细胞实验室简介强烈推荐.ppt

︵。︵
33
四.常用器皿、器械
培养器皿 移液器 特殊用具
︵。︵
34
︵。︵
35
移液器
➢ 电动移液器 ➢ 微量移液器 ➢ 多通道微量移液器
︵。︵
36
特殊用具 细胞筛网、细胞刮刀、细胞计数板
︵。︵
37
五.实验室操作注意事项
➢ 做好实验前准备，避免反复进出而增加污染机会
➢ 进入细胞培养室前需更换工作服,换鞋并洗净、消 毒双手。
︵。︵
3
基本组成：
• 基本实验室
消毒准备室 制备室 无菌操作室
• 辅助实验室
细胞学实验室 生化分析室 摄影室及暗室
︵。︵
4
1.基本实验室：
消毒准备室 制备室 无菌操作室
︵。︵
5
消毒准备室
功能 一切与实验有关的准备工作 要求 设备的安装和排列要合理
房间要宽敞明亮，通风条件好 地面要便于清洁、防滑 配备 实验台，高压灭菌锅、排风灭火设备、 超声波清洗器、洗瓶机等。
︵。︵
6
制备室
➢ 功能 进行培养液及相关试剂的配制 ➢ 要求 在无菌操作台内过滤、除菌。 ➢ 配备 冰箱、天平、真空泵、PH计等。
︵。︵
7
无菌操作室
➢ 地面、天花板及四壁尽可能光洁，无死 角，易于清洁。
➢ 大小适度，层高不高于2.5米。 ➢ 干爽、安静、清洁、明亮。 ➢ 紫外灯1－2盏，保持室内无菌状态。
细胞实验室简介
作者 Vincent
︵。︵
1
大纲
一．细胞实验室组成 二．细胞实验室的设置 三．细胞实验室的基本设备配置 四．常用器皿、器械 五．实验室操作注意事项
︵。︵
2
一.细胞实验室组成
细胞培养实验室的设计是由工作的目的和规模决定的， 其基 本要求是：便于隔离、便于操作、便于灭菌、便于观察。
细胞培养实验室的设置必须满足三个基本的需要，即：实验 准备（培养基配制，洗涤与灭菌等）、无菌操作、控制培养。
及酶蛋白氢硫基进行氧化分解反应，从而靠臭氧气体弥漫性扩散达到杀菌之目的
Fra Baidu bibliotek
，消毒时没有死角。消毒后空间的残留臭氧只需30～40min即能自行还原成氧气，
空气不留异味，消毒物体表面不留残毒。
︵。︵
11
二.细胞实验室的设置
细胞培养实验室应能进行五方面的工作： ➢ 无菌操作 ➢ 制备 ➢ 清洗 ➢ 消毒灭菌处理 ➢ 储藏
︵。︵
12
三.细胞实验室的基本设备配置
基本设备 灭菌设备 无菌操作设备 细胞培养设备 细胞学鉴定设备
︵。︵
13
1.基本设备
➢ 冰箱 ➢ 天平 ➢ 酸度计 ➢ 恒温水浴锅 ➢ 磁力搅拌器 ➢ 液氮罐 ➢ 纯水设备
︵。︵
14
︵。︵
15
➢ PH 7.0～7.4 去离子水 无菌
︵。︵
16
︵。︵
10
显示pH的观察。
无菌操作间的空气消毒：
紫外线灯—－产生臭氧，并且室内温度及湿度均较高，不利于工作人员健康。
空气过滤的恒温恒湿装置—－最好
无臭氧紫外线消毒器
电子消毒灭菌器—－在高压电场作用下，电子管的内外电极发生强烈电子轰击，
使空气电离而将空气中的氧转换成臭氧。臭氧是一种强氧化剂，能同细菌的胞膜
➢CO2培养箱 ➢离心机
︵。︵
28
温度：37℃±0.5℃ CO2浓度：5% 相对湿度：100% 定期清洗、消毒
︵。︵
29
输出压力指示 接培养箱的管子
罐内压力指示 流量控制阀门
压力调节旋钮
︵。︵
30
︵。︵
31
5.细胞学鉴定设备
➢ 倒置显微镜
➢ 荧光显微镜
➢ 酶标检测仪
➢ 流式细胞仪
︵。︵
32
2.灭菌设备
➢ 高温电子灭菌炉 ➢ 蒸汽式压力灭菌锅 ➢ 过滤灭菌装置 ➢ 喷雾消毒器 ➢ 紫外灯
︵。︵
17
︵。︵
18
0.45 μm
0.22 μm
︵。︵
19
︵。︵
20
3.无菌操作设备
➢生物安全柜
︵。︵
21
生物安全柜
根据主要几项生物安全柜国际标准 的规定，安全柜可分为一级、二级和 三级三大类以满足不同生物研究和防 疫的要求。安全柜的分类级别与生物 安全登记无关。
︵。︵
22
一级生物安全柜
➢ 保护工作人员和环境，而不保护样品。
➢ 排气口安装有HEPA过滤器。
➢ 无自带风机，依赖外接通风管中的风机带 动气流。
︵。︵
23
二级生物安全柜
➢ 可提供对样品，环境，工作人员的保护。
➢ 排气口安装有HEPA过滤器，独有特征是 具有垂直层状薄片（无定向的）HEPA过 滤器。
➢ 注意无菌室内的紫外灯
➢ 室内常规用品不准随意拿出室外，所有物品不得 挪作它用
︵。︵
38
➢ 冰箱内的培养液要注明姓名、配制日期，不 随便使用他人的培养液，以免交叉污染
➢ 注意各类设备运行状态，发现问题及时报告
➢ 实验完毕，及时清洁工作台面，将使用过的 实验用品移出无菌室
➢ 定期对无菌室进行消毒灭菌
理想的无菌操作室应划为三部分： a) 更衣室—―供更换衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。 b) 缓冲间—―位于更衣间与操作间之间，目的是为了保证操作间的无菌环境。 c) 无菌操作间—―专用于无菌操作、细胞培养。其大小要适当，且其顶部不宜过高
（不超过2.5m）以保证紫外线的有效灭菌效果；墙壁光滑无死角以便清洁和消毒 。工作台安置不应靠墙壁，台面要光滑压塑作表面，漆成白色或灰色以利于酚红
︵。︵
39
谢谢
︵。︵
40
➢ 内置风机，形成下沉气流
➢ 无自带风机，依赖外接通风管中的风机带 动气流。
︵。︵
24
三级生物安全柜
➢ 为3－4级实验室生物安全等级而设计，柜 体完全气闭。
➢ 通过手套进行操作，俗称“手套箱”。 ➢ 实验品通过双门的传递箱进出。 ➢ 适用于高风险的生物实验。
︵。︵
25
︵。︵
26
︵。︵
27
4.细胞培养设备
︵。︵
8
无菌操作室
➢ 设置空气过滤和恒温恒湿装置，恒温 温度26度左右。相对湿度控制在3065%。
➢ 保持正压，尽量减少与外界的空气对 流，减少尘埃与微生物侵入。
➢ 通常由内外间组成，外间为缓冲间， 用于准备工作。
➢ 研究人员进入操作间前要穿上消过毒 的工作服和拖鞋。
︵。︵
9
无菌操作
（1）无菌操作室：无菌操作区只限于细胞培养及其他无菌操作的区域，最好能与外 界隔离，不能穿行或受其他干扰。