动物细胞传代培养
动物细胞传代培养
动物细胞传代培养一、【实验目的】1、掌握消化法细胞传代培养的原理2、了解细胞传代培养所需专用设备、试剂3、学习细胞传代培养操作二、【实验原理】动物细胞原代培养成功，细胞生长增殖形成单层细胞后，会进一步扩展汇合，覆盖整个培养瓶底，细胞会因生存空间不足或密度过大，发生接触抑制，并引起营养物质枯竭和代谢产物积累，发生细胞中毒，影响正常生长。
这时需要进行分离培养，细胞由原培养瓶按1：2或1：3稀释后传到新的培养瓶的过程称之为传代。
80%汇合或刚汇合细胞是理想的传代阶段。
消化法细胞传代培养，是用一定含量的胰蛋白酶来进行消化，使贴壁的单层细胞脱离下来，形成分散的细胞悬液，然后用新鲜的培养液进行稀释、分装和培养。
三、【实验仪器及试剂】仪器：改良吸管、加样器、培养瓶（玻璃、塑料）、抽滤装置、超纯水器、倒置显微镜、二氧化碳培养箱试剂：PE液、0.25%胰蛋白酶液、MEM+10%小牛血清液其中，二氧化碳培养箱用于开放或半开放培养，使细胞代谢产生的CO2及时溢出至培养箱中，再通过稳定调节箱中5%的CO2，与培养基中的NaHCO3处于动态平衡状态，使PH保持稳定。
四、【实验内容及步骤】（1）内容成纤维细胞传代培养6天，细胞汇合长满培养瓶底，刚传代好的细胞，圆球型亮圈，呈流动状态，传代培养1天，细胞贴壁，数量还不太多，上皮细胞培养至细胞汇合长满培养瓶底。
1、用酒精棉球擦拭培养用液瓶盖，打开瓶盖在酒精灯火焰上一过，盖上瓶盖，但不必拧紧2、将培养瓶内的旧培养液倒入烧杯中（注意瓶盖在酒精灯火焰附近），旧培养液倒掉后，镜下观察细胞十分干净、清晰3、从布袋中取出已消毒的吸管，插入加样器，注意吸管的刻度面向上，加样器的柄面偏左侧，以便于操作时观察。
4、将吸管过火焰（竖向横向各过一到两次），吸取PE液5ml从侧面加入瓶内，平放轻摇40下，放置2~5分钟将PE液倒出PE液的作用：络合、吸收、去除维持组织完整性的钙、镁离子，促进细胞分离，钙、镁离子有抑制胰酶的消化作用，因此用PE液去除，将残余未倒尽的血清除尽，因为血清也会抑制胰酶的消化作用；洗去未倒尽的死细胞。
动物细胞传代培养试验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除篇一：细胞传代培养实验报告细胞传代培养一.实验目的初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程，为生物技术在医学上的应用打下基础。
二、原理从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。
细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充，可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象，耗费少，比较经济，因此成为生物学研究的重要手段。
细胞培养可分为原代培养和传代（继代）培养。
直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。
细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。
所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、ph值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。
三、材料和试剂1、细胞:293细胞株2、试剂：0.25%胰酶、1640培养基（含10%小牛血清）3、仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、电动枪，培养板，吸液枪，5ml玻璃吸管、酒精灯等四、操作步骤1、将长满细胞的培养板中原来的培养液吸去。
2、加入1〜2m10.25%胰酶溶液，使板底细胞都浸入溶液中。
3、马上吸走胰酶液，再次加入2ml左右的胰酶，同样马上吸去，再加入几滴胰酶放入培养箱中消化几分钟4、用吸管将贴壁的细胞反复吹打成悬液，再按照观察的生长情况确定的传代比例传代5.根据确定的比例来取需要的量(剩余的细胞拿来做细胞计数)，加入4ml左右的培养液6.前后左右的来回震荡使细胞分散均匀后，将培养板放入培养箱7.收拾整理超净台附：消化液配制方法：称取2.5克胰酶蛋白酶，加入100m110xpbs+纯水溶解到1L,滤器过滤除菌，4℃保存，用前可在37℃下回温。
动物细胞的传代具体流程
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传代细胞培养实验报告单
