临床微生物基础操作规程
临床微生物检验基本技术标准操作规程
临床微生物检验基本技术标准操作规程微生物检验实验室标本处理标准操作规程 (137)微生物检验实验室标本接种标准操作规程 (138)微生物检验实验室细菌鉴定操作规程 (139)微生物检验实验室不染色标本检查法标准操作规程 (140)微生物检验实验室革兰染色标准操作规程 (141)微生物检验实验室抗酸染色标准操作规程 (142)微生物检验实验室墨汁染色标准操作规程 (144)微生物检验实验室药物敏感试验标准操作规程 (145)取粪便脓血部位标本根据检验申请单要求选择平板，立即接种。
4.6 尿标本接收标本后，立即对标本进行编号、登记，将尿标本混匀，用10ul定量接种环立即接种血琼脂平板、麦康凯平板，分离细菌和菌落计数。
参考文献[1] 周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2] 叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006编写人：AAA、BBB 操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室标本接收标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0563灭菌。
用接种环伸入菌种管内挑取移种之菌落。
伸入斜面培养管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上蜿蜒划线，或直接自下而上蜿蜒划线。
将接种环垂直插入半固体培养基的中央，穿刺至培养基底部，然后穿刺线推出接种环。
4.4 穿刺培养法4.4.1 此法用于保存菌种，观察动力及某些生化反应。
4.4.2 以接种环挑取细菌培养物，插入半固体培养基的中央，穿刺至培养基底部，然后沿原穿刺线退出接种环。
4.5 液体培养基接种法用灭菌接种环挑取菌落或标本。
在试管内壁于液面交界处研磨，使细菌混匀在液体培养基中。
参考文献[1] 周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2] 叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006编写人：AAA、BBB 操作人：本室操作人员批准人：革兰阳性球菌：选择GP卡（阳性菌鉴定卡）。
微生物生化和血清学试验标准操作规程
触酶试验标准操作规程1.目的规范触酶试验标准操作规程。
2．原理具有触酶(过氧化氢酶)的细菌，能催化过氧化氢，放出新生态氧，继而形成分子氧，出现气泡。
3．试剂3％过氧化氢溶液。
4．质控金黄色葡萄球菌ATCC 25923阳性，肺炎链球菌ATCC 4961 9阴性。
5．操作步骤取3％过氧化氢溶液0．5 ml，滴加于不含血液的细菌琼脂培养物上，或取1～3 ml滴加入盐水菌悬液中。
6．结果判断培养物出现气泡者为阳性。
7．注意事项7．1细菌要求新鲜。
7．2不宜用血琼脂平板上的菌落作触酶试验，因红细胞内含有触酶，可能出现假阳性。
7．3需用已知阳性菌和阴性菌作对照。
8．临床意义在革兰阳性球菌中，链球菌触酶试验阴性，葡萄球菌及微球菌均阳性，因此可用于革兰阳性球菌的初步分群。
氧化酶试验标准操作规程1．目的l规范氧化酶试验标准操作规程。
{2.原理氧化酶（细胞色素氧化酶）是细胞色素呼吸酶系统的酶。
具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素C氧化，再由氧化型细胞色素C使对苯二胺氧化，生成有色的醌类化合物。
3 . 试剂盐酸二甲基对苯二胺(或四甲基对苯二胺)0.1g，加蒸锱水10ml，置于棕色瓶内可用一周。
冰箱保存，或分装于棕色瓶内密封。
4. 质控铜绿假单胞菌ATCC27853阳性，大肠埃希菌ATcc 25922阴性。
5.操作步骤去洁净的滤纸一小块，蘸取菌苔少许，加1滴10g／L盐酸二甲基对苯二胺溶液于菌落上，观察颜色变化。
6．结果判断立即呈粉红色并迅速转为紫红色者为阳性。
