正葡萄糖钳夹实验课件
高胰岛素-正常血糖钳夹试验
高胰岛素-正常血糖钳夹试验1966年Andres依据葡萄糖胰岛素的负反馈原理设计了葡萄糖钳夹技术，经过不同的静脉通路，同时输入外源性胰岛素和葡萄糖，将血糖维持在设定的稳态，该技术可对胰岛素的分泌及作用进行定量分析。
1979年DeFronzo等对该技术作了详细研究并应用于人体,从此推动了葡萄糖钳夹技术在世界范围内的应用。
根据不同的研究目的，葡萄糖钳夹技术分为高血糖葡萄糖钳夹、正常血糖葡萄糖钳夹及低血糖葡萄糖钳夹等不同方法。
高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术由于其定量准确、可重复性好等优点，已成为评价机体胰岛素敏感性的“金标准”。
该平台由于能很好地排除内源胰岛素及升糖因素的影响，并能同时客观地反映外源胰岛素制剂的药代动力学(PK)/药效动力学(PD)特点，在研发新型胰岛素制剂以及仿制胰岛素产品时也成为目前国际公认的可靠方法。
在临床试验中，高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术是评价外源性胰岛素制剂的客观平台，该平台本身成功构建及良好维持是该技术的关键。
目前在药物研发中，使用高胰岛素正葡萄糖钳夹技术存在一些常见的问题，需要在今后应用该技术中加以关注。
2、关注要点2.1 成功建立高胰岛素正葡萄糖钳夹技术的条件：(1)形成稳定高胰岛素状态,达到完全抑制肝脏内源性葡萄糖输出的目的;(2)将血糖钳夹在正常水平,变异系数小于5%;(3)试验中内源性胰岛素分泌被抑制,升糖激素无明显释放。
2.2 高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术在临床试验中的应用需关注如下几点：2.2.1 血浆胰岛素保持优势浓度，充分抑制肝糖输出在规定时间内,使血浆胰岛素水平迅速升高并保持于优势浓度(一般接近100mU/L)，人体内胰岛素浓度高于生理水平时肝糖输出可以被充分抑制，葡萄糖输注率(GIR)方能真实反映外周组织的葡萄糖利用率,使得客观评价胰岛素制剂的药效动力学参数成为可能。
2.2.2 监测血糖间隔时间每5分钟监测一次静脉血糖值，根据血糖值调整葡萄糖液输注率,使受试者血糖值维持在目标值，变异系数应小于5%。
葡萄糖钳夹技术
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高葡萄糖钳夹操作流程 2
4.分别于-30，-15，0分钟留取基础血 样后，一侧上肢置于一温度为50°C， 湿度为70%的恒温箱中以获得动脉化 的静脉血样，另一侧静脉通道用于 输注20%葡萄糖。
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高葡萄糖钳夹操作流程 3
葡萄糖钳夹技术的建立与应用
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钳夹技术
高葡萄糖钳夹技术
高胰岛素正葡萄糖钳夹技术
DeFronzo RA,Tobin JP,Andres R.Am J Physiol,1979,237:E214-S223
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相关背景知识
糖尿病是高度异质性疾病， 目前认为主要是由于胰岛素 抵抗合并胰岛B-细胞分泌胰 岛素缺陷或B-细胞分泌缺陷 伴或不伴胰岛素抵抗引起。
受试者应排除肝肾疾病。 试验前三天，受试对象每日至少进食250克以上
碳水化学物，维持体重稳定。
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主要试剂
1、葡萄糖液：50%。 2、葡萄糖液：10%。 3、氯化钠溶液：0.9%。
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高葡萄糖钳夹操作流程 1
1. 配备20%葡萄糖液：可在10%葡萄糖液 中加入50%葡萄糖混合配制。
2. 令受试者排空小便后仰卧于床，整个实 验过程中保持清醒安静状态。
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一 原理及应用 1
通过持续输注外源性胰岛素 和葡萄糖，抑制内源性肝糖 产生和胰岛素分泌，达到外 源性胰岛素-葡萄糖代谢平衡 状态后，评价个体内胰岛素 对葡萄糖代谢的作用程度， 也就是胰岛素的敏感性。
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二 实验仪器
1. 输液泵一台。 2. 注射泵一 台。 3. 快速血糖测定仪一台。 4. 温度控制仪一台。 5. 多功能计时秒表两个。
葡萄糖钳夹操作程序
葡萄糖钳夹操作程序(总2页)本页仅作为文档封面，使用时可以删除This document is for reference only-rar21year.March葡萄糖钳夹试验操作程序试验准备1.开机、定标2.取50ml注射器，配葡萄糖组：10%GS 390ml+50%GS 130ml = 20%GS 520ml3.注射器：1ml 25个、5ml 6个、10ml 3个4.微量泵管1个、输液器2个、套管针2个、三通2个、贴膜2个、纱布、消毒棉签5.生化管（红管）7个：起始抽血3管（10ml）、输胰岛素10min后抽血1管（3ml）、稳态期（21、23、25）分别抽血1管（3ml）6.生理盐水500ml7.诺和灵R 10ml（400U） 1支8.葡萄糖组：接输液器、排气、接三通；接感应器、置软管；开电源、起始9.生理盐水组：从NS500ml中抽NS49ml + 血1ml + INS量；10.