实验名称：传代细胞培养实验实验日期：2023年4月10日实验者：张三一、实验目的1. 掌握哺乳动物细胞原代培养与传代培养的基本操作过程。
2. 熟悉细胞传代过程中所需的无菌操作技术。
3. 了解细胞传代对细胞生物学研究的重要性。
二、实验原理细胞培养是一种在人工条件下模拟体内生理环境，使细胞生长、繁殖或传代的技术。
细胞培养技术可以让我们直接观察活细胞，避免体内实验的复杂因素，为生物学研究提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象。
细胞培养分为原代培养和传代培养。
原代培养是指从生物体中取出组织或细胞进行首次培养，而传代培养则是在原代培养基础上，将细胞从一个容器转移到另一个容器中扩大培养。
传代培养的累积次数即为细胞的代数。
三、实验材料1. 培养基：DMEM培养基（含10%胎牛血清、1%青链霉素双抗）2. 细胞：小鼠成纤维细胞3. 工具：超净台、移液器、吸管、培养皿、离心机、显微镜、无菌操作箱、消毒剂等四、实验步骤1. 培养基配制：按照说明书配制DMEM培养基，加入胎牛血清和青链霉素双抗。
2. 细胞复苏：将冻存细胞从-80℃冰箱取出，放入37℃水浴中解冻，轻轻摇匀后移入离心管，1000 rpm离心5分钟，弃上清，加入适量DMEM培养基重悬细胞。
3. 细胞接种：将重悬细胞接种于培养皿中，放入培养箱中培养，保持细胞密度在80%-90%。
4. 细胞传代：当细胞密度达到80%-90%时，进行细胞传代。
具体操作如下：a. 吸除旧培养基，用PBS缓冲液清洗细胞2-3次。
b. 加入适量胰蛋白酶，37℃水浴消化细胞，显微镜下观察细胞变圆、收缩，待大部分细胞脱离培养皿底面时，立即终止消化。
c. 加入适量DMEM培养基终止消化，用吸管轻轻吹打细胞，使其分散均匀。
d. 将细胞接种于新的培养皿中，放入培养箱中继续培养。
5. 细胞观察：在显微镜下观察细胞生长状态，记录细胞形态、生长速度等指标。
五、实验结果1. 细胞在培养皿中生长良好，细胞形态正常，呈梭形。
动物细胞培养
动物细胞培养
动物细胞培养是一种重要的生物技术手段，广泛应用于医药、生物学研究、食
品工业等领域。
通过细胞培养，可以获取大量同质的细胞群体，为疾病治疗、新药研发提供重要的支持。
动物细胞培养的原理
动物细胞培养是将动物组织或细胞在人工培养基中进行维持、增殖、传代等过程。
培养基通常包括营养物质、生长因子、激素等成分，提供细胞生长所需的营养和环境。
动物细胞培养的步骤
1.细胞来源：从动物体内收集组织样本，获得原代细胞。
2.细胞分离：通过消化酶等手段将组织分离成单个细胞。
3.传代培养：将分离的细胞在培养基中培养，定期传代以增殖细胞数
量。
4.检测与分析：对培养的细胞进行检测、分析，确保其健康状态。
动物细胞培养的应用
1.生物医学研究：细胞培养在癌症、遗传疾病等方面的研究中发挥重
要作用。
2.药物研发：通过细胞培养可以进行药物筛选、毒性测试等工作。
3.食品工业：利用细胞培养技术可以生产细胞培养肉等食品。
动物细胞培养的发展
随着生物技术的不断发展，动物细胞培养技术也在不断创新和提升。
新的培养
基配方、生长因子的发现以及工程技术的应用，使得动物细胞培养在医学和生物学领域有着广阔的应用前景。
动物细胞培养作为一种重要的生物技术手段，将继续在各个领域发挥重要作用，为人类健康和科学研究进步做出贡献。
动物细胞传代培养分析
动物细胞传代培养分析动物细胞的传代培养是用来研究和繁育动物细胞的技术，对于生物科学和医学研究具有重要意义。
传代培养可以使动物细胞在无限期内继续增殖，为各种研究提供了充足的细胞资源。
本文将介绍动物细胞传代培养的原理、方法和应用。
一、传代培养的原理动物细胞的传代培养是通过将初始细胞（初代细胞）在一定培养条件下生长和分裂，定期收获一部分细胞进行继代，从而使细胞持续增殖。
动物细胞的传代培养基于以下原理：1.细胞增殖：传代培养的基本原理是细胞自身的生长和分裂能力。
在适当的生长条件下，细胞会进入细胞周期，经过细胞分裂产生新的细胞。
2.分离和分散：细胞传代过程中需要经常将细胞进行分离和分散，避免细胞过度密集或形成细胞聚集。
细胞分散是为了保证细胞的生长和增殖。
3.培养基的调配：细胞传代需要提供适宜的培养基满足细胞增殖的需求。
培养基的配方要包含必需的营养物质、生长因子和维生素等。
二、传代培养的方法传代培养主要有以下几个步骤：1.准备培养基：根据需要的传代次数，准备足够的培养基。
培养基的配方可以根据具体的细胞类型和研究需要进行调整。
2.细胞解离：将细胞从培养皿或瓶子中收集，用细胞解离液将细胞分散为单细胞悬浮状态。
细胞解离的方法主要有酶消化法和机械分散法。
