血细胞分析仪测定原理与参数解析

DHSS技术：在流式 通道中有2个鞘流装置， 细胞经第1束鞘流后通过 阻抗微孔测定细胞的真实 体积，然后经第2束鞘流 后到达光窗，测定细胞的 光吸收，分析细胞的内部 结构。
双鞘流图
2、双流体（双鞘流）动力连续系统（DHSS）
DHSS技术：染色剂中含有溶血 素及氯唑黑E活体染色，溶解红细胞， 对单核细胞初级颗粒、嗜酸性粒细胞 和中性粒细胞特异颗粒进行染色，同 时对细胞膜、核膜、颗粒膜染色，得 到中性粒细胞、单核细胞、嗜酸性粒 细胞、淋巴细胞、异型淋巴细胞和巨 大未成熟细胞（LIC）散点图结果。双 矩阵LIC散点图可将幼稚细胞分为3个 亚群：①未成熟粒细胞（IMG）：包 双矩阵巨大未成熟细胞（LIC） 括异常中性粒细胞、晚幼粒细胞、中 幼粒细胞、早幼粒细胞、原始粒细胞。 散点图 ②未成熟单核细胞（IMM）：包括幼 （IMG未成熟粒细胞、IMM未成熟 稚单核细胞、原始单核细胞。③未成 单核细胞、IML未成熟淋巴细胞） 熟淋巴细胞（IML）：包括幼稚淋巴 细胞、原始淋巴细胞等。
二、成熟红细胞系列参数检测原理
1、电阻抗法 依据红细胞大小和数量 进行红细胞计数 2、流式细胞术、鞘流电阻抗 法 红细胞/血小板计数通 道：当红细胞计数你和血小 板计数结果异常时，可提示 转换至Ret/PLT-O光学检测 通道，用光学法测定血小板 （PLT-O），得到与红细胞 计数和血小板计数相关的众 多参数。
三、激光散色法流式细胞术检测原理
如细胞（或其他颗粒）用 荧光染料染色,则染色后的细胞 （或其他颗粒）被激光照射时， 可产生不同波长的荧光散射， 可用检测器接受散射荧光。将 来自各种散射光的信息进行综 合分析，即可准确区分正常类 型的细胞（其他颗粒）。激光 散射法在区别体积相同而类型 不同的细胞特征时，比电阻抗 法血细胞分群更准确。故激光 散射法已成为现代五分类血液 分析仪的主要检测原理之一。
嗜碱性粒细胞散点图

1、流式细胞术、电阻抗、射频和特殊细胞染色法 检测通道：
（3）未成熟粒细胞信息（IMI） 通道：用射频、电阻抗和细胞化学 染色法。在细胞悬液中加硫化氨基 酸，幼稚细胞与硫化氨基酸结合的 量多于较成熟的细胞、且对溶血剂 有抵抗作用。因此，当加入溶血剂 时，成熟细胞被溶解，只留下幼稚 细胞（含未成熟细胞、原始细胞、 造血祖细胞）得以计数。 IMI通道 可定量分析不同类型幼稚细胞，包 括造血祖细胞（HPC）、成熟粒细 胞、原始细胞、异型/异常淋巴细 胞、核左移和有核红细胞，得到 HPC百分率和绝对值计数。
未成熟粒细胞 信息通道散点图
2、双流体（双鞘流）动力连续系统（DHSS）

用钨光源流式细胞光吸收、 化学染色和电阻抗法：①白细 胞计数通道：用电阻抗法检测。 ②嗜碱性粒细胞通道：用专用 染液染色，嗜碱性粒细胞具有 抗酸性，而其他细胞胞质溢出， 成为裸核，用电阻抗法检测， 用电阻抗法检测，所得结果与 白细胞/血红蛋白通道（采用鞘 嗜碱性粒细胞计数直方图 流阻抗法测定白细胞）的白细 胞结果进行比较。
血细胞分析仪测定原理与参数解析
太航医院检验科 乔军军
简 介 血细胞分析仪检测原理 血细胞分析仪检测参数原理 检测参数（报警） 临床应用
简
介

自动血细胞分析仪,早年称血细胞技术 仪，已是目前国内外临床检验最常用的筛检 仪器之一。 20世纪50年代初，美国W.H.Coulter 申请了粒子计数法的技术专利，在世界上研 发了第1台电子血细胞技术仪，并应用于临 床，开创了血细胞计数的新纪元。从此，随 着基础医学和高科技，特别是计算机软件技 术的发展，其检测原理逐渐完善，检测技术 不断创新，检测的参数显著增多。
四、血红蛋白浓度测定检测原理
用光学比色原理测定血红蛋白浓度，有2类稀释液。 1、改良氰化高铁血红蛋白法 测定波长540nm，稀释液含氰化物成分。 2、非氰化高铁血红蛋白法 即稀释液不含氰化物配制的成分。如SLS-Hb测 定法，测定波长555nm。与手工法HiCN测定的相关 性高（r=0.999）。手工法HiCN反应时间长，仅用 于仪器的校准。有些血液分析仪测定血红蛋白，可 兼用非氰化物试剂（如用二甲基月桂胺氧化物）和 氰化物试剂（如用咪唑，含氰化物试剂作用，但无 毒性）。
射频电流检测原理
三、激光散色法流式细胞术检测原理

