液相色谱仪原理及使用操作规程、原子吸收仪使用规程

液相色谱仪原理及使用操作规程

原理

液相色谱法就是同一时刻进入色谱柱中的各组分，由于在流动相和固定相之间溶解、吸附、渗透或离子交换等作用的不同，随流动相在色谱柱中运行时，在两相间进行反复多次（103～106次）地分配过程，使得原来分配系数具有微小差别的各组分，产生了保留能力明显差异的效果，进而各组分在色谱柱中的移动速度就不同，经过一定长度的色谱柱后，彼此分离开来，最后按顺序流出色谱柱而进入信号检测器，在记录仪上或色谱数据机上显示出各组分的色谱行为和谱峰数值。测定各组分在色谱图上的保留时间（或保留距离），可直接进行组分的定性；测量各峰的峰面积，即可作为定量测定的参数，采用工作曲线法（即外标法）测定相应组分的含量。

液相色谱仪工作原理图

高效液相色谱仪是实现液相色谱分离分析过程的装置，如上图所示。贮液器中存贮的载液（用作流动相的液体常需除气）经过过滤后由高压泵输送到色谱柱入口（当采用梯度洗脱时，一般需用双泵系统来完成输送）。样品由进样器注入载液系统，而后送到色谱柱进行分离。分离后的组分由检测器检测，输出信号供给记录仪或数据处理装置。如果需收集馏分作进一步分析，则在色谱柱出口将样品馏分收集起来，对于非破坏型检测器，可直接收集通过检测器后的流出液。其中输液泵，色谱柱及检测器是仪器的关键部件。

仪器使用操作步骤

1、打开主机（Waters1525泵）；待泵稳定后（大约需要2~5秒钟，即有两次“嘀”

的响声）打开紫外检测器；检测器预热需要6~10min钟的时间，在此时间内你可以执行第2步操作。

2、打开电脑（电脑必须进入英文界面）待检测器稳定后，方可打开Breeze应用程序，应用程序有个自检过程（需要1～2分钟）。

3、建立新方法（打开Breeze程序时，系统默认为上次使用的方法和文件名。如果需要建立新的文件名和方法，你可以继续下一步操作）：

（1）点击“Manage Breeze”按钮→“Make a new project”→“Next”→在“project Name”框内输入新的文件名，也可以在“comment”内输入需要说明的一些注释，也可以不填→“Finish”；

（2）建好新的文件夹后，还要转换到该文件夹中，即在“Manage Breeze”界面下点击“change project/user”按钮→在project内选择刚建立的或是需要的文件名→“OK”；

（3）此时已经在刚建立的新文件夹下，那么，现在应该再建立一个新的方法，操作步骤是：

①、点击“View Method”→选择“LC或GPC”→点OK→点击“pump”在“Isocratic<等度> Flow A/B”内输入A/B流动相的比值（例如：A：B=70：30 且流速为1ml/min，那么，就在A下输入0.7，在B下输入0.3；再如A：B=70：30 且流速为0.8mL/min，那么，就在A下输入0.56，在B下输入0.24；依此类推）；

②、点击“UV Det（紫外检测器）”→选择“Channel1”→在“wavelength/nm”框内输入检测波长；

（4）保存新方法，点击菜单栏中的“File”选择“save As...”→在“Name”框内输入刚建立的新方法的名称，如“LC method1”，然后点击“save”按钮，即可保存刚刚设立的各项色谱条件。

4、用新建的方法平衡系统：

单击左下角的“Equilibrate”→在“method for Equilibrate”内选择新建立的方法（如：LC method 1）→点击“Equilibrate”即开始基线平衡（基线平衡大约需要20min）。

5、待基线平衡后即可进行单次进样：

（1）点击单次进样按钮→在“Sample Name”内输入样品名称，或备注（可不填）

→注意：在“method”内一定要选定需要的方法（如“LC method 1”）→“vial”内选1，表示这是第1次进样（用于自动进样器）→在“run time”内输入所要运行的时间→单击“inject（进样）”按钮；

（2）待进样图示出现后，方可进样（若发现进样时的方法选错了，可以点击图示右下方的“abort inject”来取消这次进样操作，然后重新点击进样按钮，确保进样时method选择的是你所需要的方法）；

（3）在进样过程中，要注意的是：

a、取样要力保一致；

b、在将进样环从“Load”位移到“inject”位时间要停留1.2秒以上，因为在1ml/min的流速下，样品完全脱离定量环所需要的时间0.02min（1.2秒）；

c、要保证运行时间的一致性，每次进样后将“Load”位移到“inject”位时间要停留的时间必须一致；

6、每次进样后，都要对运行的结果进行数据处理：

（1）点击“View Data”→点击“Precessing Parametery Wigard”或点击采集栏右下角的“send data to review”；

（2）选择“start new processing porameters”如果是进行同一个样品且在此之前有过数据处理可以选择第二项，点OK；

（3）在“start”内输入要处理峰值的开始时间，在“end”内输入结束时间，然后单击下一步；

（4）确保“clear peak width and threshold”不被选中，然后多次点击“下一步”直到对话框结束。

7、若要更换洗脱剂，必需要对泵、检测器进行冲洗（点击冲洗灌注按钮按照提示一步一步操作）：

（1）将需要更换的洗脱剂，先超声20min后换上；

（2）用注射器，抽出两泵内原有洗脱剂大约各10mL，然后打开参考阀进行冲洗灌注；

（3）冲洗灌注后，关紧参考阀；

（4）用新的方法平衡系统（大约需要20min）。

8、梯度洗脱程序的设置：