氟苯尼考单用及联用对爱德华氏菌的体外抑菌试验

收稿日期：2010－04－01基金项目：国家科技支撑计划项目（2008BADB9B04）；广西科技计划项目（0718007B－34）作者简介：陈福艳（1979－），女，广西防城港人，工程师，主要从事水生生物病害防治研究。

*为通信作者，E－mail ：nnlww＠126．com 。

斑点叉尾鮰（Ictalurus punctatus Rafinesque ）原产于美洲，是美国的主要淡水养殖鱼类，1984年湖北省水产科学研究所从美国引进，1987年人工繁殖成功，目前养殖范围遍及全国各地［1］。

随着斑点叉尾鮰养殖规模扩大及集约化程度的提高，爱德华氏菌（Edwardsiella ictaluri ）病暴发频繁，死亡率高，池塘养殖及网箱养殖死亡率可达60％～100％，给养殖户带来重大经济损失。

爱德华氏菌能引起斑点叉尾鮰肠道败血症（Enteric septicaemia of catfish ，ESC ），具有流行快、面积广等特点；此菌为非条件致病菌，能逃避宿主免疫系统的监视而在鱼体组织中不断增殖［2～4］。

因此，快速诊断与及时用药是防治该病的关键。

李铁梁［2］报道了斑点叉尾鮰肠道败血症的流行情况及实用防治方案，主要方法是：外用大黄＋五倍子泼洒，间隔用C l O 2全池泼洒，内服维生素K 3＋盐酸多西环素，然后改服氟苯尼考；而苏秀梅等［5］报道的主要治病方法是外用C l O 2或强氯精或漂白粉全池泼洒，内服氟苯尼考或新霉素。

氟苯尼考单用及联用对爱德华氏菌的体外抑菌试验陈福艳，黄婷，张彬，陈明，雷爱莹，梁万文*（广西水产研究所，南宁530021）摘要：为进一步了解爱德华氏菌的药物敏感性，采用肉汤稀释法测定氟苯尼考、恩诺沙星、多西环素、环丙沙星、大黄、黄连、连翘、黄芩等8种药物单用或分别与氟苯尼考联用对斑点叉尾鮰爱德华氏菌的最小抑菌浓度（MIC ），并计算氟苯尼考与其他7种药物联用的抑菌浓度指数（FIC ）。

结果表明，8种药物体外单用对爱德华氏菌均具较强杀菌能力，其MIC 依次为：氟苯尼考0．13μg /mL 、环丙沙星0．03μg /mL 、恩诺沙星0．25μg /mL 、多西环素0．31μg /mL 、黄芩13．33mg /mL 、连翘20．00mg /mL 、黄连30．00mg /mL 、大黄33．33mg /mL ；药物联用时，氟苯尼考分别与多西环素、黄连联用时呈相加作用；分别与恩诺沙星、环丙沙星、大黄、连翘及黄芩联用则均呈无关作用。

关键词：爱德华氏菌；氟苯尼考；联用；抑菌试验中图分类号：S948文献标识码：A文章编号：1002－8161（2010）08－0841－04In vitro inhibition of florfenicol against Edwardsiella ictalurialone and in combination with other drugsCHEN Fu－yan ，HUANG Ting ，ZHANG Bin ，CHEN Ming ，LEI Ai－ying ，LIANG Wan－wen *（Guangxi Fishery Research Institute,Nanning 530021,China ）Abstract:The minimal inhibitory concentration (MIC)of 8kinds of drugs viz .,florfenicol,enrofloxacin,doxycycline,ciprofloxacin,rhubarb(Radix et Rhizoma Rhei ),Coptis chinensis (Rhizoma coptidis ),Forsythia suspensa (Fructus forsythiae )and Scutellaria balicalensis (Radix scutellariae )against Edwardsiella ictaluri were measured alone as well as in combina -tions using beef soup dilution method.When used alone all drugs showed strong antibiotic activity,and the MIC of them a -gainst Edwardsiella ictaluri was 0.13,0.03,0.25,0.31,13.33,20.00,30.00and 33.33μg/mL for florfenicol,ciprofloxacin,enrofloxacin,doxycycline,Scutellaria baicalensis,Forsythia suspense,Coptis Chinensis and rhubarb,respectively.The ad -ditive effects were shown when florfenicol was used in combination with Coptis Chinensis and doxycycline,respectively,while no irrelevant effects have been observed when florfenicol was used in combination with enrofloxacin,ciprofloxacin,rhubarb,forsythia,suspensa and scutellaria balicalensis.Key words:florfenicol;antibiotics;Edwardsiella ictaluri ;inhibition广西农业科学2010，41（8）：Guangxi Agricultural Sciences841-844841··氟苯尼考（Florfenicol ）又名氟甲砜霉素，为合成广谱抑菌型抗菌药，对绝大部分G －菌和G ＋菌及部分衣原体和立克次氏体均具有抗菌活性。

