GC-MS【作者】张爱华;彭洪利;雷锋杰;张连学【作者单位】吉林农业大学中药材学院,吉林长春130118;天津市医药集团有限公司,天津300204;吉林农业大学中药材学院,吉林长春130118;吉林农业大学中药材学院,吉林长春130118【正文语种】中文【中图分类】S567.5+1植物在逆境胁迫下，可通过向环境释放化学物质提高自身的生存竞争力，即通过化感作用应对环境条件的改变[1]。
根系分泌物是植物发生化感作用的主要物质来源之一，它们进入土壤后会对受体植物产生化感作用，即使是微量的化学物质也能显著影响植物对营养物质的吸收及周围微环境，从而影响植物的生长[2-3]。
水培法收集甜椒根系分泌物化学成分鉴定
水培法收集甜椒根系分泌物化学成分鉴定根系分泌物是复杂的非均一体系。
通常指在特定的环境下，活体植物根系的不同部位释放到根际环境中有机化合物的总称。
根系分泌物所含的有机化合物一般在200种以上，分为3类，一类是大分子化合物，主要包括糖、蛋白质、酶和凝胶等：一类是小分子化合物，主要包括酸、酚、酮等；一类是生长激素、黄酮、甾类等。
植物根系分泌物在土壤结构组成、养分活化、植物养分吸收和缓解环境胁迫等方面具有重要作用，所以对根系分泌物的研究越来越引起重视。
水培收集法应用广泛，操作简单，在一定程度上反映某些特定根系分泌物的变化，并排除土壤微生物的干扰。
气相质谱联用仪是鉴定植物根系分泌物化学成分的常用方法，具有需样量小、灵敏度高、健全数据库比对等特点。
因此，采用水培法和气质联用法分离鉴定植物根系分泌物的化学成分是切实可行的，对于解决连作障碍问题具有重要意义。
甜椒（Capsicum fructescens L.），俗称灯笼椒、柿子椒，是茄科辣椒属辣椒的一个变种，广泛种植于我国南北各地，营养丰富，特别是VC含量位居各类蔬菜之首，深受广大消费者喜爱。
但栽培管理制度的不合理及生产环境的局限性等因素导致甜椒连作障碍日益加剧，严重影响辣椒生长发育、果实品质和产量形成，根系分泌物的逐年累积是导致连作障碍的重要因素。
因此，本研究通过水培法收集甜椒的根系分泌物，采用硅胶柱层析法分离和GC-MS鉴定根系分泌物的化学成分，为甜椒根系分泌物的深入研究提供理论基础，对减缓甜椒的连作障碍具有重要指导意义。
1材料与方法1.1试验材料供试甜椒品种为热甜5号，由中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所瓜菜研究室提供。
1.2试验方法①甜椒根系分泌物的收集采用水培法收集甜椒的根系分泌物。
将石英砂高温高压灭菌，70%烘干备用，然后将催芽后的热甜5号种子播于含有石英砂的培养箱中，待第1片真叶展开，向培养箱中注入过量蒸馏水，慢慢拔出辣椒幼苗，尽量不伤根系，留待种植于水培装置的培养箱中。
一种新型根系分泌物收集装置与收集方法的介绍
一种新型根系分泌物收集装置与收集方法的介绍一、前言根系分泌物是植物根系的一种重要代谢产物，对植物的生长发育、抗病抗逆性等起着重要作用。
因此，对根系分泌物的研究具有重要的科学价值和应用前景。
然而，现有的根系分泌物收集器具有操作繁琐、不适用于复杂土壤环境等缺点，限制了对根系分泌物的深入研究。
为此，我们设计了一种新型根系分泌物收集装置，并提出了相应的收集方法，以解决现有装置的缺陷，为根系分泌物的深入研究提供便利。
二、新型根系分泌物收集装置的设计我们提出的新型根系分泌物收集装置主要由以下几个部分组成：根系分泌物收集器、连接管、收集瓶、支架等。
具体的设计如下：1.根系分泌物收集器根系分泌物收集器是本装置的核心部分，它采用了多孔隔板设计，能够有效隔离根系和土壤，并通过多孔隔板上的小孔使根系分泌物流出并被收集。