将经试剂稀释、染 色、球形化的细胞（或 其他颗粒）悬液注入鞘 液流中央，单个细胞随 悬液和鞘流液两股液流 整齐排列，以恒定流速 定向通过石英毛细管。
鞘流技术 1.检测光；2.细胞流；3.前鞘流； 4.后鞘流；5.流液方向
三、激光散色法流式细胞术检测原理
检 测 参 数（报警）
1、报警的概念
是指所检测的标本不能满足仪器软件系统的定义或不能满足实验 室（用户）建立的检测标准。
（1）报警来源：主要有检测结果超出实验室设定的检测项目
参考值、复检标准，临床疾病标本异常和患者人群变异。
（2）报警形式：主要有图片、符号或文字三种。仪器依据预
先设定的检测数据、大小分布、图形等，作出全面分析和判断，对可 以的阳性检测结果用文字或图示的形式作出解释性、易于理解的报警 信息。如，用红色显示阳性（反之，绿色显示阴性）。出现“阳性” 或“错误”提示，可能确实是标本出现异常，因此必须根据实验室的 规则，进一步仔细检查。特别须注意出现WBC、DC、RBC、PLT及其 相关参数的数量和形态异常的报警。
正常红细胞直方图
光学法检测网织红细胞、 成熟红细胞和血小板 散点图
3、流式细胞术激光散射法

红细胞/血小板检测通道：用稀释液十二烷基硫 酸钠（SDS）使红细胞/血小板成为球形并经戊二醛固 定，红细胞被激光照射后，所得信号相同，且不影响 MCV的测定。用低角度光散射测量红细胞体积与总数， 高角度光散射检测单个血红蛋白浓度，可准确测定 MCV、MCH、MCHC值，得到红细胞散点图；同时可 测定单个红细胞体积及红细胞内血红蛋白含量，得到 相应直方图及RDW、HDW等参数。
血细胞分析仪检测原理
一、电阻抗法 二、射频电导法 三、激光散射法
一、电阻抗法血细胞计Baidu Nhomakorabea原理
悬浮在电解质溶液中的血细胞 相对于电解质溶液为非导电颗粒， 其电阻比电解质溶液大，利用两者 导电性能的差异，体积大小不同的 血细胞（或类似颗粒）通过计数小 孔时，可引起小孔内、外电流或电 压的变化形成与血细胞数量相当、 体积大小相应的脉冲电压，从而间 接区分出细胞群，并分别进行计数， 这就是电阻抗原理即库尔特原理。 电阻抗法可精确测量出细胞 （或类似颗粒）的大小，是三分类 血细胞分析仪的主要应用原理。电 阻抗法还与光学检测原理组合应用 于五分类血细胞分析仪中。
当细胞（或其他颗粒）通过激光束 被照射时，细胞（或其他颗粒）因本身 的各种特征（如体积大小、染色程度、 细胞成分浓度或细胞核密度等），可阻 挡或改变激光束的方向，产生与细胞 （其他颗粒）特征相应的各种角度的散 色光。置放在石英毛细管周围不同角度 的信号检测器（光电倍增管）接受到特 征各异的散色光。来自低角度散色光 （或称前向散色光）的信息，反映细胞 （或其他颗粒）的数量和表面体积大小； 来自高角度散色光（或称侧向散色光） 的信息，反映细胞（或其他颗粒）的内 部颗粒、细胞核等复杂性。
2、双流体（双鞘流）动力连续系统（DHSS）

③白细胞分类通道： 双鞘流系统中，用流式 细胞光吸收、电阻法和 细胞化学染色液对细胞 胞质和蛋白组分染色， 检测除嗜碱性粒细胞以 外的白细胞；在幼稚红 细胞通道，荧光染色， 进行白细胞分类。
白细胞分类计数散点图
2、双流体（双鞘流）动力连续系统（DHSS）
二、射频电导法

