大鼠肝移植过程图
大鼠肝细胞微球皮下移植生成肝组织初探
大鼠肝细胞微球皮下移植生成肝组织初探张兰;李则学;刘海亮;李沛雨【摘要】目的探讨大鼠肝细胞微球皮下移植生成肝组织的可行性,为构建组织工程肝寻找新的方法。
方法新鲜分离的SD大鼠肝细胞接种在琼脂糖包被的培养皿上进行培养,待其形成肝细胞微球后采用直接注射方式植入大鼠腹股沟处皮下腔。
1 周后取腹股沟处组织,HE 染色法观察生成的肝组织形态。
结果体外培养3 d,肝细胞形成致密的肝细胞微球,直径大小在43 ~ 185 μm,HE 染色显示微球中的肝细胞保持天然肝细胞形态特征。
将其植入大鼠腹股沟处皮下腔1 周,HE 染色显示植入的肝细胞成活,并呈三维肝样组织团,肝细胞保持其特有形态特征:胞体为圆形,核大而圆,多为双核。
结论肝细胞微球皮下移植可形成肝组织,为组织工程肝的构建创建了新的方法。
【期刊名称】《解放军医学院学报》【年(卷),期】2014(035)005【总页数】3页(P493-495)【关键词】工程化肝组织;肝细胞微球;组织工程【作者】张兰;李则学;刘海亮;李沛雨【作者单位】解放军总医院普通外科研究所,北京100853;;;;【正文语种】中文【中图分类】R318.1对于先天性肝代谢紊乱及终末期肝病所致的急、慢性肝功能衰竭,肝移植是目前唯一有效的救治手段,但供体短缺严重制约该技术广泛应用[1-2]。
肝组织工程技术的发展为各种肝病治疗提供一种潜在方法[1-4]。
通过创建可植入工程化肝移植物体内再生工程化肝组织可为病损肝脏提供肝功能支持或直接对其进行修复[5-6]。
迄今为止已证实包括肝细胞/支架材料复合物、肝细胞片层等多种肝移植物体内植入后可再生有功能的工程化组织[7-12]。
肝细胞微球是肝细胞在非贴壁培养过程中相互聚集形成的三维类组织样细胞聚集体;体外研究表明肝细胞在形成微球后可更好的保持其活性和功能[13-15],但尚未见将其用于体内构建组织工程肝的报道。
本研究旨在评价肝细胞微球皮下移植形成肝组织的可行性。
大鼠减体积肝移植术后早期死亡的原因分析
a. Ten Dp r e tfHp t b ir p nr t ugr,G n eA ia dH si l K n n d a C lg ,K n 1 h £ eat n eao— iay- a c ai S re m o l e c y a m if l t o t umi Mei l ol e u — ie pao f g c e
osut n ( .% ) gs e blm ( . % ) l e d s nt n ( . % ) n u o oa ( . % ) p lo a net n bt co 24 r i , a m os i 18 , i r yf c o 1 8 ,p em t r v u i h x 18 , um nr if i y co
( . % )adecsi e a ig ( . % ) C n ls n T ecm o et a yd a as o t eue 12 n xes erw r n 12 . o c i h o m n s er et cue f a rdcd—s el e as v m uo l h r i vr n — z i t r
u i r v d o e a in, a d 1 0 r c ie mpo e . Re u t n mp o e p r t o n ( e ev d i r v d 3 sl s T n y— f e o 7 a s h vn e ev d r d c d— sz ie we t i f 1 0 r t a i g r c ie e u e v ie l r v
布 为 :腹 腔 出血 8只 ( . % ) 4 7 ,肠 梗 阻 4只 ( . % ) 气体 栓 塞 3只 ( . % ) 24 , 18 ,肝 功 能 不 良 3只 ( . % ) 18 ,气 胸 3只
大鼠原位肝移植模型建立的技术要点
大鼠原位肝移植模型建立的技术要点目的探讨大鼠肝移植手术技巧与处理要点, 减少术后并发症,建立稳定的大鼠肝移植模型。
方法Wistar大鼠240只(供受体各120只)行二袖套法原位肝移植。
结果120例大鼠原位肝移植术后48小时存活率88.3 % ,1周存活率86.7%,建立了稳定的大鼠肝移植模型。
结论掌握技术要点与处理方法,是建立稳定的大鼠肝移植模型的保证。
Abstract:ObjectiveTo explore the surgical skills of Orthotopic Liver Transplantation in Rats and reduce the complications. MethodsOrthotopic Liver Transplantation was performed in 240 rats using two-cuff technique.ResultsThe survival rate for 48 hours was 88.3 %, the survival rate for one week was 86.7 %, and established stable liver transplantation model in rats. ConclusionMaster the surgical skills of Liver Transplantation in rats can improve achievement ratio and the steady livability of rats with orthotopic liver transplantation.Key words:Liver transplantation;Model;Rats大鼠原位肝移植是研究免疫耐受、免疫排斥、器官保存、肝脏缺血再灌注损伤等方面常用动物模型,1979年Kamada首次提出了二袖套法建立大鼠肝移植模型,简化了手术方式,提高了生存率[1]。
单人行大鼠原位肝移植手术难点及技巧的探讨
c p o p r t n t n n e a i tmewe e ( 7 2 ± 1 0 ) m i S ( 6 4 土 1 1 ) mi e t ro e a i i a d a h p t i r 2 . 2 o me e .3 nV 2.7 .6 n, ( O 5 士 3 1 ) mi S ( 8 1 ± 5.8 .O nV 4.8 3 7 ) mi , ( 1 6 .0 n 1 . O士 0 1 ) mi S ( 1 2 士 0 0 ) mi . Th u c s f lr t , o e we k s r i a a e o e mo t u vv l . 1 nV 1.8 .8 n e s c e s u a e n - e u vv lr t , n - n h s r i a
福建医药杂志 21 0 0年 6月 第 3 2卷 第 3期
F j nM e ,Jn 0 0 ui dJ u e2 1 ,Vo 3 ,No a l2 .