整个收集器采用透明材料制成，便于观察根系的生长和分泌情况。
2.连接管连接管是将根系分泌物收集器和收集瓶连接起来的管道，其材质要求柔软且耐腐蚀，以保证根系分泌物能够流畅地被输送到收集瓶中。
3.收集瓶收集瓶是用于收集根系分泌物的容器，通常使用透明材质制成，以方便观察和记录根系分泌物的数量和性质。
4.支架支架是用于支撑根系分泌物收集器的结构，其稳固性要求较高，以保证在复杂的土壤环境下也能够正常工作。
以上部分组合在一起构成了新型根系分泌物收集装置。
接下来我们将介绍其具体的使用方法。
三、新型根系分泌物收集方法1.装置的准备先将根系分泌物收集器和收集瓶组装好，确保连接管与收集瓶顺利连接，支架稳固地支撑在土壤中。
然后将整个装置放置于要研究的植物根系周围，确保根系分泌物可以通过多孔隔板流出，并被收集到收集瓶中。
2.根系分泌物的收集待根系分泌物开始流出后，记录收集瓶中根系分泌物的数量和颜色等信息。
通过观察和记录根系分泌物的变化，可以分析植物的生长状态和环境适应能力等信息。
3.数据的分析收集足够的根系分泌物样品后，可以进行进一步的分析，如物质成分的分析、活性物质的检测等，以揭示根系分泌物的性质和功能。
根际分泌物收集方法及测定
一、文献总结：根际分泌物收集方法：土壤溶液原位取样法优于根际土壤收集法、溶液培法萃取剂：二氯甲烷优于乙酸乙酯、乙醚衍生化所用试剂：吡啶、BSTFA-TMCS（99:1）（N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺,含1%三甲基氯硅烷）二、实验方法土壤处理：采集土壤（0-20cm）在室温下风干——研磨过40目筛（60目），称取3g于（50ml离心管）具塞三角瓶中，以1:10比例加入蒸馏水，30℃ 200r/min震荡1h，过滤即为根际分泌物粗提物，然后用30ml二氯甲烷提取2次，再将二氯甲烷提取液过0.45微米滤膜，取1ml于样品中，减压浓缩至干，加入吡啶和（BSTFA-TMCS（99:1））各100微升在70℃衍生化30min。
6小时GC-MS上机测定。
Detailed Procedures:1.采集0-20cm土壤在室温下风干，研磨过40目筛子2.称取2g于50ml离心管中，以1:10比例加入蒸馏水3.在30℃转速200r/min 震荡1h4.静置过滤，滤液即为根际分泌物粗提物，然后再过0.45μm滤膜5.20mlCH2Cl2提取2次，提取液旋转蒸发浓缩至1ml，转移至1.5ml样品瓶中，再旋转蒸发至干6.加入吡啶100μl进行溶解，再加BSTFA-TMC（99:1）100μl盖紧盖子，在70℃衍生化30min。
7.6小时内GC-MS上机测定。
原位收集：采用Rhizon 土壤溶液采样器收集水稻根际分泌物，用30ml二氯甲烷萃取根际分泌物30ml二次，再将二氯甲烷提取液过0.45微米滤膜，取1ml于样品中减压浓缩至干，加入吡啶100微升进行溶解，再加（BSTFA-TMCS（99:1））100微升在70℃衍生化30min。
6小时内GC-MS上机测定。
Detailed Procedures:1.取20ml根际土壤溶液于50ml离心管中，过0.45μm滤膜2.20mlCH2Cl2提取2次3. 提取液过旋转蒸发浓缩至1ml4.转移至1.5ml样品瓶中，再旋转蒸发至干5.加入吡啶100μl进行溶解，再加BSTFA-TMCS（99:1）100μl拧紧盖子，在70℃衍生化30min。
根系分泌物收集流程
根系分泌物收集流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!根系分泌物收集流程一、准备工作阶段。
