试剂盒基础知识)

按试剂组成分类
单试剂优缺点
优点： 操作简便适用于各类生化分析仪，节约试剂位 缺点： 配方复杂（稳定剂、掩蔽剂），稳定性差，不
能完全避免内外源物质干扰。
按试剂组成分类
双试剂的特点
（1）可较彻底排除样品空白和内外源干扰物 （2）更加符合酶偶联反应的特性和过程 （3）试剂配方简单 （4）试剂稳定，便于储存，运输和使用 （5）可用抑制法直接测定某些同工酶
不污染环境。 所用标准品或标准参考物符合卫生部临床检验中心、
IFCC、WHO推荐的标准和要求。
试剂盒的类型
按剂型分类 按试剂组成分类 按发展阶段分类 按是否为专用包装分类 按适用通道的不同分类
按剂型分类
干粉试剂
将各组份溶于液体中分装再冻干，或用球磨粉碎、或混合后 打成片剂，用前再加入指定量的缓冲液使其溶解（称复溶）， 这种类型的试剂称为干粉试剂。
按是否为专用包装分类
专用包装试剂：7060、7170、贝克曼包装等 非专用包装试剂
按适用通道的不同分类
封闭通道：性 可靠性
实用性
标本类型 操作要求 服务要求：电力供应，通风环境，试剂处理等 消耗品要求 技术职能要求 成本 分析速度 一般问题 如临床应用价值、试剂的效期、包装规格是否
重点选择的几个指标
准确度 通常以回收率、定值血清的靶值范围、对照试验及干扰 试验的结果来分析判断。
精密度 试剂的瓶间差异、批内精密度和批间差异三组测定的平 均值之间应无显著差异，否则，试剂盒的均一性不符合 要求。
线性范围 指该试剂盒按其说明使用时可准确测量的范围。
抗干扰作用 双试剂型试剂盒主要优点是抗干扰作用。
常用监测物质的特性
1．NADH辅酶I或NADPH辅酶II：
乳酸脱氢酶（LDH） 苹果酸脱氢酶（MDH） 谷氨酸脱氢酶（GLDH）
NAD+或NADP+ （alt） NAD+或NADP+ （co2） NAD+或NADP+ （hcy）
常用监测物质的特性
NADH或NADPH在340nm有特征性光吸收，而它们的氧 化型NAD+或NADP+则没有这个吸收峰，340nm波长处 的吸光度与NAD（P）H的浓度成正比。
按试剂组成分类
单试剂 液体单试剂就是将某种生化检验项目所用到的试剂科学 地混合在一起，组成为一种试剂。应用时，只须将标本 和试剂按一定比例混合，即可进行相应的生化反应，然 后用适当的方法检测结果。
双试剂
液体双试剂就是将某些生化检测项目所用到的试剂，按 用途科学地分成两类，分别配成两种试剂，通常第一试 剂加入后可起到全部或部分消除某些内源性干扰的作用， 第二试剂为启动被检测物质反应的试剂，两种试剂混合 后才共同完成被检项目的生化反应。
试剂盒基础知识
试剂盒的概念
把某一项临床生化分析测定项目的试剂及辅助用品配套 组装在一起，各组分在较长的保存期内稳定使用时按试 剂盒中的说明书操作。
试剂盒的要求
试剂盒所采用的测定方法特异性好、灵敏度、准确度、 精密度符合卫生部临床检验中心、IFCC、WHO等推荐 的指标。
试剂盒的储存期至少为1年。 水溶性、低粘度、无腐蚀、无毒害、不爆炸、不易燃、
液体试剂 优点：液体试剂具有组份均一、瓶间差和批间差极其微小以 及使用方便（不必复溶，避免了复溶时所用蒸馏水中污染杂 质的干扰）、操作误差小等明显优势。 缺点：许多酶类试剂盒受温度的影响保质期短。
浓缩试剂
使用时只取很少的量，再加入重蒸水稀释（例如：R-50l + 重蒸水-250l）配制成工作液。
液体双试剂的优点
提高了抗干扰反应的能力 在临床生化测定过程中，血标本除了含有待测物质外，还 含有各种酶、有机物、无机盐等物质，这些物质都会干 扰或参与测试反应，引起非特异性反应干扰，而双试剂 型试剂盒设计的一个主要目的就是为了克服这种干扰反 应。 排除样品中非测定成分的干扰，提高准确性
例如：ALT 内源性丙酮酸+NADH LDH 乳酸+NAD L-丙氨酸+α-酮戊二酸+NADH ALT 丙酮酸+L-谷氨酸 丙酮酸+NADH+H+ LDH 乳酸+NAD++H2O
常用监测物质的特性
例一：肌酸激酶（CK） 磷酸肌酸＋ADP CK 肌酸＋ATP 葡萄糖＋ATP HK 葡萄糖-6-磷酸＋ADP 葡萄糖-6-磷酸＋NADP G6PDH 6-磷酸葡萄糖酸＋NADPH＋H+
重点选择的几个指标
灵敏度 采用蒸馏水（5%牛血清白蛋白溶液）作为 空白样本，
空白样本应不含被测物。在生化分析仪上连续检测20次， 记录检测结果。计算20次结果的均值与标准差SD。以空 白均值加两倍标准差作为报告方法的检测限。
稳定性 试剂盒稳定性是指试剂盒在规定条件下储存仍保持其性
能指标的期限。该期限应符合规定的储存期。方法有以下 三种。 • 1．原包装试剂的稳定性 • 2．复溶后试剂的稳定性 • 3．不同温度下的保存期
液体双试剂的优点
增强了工作试剂的稳定性： 试剂组分高度均一：不必冻干复溶，避免了干粉试剂复溶
时所用蒸馏水污染杂质的干扰作用。避免了干粉试剂盒分 装，冻干，复溶过程中引起的瓶间差，提高了测定的精密 度和准确度.
按发展阶段分类
传统试剂盒 新型试剂
◇快速反应试剂盒 ◇一步法试剂盒 ◇多项同测组合试剂盒 ◇卡式试剂盒 ◇浓缩试剂盒
多样、操作是否简便等。
可靠性（试剂盒基本性能指标）
准确度：测定值与真值的相符合程度 精密度：同一标本用同一方法在同样条件下多次重复测
定所得各次结果之间或各次结果与均值之间的相符合程 度。 线性范围（分析范围） 干扰性 灵敏度：化学反应中能检出的最小量 稳定性 特异性 方法学性能（IFCC，酶法 ，HDL，LDL方法等）
化学试剂盒常用的反应原理
比色法 由单纯的化学物质参与反应，呈色，在一定波长下比色。 例如总蛋白的双缩脲比色法、白蛋白的溴钾酚绿法。
酶法 由特异性的酶来催化反应，在一定波长下比色。例如甘 油三酯由甘油激酶和过氧化物酶来催化反应；尿素有脲 酶来催化反应进行。
免疫比浊法 抗体（Ab）与可溶性抗原（Ag）反应，形成一定结构 的免疫复合物，成为悬浮于反应溶液中的微粒。这种在 沉淀反应中形成的微粒具有特殊的光学性质。