3.计数和接种：用细胞计数仪进行细胞数目计数，然后计算出相应的接种细胞数目。
将细胞接种到新的培养皿或瓶子中，使其适当分散。
4.培养和观察：将接种好的细胞置于恒温培养箱中，提供适宜的培养条件（温度、湿度、CO2浓度等）。
定期观察细胞的生长状态和形态特征。
5.细胞收获：根据细胞传代的周期和细胞增殖速率，定期收获适量的细胞用于下一次传代或其他实验。
三、传代培养的应用1.基因表达研究：传代培养可以用来研究细胞的基因表达和细胞信号通路。
通过诱导细胞分化、抗体染色和PCR等方法，可以分析细胞的转录水平和蛋白质表达。
2.细胞毒性和药物筛选：传代培养可以用于药物毒性评价和新药筛选。
动物细胞培养方法
动物细胞培养方法
动物细胞培养是一种常用的实验手段，广泛应用于细胞生物学、药物研发、生物医学研究等领域。
以下是一般性的动物细胞培养方法：
1.细胞系的选择：选择合适的动物细胞系是动物细胞培养的第一步。
细胞系的选择要考虑细胞类型、来源、生长特性和用途等因素。
2.细胞培养基的准备：准备适用于所选细胞系的培养基。
培养基包括基本培养基和补充物，如生长因子、抗生素等。
不同的细胞系需要不同的培养基。
3.细胞的解冻：从冷冻保存的细胞库中取出细胞，进行解冻。
解冻过程要尽可能快速，以减少细胞对冷冻损伤的敏感性。
4.细胞传代：当细胞达到一定的密度时，需要将其传代，以维持细胞的生长状态。
传代过程包括细胞的分离、计数和重新接种。
5.细胞培养条件的控制：控制培养条件，包括温度、湿度、CO2浓度等。
通常细胞培养箱会提供稳定的培养环境。
6.细胞的观察和检测：定期观察细胞的形态、生长状态，并进行必要的细胞检测，如细胞计数、细胞周期分析等。
7.防止细胞污染：严格遵循无菌操作规程，防止培养物受到细菌、真菌、支原体等的污染。
使用无菌操作室和经过无菌处理的实验器材。
8.制备细胞冻存物：定期制备细胞冻存物，以备将来使用。
冻存物的制备需要使用适当的冻存液和合适的冷冻保存温度。
9.特殊操作：针对具体实验需求，可能需要进行细胞转染、感染、药物处理等特殊操作。
在进行动物细胞培养时，实验者需具备丰富的培养经验和相关技能，同时需按照实验室的标准操作规程进行操作，以确保实验的准确
性和可重复性。
动物细胞培养及传代
一些特殊的促细胞附着的物质可能参加细胞的贴附过程。 （存在于细胞膜表面或培养液尤其血清中的蛋白质）
贴附过程：带阳电荷的促贴附因子先吸附于介质上，悬
浮的圆形细胞再与已吸附有促贴附因子的介质附着，以后 细胞将伸展成其原来的形态．
运动的接触抑制及生长的密度抑制 接触抑制:
当两个正常的细胞移动而互相靠近时，其中之一或两 个将停止移动并向另一个方向离开，使细胞不会重叠。 当一个细胞被其他细胞围绕致无处可去而发生接触时, 细胞不再移动,此即接触抑制。 正常细胞不互相重叠于其上面生长,但肿瘤细胞可重叠 生长。
5、还原剂 某些还原剂在细胞培养中有特殊作用。β－巯基乙醇 在杂交瘤细胞培养中能刺激抗体分泌，并促进胱氨酸 利用。
DMEM培养基配方(1L)
DMEM粉末 碳酸氢钠 谷氨酰胺 丙酮酸钠 青霉素 链霉素 HEPES
13.48g 3.7g 0.584g 0.11g 105U/L 105U/L 5.96g
核移植 细胞融合 细胞培养
胚胎移植
动物细胞培养技术之成就与贡献
生物制品
细胞生理\ 药理\病理 研究
有毒物质
检测
• 病毒疫苗 • 干扰素 •单克隆抗 体
•筛选抗癌 药物
动物细胞培养
动物细胞培养
教学目标
理解动物细胞的特点； 掌握动物细胞培养的定义； 理解动物细胞的体外培养生长特性； 掌握动物细胞培养过程、条件及 了解动物细胞的特点掌握动物细胞培养 的定义 基本技术。
（7）促生长因子等物质
通常情况下,血清可以提供这些生长因子.
血清 常用的血清是小牛血清CS、胎牛血清FBS、 马血清HS和人血清HS。最常用的是小牛血清, 胎牛血清次之。 血清是极其复杂的混合物
动物细胞原代培养和传代培养中的培养方法
动物细胞原代培养和传代培养中的培养方法1. 引言嘿，大家好！今天咱们聊聊动物细胞的培养，听起来可能有点高大上，但其实就像种花一样，只是“花”是细胞，养护的方法也有讲究。
说白了，细胞也有自己的“家”，咱们得给它们创造个舒适的环境，让它们在里面嗨起来！接下来，我就带你走进这个充满神奇和乐趣的细胞世界。
2. 原代培养2.1 什么是原代培养？原代培养，简单来说，就是从活体动物身上直接提取细胞，然后把它们放在培养皿里，就像把新鲜的花插进水里一样。
你知道吗，这些细胞就像刚从大自然里来的小家伙，特别活泼，适应能力强。
不过，这可不是随便就能搞定的，得有点技术活。
2.2 原代培养的方法首先，咱得准备好一切工具，这可是基础中的基础，不能马虎。