在进行根系分泌物收集之前，要做好充分的准备。
根系分泌物收集流程
根系分泌物收集流程根系分泌物收集可是个挺有趣的事儿呢，咱就唠唠这个流程吧。
一、准备工作。
要收集根系分泌物呀，得先把要用的东西都准备好。
容器那是必不可少的啦，最好是那种干净又透明的，这样方便咱们观察。
就像那种干净的玻璃瓶或者塑料瓶都挺不错的。
然后呢，还得有基质，基质就像是植物根系的小床，要选合适的哦。
像蛭石或者珍珠岩就挺好，它们比较干净，不会给根系分泌物带来太多杂质的干扰。
对了，别忘了小铲子之类的工具，这样才能把植物种到基质里呀。
二、植物的选择和种植。
接下来就是挑植物啦。
你可以选自己感兴趣的植物，比如说可爱的小多肉，或者是绿油油的小青菜。
把选好的植物小心地种到之前准备好的基质里，就像把小宝宝放到小床上一样，要轻柔一点哦。
种好之后呢，要把植物放到合适的环境里，光照、温度和湿度都得照顾到。
要是植物长得不好，那根系分泌物的收集可就会受影响啦。
就像人要是住得不舒服，也没心情好好工作一样呢。
三、收集的时机。
什么时候开始收集根系分泌物呢？这可是有讲究的。
一般来说，等植物长到一定程度，根系比较发达的时候就可以啦。
大概就是植物看起来很健康，叶子绿绿的，茎也比较粗壮的时候。
这个时候根系就会比较活跃地分泌各种物质啦。
就像人长大了，就会有更多的能力去做各种事情一样，植物的根系长大了，也就能更好地分泌东西啦。
四、收集的方法。
收集的方法有好几种呢。
一种是水培收集法。
把植物从基质里小心地取出来，然后把根系洗干净，放到干净的水里。
过一段时间，水里就会有根系分泌出来的物质啦。
不过要注意哦，水要经常换，不然水脏了，收集到的分泌物就不纯了。
还有一种是基质吸附法。
就是利用基质能够吸附根系分泌物的特性。
等植物在基质里生长一段时间后，把基质取出来，然后用合适的溶剂把吸附在基质上的分泌物溶解出来。
这就像是从海绵里把水挤出来一样，不过要小心操作，可不能把基质弄得到处都是呢。
五、分泌物的保存。
收集到根系分泌物之后，可不能就那么放着不管呀。
要把它们好好保存起来。
一种棉花根系分泌物快速收集装置
一种棉花根系分泌物快速收集装置
一种棉花根系分泌物快速收集装置的设计理念是利用吸附材料和液体收集系统，实现快速收集棉花根系分泌物。
具体设计如下：
1. 液体收集系统：设计一个具有高密度聚乙烯或聚氯乙烯等材料的收集盘。
盘的下部设置有导流槽，通过导流槽将根系分泌物引导至收集容器中。
2. 吸附材料：在收集盘上铺设具有高吸附性能的材料，例如多孔陶瓷片、活性炭或醋酸纤维等。
这些材料能有效吸附根系分泌物，并防止其流失。
3. 收集容器：设计一个密封性好的容器，容器内部可设置滤网或其他过滤装置，以保证收集到的分泌物的纯度。
4. 运输管道：将收集容器和根系连接处设置一个管道，以便将收集的分泌物快速输送至实验室等分析场所。
5. 自动控制系统：装置可配备自动控制系统，根据根系分泌物的产生情况，自动调节吸附材料的位置或更换吸附材料，以保证收集效果的持续性和稳定性。
这种设计可以实现对棉花根系分泌物的快速收集，提高分泌物的收集效率和纯度，为研究棉花根系分泌物的性质和功能提供有力支持。
根系分泌物提取
方法二：马尾松根系分泌物的鉴定及化感作用段剑1、根系分泌物的提取分离采用两种不同的试剂进行浸提，通过GC-MS进行物质鉴定，得出适宜马尾松根系分泌物的提取方法。
方法一：分别取马尾松、枫香根际土壤于有盖玻璃瓶中，按1：3的比例加入85% 的乙醇，至于20℃磁力搅拌器，2600rpm浸提24h。
再置于20℃高速离心仪中，3500rpm旋转15min。