6 3
单 人 行 大 鼠原位 肝 移植 手术 难 点及 技 巧 的探 讨
福 建 医科 大学 第 一 临床 医学 院肝 病 中 心 ( 州 3 00 ) 黄 启 明 吴 燕 斌 福 50 5 刘景 丰 邱 明链
e a i g d fiu t s a d t c n q e .M e h d A o a f 0 d l l D a swe ea o t d Th d l se t b ih d wi e r tn if l e n e h iu s c i to s t tl 0 a u tmae S r t r d p e . emo e o 2 wa s a l e t r — s h f r d t — u fme h d b i g e o e a o n o b e o e a o s Fi y c s s o a r h t p c l e r n p a t t n r e — o me WO c f t o y sn l p r t r a d d u l p r t r . f a e f r to t o o i i r t a s ln a i s we e p r t v o f r d wi n i e y a h g o p Re u t I i g e o e a o r u n o b e o e ao sg o p, d n ro e a i n tme r — o me t u ad d e e e c r u . h sl s n sn l p r t r g o p a d d u l p r t r r u o o p r t i , e o
大鼠原位肝移植模型的研究进展
症 等几 个方 面仍 需要进 行 大量 的研 究 , 稳定 的 动物 实 验模 型 的建立 就 故
显得 至关 重要 , 是研 究这 些 问题 的有 效 途 径 L 。 与 其 他实 验 动 物 相 比 , 2 ] 大 鼠具 有解 剖结 构类 似 于人 类 , 易 饲养 , 殖 较 快 , 于 观 察 等 优 点 , 容 繁 便 故 大 鼠肝移植 模 型是 目前 基 础 与 临床 中最 常 用 的 动 物模 型。 大 鼠肝 移 植术 式 模 型大 体 的分 型 有大 鼠原 位肝 移 植 ; 鼠异 位 肝移 植 ; 鼠慢 性 大 大 排斥 反 应 的建 立 ; 他 的模 型 ( 体积 式 、 助性 原 位 部分 、 心 跳供 体 其 减 辅 无 等) 3。本 文仅对 大 鼠的原 位 肝移 植实 验研 究 的进 展作 一 综述 L ] 1 大 鼠模 型 的优点 基础 和 临床 的肝移 植模 型 主要 以 鼠为造 模对 象 , 鼠原 位 肝 移植 模 大 型是 目前 最常 用 的动物 模型 。RO TM 主 要有 以下 优 点 : 与 较 大 的实 L ① 验动 物 ( 、 ) 比 , 管肝 移植 实 验在 技术 上更 容 易 实施 , 得 益于 显 狗 猪 相 尽 但 微外 科 的发 展 , 助 手术 显 微 镜 的放 大 , 借 使用 精 细 的 显微 手 术 器械 及 缝 合材 料 ( 管) 对 细小 的组 织 进 行精 细 手术 , R TM 的建 立 成 为 可 套 , 使 OL 能[ 。②有 大批 基 因型 明确 的纯 系 大 鼠 供 我们 选 择 , 近 交 系动 物 、 I ] 如 封 闭群 和杂 交群 等 。③单 克隆 抗 体 可 以 特异 和灵 敏 的 鉴定 大 鼠在 免 疫 排 斥异 以及 免疫 耐受 方面 起重 要作 用 的淋 巴细 胞 , 们 目前 对 大 鼠 的免 疫 人 分子 的认 识越 来越 多 。④ 大 鼠繁 殖 快 ( 娠期 和哺 乳 期 较 短) 成 本 低 、 妊 、 易于饲 养 、 有较 强 的抗 病 能力 , 人 的解 剖结 构 类 似 。⑤ 建 立 的 模 型 具 和 具 有 良好 的重 复性 , 济性 , 经 并发 症与 大 动物 肝脏 移植 基本 相 同 。 2 大 鼠的 麻醉 动物 模型 的建 立是在 动 物 的麻 醉状 态下 进行 的 , 模 型 的建 立 过程 在 中, 凡是 能影 响麻 醉 效果 的 因素 都 会 对 模 型 的存 活 率 和成 功率 造 成影 响I 。由于 每种 动物对 不 同麻 醉药 的 反应 , s ] 以及 不 同剂量 的维 持 效 果不 同, 故在 动物 的麻 醉过 程中 , 应选择 对 动物 机 体影 响较 小 、 作用 持 续 时 间 短, 而且 对实 验结 果影 响小 的 的麻 醉剂 , 而 达到 维 持稳 定 的麻 醉 效 果 。 从 大 鼠原 位 肝移植 模 型 , 麻醉 用药 的选 择 及麻 醉深 度 的掌 握 是保 证 手 术顺 利 进行 的关 键之 一 , 时也 是减 少大 鼠术 中及 围手 术期 死 亡率 的关 键 因 同 素 之一 。目前用 于大 鼠肝 移植 模 型手 术 的麻 醉药 物种 类 较 多 , 要 有 乙 主 醚、 氯胺 酮和 戊 巴比妥 等 , 种麻 醉药 有各 自的优 缺点 和应 用 范 围L 。 每 6 J 2 1 麻 醉药 的使 用情况 : 鼠肝 移植 模 型建 立 过程 中, . 大 目前 主 要使 用 乙醚 和 氯胺酮 两种 麻醉 剂 。乙 醚采 用吸 人 式给 药 , 由于 其对 呼 吸 道 的 刺 激作 用 , 造成呼 吸 困难甚 至 窒息 , 会 因此 在 给药 前 , 行 肌注 阿 托 品 的 要 预 处理 L 。氯胺 酮 , 7 J 化学 名是 2 ( 一氯 苯 基) 一 2 一2甲胺 基 一环 己酮 盐酸 盐 , D mi 9 5年 引入 临床 后 , 自 o n 16 o 至今 仍 是 非 巴 比妥 类 静 脉 麻 醉 药镇 痛 效果 唯 一确定 的麻 醉药 [ 巴 比 妥类 麻 醉 药 目前仍 在 大 鼠 肝 移植 模 型 的建 立 中使 用 。 因其 比较 大 的 肝脏 毒 性 , 严 重 影 响肝 脏 的 功 能和 但 会 实 验结 果 , 故很 少使 用 。彭 勇[ 等 在 用改 进 的二袖 套 法制 作大 鼠模 型的 。 ] 过程 中, 大 鼠随机 分为 对 照 组 、 醚 组 、氯 胺 酮 组 、 合 氯 醛 组 巴 将 乙 水 戊 比妥组 , 观察 每 种麻 醉 剂 的麻 醉 过 程 、 大 鼠 生理 和肝 功 能的 影 响 以及 对 无肝 期 开 始后 的 死亡 率 , 出各 种麻 醉对 肝 移植 大 鼠均有 明显 影 响 , 得 但 乙 醚具有 对生 理 、 功影 响小 , 肝 期 开始后 死 亡率 低 的优 点 , 可作 为 肝 无 故 制作 大 鼠原位 肝 移植模 型 的首 选麻 醉 方法 。 国内外 许 多 文 献报 导 , 氯胺 酮在 大 鼠肝移 植 中的麻 醉多 见 于 供 体 , 受 体 多 用 乙 醚 。就其 原 因 , 而 是 由于大 鼠肝移 植要 经 历无 肝 期 这 一特 殊 过 程 , 肝 ��
大鼠原位肝移植可控性胆道外引流模型的建立
【 b rc O j t e T ee pa dacdcn oal biytc etnl rng a A s at t 】 b cv odvl navne ot lb ia at x ra d i ei rs ei o rl e lr r e a a n t
肝 循 环 , 且 提 高 了术 后 生 存 率 , 于术 后 胆 道 管 理 。 而 便