咱们要用到无菌技术，确保培养环境干净得像新洗的碗，不然细胞们就会遭殃。
提取细胞时，通常会用胰酶把它们从组织中“松开”，就像剥开一个大榴莲，里边的果肉才好吃嘛。
然后，把这些细胞放到培养基里。
培养基就像细胞的“快餐”，里面有细胞需要的各种营养物质和生长因子。
要记得，细胞也要“吃好”，才能长得壮壮的，不然就不成气候了。
培养的环境也不能小看，温度、pH值、二氧化碳浓度都得保持稳定。
咱们得把细胞放在适合的温度下，就像给它们开个温暖的“家庭聚会”。
如果环境不合适，细胞就会抗议，甚至罢工！3. 传代培养3.1 什么是传代培养？说到传代培养，那就是把原代培养中的细胞继续繁殖，让它们“生儿育女”。
这就像一个大家庭，越来越壮大，热闹得不得了。
传代培养可以让我们获得更多细胞，方便后续的实验和研究。
3.2 传代培养的方法传代培养的关键在于及时分离细胞，咱不能让细胞们挤在一起，这样容易“打架”。
通常，当细胞长满培养皿后，就需要把它们分离开。
这个过程又得用到胰酶，跟原代培养一样，轻轻松松把它们从皿里“请”出来。
接下来，咱们需要把细胞分到新的培养皿里，再给它们加上新鲜的培养基，确保它们能继续健康成长。
注意，细胞们需要一点时间适应新环境，就像搬家后要习惯新居的味道一样。
动物细胞传代的主要操作步骤_理论说明以及概述
动物细胞传代的主要操作步骤理论说明以及概述1. 引言1.1 概述在科学研究和生物工程领域中，动物细胞传代技术被广泛应用于细胞生长、培养和实验操作。
通过传代技术，可以使细胞不断增殖并保持其特定功能和特征，为研究细胞的生物学行为提供了重要的手段。
本文将详细介绍动物细胞传代的主要操作步骤，并对其理论说明进行探讨。
1.2 文章结构本文共分为五个部分。
引言部分简要介绍了动物细胞传代技术的概述以及文章结构。
接下来的“2. 动物细胞传代的主要操作步骤”部分将详细介绍该技术涉及到的三个主要步骤：细胞筛选与培养、细胞分裂与增殖以及细胞冻存与解冻。
在“3. 理论说明”部分中，我们将深入探讨动物细胞传代的原理、影响其效率的因素以及目前传代技术发展现状。
最后，在“4. 结论”部分，我们将总结主要操作步骤和理论说明的内容，并对动物细胞传代技术的未来展望和意义进行讨论。
最后，如果有相关参考文献，将在“5. 参考文献”部分列出。
1.3 目的本文旨在提供一个基本的指南，帮助读者了解和掌握动物细胞传代技术的主要操作步骤以及其背后的理论原理。
通过深入了解该技术，读者可以更好地应用于实验室研究、医学治疗以及生物工程等领域中。
同时，我们也希望通过对该技术发展现状和未来展望的讨论，进一步推动细胞传代领域的研究和创新。
2. 动物细胞传代的主要操作步骤2.1 细胞筛选与培养在动物细胞传代中，一个重要的步骤是对初代细胞进行筛选和培养。
首先，选择适合传代的种类或类型的细胞，并确保其健康和纯度。
通常使用显微镜来观察细胞形态和增殖情况，以确定其适用性。
然后，将选定的细胞转移到培养皿中，并提供适当的培养基。
培养基应包含必需的营养物质、氧气和适宜的温度和湿度条件。
通过提供合适的环境，使细胞能够在体外生长和繁殖。
2.2 细胞分裂与增殖细胞传代过程中，细胞分裂与增殖是不可或缺的步骤。
一旦细胞达到足够数量，可以进行传代操作。
在这个阶段，需要注意几个关键因素。
生物动物细胞培养知识点
生物动物细胞培养知识点
1. 培养基：生物动物细胞必须在合适的培养基中生长和繁殖。
常用的培养基包括DMEM、RPMI 1640和MEM等。
2. 细胞传代：当细胞密度达到一定程度后，需要进行传代，即将细胞分离并移植到新的培养皿中继续生长。
3. 培养条件：生物动物细胞需要适宜的培养条件才能正常生长。
包括温度、湿度、氧气含量、营养物质等。
4. 细胞病毒污染：生物动物细胞培养容易出现细胞病毒污染，需要采取相关的预防措施，如定期检测、消毒鉴定等。
5. 细胞凋亡：细胞凋亡是一种自我调节的程序性死亡，常出现在细胞密度达到一定程度后。
6. 细胞形态：生物动物细胞的形态和生长状态需要定期观察和记录，以便及时发现和处理问题。
7. 细胞株的建立：通过限制性稀释或筛选，可以获得单克隆的细胞株，方便后续的实验研究。
8. 细胞的鉴定：眼睛观察、免疫细胞化学等方法可以用于鉴定不同类型的生物动物细胞。
9. 细胞破裂：细胞在处理过程中需要破裂释放细胞内物质，通常使用机械方法或超声波等物理方法来破裂细胞。
10. 细胞冻存：为了保存细胞，需要进行冷冻保存，通常在添加冷冻保护剂后，将细胞悬浮液分装于-80°C冰冻保存。
动物细胞培养传代培养
实验三：动物细胞培养细胞传代培养【实验目的】熟练掌握细胞的传代培养法。
【实验原理】传代培养是组织培养常规保种方法之一。