离心后上清液，置于旋转蒸发仪脱去浸提剂，用乙酸乙酯（1：1）萃取2次，乙酸乙酯相为中性组分；再用1mol/L的HCl将水相的pH 值调至3.0后，再用等量的乙酸乙酯萃取2次，乙酸乙酯相为酸性组分；再用1mol/L的NaOH将水相pH值调至8.0，再用等量的乙酸乙酯萃取2次，乙酸乙酯相为碱性组分。
合并酸、中、碱性乙酸乙酯相，即为马尾松、枫香根系分泌物提取液。
方法二：分别取马尾松、枫香根际土壤置于有盖玻璃瓶中，按1：3的比例加入20%乙酸乙酯，置于20℃磁力搅拌器中，2600rpm浸提24h。
再置于20℃高速离心仪中，3500rpm旋转15min。
离心后的上清液，即为马尾松、枫香根系分泌物提取液。
2、根系分泌的鉴定将上述两种浸提方式得到的马尾松、枫香根系分泌物提取液，35℃真空旋转蒸发仪浓缩至1ml，无水硫酸钠脱水后，供GC-MS测试分析。
检测仪器为GC-MS Agilent-6890N/59731（美国安捷仑公司），色谱条件：色谱柱（Agilent 122-3832）：30m×0.25mm×0.25um，DB-35ms；进样口温度250℃；程序升温：柱温70℃（2min），以10℃﹒min-1升温至280℃，20min；载气：He；流速：1.0ml﹒min-1。
质谱条件：EI源（电子轰击源）；轰击电压：70eV；离子源温度：230℃；扫描范围m/z：35-500amu；扫描速度0.2s扫全程；检测器电压500V；电流350uA；四级杆温度：150℃；溶剂延迟时间3.0min；进样量：1.0uL；不分流进样。
植物根系分泌物的分离方法
• 连续性根系分泌物收集方法
青 衣
阶段性分离方法
• 简单溶液收集方法
简单溶液收集方法根系分泌物是指将植株苗 经过胁迫处理后，用无菌蒸馏水清洗，再放入预 先加入微生物抑制剂的溶液中，使之生长一段时 间，然后将植株移走，收集其培养液，过滤，即 为所收集的根系分泌物。
青 衣
阶段性分离方法
• 特定营养液收集：
青衣
其他提取分离方法
• 也有一些学者改变土培收集根系分泌物的传统方法，将离 子膜、纤维素薄膜或是层析滤纸置于根系表面，一段时间 后进行回收，用浸提液(如甲醇、酒精)对离子膜、纤维素 薄膜或是层析滤纸多次浸提，得到根系分泌物。
青 衣
谢 谢！！
青 衣
连续性收集方法优势
• 连续性根系分泌物收集系统能够在现实栽培中，对根系不 造成伤害的情况下，实时、连续、准确地收集根系分泌物。 但是在利用连续性根系分泌物收集系统收集根系分泌物时， 需要注意防止培养容器、连续装置各部件被细菌污染，另 外，在收集根系分泌物时要控制培养液循环的流速，保证 根系分泌物能够被充分收集。
植物根系分泌物的 分离方法
青 衣
主要内容
• 根系分泌物简介 • 根系分泌物作用 • 根系分泌物分离提纯方法
青 衣
根系分泌物简介
• 在植物生长过程中，根系不仅从环境中摄取养分 和水分，同时也向生长介质中分泌质子，释放无 机离子，溢泌或分泌大量的有机物。这些物质和 根组织脱落物一起统称为根产物(root products) J， 即根分泌物。
青 衣
阶段性收集方法 琼脂收集法：
琼脂培养收集方法是将植株幼苗置于 琼脂介质中，生长一段时间后，收集根系 周围以及附着在根系上的琼脂，加热溶解， 过滤，收集其过滤液即为根系分泌物。 琼脂收集法操作简单，但是在培养过程 青 中要注意防止微生物污染。 衣
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
方法二：马尾松根系分泌物的鉴定及化感作用段剑
1、根系分泌物的提取分离
采用两种不同的试剂进行浸提，通过GC-MS进行物质鉴定，得出适宜马尾松根系分泌物的提取方法。