【 关键词 】 肝移植 ; 胆 道 ; 引流术 ; 模型 , y
C nrl bebl r at xen l ria ei as r oo i l e a slnainmo e Q UMig o tol l iayt c etr a d an g rt ot tpc i r rn pa tt d l I n — a i r n h v t o
Fr o i lf l t ua dcl nv sy F zo 50 5 C ia it s t f i e t Fj nMei i r t,uhu3 0 0 , h sH p a A a d o i i a U ei n C r sodn uhr orp nigato: e Jn - n E ald igeg ao.o .n i f g,m i ln n @yho cr c ge :j f n
【 摘要】 目的 制作大鼠原位肝移植可控性 胆道外引流模 型 。方法 将 10只原位肝 移植大 1
鼠随机分为实验组 7 O只 , 制作可控性 的胆道外 引流 回流通路 ; 照组 4 对 O只 , 进行 二袖套法 大 鼠原位 肝移植并制作单纯 的胆道外 引流 。术后进行胆汁检测及 生存评估 。结 果 术后 4周 , 实验 组大 鼠的 胆汁分泌量 、 汁酸 总量及胆 汁中 C D A和 C C 胆 A、 C D A所 占的 比重 均高于对照组 ( P值分别 为 00 5 .2 、 0 0 40 0 60 0 9及 0 0 1 。实验组 4周生存率为 8 . % , . 1 、.0 、.2 .0 ) 5 7 对照组为 5 .% ; 5O 生存分析示两组差异 有统计学意义( 00 8 。结论 P: . 1 ) 该大 鼠原位肝移植可控性 胆道外引流模 型 , 不但 维持了大 鼠的肠
大鼠30%小体积肝移植模型两种切肝方法的比较
( f l t o i lfX zo dcl o ee X zo 2 0 2 P .C ia 1A i e H s t uh uMei lg , uh u2 1 0 , .R hn ) i a d pa o aC l
A s at bt c:0bet e T s bi ne etea daaa l 3 % s lfr i a l e t np na o oe. r jci oet l ha f cv n vibe 0 v a s f i l ma — —z rt i r r sl ttn m d1 lo s e v a a i
l e cu a b dtag b rf gopB( 4 ) 3 % l e asl ttnuigam da b r t he— o , adt l e nl l e a ; ru n= 0 , 0 b eo a r n i eo g t i rrnpa ao s ei l ega .T r v t n i n no f e
山东 医药 2 1 年 第 5 卷 第 5 01 1 2期
大 鼠 3 % 小 体 积肝 移 植模 型两 种切 肝 0 方 法 的 比较
宋 军 。丁志 龙 徐 , , 为 李 文 美 李 向农 王 学浩 , , ,
( 1徐 州医学 院附属 医院 , 苏徐 州 2 10 ; I 江 2022南京 医科 大学第 一 附属 医院)
c o s s cin b e dn ,b l e k g n n e t n s o d n in f a tdf r n e .Co cu i n U ig i rv d meh d r s —e t l e i g i la a e a d if ci h we o sg i c n i e e c s o e o i f n l so sn mp o e t o o b e e t n r ib e a d e e t e 3 % s l f rsz a ie a s ln ai n mo e i g tlb .c u ae fl e r s ci ,a mo e va l n f ci 0 o o v ma1 —ie r t v rt n p a t t d lw t a r h o e a d t . o l r o h i
大鼠原代肝细胞的标记和移植方法
大鼠原代肝细胞的标记和移植方法杨军英;王建设;刘慧兵;李涛;刘芳【摘要】The optimum concentration of CM-DiI incubated with primary hepatocyte of rat , optimum transplant volume and route of labeled primary hepatocyte are studied . The rat hepatocytes are isolated and purified by collagenase and density gradient centrifugation , and labeled with different concentration of CM-DiI , and then transplanted on rat which are previously suffered 2/3 partial hepatectomy 0 h by liver portal vein and tail vein , respectively . The livers are removed after transplanting hepatocyte 36 h , frozen section and paraffin section are prepared and analyzed by immunohistochemistry and fluorescence observation , respectively . The results show that hepatocyte can be labeled to 95% after incubating with CM-DiI 4 μmol・mL - 1 for 5 min , labeled hepatocytes which are observed on frozen section transplanted by 0.8 mL per keilogram remnant liver weight are more than that of 0.2 ,0.4 and 0.6 mL (P < 0.01) , and labeled hepatocytes transplanted by liver portal vein aremore than that of tail vein ( P < 0.01 ) . Hepatocytes incubated with CM-DiI 4 μmol・mL - 1 for 5 min can be labeled to 95% , and 0.8 mL labeled hepatocytes per keilogram remnant liver weight transplanted by liver portal vein can get preferable label and transplantation efficiency .%探讨CM-DiI 标记大鼠原代肝细胞的最佳浓度、细胞的移植量和移植途径.