也是几乎所有细胞生物学实验的基础。
当细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释分种成多瓶，细胞才能继续生长。
这一过程就叫传代。
传代培养可获得大量细胞供实验所需。
传代要在严格的无菌条件下进行，每一步都需要认真仔细的无菌操作。
【材料用品】材料：培养瓶，试管，移液管，巴斯德吸管，废液缸，75％酒精棉球，酒精灯，培养细胞。
药品：培养基(RPMI1640或DMEM)，小牛血清或胎牛血清，0.25％胰蛋白酶，Hanks 液。
仪器：C02培养箱，倒置：显微镜，超净台。
【实验步骤】1．人无菌室之前用肥皂洗手，用75％酒精擦拭消毒双手。
2．倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否需要传代及细胞需要稀释的倍数。
将培养用液置37℃下预热。
3．超净台台面应整洁，用0.1％新洁尔灭溶液擦净。
4．打开超净台的紫外灯照射台面20 min左右，关闭超净台的紫外灯，打开抽风机清洁空气，除去臭氧。
5．点燃酒精灯；取出无菌试管，巴士德吸管和刻度吸管；安上橡皮头；过酒精灯火焰略烧后插在无菌试管内。
6．将培养用液瓶口用75％酒精消毒，过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上。
7．倒掉培养细胞的旧培养基。
酌情可用2—3 mL Hanks液洗去残留的旧培养基，或用少量胰酶涮洗一下。
18．每个大培养瓶加入1 mL胰酶，小瓶用量酌减，盖好瓶盖后在倒置显微镜下观察，当细胞收回突起变圆时立即翻转培养瓶，使细胞脱离胰酶，然后将胰酶倒掉。
注意勿使细胞提早脱落入消化液中。
9．加入少量的含血清的新鲜培养基，反复吹打消化好的细胞使其脱壁并分散，再根据分传瓶数补加一定量的含血清的新鲜培养基(7～10 mL／大瓶，3～5 mL／小瓶)制成细胞悬液，然后分装到新培养瓶中。
盖上瓶盖，适度拧紧后再稍回转，以利于CO2气体的进入，将培养瓶放回CO2培养箱。
10．对悬浮培养细胞，步骤7-9不做。
实验四 动物细胞的传代培养
实验四动物细胞的传代培养1.实验目的（1）了解动物细胞培养的基本知识。
（2）了解体外培养细胞的的基本形态类型；学会通过镜检判定体外细胞生长的状态。
（3）掌握动物细胞的传代培养法。
2.实验背景与原理2.1 动物细胞培养的基本概念（1）组织培养: 把来自机体内的细胞、组织或器官放在类似于体内的外环境中, 使之成活、生长和繁殖。
严格又分为细胞培养、组织培养和器官培养。
值得注意的是和植物组织培养不同, 目前动物组织培养在一般培养条件下难以维持组织的结构和功能, 常最终转变成为细胞培养, 所以动物细胞与组织培养并无严格区别。
（2）原代培养: 直接从供体取来的细胞, 组织或器官进行的初次培养。
通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。
（3）传代培养：原代培养物长成单层细胞, 达到一定密度时, 营养消耗殆尽, 需要补充营养, 分开扩大培养, 使之继续增殖。
注意的是传代的这个“代”与细胞分裂的一个世代不同, 一代细胞约分裂3~5次, 不要混淆。
（4）细胞系：原代培养后的细胞经传代即可成为细胞系。
若其形态均一, 生长增殖稳定, 生物性状明确, 即可称之为已鉴定的细胞（Certified Cells）。
不同种类的细胞成系的难易程度也不同, 一般胚胎、更新组织的细胞如造血、上皮等以及癌细胞较容易成系, 而神经等细胞则较难成系。
按照其生存期可分为有限细胞系（生存期有限的正常二倍体细胞）和无限细胞系（生存期无限的癌细胞、转化细胞等, 大多异倍体）2.2 动物细胞培养的基本条件体外培养细胞的条件总原则就是要尽可能模拟细胞在体内生长的环境, 因此必要的营养、适宜的胞外环境以及严格的无菌条件是主要的三个方面。
（1）营养: 早期培养主要采用天然的生物性液体, 但其成分不确定, 难以控制营养成分。
现广泛使用的是化学成分明确的各种商品化的合成培养基, 其主要成分包括各种氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖等必要的营养物质。
培养基中还含有酚红指示剂, 使培养基的颜色可显示细胞生长状态。
动物细胞传代培养的步骤
动物细胞传代培养的步骤动物细胞传代培养，这事儿听起来好像很高大上，其实也没那么复杂。
咱们先聊聊，啥是传代培养呢？就是把细胞从一块地方转移到另一块地方，继续让它们生长，简直就像搬家，给它们换个新环境。
准备工作得做好。
这就像你出门前，得先检查钱包、钥匙、手机啥的。