点击葡萄糖钳夹软件11.输入：Name；Weight；Euglycaemic；G-Infusion Solution 200mg/ml；G-Pump Max500ml/h；I Max 4；I Start 4；G Utilation 4；BG-End 5；Duration180min；I h12.抽血10ml（3管），测血糖，request，计算胰岛素量13.配置生理盐水组，1ml = 40U， = 4U；排气，接三通；开电源、起始14.确定输液管道通畅，先葡萄糖组，再生理盐水组15.建立双侧静脉通道：右侧输入葡萄糖、胰岛素；左侧抽血（T60-65℃）试验开始1.点击confirm开始⑴2.输注胰岛素10min整，测血糖，改胰岛素用量为h ⑵3.每5分钟测血糖1次，调整葡萄糖输注量，胰岛素用量固定⑶~⒅4.维持血糖在~h5.第19起进入稳态，第21、23、25分别抽血3ml试验结束1.点击结束试验，打开葡萄糖组500ml/h单独输注10min2.保存数据，Save as …；保存图表，Save as …3.计算M值 =（G25-G19）/（Weight×Time）mg/4.带上剩余50%葡萄糖120ml，提醒患者注意进食5.填写胰岛素管标签，带血清管7个；生化管离心5min，倒出血清，保存至冰箱。
正葡萄糖钳夹实验
一、高胰岛素--正葡萄糖钳夹技术
（一）、历史背景 1966年Andres等根据葡萄糖一胰岛素的负反馈原理，创立了一种可定量分析胰岛
素分泌及作用的方法——葡萄糖钳夹技术。1979年De Fronzo等对该技术从理论上作了
详细的阐述，并给予技术指导，推动了世界范围的广泛应用。萄糖钳夹技术根据研究 目的的不同又划分为高糖钳、正糖钳及低糖钳等不同方法。 （二）、技术原理 1、葡萄糖一胰岛素负反馈体系 血糖升高时，胰岛素分泌增加，并通过增加摄取、储存和利用葡萄糖等方式，下调 血糖；血糖下降，胰岛素分泌降低，胰高血糖素等升糖激素增加，促进代谢分解，加 速糖原分解和葡萄糖异生作用，升高血糖。
升高，而后以较低的速度持续输注维持一定血胰岛素浓度。在静脉通道对侧前肢取血 测量血糖，每隔5min取血测量血糖一次，通过调节葡萄糖输注率以维持血糖水平恒定。 经一段时间后、血糖恒定维持于平衡状态。给胰岛素制剂后,葡萄糖输注率随着胰岛素 产生的作用变化，以此来评价胰岛素制剂的药效动力学特征。
3、正糖钳技术指标 ① 钳夹稳定状态下血糖(SSPG)：SSPG需控制在正常空腹血糖±10％范围内。 ② 钳夹稳定状态下胰岛素(SSINS)：较高的血浆外源性胰岛素水平才能抑制内源性肝 糖及胰岛素的生成，满足实验要求。 ③ 血糖变异系数(CVBG)：钳夹实验期间CVBG可反映钳夹技术的稳定性与准确性。
（三）、特点
Hale Waihona Puke 1、避免了内源性胰岛素缺乏(如糖尿病患者)及低血糖(如胰岛素耐量试验中)对胰岛素
敏感性测定的影响。 2、将内源性干扰减至最小，增加了实验的可控性与准确性，降低了结果的变异性。 （四）、缺点 1、不同受试者的应激反应和血管紧张度等诸多因素会对稳态的建立产生一定的影响。 2、该技术复杂耗时、费用昂贵，实验中需频繁取血。 （五）、实验方法 1、建立静脉输液通道及采血通道 在前臂静脉或正中静脉穿刺并留置导管建立输液通道，用于输入胰岛素和葡萄糖 溶液。葡萄糖和胰岛素输注通道经三通管与静脉通道联接。采血通道由输液器、三通
正葡萄糖钳夹技术的建立及与简易指数的比较
上海第二医科大学硕士学位论文正葡萄糖钳夹技术的建立及与简易指数的比较姓名：***申请学位级别：硕士专业：内分泌与代谢病指导教师：***2002.4.1高胰岛素正葡萄糖钳夹技术的建立及与简易指数的比较中文摘要目的：高胰岛素正葡萄糖钳夹技术是国际上公认的评价胰岛素敏感性的“金标准”。
微小模型技术是又～个国际公认的判断胰岛素敏感性的指标。
建立此两种表示胰岛素敏感性的方法并用他们评价许多简易指标有重要的临床价值。
因此本研究的目的旨在建立高胰岛素正葡萄糖钳夹试验及微小模型技术，并用以评价简易相关指数。
／对象：本研究共入选正常志愿者２。
人，单纯性肥胖者８人，Ｔ２一。
Ｍ患者１。
人。
其中男性２４人，女性１４人。
正常志愿者及单纯性非肥胖者均经ＯＧＴＴ及体检，排除其他疾病。
Ｔ２－ＤＭ为血糖控制良好，ＦＢＧ＜８ｍｍｏｌ／Ｌ，ＨｂＡｌＣ＜８％，单纯口服磺脲类降糖药，并排除服用其他影响胰岛素敏感性的药物。
所有受试者分成４组。
分别为：组１，正常ＢＭＩ，年龄２６．７±２．１６；组２，正常ＢＭＩ，年龄５２３０±５７９组３，单纯性肥胖，年龄５３．２５±５．０３；组４，Ｔ２．ＤＭ，年龄６１１１±８．０７。
组２、３、４中的女性受试者均为绝经后妇女。
方法：每个受试者均测定ＯＧＴＴ、微小模型和正葡萄糖钳夹。
每次测试间隔一周，组１的女性受试者在月经第６或第７天测试。
测试前３天Ｔ２一ＤＭ患者停药。
测试前三天保持每天２００克以上的碳水化合物饮食，晚８时后禁食。
第二天早上８时开始试验。
ＯＧＴＩ＂为口服７５克葡萄糖粉，在０’、３０’、６０’、１２０’、１８０’抽血测血糖和胰岛素。
微小模型试验为在０时推注２５％葡萄糖０．３９／ｋｇ，在２０’时推注人胰岛素（优泌灵Ｒ）０．０３ＩＵ／ｋｇ，分别在０’、２’、４’、８’、１９’、２２’、３０’、４０’、５０’、７０’、９０’、１８０’抽血测定血糖和胰岛素。
将测定值输入计算机，应用Ｂｅｒｇｍａｎ减少样本数的微小模型统计软件包得到胰岛素敏感指数ＳＩ。
正葡萄糖钳夹技术在胰岛素研究中的运用
高
正
定量检测
胰岛素分泌
来源：外源性 和胰岛素抵抗 的方法
作用：抑制内源性
血 糖
水
抑制肝糖原分解
平
技术特点
技术原理
输注外源性葡萄糖及胰岛素 葡萄糖输注率等于