采用原位胶原酶灌注和密度梯度离心法分离、纯化大鼠肝细胞,用不同浓度 CM-DiI 进行标记,筛选出 CM-DiI 的最佳标记浓度,分别从门静脉、尾静脉移植到2/3肝切除0 h大鼠,对细胞移植36 h 后的肝组织石蜡切片和冰冻切片分别进行免疫组织化学分析和荧光观察.结果显示,4μmol・mL -1浓度的CM-DiI 和肝细胞孵育5 min ,细胞标记率高达95%.每克大鼠残肝移植0.8 mL的细胞悬液(107个・mL -1)和0.2,0.4,0.6 mL 移植后检测到的标记细胞数目相比有显著性差异(P<0.01),经肝门静脉移植后可以检测到的标记细胞数比尾静脉多(P<0.01).CM-DiI 标记大鼠原代肝细胞的最佳浓度为4μmol・mL -1,标记细胞的最佳移植量为每克大鼠残肝移植0.8 mL 的细胞悬液(107个・mL -1)、最佳移植途径为经肝门静脉移植.【期刊名称】《西北师范大学学报(自然科学版)》【年(卷),期】2014(000)004【总页数】5页(P79-83)【关键词】大鼠;原代肝细胞;细胞移植;标记率;移植途径【作者】杨军英;王建设;刘慧兵;李涛;刘芳【作者单位】河南师范大学体育学院,河南新乡 453007; 河南师范大学省部共建细胞分化调控重点实验室,河南新乡 453007;河南师范大学体育学院,河南新乡 453007;河南师范大学省部共建细胞分化调控重点实验室,河南新乡 453007;河南师范大学省部共建细胞分化调控重点实验室,河南新乡 453007;河南师范大学省部共建细胞分化调控重点实验室,河南新乡 453007【正文语种】中文【中图分类】Q2-33细胞治疗在修复肝损伤、促进肝再生、改善肝功能的作用已经在体外研究和动物实验中得到越来越多令人欣喜的结果,但其作用机制、临床疗效还需要深入研究[1,2].目前,大多研究采用间充质干细胞、IPS细胞等诱导成 hepotocyte-like cell 治疗肝脏疾病[3,4],但其在体内是否可以维持内环境稳定,不会诱发肿瘤需要长期试验来证实.肝脏具有极强的再生能力.当受到急性损伤时,残余肝脏细胞能够迅速增生恢复至原肝重,维持正常的肝脏生理功能[5].因此,肝细胞是肝脏的主要结构和功能细胞,也是肝损伤修复的第一道屏障[6],是肝脏疾病治疗的重要细胞[7,8].本研究采用大鼠2/3肝切除模型,用荧光染料CM-DiI标记,对再生肝细胞的体外标记、移植途径和体内分布进行检测,为肝细胞的细胞治疗和体内分化研究提供实验基础.1 材料与方法1.1 实验动物及模型制备成年健康 SD 大鼠由河南师范大学实验动物中心提供.体重(220±20)g,饲养温度(21±2)℃,相对湿度60%±10%,光照时间12 h(8:00~20:00),自由饮水、摄食.大鼠用乙醚麻醉、酒精消毒后,按文献[9]方法切除大鼠的肝脏左叶和中叶,制备2/3肝切除大鼠模型.本实验均在无菌条件下进行.1.2 仪器和试剂荧光显微镜、冰冻切片机、切片机、低温离心机等.Percoll(Pharmacia公司),羊抗鼠 ALB 单克隆抗体(Santa公司),兔抗鼠G6P 单克隆抗体、鼠抗羊 IgG 试剂盒、鼠抗兔 IgG 试剂盒(博士德公司),碱性磷酸酶标记山羊抗兔二抗、碱性磷酸酶标记兔抗山羊二抗(北京中杉公司),CellTrackerTM CM-DiI(Invitrogen公司),Ⅳ 型胶原酶(Collage nase Type Ⅳ,Sigma 公司),其他化学药品均为分析纯.1.3 肝细胞分离水合氯醛麻醉正常大鼠,腹部用酒精消毒,采用原位胶原酶灌注和密度梯度离心法,参照文献方法[10],分离获得肝脏细胞悬液.将肝脏细胞悬液和60% Perco11在4℃、200 g密度梯度离心15 min,收集中间层细胞(即肝细胞).台盼蓝染色,镜检细胞形态和活性.当细胞收率≥90%,细胞活性≥96%,红细胞数量≤0.1%时,视为合格样品.1.4 细胞免疫化学分离纯化的肝细胞悬液用4%多聚甲醛固定30 min后涂片,参照细胞免疫化学方法,DAB染色,检测ALB和G6P的表达.1.5 肝细胞标记将分离纯化的肝细胞悬液调整密度至1×106 mL-1,分别用 CM-DiI(二甲基亚砜事先溶解好,浓度为1 mg·mL-1) 1~5 μL·mL-1 5个梯度标记细胞,37 ℃分别孵育2,5,10 和 15 min,随后将细胞置于4 ℃ 下 5 min 以终止反应,用4 ℃预冷的D-PBS溶液50 g洗涤3次,去除残余标记液.取10 μL细胞悬液滴片,荧光显微镜下检测标记率.1.6 细胞移植按每克大鼠残肝移植0.2,0.4,0.6,0.8和1.0 mL的细胞液,以1 mL·min-1的速度,用0.7 mm直径针头的注射器,将标记好的细胞悬液(1×107 mL-1)分别从尾静脉和门静脉移植入2/3肝切除0 h的大鼠.对照组注入等量PBS.1.7 细胞示踪于细胞移植后36 h处死大鼠,摘取肝脏,制备6 μm冰冻切片,荧光显微镜观察移植肝细胞在肝脏内的分布情况;用10%福尔马林溶液固定肝脏,制备石蜡切片.按照免疫组织化学方法,DAB显色,镜检ALB 的表达.1.8 统计学分析数据处理采用 SPSS 15.0 软件,实验结果数值采用t检验.P<0.05即为有统计学意义.2 结果2.1 再生肝细胞的形态学特征通过两步法原位灌流消化获得肝细胞的活性高达95%以上,细胞分散较好,轮廓清晰,大小均一,折光性强,胞质清亮,核大而圆,核仁清晰,有双核细胞.肝细胞纯度较高,G6P和ALB阳性细胞率均在95%以上(图1).2.2 CM-DiI标记细胞的最佳浓度和时间分离纯化的1×106 mL-1的肝细胞和CM-DiI储备液在37 ℃条件孵育.CM-DiI在2~4 μL·mL-1浓度范围内,标记率随浓度增加而升高,4 μL·mL-1浓度时标记率达95%以上.各实验组间差异显著(P<0.01).孵育 5 min标记率和细胞活性最好,随着孵育时间延长,细胞活性降低(图 2,3).图1 原代肝细胞 ALB(A)和G6P(B)的表达(×200)Fig 1 Expression of ALB(A) and G6P(B) in primary hepatocyte(×200)A~E分别为CM-DiI 1,2,3,4,5 μL·mL-1标记的肝细胞(A~E: Hepatocyte labeled by 1,2,3,4,5 μL·mL-1 CM-DiI,respectively)图2 不同浓度CM-DiI标记原代肝细胞(×200)Fig 2 Primary hepatocyte labeled by different concentration CM-DiI(×200)图3 冰冻切片检测到的标记细胞和移植细胞数量的关系Fig 3 The relationship between labeled hepatocyte observed on frozen section and the numbersof transplanted hepatocyte2.3 肝细胞移植的最佳量细胞移植后 36 h,受体动物肝脏的连续冰冻切片结果显示(图4),移植细胞量少时,在组织切片中基本看不到,可以追踪到的细胞数目随着移植细胞数量的增加而增加.1×107mL-1密度的标记细胞按0.8 mL·g-1残肝移植检测效果最好,和0.2,0.4,0.6和1.0 mL·g-1残肝的细胞移植量相比具有显著性差异(P<0.01),和1.0 mL·g-1残肝的细胞移植量相比没有显著性差异.2.4 移植途径细胞移植后36 h受体动物肝脏的连续冰冻切片的免疫组化和荧光结果显示(图5),经肝门静脉和尾静脉两种方式移植,在肝组织内均可检测到移植细胞.