方法一：分别取马尾松、枫香根际土壤于有盖玻璃瓶中，按1：3的比例加入85% 的乙醇，至于20℃磁力搅拌器，2600rpm浸提24h。
再置于20℃高速离心仪中，3500rpm旋转15min。
离心后上清液，置于旋转蒸发仪脱去浸提剂，用乙酸乙酯（1：1）萃取2次，乙酸乙酯相为中性组分；再用1mol/L的HCl将水相的pH 值调至3.0后，再用等量的乙酸乙酯萃取2次，乙酸乙酯相为酸性组分；再用1mol/L的NaOH将水相pH值调至8.0，再用等量的乙酸乙酯萃取2次，乙酸乙酯相为碱性组分。
合并酸、中、碱性乙酸乙酯相，即为马尾松、枫香根系分泌物提取液。
方法二：分别取马尾松、枫香根际土壤置于有盖玻璃瓶中，按1：3的比例加入20%乙酸乙酯，置于20℃磁力搅拌器中，2600rpm浸提24h。
再置于20℃高速离心仪中，3500rpm旋转15min。
离心后的上清液，即为马尾松、枫香根系分泌物提取液。
2、根系分泌的鉴定
将上述两种浸提方式得到的马尾松、枫香根系分泌物提取液，35℃真空旋转蒸发仪浓缩至1ml，无水硫酸钠脱水后，供GC-MS测试分析。
检测仪器为GC-MS Agilent-6890N/59731（美国安捷仑公司），
色谱条件：色谱柱（Agilent 122-3832）：30m×0.25mm×0.25um，DB-35ms；
进样口温度250℃；程序升温：柱温70℃（2min），以10℃﹒min-1升温至280℃，20min；载气：He；流速：1.0ml﹒min-1。
质谱条件：EI源（电子轰击源）；轰击电压：70eV；离子源温度：230℃；扫描范围m/z：35-500amu；扫描速度0.2s扫全程；检测器电压500V；电流350uA；四级杆温度：150℃；溶剂延迟时间3.0min；进样量：1.0uL；不分流进样。
GC-MS 数据应用标准质谱谱库NIST02获得，采用面积归一化法计算各类物质的相对含量。
方法三：烤烟根系分泌物的研究高欣欣
1、具体方法为：取定量过滤后的收集液用乙酸乙酯萃取，得到乙酸乙酯相为中性组分；将剩余水相用1M HCl调节pH至2后，再用乙酸乙酯萃取，得到乙酸乙酯相为酸性组分；将剩余水相再用1M NaOH 调节pH 为8，用乙：酯萃取，得到乙酸乙酯相为碱性组分，将酸性、碱性和中性乙酸乙酯萃取液分别减压浓缩至1ml（45℃），过0.45μm 滤膜。
2、根系分泌物的硅烷化处理
利用常文理于1990 年提出的方法，将乙酸乙酯萃取后的上述浓缩样品中分别加入0.25mL 硅烷化试剂（BSTFA:TMC=5:1），加盖密封后于80℃水浴中衍生 2 h，待测。
原因是什么
3、GC-MS 分析条件
经硅烷化处理后的各组分根系分泌物采用Agilent7890A-5975C 进行仪器分析测定。
毛细管柱采用HP-5MS柱（30m×0.25mm×0.25μm），进样口温度为250℃，升温程序为50℃（2min），以6 ℃/min程序升温至250℃（保持15min）。
载气为He，流量1ml/min，进样量为1μl，离子源温度230℃，轰击电压70eV。
应用NIST98 质谱数据库，分析质谱图，确定物质组成。
方法四：刺槐根系分泌物的研究石鑫
第一种提取办法是参考了尹玉莲等人对橡胶树以及王晗光等人对巨桉根系分泌物测定时的超声浸提法。
此办法操作较为简单,只需要将过筛后的土壤放入具塞锥形瓶中,加入正己垸到完全淹没土样,再超声浸提20-30min,过0.45um微孔滤膜,将过滤的溶液在35℃条件下旋转浓缩至2mL,即得到根系分泌物的待测液(尹玉莲等,2008;王晗光等,2009)。