打破体内葡机萄体糖的-胰葡岛萄素糖的利负用反率馈调控 调节灌注流速控制血糖稳态降低内源性 干扰
胰岛素敏感性评价的金标准
金标准 避免低血糖
评判标准
0.0 2.0
钳夹技术在胰岛素研究中的应用
钳夹的建立 样品的采集
分三步走 指标的检测
钳夹术检测不同胰岛素制剂后平均GIR-T曲线
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注射 胰 岛 素 口服胰岛素
10
GIR (mg/kg/min)
0 0
120
240
360
480
600
Time/min
生长抑素
生理作用：促进组织生长 对胰岛素有拮抗
作用
高分泌现象：肢端肥大症、 糖尿病
低分泌现象：侏儒症、肝硬 化 脑肿瘤
生理作用：抑制生长激素、 促甲状 腺激素、胰岛素、 胰高 血糖素的分泌
药理作用：减少胰腺的内外 分泌 降低酶活性，对 胰腺细
血糖代谢 血糖稳态
血糖稳态
机体消耗葡萄糖5 g/h，是血液中含有的全部葡 萄糖的总量
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GIR
血糖
8
15
6
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4
5
2
0
0 0
-5
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40
60
80
100
120
t (h)
钳夹建立过程中平均胰岛素及C肽的浓度-时间曲线
胰 岛 素 浓 度 （mIU. -L1） C肽 （μg.L-1）
高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术检测原发性高血压患者胰岛素敏感性的护理
关键词 ： 原发 性 高血 压 ； 糖 尿 病 ； 高胰 岛 素一 葡 萄 糖钳 夹技 术 ； 胰 岛素 抵 抗 ； 护 理 正
中 图分 类 号 ： ７ 。 文 献 标 识 码 ： 文 章 编 号 ： ０ ｌ １ ２ ２ ０ ） ７ ０ １ —０ Ｄ ： ０ ３ ７ ／ ｌｚ． ０ ９ ０ ． １ Ｒ４ ３ ５ Ｂ １ ０ 一４ ５ （ ０ ９ Ｏ — ０ ８ ２ ＯＩ １ ． ８ ０ ｈ ｘｚ ２ ０ ． ７ ０ ８
者 的心理 疏导 ， 检测 前 ， 检测 目的 、 将 意义 及 可 能产 生
２ 护 理
１ １ 一般 资料 ．
２ ４例 中男 １ ４例 、 １ 女 ０例 ， 年龄 ３ ～ ５
６ （ ０ １ － ． ５ 岁 ， 质 指数 ２ ． ５ ０ ６ ， ０ ４． ７－ ３ ） 体 ＿８ ４ １ ７ １ ． １ 空腹 血 糖 （．８ ４ ９ ±０ １ ） ． １ ｍｍｏ／ ｌＬ。２ ４例 患 者 均 确 诊 为 原 发 性 高血 压 ， 即收缩 压≥ １ ０ｍｍＨｇ和 （ ） 张 压≥ ９ ４ 或 舒 Ｏ
的量 和速度 ， 血糖 钳 夹 在 一 个 预 定 的水 平 ； 使 同时 通
检 测 相关项 目。检测 开始 １ ｉ ０ｒ ｎ内快 速 输 入 人胰 岛 ａ 素 溶 液（ 分钟 体表 面积 ８ 每 ＯｍＵ） 将 血糖钳 夹 在一个 ， 预 先设 计 的稳定 水平 ［ 血糖 值 （ ． ０ ． ８ ｍｍｏ／ 靶 ５ Ｏ ±０ ２ ） ｌ Ｌ， ］ 然后 以每 分 钟 体 表 面积 ４ ０ ｍＵ 的 速 度维 持 至检 测结 束 。所得 数 据 通 过 计 算 机 专 用 软件 计 算 ＧＤＲ，
ｔ ｉ ／ Ｐ ａ ｍ ｉ Ｌ ｉｕ ｎ． ｉ ｔ ／ ＡＮ Ｘｉｏ ｅ ， １ ｊａ ＸＵ ｎ ｅ ｖｙ Ｌ Ａ ｆｎ
关于高胰岛素正常葡萄糖钳夹技术的建立
关于高胰岛素正常葡萄糖钳夹技术的建立【摘要】目的：建立能精确测定胰岛素敏感性的高胰岛素正常葡萄糖钳夹技术. 方法：应用高胰岛素��正常葡萄糖钳夹技术对10名正常体质量、正常糖耐量的健康志愿者进行方法学研究. 结果：钳夹试验开始后，血浆胰岛素浓度迅速上升并维持在100 mU/L左右，空腹血糖维持在正常水平(5.0 mmol/ L)，试验过程中内源性胰岛素和肝糖源输出得到完全抑制，血液升糖激素浓度 (包括皮质醇和生长激素) 与基础值相比无明显上升. 钳夹稳态期，葡萄糖输注率为(11.56±1.74) mg/(kg・min). 结论：高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹技术已成功建立. 在高胰岛素�舱�常葡萄糖稳态条件下，葡萄糖输注率等于机体的葡萄糖利用率，葡萄糖输注率可以作为评价组织对外源性胰岛素敏感性的指标.【关键词】胰岛素葡萄糖钳制技术胰岛素抗药性胰岛素敏感性0引言高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹技术 (hyperinsulinemic��euglycemic clamp) 是目前世界上公认评价机体胰岛素敏感性的金标准，已在基础及临床医学研究领域中得到广泛应用，并且已扩展应用于许多病理状态、药物或非药物防治措施的机制研究中. 建立和开展高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹技术对于糖尿病基础和临床研究具有重要意义，但由于此方法操作复杂、价格昂贵且费时，国内仅有数家医院开展此技术. 我院内分泌科自2006年引进葡萄糖钳夹系统以来，根据DeFronzo等［1］所建立经典钳夹技术的原理并结合国内外近年来的研究进展，成功建立了高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹技术.1对象和方法1.1对象10 (男5，女5)名正常健康志愿者，年龄27.0 ± 4.4 (23~37)岁，体质量指数20.3 ± 1.2 (19.2~23.2) kg/m2，无糖尿病、高血压病家族史，血脂谱正常，肝、肾功能及血尿酸浓度均在正常范围，未服用任何可能影响胰岛素敏感性的药物，口服75 g葡萄糖耐量试验均为正常糖耐量者 (按2003年ADA标准).