相同密度和数量的肝细胞,经肝门静脉移植检测到的标记细胞明显多于尾静脉移植(P<0.01). 图4 冰冻切片检测到的标记细胞和移植途径的关系Fig 4 The relationship between labeled hepatocyte observed by IHC and transplantation route2.5 受体肝的组织学检测细胞移植后36 h受体动物肝脏组织学结果显示(图5),肝细胞轮廓清晰,胞质均匀,可见部分双核细胞,细胞核呈圆形或椭圆形,个体较大,易于辨别.个别移植细胞在受体肝脏中可以表达ALB.3 讨论目前治疗肝癌或终末期肝病的理想方案是肝移植,但是供肝严重不足和免疫排斥阻碍了其广泛应用.原代肝细胞的移植避免了干细胞和iPSCs细胞的潜在危险,实现了一个供肝用于多个受体,具有费用低,可重复移植、创伤小等优点[11],既是终末期肝病和肝移植之间的桥梁,又可以作为基因治疗的载体,纠正遗传代谢性肝病的代谢紊乱.A.HE染色;B和D.荧光显微镜下观察到的标记细胞;C.ALB表达.箭头指的是受体肝内表达ALB的移植细胞(A.HE staining;B and beled hepatocyte observed by fluorescence observation microscope;C.Expression ofALB.Arrow indicated transplatated hepatocyte which expressed ALB inreceiver liver).图5 受体肝组织的组织形态学检测Fig 5 Morphology observation in receiver liver肝细胞移植常采用门静脉肝内移植、尾静脉移植、穿刺脾实质内移植、经肝动脉肝内移植以及腹腔内大小网膜腔内移植或皮下注射等途径[12,13].静脉内输注的细胞会回归到肝脏,是一种简便而又安全的输注途径.部分肝切除后,肝再生被启动,细胞增殖、分化相关的一些生长因子、细胞因子等通过激活细胞信号通路[10],为移植细胞提供良好的再生环境,可促进移植细胞的存活、驻留、增殖和分化.我们采用部分肝切除模型大鼠作为受体,采取门静脉和尾静脉两种方式植入原代肝细胞,通过荧光追踪,发现相同密度和数量的肝细胞,经肝门静脉移植后可以检测到较多的标记细胞.CM-DiI是一种细胞膜标记染料,水溶性好,标记细胞形态良好,对细胞无毒,稳定长效,其荧光不受醛类固定剂影响,能有效用于体外诱导分化和移植细胞在活体组织中的迁移及分化研究.但CM-DiI标记基本都是用于干细胞研究,对于原代细胞的标记未见报道.研究发现,移植细胞数量级不得超过 107 个,移植量在 0.5~3.0 mL范围内.移植细胞的数量增加1倍,门脉高压引起的右心房压力升高,并发症如呼吸暂停或死亡明显增多[13].本研究中,把分离纯化的肝细胞移植到2/3肝切除大鼠,通过细胞移植后36 h受体动物肝脏的连续冰冻切片和石蜡切片的观察,发现4 μmol·mL-1浓度的CM-DiI和肝细胞孵育5 min,按每克大鼠残肝0.8 mL 的细胞悬液(107个·mL-1)移植,可以达到最好的标记效率和移植效果.把分离纯化的肝细胞移植到再生肝后,细胞散在分布于肝内,细胞结构完整,部分标记细胞嵌入肝板,具有肝细胞形态,极个别移植细胞能够表达ALB,具有肝细胞的功能.肝细胞移植后是否驻留、分化等有待于进一步探讨与研究.参考文献:[1]ANSBORO S,GREISER U,BARRY F,et al.Strategies for improved targeting of therapeutic cells:implications for tissue repair[J].Eur Cell Mater,2012,23:310-318.[2]STREETZ K L.Liver cell transplantation models for experimental clinical research:Prometheus in a different light[J].Dtsch Med Wochenschr,2013,138(16):852-854.[3]MEIER R P,MÜLLER Y D,MOREL P,et al.Transplantation of mesenchymal stem cells for the treatment of liver diseases,is there enough evidence[J].Stem Cell Res,2013,11(3):1348-1364.[4]YU Y,FISHER J E,LILLEGARD J B,et al.Cell therapies for liver diseases[J].Liver Transpl,2012,18(1):9-21.[5]FAUSTO N,CAMPBELL J S,RIEHLE K J.Liver regeneration[J].Hepatology,2006,43(2 suppl 1):45-53.[6]RIEHLE K J,DAN Y Y,CAMPBELL J S,et al.New concepts in liver regeneration[J].J Gastroenterol Hepatol,2011,26:203-212.[7]RODRIGUES D,REVERBEL D A,SILVEIRA T,et al.Freshly isolated hepatocyte transplantation in acetaminophen-induced hepatotoxicity model in rats[J].Arq Gastroenterol,2012,49(4):291-295.[8]KROHN N,KAPOOR S,ENAMI Y,et al.Hepatocyte transplantation-induced liver inflammation is driven by cytokines-chemokines associated with neutrophils and Kupffer cells[J].Gastroenterology,2009,136(5):1806-1817.[9]HIGGINS G M,ANDERSON R M.Experimental pathology of theliver:restoration of the liver of the white rat following partial surgicalremoval[J].Arch Pathol,1931,12(2):186-202.[10]徐存拴,章静波.大鼠肝再生的功能基因组学研究:上册[M].北京:高等教育出版社,2009:1-2.[11]PIETROSI G,VIZZINI G B,GRUTTADAURIA S,et al.Clinical applications of hepatocyte transplantation [J].World J Gastroenterol,2009,15(17):2074-2077.[12]冯渊,李德卫,杨均均.经大鼠脾动脉行肝细胞移植建立动物模型[J].复旦大学学报:医学版,2012,39(6):653-657.[13]向贤宏,陈伟,陈柳琴,等.不同途径肝细胞移植对肝硬化大鼠模型肝脏血流灌注的影响[J].中山大学学报:医学科学版,2012,33(3):357-360.。