射频指射频电流，是每秒变化 大于10000次的高频交流电磁波。电 导性即电的传送性能。高频电流能 通过细胞壁。用高频电磁探针渗入 细胞膜脂质层可测定细胞的导电性， 提供细胞内部化学成分、细胞核和 细胞质（如比例）、颗粒成分（如 大小和密度）等特征性信息。电导 性特别有助于鉴别体积虽相同、但 内部结构性质不同的细胞（或相似 体积的颗粒）如淋巴细胞和嗜碱性 粒细胞两者直径虽均9~12um，但 在高频电流检测时，因两类细胞不 同核质比例而出现不同的检测信号。 射频电导法结合其他检测原理一起 应用于血细胞分析仪中。
三、血小板系列参数检测原理
1、电阻抗法 依据血小板大小和数量进行血小板计数。在电阻抗法血小 板计数时，有的还采用3次计数、扫流和拟合曲线等计数准确 性。 2、流式细胞激光核酸荧光染色和电阻抗法 红细胞/血小板计数通道：用鞘流电阻抗法测定血小板计 数（PLT-I）结果异常时，仪器转换至光学法核酸荧光染色网 织红细胞/血小板检测通道，用光学法测定血小板（PLT-O）。 核酸（DNA/RNA）荧光染色时，未成熟网织血小板染色多， 成熟血小板染色少，并显示PLT-O散点图结果，可得到未成熟 血小板比率（IPF）、光学法血小板计数（PLT-O）、电阻抗 血小板计数（PLT-I）、血小板比容（PCT）、血小板分布宽 度（PDW）、血小板平均体积（MPV）、大血小板比率（PLCR）。成熟红细胞无DNA/RNA，不被染色，从而得以在体 积大小和核酸染色上与血小板鉴别。
仪器检测性能指标，包括：灵敏度（S）、特异性（Sp）、阳性预测 值（PPV）、阴性预测值（NPV）和总数率（一致率或符合率）。
（3）报警有效性：仪器以参考方法检测结果作为标准，判断 （4）报警内容：仪器报警的项目和内容是厂商和用户作出的
定义，内容涉及检测对象年龄、性别、参考值、危急值、红细胞计数 值、血小板计数值、白细胞计数和分类值、细胞形态或可疑的各种异 常信息。血细胞分析仪解释性程序（IP）是仪器依据检测数据、大小 分布、图形的全面分析作出判断，提供易于理解的报警信息，用于对 结果显示和信息的补充，提示浏览屏幕上报警信息。 对同样的内容，各仪器报警形式并不统一。因此，要根据各仪 器的操作手册，仔细理解定义。各类血细胞分析仪常见报警内容见表：


传统手工法显微镜血细胞计数或分类 方法，不仅速度慢，而且因操作过程的随 机误差、实验器材的系统误差和检测方法 的固有误差，检测的精密度不高。 “精度高、速度快、易操作、功能强” 是血细胞分析仪的强劲优势，还可和血涂 片制备和染色仪进行组合，由后者完成血 细胞分析仪检测后的形态学复检。


现代血细胞分析仪的功能有:1.全血细 胞计数功能（红细胞、白细胞和血小板计 数及其相关的计算参数）.2、白细胞分类功 能（三分类或五分类白细胞百分率和绝对 值）.3、血细胞计数和分类功能的扩展功能， 包括：有核红细胞计数、网织红细胞计数 及其相关参数检测；未成熟粒细胞、幼稚 粒细胞、造血干细胞计数；未成熟血小板 比率；淋巴细胞亚型计数；细胞免疫表型 检测等。
激光散射法系统基本组成
名称
光源 鞘流 细胞悬液
组成及评价
气体（氦-氖、氩气等）激光或固体（半导体）激光（单色 光）；钨光源（多色光） 维持颗粒于液流中央，顺序、单个、恒速向前流动，即流 体动力学聚集 被检测细胞（颗粒）的悬液，由气压导入流动池
光检测器
接受来自各种角度的散射光或吸收光信号，并转换成相应 特征的电信号
血细胞分析仪检测参数原理
一、白细胞系列参数检测原理 二、成熟红细胞系列参数检测原理 三、血小板系列参数检测原理 四、血红蛋白浓度测定检测原理
一、白细胞系列参数检测原理
1、流式细胞术、电阻抗、射频和特殊细胞染色法 检测通道：

（1）4DIFF通道：利用激光流式 细胞术、核酸荧光染色技术，采用专 一溶血剂解红细胞和血小板，而白细 胞膜仅部分溶解出现小开口，核酸荧 光染料聚次甲基进入受损的白细胞内， 与DNA、RNA和细胞器结合，使之着 色。染色后白细胞色深（未成熟粒细 胞、异常细胞染色更深，成熟白细胞 荧光染色浅），红细胞不染色，血小 板稍染色。因荧光强度与细胞所含核 酸量成比例，从而得到4DIFF白细胞 散点图，包括中性粒细胞和嗜碱性粒 细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性 粒细胞（百分率和细胞计数绝对值） 和未成熟粒细胞（百分率和细胞计数 绝对值）。
白细胞分类–4DIFF散点图
1、流式细胞术、电阻抗、射频和特殊细胞染色法 检测通道： （2）WBC/BASO通道： 在碱性溶血剂作用下，除 嗜碱性粒细胞外的其他所 有细胞均被溶解或萎缩， 随后用流式细胞术计数嗜 碱性粒细胞，从而得到 WBC/嗜碱性粒细胞百分率 和细胞计数绝对值及 WBC/BASO散点图。 白细胞分类–白细胞、