7. 注意事项7．1 试剂在空气中易氧化，故应经常更换新试剂，或配置时试剂内加入0．1％维生素c以减少自身氧化。
7. 2 不宜采用含葡萄糖培养基上的菌落(葡萄糖发酵可抑制氧化酶活性)。
7．3实验时应避开含铁的培养基等含铁物质，因本实验过程中，遇铁时会出现假阳性。
8 . 临床意义8. 1 用于奈瑟菌属﹑非发酵等细菌的鉴定。
如果肠杆菌科不进行本试验，则可能将氧化8．2所有的革兰阴性菌均应进行氧化酶试验，如果肠杆菌科不进行本试验，则可能将氧化酶阳性的嗜水气单胞菌错误地鉴定为大肠埃希杆菌或沙雷菌。
微生物操作规程
微生物操作规程
《微生物操作规程》
微生物操作是实验室中常见的操作，但由于微生物具有一定的危害性，因此对微生物操作有严格的规程。
以下是对微生物操作规程的一些要点：
1. 穿着适当的防护装备：在进行微生物操作时，实验人员应该穿着适当的防护装备，包括实验服、手套、口罩和护目镜等。
这可以有效预防微生物和其代谢产物对皮肤和呼吸系统造成危害。
2. 操作实验室的卫生消毒：在进行微生物操作前，需要对实验室进行必要的卫生消毒，确保操作环境的清洁与无菌环境。
3. 严格的操作流程：在进行微生物操作时，需要严格按照规程进行操作，避免出现操作失误导致微生物泄漏或污染的情况发生。
4. 正确处理微生物废弃物：在微生物操作结束后，实验人员需要将微生物废弃物进行正确处理，避免对环境和人体造成危害。
5. 定期进行培训和检查：对从事微生物操作的实验人员需要进行定期的培训和检查，以提高其微生物操作的安全性和准确性。
总之，微生物操作规程是保证微生物操作安全的基础，严格遵
守微生物操作规程可以有效预防微生物的危害，并保障实验人员和环境的安全。
微生物实验室操作规程与注意事项
微生物实验室操作规程与注意事项微生物实验室是进行微生物学研究和实验的场所，为了确保实验的安全性和准确性，有一系列的操作规程和注意事项需要遵守。
本文将介绍微生物实验室的操作规程和注意事项，以帮助实验人员进行安全高效的实验工作。
1. 实验室准备在进行实验前，实验室需要进行充分的准备工作。
首先，实验室内的设备和仪器应保持干净整洁，并定期进行维护和保养。
实验人员应熟悉实验室的布局和紧急设施的位置，以便在紧急情况下能够迅速采取应对措施。
此外，实验人员需要佩戴适当的实验服和个人防护装备，如手套、口罩和护目镜等，以保护自身安全。
2. 操作规程在进行微生物实验时，需要遵守一系列的操作规程。
首先，实验人员应按照实验方案进行操作，严格控制实验条件和时间。
实验过程中，应注意避免交叉污染，避免将实验物品和培养基带到其他实验台面上。
同时，实验人员应遵循无菌操作的原则，确保实验物品和培养基的无菌状态。
3. 培养基的制备和处理培养基是微生物实验的基础，制备和处理培养基需要特别注意。
首先，实验人员需要准备适当的培养基，并按照要求进行消毒和灭菌处理。
在制备培养基的过程中，应注意避免接触空气和其他细菌，以免造成污染。
另外，实验人员在处理培养基时，应使用无菌技术和器具，避免污染。
4. 微生物菌种的保存和传递微生物菌种的保存和传递是微生物实验室常见的操作。
在保存微生物菌种时，应选择适当的保存方法，如冷冻保存或冻干保存。
保存菌种的容器和标签应清洁干燥，并标明菌种的名称、保存日期和保存条件等信息。
在传递菌种时，应注意避免菌种的污染和变异，确保传递的菌种保持原有的特性。
5. 废弃物的处理微生物实验产生的废弃物需要进行正确的处理。
首先，实验人员应将废弃物分类，如将生物危险废弃物和一般废弃物分开处理。
生物危险废弃物应放入专用的容器中，并进行特殊处理，如高温灭菌或化学处理。
一般废弃物应放入指定的垃圾桶中，并定期清理和更换垃圾袋。
6. 实验室安全实验室安全是微生物实验的重要环节。
微生物检验操作规程
微生物检验操作规程《微生物检验操作规程》一、检验前准备1. 确保实验室环境清洁整洁，无菌操作台面及仪器设备；2. 熟悉操作规程，准备好所需的培养基、试剂和消毒液；3. 检查培养基和试剂的有效期，确保使用的培养基和试剂符合要求。
二、样本处理1. 将样本送检单与样本一同接收，并核对相关信息；2. 对样本进行消毒处理，避免污染实验室环境；3. 定量取样，确保取样的准确性和可靠性。