肝脏移植--课件
肝脏移植发展史
★早期肝移植术后病人没有应用免疫抑制剂,很 快因为排斥反应而移植物失功能。1963年,Starzal将 硫唑嘌啉和类固醇用于临床肝移植。1980年, Starzal 应用环孢霉素+强的松的免疫抑制治疗方案,从而大 大提高移植肝的生存率。1989年,FK506应用于临床, 从而使肝移植受体1年及5年生存率分别达到90%和 70%~80%。 ★1988年,美国威斯康星大学的Belzer创造了一种 新的器官保存液,称为UW液,使肝脏冷保存安全时间 达到16~24小时。 ★1983年,美国国家卫生研究机构正式承认肝移 植是治疗终末期肝病的一种治疗方法。
供肝的获取技术(图)
供肝的修剪技术
1.供肝运到手术室后,置于盛有4℃的UW液的 无菌钢盆中,该钢盆再置于盛有无菌碎冰的一个较大 钢盆中。 2.修剪下腔静脉,减去膈肌和多余的韧带组织。 注意妥善结扎或缝合一些小静脉的分支,以免引起供 肝植入后的麻烦的出血。 3.修剪肝动脉,这是最重要的一步。如遇肝动脉 变异(如供肝的肝右动脉来源于肠系膜上动脉),则 需要进行肝动脉的整形。 4.修剪门静脉,保留足够的长度;修剪胆总管, 但切忌过分分离,以免影响胆管的血供。
五、肝脏移植的手术方式
★目前应用的最多的仍然是经典的原 位肝脏移植术。即,切除病肝,保留受 体的部分肝上下腔静脉、门静脉、肝固 有动脉、胆总管,分别与供肝的肝上下 腔静脉、门静脉、肝固有动脉、胆总管 吻合。
背驮式原位肝脏移植术
★又称保留下腔静脉的原位肝移植术,即 在切除病肝时,保留其肝后下腔静脉将供肝的 肝上下腔静脉与受体的下腔静脉以一定方式吻 合,形似受体下腔静脉背驮供肝而得名。 ☆其中供肝肝上下腔静脉与受体肝中、肝 左静脉共同开口吻合的术式为经典的背驮肝脏 移植。 ☆此外尚有供肝下腔静脉与受体下腔静脉 侧侧吻合、直接端侧吻合、与三条肝静脉开口 吻合等各种术式。
背驮式肝移植技术
第二部分
PBLT术中肝动脉异位重建的经验
肝动脉重建与预后(一)
肝动脉的重建决定肝移植的成败 传统肝动脉重建方式:肝动脉-肝动脉端 端吻合 受体多次手术、肝动脉因栓塞化疗受损、 肝门区肿瘤、肝动脉分离困难、受体肝动 脉管腔太小
传统肝移植血管重建方式受限
肝动脉重建与预后(二)
以往对于受体肝动脉条件差,不宜直接 吻合的病例,笔者先后尝试过采取将供 体肝动脉与 下列动脉吻合:
上个世纪80年代末期Tzakis开创的背驮式肝
移植( Piggyback liver transplantation, PBLT) 是以受体肝静脉成型后与供体下腔静脉重建 技术为特点。我们称以受体成型与供体下腔 静脉重建者为经典式背驮式肝移植( Standard piggyback liver transplantation, SPBLT) 作者自1995年迄今,共施行PBLT近280例。 初步经验证明,该技术具有血液动力学稳定, 内环境干扰小等优点
Байду номын сангаас
改良术式的优点
简化了修肝过程,对于肝后下腔静脉保留的
限制大大放宽; 使用腔静脉侧壁阻断钳,在腔静脉前方直接切 除肝脏,明显简化了切肝过程,并使得实施背 驮式技术中巨大肝脏的直接切除成为可能; 术者不担心吻合口过小或者狭窄; 不会因供、受体血管过长而扭曲或受压; 植肝不会压迫吻合口致静脉回流不畅;
经典式背驮式肝移植技术弊端
重建的受体肝静脉与供体下腔静脉口径不匹配,容 易导致吻合口狭窄;
重建的肝静脉回流通道长度不易掌握,容易扭转;
背驮受体肝静脉之上的供肝压迫回流通道;
如果为恶性肿瘤并侵犯或包绕第二肝门的肝静脉, 肿瘤不易根治;
建立豚鼠至大鼠异种肝移植模型的实验研究
【 bt c】 O j t e T t lhte dlf iodn le xnt np na nf m g i ap A s at r b ci oe a i eo d crati r eo asl to o u e i e v s bs h mo s v r a i r n g
S = P n U N e g, CA, Di . 眦
Z HANG n u Qu h a,e 1 ta .Dea t e to ug r p rm n f S rey,Hu sa si l F d n U ies y, S a g a ah n Hopt , u a n vri a t hn hi
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・
实 验 研 究 ・
建 立 豚 鼠 至 大 鼠异 种 肝 移 植 模 型 的 实 验 研 究
(8 0 9 .0±2 .8 an ie e weiga d vse cn et n weeo sre .G yo e at l i p 6 3 ri.Lv rcls ln n esl o gБайду номын сангаасi r ke d l l s o v lcg np rie ds — c s a
p a e d o g di e e s l n. n ls o s Th d l fg i e i o r tl e e o r n p a t to e r a ra d n n s e w r wo l Co cu i n e e mo e n p g t a i r x n t a s l a in o u a v n
大鼠原位肝移植手术技巧探讨
0 引
言
首次提出“ 缝合 法 ” 鼠原 位 肝 移 植 之 后 , 套 袖 大 二
法、 三套 袖 法及 各 种 改 良方 法 相 继 出 现 , 是 但 由于操 作 复 杂 , 响成 功 的 因 素 多 , 功 建 立 该 模 影 成
随 着 临 床 肝 脏 移 植 的 发 展 , 鼠 的 肝 脏 移 植 大
模 型 已被 广 泛 的 运 用 于 部 分 肝 移 植 , 脏 移 植 免 肝 疫 、 移植 术 后 感 染 , 瘤 的复 发 以及 相 关 并 发 症 肝 肿 的 发生 、 发展 机 制 的研 究 -] 自 1 7 4。 9 3年 , e L e等
短 无 肝 期 , 顺 利 完 成 大 鼠肝 移植 模 型 的 建 立 。 可 关键 词 : 原 位 肝 移 植 ; 二 袖 套 法 ; 动 物 模 型 ; 大 鼠 中 图 分 类 号 : R 5 . 67 3 文献标识码 : A 文 章 编 号 : 10 —19 2 0 ) 1 0 7 4 0 889 (0 9 0 - 5 - 0 0
蔡 明 , 潘 桃 , 李红洲 , 陈知水
( 中科 技大 学 同济 医 院器官移 植研 究所 教育 部/ 华 卫生 部器 官移植 重 点实验 室 , 湖北 武汉 4 03 ) 300
摘要 : 目的 : 探讨建立稳定 的大鼠原位肝移植模型 的外科技巧 。 方法 : K m d 在 a aa二袖套法基 础上 , 重对供肝 着 分离 、 灌注 、 肝上下腔静脉切取 , 肝上下腔静脉 吻合 , 袖套和胆道处理等手术 方法作 了进 一步改进 。 结果 : 共建立 4 0例大 鼠原位肝移植模型 , 手术成功率 8 % , 活率达 7 %。 结论 : 0 7 d存 0 在娴熟 细致 的外科操作 基础上进 一步缩