其作用机制是与细菌70S 核糖体的50S 亚基上的A 位紧密结合，阻碍肽酰转移酶转肽反应，使肽链不能延伸而抑制细菌蛋白质合成［6］。

氟苯尼考无潜在致再生障碍性贫血危险，且广谱、高效、吸收迅速、分布广泛、动物专用等特点，已在水产养殖上广泛应用［7，8］。

目前已经证实氟苯尼考对治疗黄体鰤（Seriola lalan dei ）、真鲷（Pagrosomus major ）、银大马哈鱼（Oncorh -ynchus kisutch ）、虹鳟（Oncorhynchus mykiss ）等鱼类的细菌性疾病具有良好的效果，但有关水产养殖中氟苯尼考与其他药物联用的报道较少。

为此，本研究选用氟苯尼考、恩诺沙星、多西环素、环丙沙星、黄连、大黄、连翘、黄芩等8种药物，通过药物单用及氟苯尼考与其他7种药物联用的体外抑菌试验，以期了解爱德华氏菌的药物敏感性，为斑点叉尾鮰ESC 的防治提供参考。

1材料与方法1．1试验材料肉汤培养基含牛肉汤1000mL 、蛋白胨10g 、氯化钠5g ，经滤纸过滤2次，高压灭菌后于4℃冰箱存放备用；血琼脂培养基购于郑州安图绿科生物工程有限公司。

氟苯尼考粉剂（质量分数为98％）购于武汉远城药业集团，恩诺沙星和环丙沙星粉剂（质量分数均为98％）购于浙江国邦药业有限公司，多西环素粉剂（质量分数94％）购于湖南开封集团；中药大黄（R heum officinale B．）、黄连（Coptis chinensis FI ）、连翘（Forsythia suspensa Vahl ）和黄芩（Scutellaria baicalensis G．）购于南宁本地药房。

斑点叉尾鮰爱德华氏菌为广西水产研究所鱼病室分离纯化致病菌株，菌株从－85℃冰箱取出，于血琼脂培养基上划线复苏培养，28℃培养36h 后长出菌落，经革兰氏染色确认，挑取单菌落以TSA 培养基、28℃扩大培养24h 后用于药敏试验。

1．2药物原液配制1．2．1抗菌药原液制备无菌操作条件下，电子天平称取各种抗菌药，适宜溶剂溶解后用灭菌蒸馏水定容至50mL ，用20mL EP 管分装，于－20℃低温保存。

氟苯尼考0．0646g ，用无水乙醇滴加振摇至完全溶解，定容后终浓度1．292g ／L ；恩诺沙星0．0647g ，用10％乙酸滴加振摇至完全溶解，定容后终浓度1．294g ／L ；多西环素0．0710g ，用蒸馏水溶解，终浓度1．420g ／L ；环丙沙星0．0710g ，用蒸馏水溶解，终浓度1．420g ／L 。

1．2．2中草药原液制备取大黄、黄连、连翘和黄芩干品各120．0g ，分别注入800mL 双蒸水，浸泡30min 后煎煮30min ，重复3次，收集3次滤液，浓缩至200mL ，定容至1000mL （药液浓度为120．00mg／mL ），高压灭菌后置－20℃冰箱中保存备用。

1．3抑菌液的配制1．3．1抗菌药抑菌液的配制采用倍数稀释法［9］，将菌液用肉汤培养基作1∶100稀释，然后在6支50mL 无菌加盖EP 管的第①管中加入稀释菌液20mL 及氟苯尼考母液15．5μL ，配成浓度为1.00μg ／L 的药液，混匀；其余各管均加入稀释菌液10mL ，然后移取第①管药液10mL 至第②管，同样移取第②管药液10mL 至第③管中，依次稀释至第⑥管。

即第①管药物浓度为1．00μg ／L ，第②管为第①管的1／2，依此类推。

同样方法配制其他药物第①管浓度，恩诺沙星2．00μg ／mL 、多西环素5．00μg ／mL 、环丙沙星0．50μg ／mL ，然后依次稀释各管浓度。

1．3．2中草药抑菌液的配制第①管加入稀释菌液15mL ，其余各管加入稀释菌液10mL 。

在第①管加入黄连母液15mL ，配成第①管浓度为60．00mg ／mL 药液30mL ，混匀后移取20mL 至第②管，再移取第②管20mL 至第③管，依次稀释至第⑥管。

即第②管浓度为第①管浓度的2／3，依此类推。

同样方法配制其他药物第①管浓度：大黄100．00mg／mL 、连翘60．00mg ／mL 、黄芩40．00mg ／mL ，然后依次稀释各梯度浓度。

1．4体外抑菌试验采用棋盘交叉法［6，10］，将氟苯尼考分别与另外7种药物进行配伍，各取0．5mL ，每个配伍组设6个梯度浓度，另设空白生长及单药对照。

加盖混匀后，28℃培养24h 。

1．5判断标准4种抗菌药单用的最小抑菌浓度（MIC ）解释标准依照美国临床实验室标准化委员会（NCCLS ）的抗微生物药物敏感性试验执行标准，氟苯尼考（参考氯霉素）MIC ≤8．00μg ／mL 、环丙沙星≤1．00μg ／mL 、恩诺沙星≤2．00μg ／mL 、多西环素≤4．00μg ／mL ；中草药单用MIC 解释标准则参照吴亮等［6］的研究结果，MIC ≤50．00mg ／mL 。