三、培养基制备1. 按照培养基说明书的要求，准备培养基，注意培养基的稀释和灭菌；2. 根据需要，将培养基注入培养皿中，准备好后放置在无菌条件下。
四、微生物接种1. 根据样本的来源，选择合适的培养基进行接种；2. 采用无菌技术，进行微生物接种，避免外部污染；3. 对接种的培养皿进行标记，清晰记录接种的菌种和数量。
五、培养条件1. 根据不同微生物的生长要求，设置适当的培养条件，包括温度、湿度、气体组成等；2. 定期观察培养皿的生长情况，记录菌落形态、数量和颜色等信息。
六、鉴定和鉴定1. 根据菌落形态、生理生化特性等进行初步鉴定；2. 利用鉴定试剂或生化指标进行进一步鉴定；3. 如有需要，可进行分子生物学方法进行鉴定。
七、结果记录和报告1. 将鉴定结果详细记录在报告中，包括鉴定的微生物种类、数量、鉴定方法和结果等；2. 及时向送检单位提交检验报告，确保检验结果准确无误。
八、实验后清洁1. 将使用过的培养皿和试剂进行正确的处理和清洁；2. 对实验室操作台面和设备进行消毒，保持实验室环境整洁。
以上是《微生物检验操作规程》的基本操作流程，每一步的操作都应严格遵守操作规范，保证微生物检验结果的准确性和可靠性。
临床微生物检验基本技术标准操作规程
临床微生物检验基本技术标准操作规程微生物检验实验室标本处理标准操作规程 (137)微生物检验实验室标本接种标准操作规程 (138)微生物检验实验室细菌鉴定操作规程 (139)微生物检验实验室不染色标本检查法标准操作规程 (140)微生物检验实验室革兰染色标准操作规程 (141)微生物检验实验室抗酸染色标准操作规程 (142)微生物检验实验室墨汁染色标准操作规程 (144)微生物检验实验室药物敏感试验标准操作规程 (145)取粪便脓血部位标本根据检验申请单要求选择平板，立即接种。
4.6 尿标本接收标本后，立即对标本进行编号、登记，将尿标本混匀，用10ul定量接种环立即接种血琼脂平板、麦康凯平板，分离细菌和菌落计数。
参考文献[1] 周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2] 叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006编写人：AAA、BBB 操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室标本接收标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0563灭菌。
用接种环伸入菌种管内挑取移种之菌落。
伸入斜面培养管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上蜿蜒划线，或直接自下而上蜿蜒划线。
将接种环垂直插入半固体培养基的中央，穿刺至培养基底部，然后穿刺线推出接种环。
4.4 穿刺培养法4.4.1 此法用于保存菌种，观察动力及某些生化反应。
4.4.2 以接种环挑取细菌培养物，插入半固体培养基的中央，穿刺至培养基底部，然后沿原穿刺线退出接种环。
4.5 液体培养基接种法用灭菌接种环挑取菌落或标本。
在试管内壁于液面交界处研磨，使细菌混匀在液体培养基中。
参考文献[1] 周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2] 叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006编写人：AAA、BBB 操作人：本室操作人员批准人：革兰阳性球菌：选择GP卡（阳性菌鉴定卡）。
临床微生物SOP革兰染色标准操作规程
1.目的规范革兰染色标准操作规程。
2.原理细菌样本先经紫色草酸盐结晶复合物染色，之后用Lugol-PVP煤染剂处理以促进染料与革兰阳性菌的结合。
经酒精-丙酮的脱色作用，革兰染色阴性菌中的结晶紫会被洗脱。
番红精则是作为复染剂：革兰染色阴性的细菌呈粉红色，而革兰染色阳性的细菌呈现紫色。
3.试剂3.1 结晶紫草酸盐溶液结晶紫2％；酒精20％；草酸铵0.8％。