大鼠原位肝移植模型的手术改进及体会
术后早期胆道出血与手术过程中操作不当密切 相关 , 主要表 现为 T管 内引 流 出 血性 胆 汁 。腹 腔 镜
下胆 总管 切开 取石 的方 法 有 2种 : 、 道 镜 网篮 取 1胆 石 ,、 2 经剑 突下 切 口用 开 腹 取 石钳 取 石 。有 文 献 报 道在 开腹 手术 时若 使 用 取 石 钳 盲 目取 石 , 道 黏 膜 胆 均有 不 同程 度 的损 伤 和 出 血 J 。在 腹 腔镜 下 用 取 石钳 取 石时 由于 患者 处 于 所 腹 状态 下 , 手术 的操 作
段 , ]术后早期 虽仍有较高并发 症 , 但其并发症 主
要 与术 者 的镜 下 操作 技 术 密 切相 关 , 相信 随着 腹 腔
镜操作技巧的提高, 耐心细致地处理好手术 的每一 环节 , 其早期并发症一定会明显下降。
参 考 文献 :
[ ] 王育 生, 1 郭献庭 , 增辉. 徐 腹腔 镜胆总 管探查术 并发症 的 防治 体会 [ ] 中国内镜杂志 ,0 4 1 ( ):1—3 J. 2 0 ,0 6 2 . [ ] 郭建 平 , 长年 , 2 许 张金燕. 维胆道镜 在胆管结 石症术 中的应 纤 用[ ] 山西医科 大学学报 ,9 9 3 ( J. 19 ,0 增刊) 19—2 . :1 0
置 。引流 管 口一定要 放 置在小 网膜 孔靠 近胆 总管切 口的下方 , 沿右 肝脏 面靠 近 后 腹膜 处 低 位 从 腹 腔 内
管在腹腔 内按常规长度 留置 , 手术结束 时 , 气腹关 闭, 腹腔 内空 问变小 , 而此 时 T管 已在 腹 壁 固定 , 造 成腹 腔 内 T管 行 径过 长 , 曲 , T管 引流 不 畅 , 扭 使 因 此, 以后笔者在进行此项手术时 , 匀在手术结束时外 拉 T管 3c m左 右后再 固定 , 无 T管 扭 曲现象 。 再 腹 腔镜 下 胆 总 管切 开 取 石 , T管 引流 术 与 传 统
大鼠肝脏移植模型制作
大鼠肝脏移植模型制作大鼠原位肝移植是研究器官保存、肝脏缺血再灌注损伤、免疫抑制剂、移植排斥反应以及免疫耐受机理等方面常用的动物模型。
最初由Lee在1973年报道,经过许多学者的改进,其手术基本稳定,根据肝上下腔静脉吻合方式,大鼠原位肝移植可分为“二袖套法”和“三袖套法”,下面简单的将大鼠肝脏移植的模型制作介绍一下。
一、手术器械显微外科手术器械包,手术显微镜1台,自制S拉钩(用橡皮筋一端带弯成S形大头针)4个,眼科剪1把,其它外科器械若干及纱布、棉球、棉片和橡皮条等。
二、供、受者大鼠的选择根据不同的研究目的选择不同的动物品系,在同种移植模型中,一般采用两种纯系健康大鼠,如Lewis大鼠,Brown Norway 大鼠(BN),DA大鼠等,国内应用Wistar,SD大鼠也比较多。
如果是异种移植可以选用豚鼠-大鼠,仓鼠-大鼠等不同品系的动物。
三、术前准备供、受者术前禁食14h,自由饮水,采用乙醚吸入麻醉麻醉的方法,提高手术的安全性,受者术前肌肉注射阿托品0.03mg,防治分泌物阻塞呼吸道。
四、供者手术麻醉成功后,经阴茎背静脉注射50U/ml肝素稀释液3.0ml,使供者全身肝素化。
十字切口入腹,经腹主动脉穿刺灌洗供肝;灌洗前,剪开膈肌,阻断腹主动脉,离断胸腔段肝上下腔静脉,灌洗至流出液澄清为止,约需灌洗液20~30ml。
游离肝下下腔静脉,分离结扎离断右肾静脉和右肾上腺静脉,自肠系膜上静脉置管,缓慢注入20ml含肝素的林格氏液,于右肾静脉下方离断肝下下腔静脉,剪开胆总管前壁,近肝端插入外径1.0mm,长4.0mm 的聚乙烯管约2.0mm(可用硬膜外导管制成),结扎固定后远肝端离断之,分离结扎离断肝固有动脉;游离门静脉,结扎离断其分支幽门静脉、脾静脉,于脾静脉下方离断门静脉,锐性分离肝周韧带,结扎左膈下静脉,绕肝上下腔静脉环切膈肌及其腱膜,保留2.0mm边缘,取下供肝置于4℃林格氏液中保存。
五、血管套管的准备供肝置4℃冰浴中,作血管套管放置。
胆道梗阻大鼠的肝脏病理变化及动态观察
胆道梗阻大鼠的肝脏病理变化及动态观察雷俊;陶强;杨文萍;徐红艳;黄慧;邓庆强;曾华;张守华【摘要】目的:建立SD大鼠胆道梗阻的动物模型,并对该动物模型的肝脏病理变化及肝功能等各项指标进行动态观察。
方法将纯系SD大鼠30只,随机分为实验组和对照组,实验组进行胆总管结扎,然后关腹。
对照组打开腹部后游离胆总管然后关腹。
动态观察胆总管结扎后第1d、3d、7d、14d,21d的肝功能、肝脏组织病理变化。
结果梗阻性黄疸大鼠在14d内随着时间延长,血清胆红素逐渐上升,肝内小胆管增生逐步增加,少量纤维结缔组织增生。
14d后血清胆红素逐渐下降,增生小胆管减少,亦未见纤维结缔组织增生。
结论大鼠梗阻性黄疸在14d内的肝脏病理及肝功能变化与人类相似,但在14d后出现恢复,与人类梗阻性黄疸病变过程不同。
%Objective To establish the animal models of SD rat biliary obstruction,and pathological changes of liver and liver function indicators on the animal model of dynamic observation. Methods The pure line of 35 SD rats,were randomly divided into experimental group and control group,the experimental group underwent common bile duct ligation,then close the abdominal. The control group after open abdomen from the common bile duct and abdominal closure. Dynamic observation of bile duct ligation af-ter first days,3 days,7 days,14 days,21 days of liver function,pathological changes of hepatic tissues. Results In rats with ob-structive jaundice in 14 days with the prolongation of time,serum bilirubin increased gradually,the small intrahepatic bile duct proliferation increased gradually,with little fibrous connective tissue hyperplasia. After 14 days of serum bilirubin decreased grad-ually,small bile duct hyperplasiareduce,also has not seen the hyperplasia of fibrous connective tissue. Conclusion Jaundice Rat Liver and liver function obstruction in 14 days changes similar to humans,but in 14 days after the surgery the rats appeared re-covery,unlike human obstructive jaundice disease process.