试验前3 d受试者每日碳水化合物饮食不少于200 g，体质量保持稳定. 试验前向受试者解释试验的性质、目的及可能发生的不良反应，所有受试者均自愿参加试验并签署知情同意书.1.2方法受试者检查前空腹12 h，早8:00到达检查室，测量身高、体质量，排空小便后清醒静卧于检查床30 min后开始试验. 先分别于受试者双侧前臂行静脉穿刺，利用三通管组成2条静脉通道. 一侧用于输注胰岛素及200 mL/L葡萄糖液 (连接于Injectomat C IS和INCA��ST容积泵，德国Fresenius公司)；另一侧用于试验中采血 (将此侧前臂置于60℃恒温仪中，以保证静脉血动脉化［2］)，不采血时缓慢静滴生理盐水，采血前临时关闭输液器.钳夹开始10 min内以4 mU/（kg・min）速率输注人胰岛素溶液 (诺和灵R，40000 U/L，丹麦Novo Nordisk公司) 使血液胰岛素浓度迅速升高，随后110 min内以2 mU/（kg・min）速率持续输注. 在此期间每5 min测一次静脉血糖值(BIOSEN5030血糖分析仪，葡萄糖氧化酶电极法，德国)，根据血糖值调整200mL/L葡萄糖液输注率，使受试者血糖值维持在5.0 mmol/L左右. 每10 min采静脉血测定血清胰岛素浓度，每30 min测定血清C肽、皮质醇和生长激素浓度 (化学发光法，药盒购自天津德普诊断产品有限公司). 试验结束时收集试验期间尿标本，测定尿糖值 (测定方法同血糖测定). 所有血标本均经离心分离血清，-80℃冰箱保存至同批测定.统计学处理：试验结束后计算各受试者试验中血糖值均数(x)、标准差(s)及变异系数(CV)，计算试验中每10 min的平均葡萄糖输注率(glucose infusion rate， GIR)、机体总葡萄糖利用率 (钳夹开始 20~120 min内平均GIR) 和最大葡萄糖利用率 (钳夹稳态期最后30 min平均GIR). 全部数据均采用SPSS 13.0软件处理，计量资料以x±s表示，不同性别之间比较采用两独立样本t检验.2结果全部受试者均成功完成钳夹试验，检查结束后均未发生低血糖反应及其他异常反应，静脉穿刺部位未发生感染及静脉血栓形成. 结果显示高胰岛素正常葡萄糖钳夹技术成功建立.2.1外源性胰岛素�财咸烟谴�谢稳态形成基础血浆葡萄糖浓度为(4.26±0.39) mmol/L，在高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹过程中，血糖稳定在(4.99±0.15)mmol/L，稳态期血糖CV为(3.09±1.29)%. 基础血清胰岛素浓度为(3.81±2.20) mU/L，钳夹试验开始后血清胰岛素浓度迅速升高，于10 min时达到高峰 (133.70±21.91)mU/L，随后维持在(91.57±13.86)mU/L 至试验结束. 基础血清C肽浓度为(1.92±0.34)μg/L，整个钳夹过程中C肽浓度为(1.32±0.35)μg/L，各个时点的C肽浓度与基础状态相比呈逐渐下降趋势 (图1). 钳夹稳态期与基础状态相比较，升糖激素如血皮质醇、生长激素的浓度无明显上升，且均呈逐渐下降的趋势 (图2).2. 2高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹过程中的血糖及葡萄糖输注率变化钳夹试验过程中受试者血糖浓度稳定在(4.99±0.15)mmol/L，试验开始40 min内GIR上升较快，达到(9.45±3.17)mg/（kg·min），此后上升趋于平缓，在90~120 min时均保持在稳态 (图3). 钳夹开始20~120 min内GIR为(10.75±2.38)mg/（kg・min），稳态期GIR为(11.56±1.74)mg/（kg・min），不同性别之间GIR ［男(10.53±1.57)mg/（kg・min），女(12.25±1.59)mg/（kg・min）］差异无统计学意义（P=0.12）.3讨论1966年Andres依据糖代谢特点设计了高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹技术，1979年DeFronzo等［1］对该技术作了详细研究并应用于人体，从此推动了葡萄糖钳夹技术在世界范围内的应用，成为目前公认评价机体胰岛素敏感性的“金标准”. 本研究按照DeFronzo等［1］的方法进行设计，结果显示形成稳定高胰岛素状态，达到完全抑制肝脏内源性葡萄糖输出的目的；血糖钳夹在正常水平，变异系数小于5%；试验中内源性胰岛素分泌被抑制，升糖激素无明显释放，符合高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹技术成功建立的标准［1］. 正常人体内胰岛素浓度高于生理水平时肝糖输出可以被完全抑制，故钳夹试验中当达到高胰岛素稳态时外源性葡萄糖输注率 (GIR) 等于外周组织的葡萄糖利用率 (M值)，此时GIR可作为评价机体胰岛素敏感性的指标［1］. 贾伟平等［3］建立扩展高胰岛素��正常葡萄糖钳夹技术时稳态期胰岛素浓度为(63.00±4.86) mU/L时肝糖产生为0，故计算M值时可忽略肝糖的产生. 当对存在胰岛素抵抗的患者进行正常葡萄糖钳夹试验时，经典试验中采用的胰岛素输注率所达到的稳态期胰岛素浓度并不能完全抑制肝糖输出［4］.