3.2 稳定Lugol-PVP复合物碘1.3％；碘化钾2％；PVP（聚乙烯呲咯烷酮）10％。
3.3 脱色剂 95％酒精50％；丙酮50％。
3,4 番红精溶液番红精0.25％；95％酒精10％。
4. 质控4．1 采用大肠埃希菌ATCC25922质控标准菌株，每周一次，有室内质控记录。
4.2 采用金黄色葡萄球菌ATCC25923质控标准菌株，每周一次，：有室内质控记录。
5．操作步骤5.1 初染第一液初染剂（结晶紫）染色一分钟，水洗。
5.2 媒染第二液媒染剂（碘液）染色一分钟，水洗。
5.3 脱色第三液脱色剂（95％酒精）用到无紫色脱落为止，水洗。
5.4 复染第四液复染剂（石炭酸复红或沙黄）染色30秒，水洗。
自然干燥后镜检。
6．结果判断革兰阳性菌呈紫色，革兰阳性菌呈红色。
7. 注意事项7.1 染色的结果常受操作者技术影响，尤其是容易过度脱色，往往阳性染成阴性。
7.2 在同一载玻片上，需用已知金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌作阳性及阴性对照。
7.3 染色关键在于涂片和脱色，涂片不宜过厚，固定不宜过热，脱色不宜过度。
7.4 菌龄为18～24 小时为佳。
8. 临床意义8.1 鉴别细菌可将细菌分为阳性和阴性两大类，因而可以初步识别细菌，缩小范围，有利于进一步鉴定。
8.2 选择药物革兰阳性菌与阴性菌的细胞壁结构有很大差别，因而抗菌药物有差异。
参考文献[1] 周庭银编著．临床微生物学诊断与图解．第二版．上海：上海科学技术出版社，2007[2] 叶应妩，王毓三，申子瑜主编．全国临床检验操作规程．第三版．南京：东南大学出版社，2006。
临床微生物及寄生虫检验操作规程
临床微生物及寄生虫检验操作规程细菌涂片检查涂片不染色显微镜检查1.标本要求：各种标本或细菌培养物。
2.试验方法：直接涂片法、压滴法或悬滴法。
3.操作步骤：见《全国临床检验操作规程》（第二版）。
4.结果观察：观察标本中有无细菌或真菌，如有再观察细菌的形态及运动情况，报告所见。
5.注意事项：注意微生物操作安全；标本量不宜太多，以免影响观察；涂片制作后立即观察，涂片干涸后应重新制作涂片。
涂片革兰染色显微镜检查1.标本要求：各种标本或细菌培养物。
2.试验方法：常规法、快速法。
3.操作步骤：见《全国临床检验操作规程》（第二版）。
结果观察：观察染色涂片有无细菌或真菌，如有则进 4.一步观察细菌的染色性、形态、特殊结构及排列方式。
涂片中如有细胞，则观察细菌菌体在细胞内或细胞外。
报告所见。
5.注意事项：涂片厚薄适宜均匀；固定及染色不能超时，否则染色变性；只能报告所见细菌的染色性、形态、特殊结构及排列方式，不能直接报告细菌菌种如报告涂片见淋病奈瑟菌、白喉棒状杆菌。
涂片抗酸染色显微镜检查1.标本要求：各种标本或细菌培养物。
2.试验方法：萋尼染色法、快速染色法或荧光（金胺－罗丹）染色法。
3.操作方法：见《全国临床检验操作规程》（第二版）。
4.结果观察：抗酸菌在萋尼染色法中呈红色，在金胺－罗丹染色法中呈荧光金黄色。
5.观察染色涂片有无抗酸杆菌，如有则进一步观察细菌数量大致情况。
涂片中如有细胞，则观察菌体在细胞内或细胞外。
报告所见。
．6.注意事项：涂片厚薄适宜均匀；固定及染色不能超时，否则染色变性；只能报告有无抗酸杆菌，如有，可报告其数量大致情况及是否在细胞内，不能直接报告见分枝杆菌或结核分枝杆菌，因奴卡菌属、放线菌属细菌也可为抗酸阳性菌。
涂片墨汁染色显微镜检查1.标本要求：各种标本或细菌培养物。
2.试验方法：直接染色法。
3.操作步骤：见《全国临床检验操作规程》（第二版）。
4.结果观察：涂片背景为黑色，新型隐球菌或细菌荚膜在染色中呈折光环形菌体结构。
微生物实验室操作规程完整