细胞培养液、培养瓶、离心机、培养箱，缺一不可，得齐齐整整的，准备就绪。
然后，咱们得拿到这些细胞。
细胞可不是随便抓来的，它们需要从动物体内提取。
别担心，科学家们有一套方法，取样的过程就像是给小动物们做个健康检查。
提取完毕，把细胞放在培养液里，这时候，细胞们就开始在这个温暖的环境中茁壮成长了，简直像鱼得水。
细胞们就像孩子们，吃得好，长得快，咱们得定期去看看它们的“成长记录”。
到了细胞长得比较多的时候，咱们就得进行传代了。
这就像孩子们上学，得时不时换个班级，跟不同的小伙伴玩。
先把培养瓶里的细胞用离心机转一转，分离出细胞和培养液。
这里有个小细节，离心的时候别太用力，不然细胞就跟打了个旋儿，容易受伤。
分离完毕后，咱们得把细胞用消毒的方式处理一下，确保它们在新环境中能安全无忧。
把细胞重新放进新培养瓶里，加上新鲜的培养液。
这时候，细胞们就像到了新学校，得适应新的环境。
记得在培养箱里调好温度和二氧化碳浓度，给细胞们一个舒适的生活条件。
你想啊，细胞也有它们的小脾气，环境好，才能开心地成长。
每隔一段时间，咱们得去检查一下它们，看看它们的“心情”如何，有没有异常的情况。
细胞传代并不是一件简单的事情，偶尔也会遇到一些小麻烦。
细胞长得太快，空间不够用，就得考虑再传代一次。
这时候可别心急，要有耐心。
细胞就像小朋友，有时候也需要多一点时间去适应。
遇到不健康的细胞，咱们也得果断处理，像是给小朋友的坏习惯做个干脆的了断。
每次传代都是个新的开始，细胞们在新环境中继续生长繁殖，越来越壮大，真是让人感到欣慰。
随着时间的推移，细胞们就像一片森林，生机勃勃。
科研人员也会从中提取到许多有用的信息，就像从孩子们的成长中获取经验教训。
动物科学细胞实验报告
实验名称：动物细胞培养与传代一、实验目的1. 熟悉动物细胞培养的基本操作流程；2. 掌握动物细胞传代技术；3. 学习观察细胞形态变化，了解细胞增殖、衰老等生命现象。
二、实验原理动物细胞培养是指将动物组织或细胞分离出来，在体外培养条件下使其生长、繁殖的一种技术。
通过动物细胞培养，可以研究细胞的生物学特性、细胞增殖、分化等生命现象，为生物医学研究提供重要手段。
动物细胞传代是指在细胞培养过程中，将细胞从培养瓶中取出，加入新鲜培养液，使细胞继续生长、繁殖的过程。
传代次数越多，细胞生长速度越慢，衰老现象越明显。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠胚胎成纤维细胞；2. 培养基：DMEM高糖培养基；3. 细胞消化剂：胰蛋白酶；4. 细胞培养瓶、培养皿、移液器、显微镜等。
四、实验步骤1. 预处理（1）将小鼠胚胎成纤维细胞从冻存管中取出，37℃水浴箱中解冻；（2）加入适量DMEM高糖培养基，轻轻吹打，使细胞分散均匀；（3）将细胞悬液转移至培养瓶中，置于37℃、5%CO2培养箱中培养。
2. 细胞传代（1）观察细胞生长状态，待细胞密度达到80%时，进行传代；（2）用胰蛋白酶消化细胞，吹打均匀；（3）将消化后的细胞悬液转移至培养皿中，加入适量DMEM高糖培养基，终止消化；（4）收集细胞，用移液器将细胞悬液转移至新的培养瓶中；（5）将细胞悬液在37℃、5%CO2培养箱中培养。
3. 观察细胞形态变化（1）每隔一定时间，观察细胞形态变化，记录细胞增殖、衰老等现象；（2）用显微镜观察细胞形态，拍照记录。
五、实验结果与分析1. 细胞生长状态在培养过程中，细胞生长状态良好，细胞密度逐渐增加，细胞形态呈扁平状，细胞间连接紧密。
2. 细胞形态变化随着传代次数的增加，细胞生长速度逐渐减慢，细胞衰老现象逐渐明显。
在显微镜下观察，可见细胞出现皱缩、核仁缩小、细胞膜皱褶等衰老现象。
六、实验结论1. 动物细胞培养是一种重要的实验技术，可以研究细胞的生物学特性、细胞增殖、分化等生命现象；2. 动物细胞传代技术是细胞培养过程中的重要环节，有助于维持细胞的生长、繁殖；3. 细胞培养过程中，细胞形态变化反映了细胞的增殖、衰老等生命现象。
简述动物细胞培养过程中细胞复苏,传代,冷冻的操作方法
简述动物细胞培养过程中细胞复苏,传代,冷
冻的操作方法
动物细胞培养过程中的细胞复苏、传代和冷冻是常见的操作步骤。
具体方法如下：
1. 细胞复苏：
a. 将冷冻保存的细胞样品快速解冻，可以将冰冻管置于37°C的水浴中缓慢解冻。
b. 解冻后，将细胞迅速转移到含有预暖的培养基的离心管中。
c. 用培养基轻轻洗涤细胞，并将其移至培养皿中，使细胞附着于培养器皿表面。
d. 增加足够的预热培养基，将细胞放回合适的培养条件中进行复苏。
2. 细胞传代：
a. 当细胞达到适当的密度或已达到培养器皿的最大生长容量时，需要进行细胞传代。
b. 首先，先用无菌PBS缓冲液轻轻洗涤细胞，以去除残留的培养基和细胞碎片。