研究表明，无论是糖尿病患者还是其他胰岛素抵抗严重的患者，当采用较快的胰岛素输注率使稳态期胰岛素浓度达到200 mU/L以上时，肝糖输出几乎被完全抑制，可以避免肝糖输出影响试验结果［5- 6］. 本组10名受试者钳夹试验时均采用2 mU/（kg・min)的胰岛素输注率，稳态期胰岛素浓度与DeFronzo经典试验结果类似［1］. 不同实验室采用相同胰岛素输注率时稳态期胰岛素浓度相差较大，可能与试验具体操作、胰岛素测定方法及受试者空腹胰岛素浓度不同等因素有关. 钳夹稳态期胰岛素浓度不同，GIR值也不同，一般稳态期胰岛素浓度越高，GIR值越大［1， 3， 7-10］. 当对存在胰岛素抵抗的患者进行正常葡萄糖钳夹试验时，稳态期胰岛素浓度较高，评价胰岛素敏感性时可采用稳态期胰岛素浓度加以较正［11］.综上所述，高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹试验中达到胰岛素�财咸烟谴�谢稳态后的外源性葡萄糖输注率等于外周组织的葡萄糖利用率，葡萄糖输注率(GIR) 可作为评价机体胰岛素敏感性的指标. 近年来钳夹试验中微量精确输液泵和计算机技术的应用大大简化了试验操作难度并提高了成功率，高胰岛素正常葡萄糖钳夹技术将在糖尿病的预测、糖尿病发病机制研究等方面发挥重要作用.【参考文献】［1］ DeFronzo RA， Tobin JD， Andres R. 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2、测定 NSB管(非特异性结合管)加300ml分析液，Bo管(参比管)加200ml分析液，其他管加100ml 分析液。在其它分析管中加100oL标准品、质控样品或待测血清样品，各管加入100μl 125I-Insulin，然后各管(除Total count tubes与NSB管)加入100ml猪胰岛素抗体，混合均匀 ，封闭，4oC过夜。20小时以后各管加1ml的冷冻沉淀剂，涡旋，孵育20min，4oC。离心 30min，立即倾出上清，于γ计数仪上计数各管。各批分别设置猪胰岛素标准校正曲线， 用以计算该批所测未知样品浓度。
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二、RIA方法测定血清样品中胰岛素抗 原浓度
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（一）原理 将一定量的胰岛素标记示踪物和待测样品混合，加入猪胰岛素抗体,通过标记
示踪物和待测样品与抗体的特异性竞争结合。加入沉淀剂后,与抗体结合的标记示 踪物在沉淀中，结合的标记示踪物与待测胰岛素样品的量成反比。γ计数仪计数越 高，对应的胰岛素样品的浓度越低。 （二）实验方法 1、采样
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2、钳夹技术原理 正糖钳技术通过同时输注可控浓度及速率的外源性胰岛素和葡萄糖，打破体内葡
萄糖一胰岛素的负反馈调控，使血浆外源性胰岛素维持在较高浓度水平，而血糖维持 在基础稳态水平。由于血浆外源性胰岛素的优势浓度，抑制了内源性葡萄糖(肝糖分解 和糖异生)和内源性胰岛素分泌，此时外源性葡萄糖输注速率等于外周组织的葡萄糖利 用率，从而评价葡萄糖、胰岛素以及其他相关物质的代谢过程。
胰岛素治疗中的胰岛素抵抗-PPT
胰岛素治疗反应
内源性或外源性胰岛素得敏感性和反应性降低
实验室检查
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临床评估
有 T2DM、HBP或者心梗得家族史 2分
WHR>0、85 1分
BP>140/90 1分
TG>1、9
1分
尿酸 >386、8
1分
脂肪肝
1分
≥ 3分可能有抵抗 ≥ 3分+IGT、T2DM或者FING≥ 15ui/ml 肯定有抵抗
胰岛素抵抗得诊断标准:
1999年WHO提出:由高胰岛素正葡萄糖钳夹技术测定得个体葡萄糖利用 率低于所处背景人群得下1/4位点,可诊断为胰岛素抵抗
原理
血胰岛素浓度在50μU/ml以上时能抑制90%得肝脏内源性葡萄糖生成 此时血糖维持正常水平主要依赖输入得外源性葡萄糖 所输外源性葡萄糖得量等于机体在胰岛素作用下所处理得葡萄糖 根据输入葡萄糖得量和血胰岛素比值,可以间接了解机体对胰岛素得敏感
胰岛素治疗中的胰岛素抵抗
胰岛素治疗中得胰岛素抵抗
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目录
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胰岛素抵抗的定义与内涵
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胰岛素抵抗的临床评估
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胰岛素抵抗与糖尿病治疗
43 胰岛素治疗中的胰岛素抵抗
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胰岛素抵抗得定义
胰岛素抵抗就是指
胰岛素得外周靶组织(主要为骨骼肌、肝脏和脂肪组织)对内源性或外 源性胰岛素得敏感性和反应性降低,导致生理剂量得胰岛素产生低于 正常得生理效应。
胰岛素和胰岛素受体结合后主要通过两条途径将信号下传至效应器, 其中之一就是代谢信号通路。另一个通路就是生长信号通路。
在肥胖和2型糖尿病患者得靶组织,如肌肉和血管内皮细胞,代谢信号 通路明显受损,但生长信号通路途径保持完好,甚至加强,这种现象就 就是近年有些学者提出得“选择性”胰岛素抵抗。
葡萄糖钳夹技术PPT精选课件
1PH =∑Ins(2,4,6,8,10 mins).