【期刊名称】《江西医药》【年(卷),期】2015(000)008【总页数】4页(P752-754,848)【关键词】胆道梗阻;肝脏;大鼠【作者】雷俊;陶强;杨文萍;徐红艳;黄慧;邓庆强;曾华;张守华【作者单位】江西省儿童医院普外科,南昌 330006;江西省儿童医院普外科,南昌 330006;江西省儿童医院病理科,南昌 330006;江西省儿童医院病理科,南昌330006;江西省儿童医院病理科,南昌 330006;江西省儿童医院普外科,南昌330006;江西省儿童医院病理科,南昌 330006;江西省儿童医院普外科,南昌330006【正文语种】中文【中图分类】R657.4胆道梗阻性疾病在临床上常见,常见于胆道闭锁和胆汁淤积,是小儿肝胆外科领域常见及难治性疾病。
大鼠肝移植图谱
供体手术
1.游离肝周韧带,显露结扎左膈下静脉
剪开胃结肠韧带无血管区,游离肝脏尾状叶
游离尾状叶
游离右腰静脉全身肝素化
分离结扎右肾动脉
结扎切断右肾静脉
肝下腔静脉游离完毕
分离结扎右肾上腺血管
供体胆道置入硬膜外导管
经腹腔动脉全身灌注冰乳酸林格式液
供肝灌注良好,变为土黄生色
游离供体门静脉完毕(结扎幽门静脉、脾静脉)
紧贴膈环下方剪断供体肝上腔静脉
不好意思,少发了1张,分离切断供体门静脉幽门支
供体修整,肝下腔静脉及门静脉袖套
肝上腔静脉修整完毕,两角缝吊牵引线
游离受体肝下腔静脉
结扎切断受体胆总管(已结扎)及分离肝固有动脉
分离门静脉左右支(图为左支)
经门静脉驱除受体肝脏余血(变为土黄色)
供体植入,缝合肝上腔静脉前壁
肝上腔静脉吻合完毕前排除气泡
门静脉袖套吻合完毕后固定
门静脉袖套吻合开放供肝迅速再灌注
肝下腔静脉袖套吻合完毕
修整受体胆总管(供肝胆道支撑管内已有胆汁产生)
两袖套及胆道插管完毕
关腹时大鼠清醒抬头
术毕大鼠自行翻身,毛发蓬松,直立。
大鼠部分肝移植(PLT)的肝叶切除方法及体会
大鼠部分肝移植(PLT)的肝叶切除方法及体会宋康;贺轶锋;周俭;黄晓武;孙健;王晓颖;王征;潘奇;樊嘉【摘要】Objective To establish the models of 30% and 60% partial liver transplantation (PLT) in rats by different methods of hepatolobectomy. Methods The 60% PLT group was resected left lobe and caudate lobe in vivo (n = 50) or in vitro (n= 50) , retained middle lobe, right lobe and right anterior lobe. The 30% PLT group in = 50) was resected left lobe, caudate lobe, right lobe and right anterior lobe in vivo , retained middle lobe only. Results The proportion of the partial donor liver in each group was similar to the clinical PLT. It had higher survival rate in each group after liver transplantation. Conclusions The models of 30% and 60% PLT in rats can better simulate the process of clinical PLT by different methods of hepatolobectomy in vivo or in vitro. It provides a good platform for in-depth fundamental research on liver transplantation.%目的通过不同的肝叶切除方法,建立30%和60%比例的大鼠部分肝移植(partial liver transplantation,PLT)模型.方法 60% PLT组,在体切除(n=50)或者离体切除(n=50)肝左外叶、尾叶,保留中叶、右叶、右前叶;30% PLT组(n=50),在体切除肝左外叶、尾叶、右叶、右前叶,仅保留中叶.结果各实验组获取的部分供肝比例与临床部分肝移植相似,移植后存活率较高.结论通过在体切除或者离体切除不同的肝叶组合,建立30%和60%比例大鼠PLT模型,能较好地模拟临床部分肝移植过程,为深入进行肝移植的基础研究提供了良好平台.【期刊名称】《复旦学报(医学版)》【年(卷),期】2012(039)006【总页数】4页(P645-648)【关键词】动物模型;肝移植;肝叶切除;大鼠【作者】宋康;贺轶锋;周俭;黄晓武;孙健;王晓颖;王征;潘奇;樊嘉【作者单位】复旦大学附属中山医院肝癌研究所肝外科上海200032;复旦大学附属中山医院肝癌研究所肝外科上海200032;复旦大学附属中山医院肝癌研究所肝外科上海200032;复旦大学附属中山医院肝癌研究所肝外科上海200032;复旦大学附属中山医院肝癌研究所肝外科上海200032;复旦大学附属中山医院肝癌研究所肝外科上海200032;复旦大学附属中山医院肝癌研究所肝外科上海200032;复旦大学附属中山医院肝癌研究所肝外科上海200032;复旦大学附属中山医院肝癌研究所肝外科上海200032【正文语种】中文【中图分类】R657.3由于器官缺乏的现状,目前临床部分肝移植(partial liver transplantation,PLT)如活体和劈离式肝移植日益受到重视,已成为一项重要的肝移植技术并被广泛应用[1]。
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游离供体门静脉完毕(结扎幽门静 脉、脾静脉)
紧贴膈环下方剪断供体肝上腔静脉
分离切断供体门静脉幽门支
供体修整,肝下腔静脉及门静脉袖 套
肝上腔静脉修整完毕,两角缝吊牵 引线
游离受体肝下腔静脉
结扎切断受体胆总管 (已结扎)及分 离肝固有动脉
分离门静脉左右支(图为左支)
经门静脉驱除受体肝脏余血(变为 土黄色)
大鼠肝移植过程图
游离肝周韧带,显露结扎左膈下静 脉
剪开胃结肠韧带无血管区,游离肝 脏尾状叶
游离尾状叶
游离右腰静脉全身肝素化
分离结扎右肾离结扎右肾上腺血管
供体胆道置入硬膜外导管
经腹腔动脉全身灌注冰乳酸林格液
供肝灌注良好,变为土黄生色
供体植入,缝合肝上腔静脉前壁
肝上腔静脉吻合完毕前排除气泡
门静脉袖套吻合完毕后固定
门静脉袖套吻合开放供肝迅速再灌 注
肝下腔静脉袖套吻合完毕
修整受体胆总管 (供肝胆道支撑管内 已有胆汁产生)
两袖套及胆道插管完毕
关腹时大鼠清醒抬头
术毕大鼠自行翻身 ,毛发蓬松,直立。
游离肝周韧带,显露结扎左膈下静 脉