c. 使用无菌酶消化液（如胰蛋白酶）轻轻润湿细胞，然后加入等量的无菌培养基来停止消化。
d. 耐心地将细胞悬浮液吸取并转移到新的培养皿中，保持适当的稀释比例，并加入新的预热培养基。
e. 将新的培养皿放入培养箱中，提供适当的温度、湿度和氧气供应。
3. 细胞冷冻：
a. 将细胞按照细胞传代的方法进行收获和洗涤。
b. 用细胞冻存试剂（如DMSO）缓慢添加到细胞悬浮液中，最终细胞密度通常为1-2×10^6个细胞/mL。
c. 将细胞悬浮液转移至预冷的冻存管中。
d. 快速将冷冻管放入冷冻等温器中，以确保细胞迅速冷冻。
e. 细胞冷冻后，将冷冻管转移到液氮罐中进行长期储存。
请注意，动物细胞培养的具体操作方法可能因细胞类型和研究需要而有所不同。
在进行这些操作之前，应仔细阅读并遵守相应的实验室指南和安全操作规程。
动物细胞传代的主要操作步骤
动物细胞传代的主要操作步骤动物细胞传代是一种将动物细胞无限延续繁殖的技术，它在生物研究和医学应用中具有重要的作用。
通过动物细胞传代技术，可以通过一种或多种手段实现细胞不断增殖，从而获得足够数量的细胞来进行进一步的实验和应用。
动物细胞传代的主要操作步骤包括细胞接种、细胞培养和细胞分裂等，下面将详细介绍这些步骤。
首先是细胞接种。
在进行细胞传代之前，需要将细胞接种到培养皿或培养瓶中。
接种之前，需要准备培养基和细胞悬液。
培养基是一种含有适宜的营养物质和生长因子的液体或凝胶，可以提供细胞生长所需的营养和环境。
细胞悬液则是从细胞培养物中提取的含有细胞的溶液。
在接种过程中，需要注意消毒操作，避免细菌和其他微生物的污染。
接种时，将细胞悬液均匀地分布在培养皿或培养瓶的表面上，然后放入培养箱中进行培养。
接下来是细胞培养。
细胞培养是指将细胞放置在适宜的培养基中，提供适宜的生长条件，使细胞能够不断增殖和生长的过程。
在培养过程中，需要注意培养基的配制和更换、培养箱的温度和湿度控制、培养皿的清洁和消毒等。
培养基的配制需要根据细胞类型的不同进行调整，通常包括无菌的培养基、生长因子和血清等。
培养箱的温度和湿度需要根据细胞类型的要求进行调整，一般维持在37摄氏度和5%CO2的条件下，以提供细胞所需的温度和气体环境。
培养皿的清洁和消毒需要严格控制，以避免细菌和其他微生物的污染。
最后是细胞分裂。
细胞分裂是指细胞增殖的过程，通过细胞在有限的时间内不断分裂，从而形成足够数量的细胞。
细胞分裂的速度和方式取决于细胞类型和培养条件。
一般情况下，细胞分裂可以分为有丝分裂和无丝分裂两种类型。
有丝分裂是指细胞进行有线型染色体分离、细胞质分裂等一系列有丝分裂过程的过程。
无丝分裂是指细胞在没有可见的有线型染色体和细胞质分裂的情况下进行分裂的过程。
动物细胞传代技术的应用广泛，包括细胞生物学研究、药物筛选、疾病模型制备等。
在细胞生物学研究中，动物细胞传代技术可以用来研究细胞的生命周期、分化和转化等现象。
简述动物细胞培养过程中细胞复苏传代冷冻的操作方法
简述动物细胞培养过程中细胞复苏传代冷冻的操作方法动物细胞培养是研究和应用生物学领域中非常常见的技术手段。
在细胞培养过程中，细胞复苏、传代和冷冻是非常重要的操作步骤，下面将对这三个步骤进行详细的描述。
1.细胞复苏：细胞复苏是指从冷冻的细胞样品中恢复活性的过程。
细胞冷冻保存是为了长期保存和传递细胞系。
细胞复苏的基本流程如下：a.准备培养基：首先需要准备适合细胞类型的培养基，培养基中应含有必需的营养物质和生长因子，以促进细胞的复苏。
b.解冻冷冻细胞：将冷冻的细胞样品快速解冻，并迅速将其转移到预热的培养基中。
解冻过程需要非常迅速，以避免细胞受到冻结引起的损伤。
c.细胞培养：将解冻的细胞转移到预先涂覆有培养基的培养皿中，并放置在恒温培养箱中进行培养。
在培养的过程中，需要定期观察细胞的形态和增殖情况，以确定细胞是否成功复苏。
2.细胞传代：细胞传代是指将细胞从一个培养皿中转移到新的培养皿中继续培养的过程。
细胞传代的主要目的是扩大细胞数量，以满足后续实验的需要。
细胞传代的基本流程如下：a.细胞解聚：在细胞的解聚过程中，常用的方法是使用酶类（如胰蛋白酶）对细胞进行消化，以将细胞从培养皿表面解离下来。
b.细胞计数：使用显微镜和细胞计数板对细胞进行计数，以确定细胞的密度。
细胞密度的控制非常重要，过高或过低都会影响细胞的生长和增殖。
c.接种细胞：根据细胞密度的要求，将细胞解聚后的适量细胞转移到新的培养皿中，加入适量的培养基，并轻轻摇晃培养皿以均匀分布细胞。
d.细胞培养：将接种过的细胞培养皿放置在恒温培养箱中进行培养。
在培养的过程中，同样需要定期观察细胞的形态和增殖情况，以控制细胞的状态和密度。