2.计算第二时相胰岛素分泌（second-phase insulin release,2PH）；
2PH=∑Ins（20-150 mins）/14
3 . 最 大 胰 岛 素 分 泌 量 （ maximum secretion,INS120-150）:
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高葡萄糖Байду номын сангаас夹技术 的建立与应用
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原理及应用 1
通过输注外源性葡萄糖使血糖浓度较空 腹状态迅速升高,并在一定时间内维持相 对平稳的高糖状态。在这种持续的高糖 状态下，可以观察到胰岛素在糖刺激后 的快速分泌相（第一相），以及随后出 现的与高糖持续时间一致的第二相分泌， 并能测定稳态下机体最大的分泌胰岛素 的能力，从而能完整的评估胰岛B细胞的 储备和分泌胰岛素的功能。
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实验物品
1、输液管（输液泵专用）。 2、三通管3个。 3、连接管2条。 4、静脉留置针2个。 5、针筒：1ml，5ml，60ml针筒各若干个。
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受试者准备
试验前晚8点钟后禁食，可少量饮水，早晨8点 到实验室，排空小便后仰卧。
试验前，将试验的性质、目的以及可能产生的不 良反应告知受试对象，并填写知情同意书。
受试者应排除肝肾疾病。 试验前三天，受试对象每日至少进食250克以上
碳水化学物，维持体重稳定。
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主要试剂
1、葡萄糖液：50%。 2、葡萄糖液：10%。 3、氯化钠溶液：0.9%。
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高葡萄糖钳夹操作流程 1
1. 配备20%葡萄糖液：可在10%葡萄糖液 中加入50%葡萄糖混合配制。
葡萄糖杂质检查精品PPT课件
PbAc2棉花 HgBr2试纸 砷斑
原理(古蔡氏法)
Zn HCl H2 AsO33 (As3+ ) AsH3
利用金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中 的微量砷盐反应生成具有挥发性的砷化氢，遇溴 化汞试纸产生黄色至棕色的砷斑，与一定量标准 砷溶液在同样条件下生成的砷斑比较，判定药物 中砷盐的限量．
③ SnC12和KI可抑制微量Sb的干扰。
④ PbAc2棉花：样品中可能含有少量硫化物，
在酸性溶液中生成 H 2S Hg Br2 HgS
色斑。醋酸铅棉花用量60mg（装管高度6080mm），应松紧适度。 ⑤ HgBr2试纸：与砷化氢作用较氯化汞试纸 灵敏，但其砷斑不稳定，反应中应保持干燥 及避光，且立即与标准品比较。
(２)最佳实验条件： ①试剂的浓度 ②反应温度：25-40。C水浴反应45min ③Zn粒：2g（ Zn粒大小，加减）， 2000±70μm(1号筛） ④临用新配标准液（lμgAs/ml）：取AS203 0.132g 1000m1，取出l0ml--> 1000ml，即 得。
学习总结
经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量 Study Constantly, And You Will Know Everything. The More
制药五班第五大组
一 实验目的
• 1.掌握葡萄糖中砷盐检查的 操作方法和原理.
二 仪器和试剂
▪ 仪器：检砷仪(250mL)、水浴锅、钠式 比色管等
▪ 试剂：稀盐酸 、 氯化钡、稀硫酸、溴 化钾溴试液、碘化钾试液等
三 操作步骤
砷盐检查
HCl ▪ 样品和标准砷溶液分别置检砷瓶中
KI,SnC12
+Zn 粒 பைடு நூலகம்sH3
葡萄糖钳夹技术
六 高胰岛素正葡萄糖钳夹技 术高葡萄糖钳夹操作流程
4.分别在两侧上肢静脉留置穿刺针，以生 理盐水维持通道，以备抽血及输注胰岛 素及20%葡萄糖。 5.分别于-30，-15，0分钟留取基础血样后， 一侧上肢置于一温度为50°C，湿度为 70%的恒温箱中以获得动脉化的静脉血 样，另一侧静脉通道用于输注胰岛素及 20%葡萄糖。
高葡萄糖钳夹操作流程4
6. 标本采集；于开始输注葡萄糖0-10分钟 内每2分钟取血测定胰岛素，以后每10 分钟取血一次，测定胰岛素。每30分钟 取血一次测定胰高糖素。实验结束后收 集实验过程中的尿液，测定尿糖含量。 7.留取部分实验中输注的葡萄糖液测定精 确的葡萄糖浓度。
结果处理 1
一） 评价B细胞功能： 1.计算第一时相胰岛素分泌（first-phase insulin release,1PH）： 1PH =∑Ins(2,4,6,8,10 mins). 2.计算第二时相胰岛素分泌（second-phase insulin release,2PH）； 2PH=∑Ins（20-150 mins）/14 3 . 最 大 胰 岛 素 分 泌 量 （ maximum insulin secretion,INS120-150）: INS120-150=∑Ins（120-150 mins）/4
葡萄糖钳夹技术的建立与应用
钳夹技术
高葡萄糖钳夹技术 高胰岛素正葡萄糖钳夹技术
DeFronzo RA,Tobin JP,Andres R.Am J Physiol,1979,237:E214-S223
相关背景知识
糖尿病是高度异质性疾病，
目前认为主要是由于胰岛素 抵抗合并胰岛B-细胞分泌胰 岛素缺陷或B-细胞分泌缺陷 伴或不伴胰岛素抵抗引起。
高胰岛素_正葡萄糖钳夹技术的建立
文章编号:0253-3626(2004)05-0615-03高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术的建立汪志红1,李启富1,张素华1,刘秀容1,刘智萍1,罗四川2,黄健康1,何 军1(1.重庆医科大学临床学院内分泌科,重庆 400016;2.重庆市急救中心内科,重庆 400012)【摘 要】目的:建立高胰岛素-正常葡萄糖钳夹技术。
方法:应用高胰岛素-正常葡萄糖钳夹技术对8例正常体重、正常糖耐量者进行了方法学的研究。
结果:在优势胰岛素浓度、血浆葡萄糖浓度稳定在正常空腹水平状态下,内源性胰岛素释放和肝糖产生被抑制,升糖激素(皮质醇、生长激素、胰高糖素)无明显增高。
(2)在高胰岛素-正常葡萄糖钳夹稳态期,葡萄糖利用率为9.25±0.25mg/(kg.min)。
结论:高胰岛素-正常葡萄糖钳夹技术已成功建立。
在外源性胰岛素-葡萄糖代谢的稳定状态下,机体葡萄糖利用率显著增加。