第二种是三性萃取法,该方法参考了张汝民等对梭梭的根系分泌物提取的经验。
首先取根系土lOOg于容量瓶中,加入蒸馏水50ml,置于20℃摇床中,lOOrpm消化24 h。
再将容量瓶放于20℃高速离心仪中,3500rpm旋转15min。
将离心后上清液用乙酸乙酷萃取2次,得中性成分;再将上清液用Imol/L的HC1调PH至4,萃取,得酸性组分;用 Imol/L的NaOH将上清液的PH值调至9,萃取得碱性组分。
合并乙酸乙酯相,在35°C旋转蒸发仪中浓缩至0.5ml,即得到根系分泌物待测液(张汝民等,2007)。
方法三是邵东华、宁心哲、樊石磊等对油松、虎榛子根系分泌物实验时萃取硅烷化法的改进。
首先称取lOg 土样放入烧杯,用50 mllmol/L的NaOH溶液淋洗植株根系,收集洗液,倒入盛有lOg 土的烧杯中;放到20℃摇床上,180rmin消化lOh;过滤2-3次,取20mL滤液,调节pH值到2.5-3,滴入饱和NaCl,用乙醚萃取3次, 合并醚相,转入心型瓶中,旋转浓缩至干;滴入甲醇,溶解瓶壁上物质,并移入直径为1.8-2.0mm毛细管,抽干;加入8ul硅院化试剂,lOO'C衍生Ih后便为待测液(邵东华等,2011)
使用的第四种方法是陈华君、金幼菊等人在对杨树等根系分泌物测定时的萃取甲酯化提取方法。
首先取200g跟际土,加入适量70%的乙醇,超声10min,此步骤重复3次。
抽滤、减压浓缩、离心。
将上清液40ml用2 mol/L的HC1调pH至2-3, 用O.lmol/L乙酸饱和的乙酸乙酯萃取3次,将有机相合并,在4(rC条件下解压浓缩至干,CH2N2甲酯化后,即为酸性物待测液。
再取上淸液40m用0.1 mol/L磷缓液缓液调pH≥8, 用 O.lmol/L憐缓饱和的正丁醇萃取3次,将有机相合并,在55°C条件下解压浓缩至干，用硅烷化试剂进行TMS衍生化,即为碱性物待测液(陈华君等,1997)
方法三：梭梭幼苗根系分泌物提取方法的研究＊张汝民
1.4 根系分泌物的收集和提取
根系分泌物的水浸提取:取生长良好的梭梭幼苗,将其无损伤从石英砂中取出,用500ml蒸馏水浸石英砂24h,浸提液离心,上清液用乙酸乙酯萃取其酸性、碱性和中性成分。
方法为:将离心上清液用乙酸乙酯萃取3次(每次用乙酸乙酯10ml),得到乙酸乙酯相为中性组分;将水相用1M HCl调节pH至3后,再用乙酸乙酯萃取3次(每次用乙酸乙酯10ml),得到乙酸乙酯相为酸性组分;将水相再用1M NaOH调节pH为8,用乙酸乙酯萃取3次(每次用乙酸乙酯10ml),得到乙酸乙酯相为碱性组分,将酸性、碱性和中性(原液)乙酸乙酯萃取液减压浓缩至1ml(45℃),用于进行GC/MS分析。
根系分泌物的循环灌溉收集:将生长良好的梭梭幼苗培养盆下面安装一个塑料管与根系分泌物收集器相连接,通过收集器中XAD-16树脂吸附根系分泌物后的溶液又循环到培养盆中,如此连续循环5d后,将收集器中XAD-16树脂吸附的根系分泌物用甲醇洗脱,收集洗脱液为梭梭根系分泌物提取液。
然后,45℃减压浓缩至1ml,再用1ml乙酸乙酯萃取,用于进行GC-MS分析测试。
将野外采集沙棘根系及根系表面0-3mm 土壤然风干,土壤过100 g。
称取lOg 土放入烧杯;用50mnrnol/L的NaOH溶液淋洗沙棘根系,收集洗液,倒入盛有lOg 土的烧杯中:放到20°C摇床上,180r/min消化lOh;过滤2-3次,取20mL滤液,调节pH值到2.5-3,滴入饱和NaCl,用乙醚萃取3次,合并醚相,转入心型瓶中,旋转浓缩至干:滴入甲醇,溶解瓶壁上物质,并移入到直径为1.8-2.0mm毛细管中,抽千;加入8μl硅烷化试剂,100℃衍生Ih; GC/MS检测分析。