微生物实验室操作规程完整专业资料分享.微生物实验室操作规程【SOP】细菌室工作守则（微生物室SOP之一）细菌室消毒隔离措施（微生物室SOP之二）微生物实验室安全与防护（微生物室SOP之三）细菌室内质控制度（微生物室SOP之四）细菌室操作技术规范（微生物室SOP之五）无菌间规章制度（微生物室SOP之六）菌（毒种）管理办法（微生物室SOP之七）细菌室仪器维护保养及质控措施（微生物室SOP之八）•标准菌株保存及使用（微生物室SOP之九）细菌室内务管理规定（微生物室SOP之十）标本采集及保存要求（微生物室SOP之十一）室内质控失控处理程序（微生物室SOP之十二）标本拒收标准（微生物室SOP之十三）温度失控处理措施（微生物室SOP之十四）超净工作台作业指导（微生物室SOP之十五）标本的接种和移种法（微生物室SOP之十六）WORD完美格式.专业资料分享.细菌室工作守则微生物室SOP之一）1.每日工作前用紫外线映照实验室半小时以上。
2.入室前应穿工作服，并做好实验前的各项准备工作。
3.实验室内应保持肃静，不准吸烟、吃东西及用手触摸面部。
尽量减少室内活动，以免引起风动，无关人员禁入。
4.非必要物品禁止带入实验室，必要资料和书籍带入后，应远离操作台。
5.做好标本的登记、编号及实验记录。
未发出报告前，请勿丢弃标本。
6.标本处理及各项实验应在操纵间进行，接种环用完后应立即火焰灭菌，沾菌吸管、玻片等用后应浸泡在消毒液内。
7.实验时手部污染，应立即用过氧乙酸消毒或浸于3%来XXX溶液中5-10分，再用肥皂洗手并冲洗干净；如误入口内，应立即吐出，并用1:1000高锰酸钾溶液或3%双氧水漱口，根据实际情况服用有关药物。
8.实验过程中，如污染了实验台或地面，使用3%来XXX 覆盖其上半小时，然后清洗；如污染工作服，应立即脱下，高压灭菌。
9.若出现着火情况，应沉着处理，切勿XXX，立即关闭电闸，积极灭火。
易燃物品（如酒精、二甲苯、乙醚和丙酮等）必需远离火源，妥善保存。
微生物操作规程
微生物操作规程微生物操作规程一、概述微生物操作是指在实验室中对微生物进行培养、传代、操作和实验的一系列操作。
为了保证实验的安全性和可靠性，制定了本规程，并制定了相应的操作流程。
二、操作环境要求1. 实验室应具备相应的防护设施，包括生物安全柜、洗消设施等。
2. 实验室应保持干燥、整洁，操作台面应每天进行清洁和消毒。
3. 实验室内的垃圾应按规定进行分类处理，有害垃圾应特别加以处理。
三、人员要求1. 参与微生物操作的人员应接受相关安全培训，并具备相应的专业知识和实践经验。
2. 必须定期进行体检，并定期接受培训。
四、实验室操作规程1. 准备工作(1) 操作前要认真阅读操作手册，并了解实验的目的、方法和注意事项。
(2) 要确认所需材料和试剂的准备情况，检查设备和实验仪器是否正常工作。
(3) 在进行实验前，请将实验台面和实验器皿等进行清洁和消毒处理。
(4) 穿戴好实验用衣物，并佩戴实验手套和口罩等防护用品。
2. 微生物培养液的制备(1) 按照实验所需的培养基成分，精确称取所需试剂，并按照一定的配方和比例进行制备。
(2) 慎重选择培养基的种类和配方，避免选择不合适的培养基，导致微生物培养失败。
(3) 在配制培养基时应注意无菌操作，以避免杂菌污染。
3. 微生物培养操作(1) 每次操作前，都要准备清洁好的试验器皿，使用高温高压灭菌器进行无菌处理。
(2) 根据实验需要，将所需的微生物转接到培养基中，并进行相应的操作和培养条件的控制。
(3) 培养中的微生物液体要定期观察生长情况，并记录相关的数据和观察结果。
4. 微生物实验操作(1) 实验操作过程中，要按照实验的步骤和方法进行操作，尽量避免操作失误或杂菌污染。
(2) 实验操作完成后，要及时清洗和消毒实验器材和实验台面。
尽量避免微生物在实验室内扩散和传播。
五、安全措施1. 操作人员应严格按照规定的操作步骤进行操作，避免操作中的误操作和疏忽。
2. 操作人员应佩戴好实验手套、口罩等防护用具，避免皮肤接触和吸入微生物污染物。
临床微生物SOP-粪便涂片标准操作规程
1．目的规范粪便标本涂片标准操作规程。
2．适用范围粪便标本。
3．检验步骤3.1 革兰染色：取新鲜送检粪便的水样、脓血或黏液样部分涂片，经自然干燥或烘片机烘干，进行革兰染色。
3.2 悬滴法或压滴法检查：取患者粪便，用无菌生理盐水制成悬液标本或压滴标本，直接用高倍镜检查细菌、真菌或寄生虫的形态或运动状况。