【关键词】高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术;胰岛素抵抗;胰岛素敏感性【中国图书分类法分类号】R587.1 【文献标识码】A 【收稿日期】2003-10-24Establishment of hyp erinsulinemic euglycemic clamp techniqueW A N G Zhihong,et al(Depart ment of Endocri nology,College of Cli nical Medici ne,Chongqi ng Medical U niversity)【Abstract】Objective:To establish a hyperinsulinemic euglycemic clamp technique for the study of insulin sensitivity in Chinese. Methods:A hyperinsulinemic euglycemic clamp technique was used to the study of methodology in8normal weight subjects with nor2 mal glucose tolerance.Results:(1)When a higher level of insulin was created during maintaining fasting euglycemia,the secretion of endogenous insulin and hepatic glucose production were completely inhibited.The secretion of counter-regulatory hormones(cortisol, growth hormone and glucagon)was not significantly stimulated..(2)During the steady-state of hyperinsulinemic euglycemic clamp, the glucose disposal rate was9.25±0.25mg/(kg.min)Conclusion:The hyperinsulinemic euglycemic clamp technique was established successfully in Chinese.During the steady-state of exogenous insulin and glucose metabolism,glucose utilization increased.【K ey words】Hyperinsulinemic euglycemic clamp technique;Insulin resistance;Insulin sensitivity 众多研究表明,胰岛素抵抗(IR)和胰岛B细胞功能缺陷是2型糖尿病发病和病程中的两个重要环节。
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高胰岛素正葡萄糖钳夹技术 的建立与应用
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一 原理及应用 1
通过持续输注外源性胰岛素 和葡萄糖，抑制内源性肝糖
产生和胰岛素分泌，达到外 源性胰岛素-葡萄糖代谢平衡 状态后，评价个体内胰岛素
对葡萄糖代谢的作用程度， 也就是胰岛素的敏感性。
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原理及应用 2
同时由于大部分的内源性葡萄糖生 成被抑制，外源性葡萄糖的输注率 即被认为是组织葡萄糖的利用率， 通过计算可以得到胰岛素敏感性指 数，其与评价胰岛素敏感性的“金 标准”-----高胰岛素正葡萄糖钳夹的 相关性较好。
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实验仪器：
1、输液泵一台。 2、快速血糖测定仪一台。 3、温度控制仪一台。 4、多功能计时秒表两个。
葡萄糖钳夹技术的建立与应用
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钳夹技术
高葡萄糖钳夹技术
高胰岛素正葡萄糖钳夹技术
DeFronzo RA,Tobin JP,Andres R.Am J Physiol,1979,237:E214-S223
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相关背景知识
糖尿病是高度异质性疾病， 目前认为主要是由于胰岛素 抵抗合并胰岛B-细胞分泌胰 岛素缺陷或B-细胞分泌缺陷 伴或不伴胰岛素抵抗引起。
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高葡萄糖钳夹操作流程 3
5. 20%葡萄糖的输注分两个阶段：第一阶 段为初始剂量阶段，使血糖在14分钟内 升 高 7 . 9 mmol/L， 其 具 体 的 输 注 率 按 DeFronzo提供的体表面积经验值及实际 操作中每2分钟测得的血糖值调节。第二 阶段为维持剂量阶段，葡萄糖输注率以 实验15-150分钟内每5分钟测得的血糖值 根据负反馈原则调节，并记录调节时间。
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主要试剂
1、葡萄糖液：50%。 2、葡萄糖液：10%。 3、氯化钠溶液：0.9%。
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高葡萄糖钳夹操作流程 1
1. 配备20%葡萄糖液：可在10%葡萄糖液 中加入50%葡萄糖混合配制。 2. 令受试者排空小便后仰卧于床，整个实验过程中保持清醒安静状态。 3. 分别在两侧上肢静脉留置穿刺针，以生理盐水维持通道，以备抽血及输注20%葡萄糖。
DeFronzo RA,Tobin JP,Andres R.Am J Physiol,1979,237:E214-S223
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相关背景知识
•糖尿病是高度异质性疾病， 目前认为主要是由于胰岛素 抵抗合并胰岛B-细胞分泌胰 岛素缺陷或B-细胞分泌缺陷 伴或不伴胰岛素抵抗引起。
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五 受试者准备：