3.细胞冷冻：细胞冷冻是为了长期保存和传递细胞系而进行的操作步骤。
细胞冷冻的基本流程如下：a.细胞准备：选择处于良好状态的细胞进行冷冻。
此时，细胞应处于对冻结过程耐受的阶段，生长状态良好。
b.细胞解聚：将细胞从培养皿表面解离下来，常用的方法是使用酶类对细胞进行消化。
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细胞工程实验报告
实验课程：细胞工程
实验内容：动物细胞传代培养
一实验目的
➢掌握消化法细胞传代培养的原理
➢了解细胞传代培养所需专用设备、试剂
➢学习细胞传代培养操作
二实验原理
●动物细胞原代培养成功，细胞生长增殖形成单层细胞后，会
进一步扩展汇合，覆盖整个培养瓶底，细胞会因生存空间不
足或密度过大，发生接触抑制，并引起营养物质枯竭和代谢
产物积累，发生细胞中毒，影响正常生长。
这时需要进行分
离培养，细胞由原培养瓶按1：2或1：3稀释后传到新的培
养瓶的过程称之为传代。
80%汇合或刚汇合细胞是理想的传
代阶段。
●消化法细胞传代培养，是用一定含量的胰蛋白酶来进行消化，
使贴壁的单层细胞脱离下来，形成分散的细胞悬液，然后用
新鲜的培养液进行稀释、分装和培养。
三实验试剂及器具
⏹改良吸管加样器
⏹培养瓶（玻璃、塑料）
⏹PE液
⏹0.25%胰蛋白酶液
⏹MEM+10%小牛血清液
⏹抽滤装置
⏹超纯水器
⏹倒置显微镜
⏹二氧化碳培养箱
四实验步骤与操作
●75%酒精消毒双手、工作台面、培养瓶、瓶盖、试管，
并过火焰。
●用酒精棉球擦拭培养用液瓶盖，打开瓶盖在酒精灯火焰
上一过，盖上瓶盖，但不必拧紧
●将培养瓶内的旧培养液倒入烧杯中
●旧培养液倒掉后，镜下观察细胞十分干净、清晰
●从布袋中取出已消毒的吸管，插入加样器
●从布袋中取出已消毒的吸管，插入加样器，注意吸管的
刻度面向上，加样器的柄面偏左侧，以便于操作时观察。
●将吸管过火焰（竖向）
●将吸管过火焰（横向）
●吸取PE液5ml
●从侧面加入瓶内
●平放轻摇40下，放置2~5分钟
●将PE液倒出
●吸取胰酶0.3ml
●将胰酶加入瓶中，加入时直冲细胞贴壁处，平放轻摇，
使酶液漫过整个瓶底部，放置1-2分钟，可于镜下观察，并轻拍
●在倒置显微镜上观察，发现细胞质渐渐回缩，细胞间隙
增大，细胞慢慢变圆时
●用手掌拍打瓶底和瓶侧，使细胞从瓶壁脱落下来并悬浮
和流动起来，再在显微镜下观察。
●准备好一个新瓶，松开瓶盖一圈，吸取MEM培养液5ml ●准备加入培养瓶
●将培养液加入原培养瓶
●用吸管向瓶壁吹吸数次，混合成均匀的细胞悬液后，吸
出2ml，装入一新瓶内，剩余的留于瓶内，再在两瓶中分别加入1ml和2ml的新鲜培养液
●将培养瓶口及盖过火焰后拧紧
●做上标记
●将传代好的培养瓶放置于合适温度的培养箱中（视不同
细胞要求而确定培养温度）培养
●细胞由刚传代好时的圆球型（游离期）→贴附（贴壁期）
→伸展（铺展）→扁平或梭型或多边形→繁殖→长满整
个培养瓶底→下一次传代（或冻存）
五试验中PE、胰蛋白酶作用
PE作用：
➢PE：络合、吸收、去除维持组织完整性的钙、镁离子，促进细胞分离；
➢钙、镁离子有抑制胰酶的消化作用，因此用PE液去除；
➢将残余未倒尽的血清除尽，因为血清也会抑制胰酶的消化作用；
➢洗去未倒尽的死细胞。
胰蛋白酶作用：
➢胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽健，水解除去细胞间粘蛋白及糖蛋白，从而使细胞分离。
➢胰蛋白酶液浓度越高，消化作用越强，但超过一定限度会损伤细胞，消化时间也要适度。
六实验结果
（传代前）（传代后）
（加胰酶后）
七思考与讨论
请结合实验体会简述细胞传代培养成功的标志和显微镜下观察到的现象。
（消化前后、游离期、贴壁期、指数生长期等不同时期细胞状态、培养液的清澈度、颜色、细胞界限等），并比较成功与不成功培养及其他培养状态的差别。
答：
消化前细胞长满培养瓶底，细胞紧密无间隙。
消化后发现细胞质渐渐回缩，细胞间隙增大，细胞慢慢变圆，细胞从瓶壁脱落下来并悬浮和流动起来。
游离期细胞间隙增大，细胞圆球形，细胞悬浮，培养液浑浊。
贴壁期细胞扁平或梭型或多边形，透明度较好。
指数生长期培养细胞数量明显增多，并逐渐汇合，细胞密度增
大。
●培养成功标志：细胞生长状态良好，透明度大；细胞内颗粒少，
没有空泡,细胞形态完整，饱满。
●成功与不成功培养及其他培养状态的差别比较：
成功的：细胞生长状态良好，透明度大；细胞内颗粒少，没有空泡,细胞形态完整，饱满。
不成功的:当细胞刚污染时，会发现细胞形态不饱满，细胞反差变大，细胞质颗粒变多，细胞延展性差。
随着污染的
加重，贴壁细胞脱落，培养基中杂质多，培养液很快
变黄，且浑浊。