1. 试验前三天，受试对象每日至少进食250克以上碳水化学物，维持体重稳定。 2. 试验前晚8点钟后禁食，可少量饮水，早晨8点到实验室，排空小便后仰卧。 3. 试验前，将试验的性质、目的以及可能产生的不良反应告知受试对象，并填写知情同意书。
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六 高胰岛素正葡萄糖钳夹技术高葡萄糖钳夹操作流程
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原理及应用 1
• 通过输注外源性葡萄糖使血糖浓度较空腹状态迅速升高,并在一定时间内维持相对平稳的高糖状态。在这种 持续的高糖状态下，可以观察到胰岛素在糖刺激后的快速分泌相（第一相），以及随后出现的与高糖持续 时间一致的第二相分泌，并能测定稳态下机体最大的分泌胰岛素的能力，从而能完整的评估胰岛B细胞的储 备和分泌胰岛素的功能。
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原理及应用 2
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各组动物于给予胰岛素制剂前及给药后每隔30min取血,直至钳夹结束。全部血 样均于凝固后离心获得血清，血清样品于-20℃保存。采用RIA方法检测其中的猪胰 岛素抗原浓度，用于胰岛素血清药代动力学的计算。
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2、测定 NSB管(非特异性结合管)加300ml分析液，Bo管(参比管)加200ml分析液，其他管加100ml 分析液。在其它分析管中加100oL标准品、质控样品或待测血清样品，各管加入100μl 125I-Insulin，然后各管(除Total count tubes与NSB管)加入100ml猪胰岛素抗体，混合均匀 ，封闭，4oC过夜。20小时以后各管加1ml的冷冻沉淀剂，涡旋，孵育20min，4oC。离心 30min，立即倾出上清，于γ计数仪上计数各管。各批分别设置猪胰岛素标准校正曲线， 用以计算该批所测未知样品浓度。
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2、钳夹实验 试验前比格犬禁食12h，试验时用巴甫洛夫吊带将比格犬固定于实验台上。在动 物一侧前肢建立静脉通道，该通道连接三通管，一端连接胰岛素注射泵，一端连接葡 萄糖输注泵。钳夹开始后10min内以较快的速度输注胰岛素，以使血胰岛素水平快速 升高，而后以较低的速度持续输注维持一定血胰岛素浓度。在静脉通道对侧前肢取血 测量血糖，每隔5min取血测量血糖一次，通过调节葡萄糖输注率以维持血糖水平恒定 。经一段时间后、血糖恒定维持于平衡状态。给胰岛素制剂后,葡萄糖输注率随着胰岛 素产生的作用变化，以此来评价胰岛素制剂的药效动力学特征。
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一、高胰岛素--正葡萄糖钳夹技术
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（一）、历史背景 1966年Andres等根据葡萄糖一胰岛素的负反馈原理，创立了一种ronzo等对该技术从理论上作了 详细的阐述，并给予技术指导，推动了世界范围的广泛应用。萄糖钳夹技术根据研究 目的的不同又划分为高糖钳、正糖钳及低糖钳等不同方法。 （二）、技术原理 1、葡萄糖一胰岛素负反馈体系
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（三）结果计算 用MicroCal公司Origin5.0对浓度对数和各管放射计数与总计数的比值对数绘制
标准曲线，四参数Logistic拟合：
（四）PKPD参数的计算和统计分析 用MierosoftExee1XP软件采用统计矩方法计算各药效动力学与药代动力学参数
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3、正糖钳技术指标 ① 钳夹稳定状态下血糖(SSPG)：SSPG需控制在正常空腹血糖±10％范围内。 ② 钳夹稳定状态下胰岛素(SSINS)：较高的血浆外源性胰岛素水平才能抑制内源性肝 糖及胰岛素的生成，满足实验要求。 ③ 血糖变异系数(CVBG)：钳夹实验期间CVBG可反映钳夹技术的稳定性与准确性。 ④ 稳态葡萄糖输注速率(SSGIR)：SSGIR等于外周组织的葡萄糖利用率，可用来评价 外周组织(主要是肌肉组织)胰岛素作用，反映机体组织的胰岛素敏感性。 ⑤ 内源性胰岛素分泌：c肽水平可评估内源性胰岛素分泌，粗略判断内源性胰岛素分 泌的抑制程度。
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二、RIA方法测定血清样品中胰岛素抗 原浓度
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（一）原理 将一定量的胰岛素标记示踪物和待测样品混合，加入猪胰岛素抗体,通过标记
示踪物和待测样品与抗体的特异性竞争结合。加入沉淀剂后,与抗体结合的标记示 踪物在沉淀中，结合的标记示踪物与待测胰岛素样品的量成反比。γ计数仪计数越 高，对应的胰岛素样品的浓度越低。 （二）实验方法 1、采样
。PK或PD曲线下面积用梯形法进行计算。达峰时间与峰浓度均为实测值。比格大 自身交叉对照组数据比较用Student‘S配对t一检验法进行统计判断,其它处理组组间t 一检验进行统计学判断。用Origin软件对实验结果进行线性回归求回归方程及相关统 计参数，并作图。
血糖升高时，胰岛素分泌增加，并通过增加摄取、储存和利用葡萄糖等方式，下 调血糖；血糖下降，胰岛素分泌降低，胰高血糖素等升糖激素增加，促进代谢分解， 加速糖原分解和葡萄糖异生作用，升高血糖。
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2、钳夹技术原理 正糖钳技术通过同时输注可控浓度及速率的外源性胰岛素和葡萄糖，打破体内葡
（三）、特点 1、避免了内源性胰岛素缺乏(如糖尿病患者)及低血糖(如胰岛素耐量试验中)对胰 岛素敏感性测定的影响。 2、将内源性干扰减至最小，增加了实验的可控性与准确性，降低了结果的变异 性。 （四）、缺点 1、不同受试者的应激反应和血管紧张度等诸多因素会对稳态的建立产生一定的 影响。 2、该技术复杂耗时、费用昂贵，实验中需频繁取血。 （五）、实验方法 1、建立静脉输液通道及采血通道 在前臂静脉或正中静脉穿刺并留置导管建立输液通道，用于输入胰岛素和葡萄糖 溶液。葡萄糖和胰岛素输注通道经三通管与静脉通道联接。采血通道由输液器、三通 管、带延长的三通管、静脉留置针依次串连在一起，2个三通管的侧孔分别接上注射