3.3 粪便球杆菌比例：取水样便或粘液便直接滴在洁净载玻片一端，以30°~40°角匀速推片，厚薄适宜，自然干燥后在酒精灯火焰上通过3次固定，进行革兰染色。
3.4 镜检与结果报告3.4.1 霍乱弧菌悬滴法检查：悬滴标本或压滴标本用高倍镜观察细菌，镜下呈穿梭状或鱼群状极活泼地运动，报告为“找到穿梭状或鱼群状活泼菌，疑似霍乱弧菌”。
3.4.2 霍乱弧菌涂片检查：油镜可见较小呈直杆状、弧状、香蕉状或逗点状呈鱼群状排列的阴性杆菌，报告为“找到革兰阴性弧形杆菌，疑似霍乱弧菌”。
3.4.3 球菌与杆菌的比例：涂片革兰染色后，在油镜下观察100个菌分别计算球菌与杆菌数量以求得其比例，报告“球菌/杆菌=X：X”。
3.5 真菌涂片检查：参见《真菌涂片标准操作规程》、《墨汁染色标准操作规程》。
3.6 抗酸染色：参见《抗酸染色标准操作规程》。
3.7 质控：每张涂片均做革兰阳性和阴性菌对照。
4．注意事项4.1 涂片不要太厚，以免影响染色效果。
4.2 正常人粪便球杆菌比例范围一般约为1：10，不同年龄其比例不一样。
长期使用广谱抗生素、免疫抑制剂及慢性消耗性疾病患者可发生肠道菌群失调，引起革兰阴性杆菌数量严重减少甚至消失，而葡萄球菌或真菌等明显增多，粪便中球菌/杆菌比值变大。
4.3 直接涂片镜检可见较小的直杆状、弧状、香蕉状或逗点状呈鱼群状排列的阴性杆菌，报告为“找到革兰阴性弧形杆菌，疑似霍乱弧菌”，并立即报告临床及医院行政管理部门，做好详细记录。
参考文献[1] 中国合格评定国家认可委员会．CNAS-GL42医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的应用说明．2014.[2] 周庭银编著．临床微生物学诊断与图解，第3版，上海：上海科学技术出版社,2012[3] Versalovic J, Carroll KC, Funke G, et al. Manual of Clinical Microbiology. 10th ed. Washington: ASM Press, 2011.。
微生物实验操作规程
微生物实验操作规程
1. 实验目的
本操作规程旨在确保微生物实验的安全进行，并保证实验结果的准确性和可靠性。
2. 实验器材准备
- 高温灭菌器
- 密封培养皿
- 不锈钢接种环
- 培养基
- 显微镜
- 实验台
3. 实验步骤
3.1. 准备工作
1. 确保实验台面干净整洁，并消毒实验器材。
2. 检查培养基是否符合要求，如有需要，根据实验要求进行调配。
3.2. 培养菌种
1. 使用无菌的不锈钢接种环在培养基表面划线，接种菌种。
避
免污染其他区域。
2. 密封培养皿，标记上菌种信息和日期，放入高温灭菌器中进
行培养。
3.3. 现场观察
1. 从高温灭菌器取出培养皿，置于实验台上。
2. 使用显微镜观察菌落的形态和生长情况。
记录实验结果。
3.4. 数据处理
1. 将观察到的数据整理成表格或图表。
2. 分析数据并得出结论。
4. 实验注意事项
- 操作过程中要佩戴实验手套，避免污染。
- 实验器材要经过高温灭菌处理，确保无菌状态。
- 实验完毕后及时清理实验台面和器材，保持实验环境的卫生。
- 严格遵守实验操作规程，避免操作失误和意外发生。
5. 实验结果分析
根据实验结果分析，我们可以得出结论并进一步探索微生物的特性和应用领域。
以上为微生物实验操作规程，详细描述了实验的步骤和注意事项，希望能对实验操作提供指导和帮助。
----------
> 注：以上内容仅供参考，实际操作请根据实验要求和实验室安全规定进行。
微生物实验安全操作规程
微生物实验安全操作规程随着微生物学研究的深入，微生物实验在科研、医学和工业等领域中扮演着重要的角色。
然而，由于微生物具有高度可变性和传染性，操作不当可能导致实验室事故和人员伤害。
为了确保微生物实验的安全性，制定并遵守相应的操作规程是至关重要的。
本文将详细介绍微生物实验的安全操作规程，以保护实验室工作者的安全和生物安全。
1. 实验室准备在进行微生物实验之前，必须进行充分的实验室准备工作。
首先，确保实验室的环境干净、整洁，并且操作台面、设备和材料都应进行必要的消毒和清洗。
实验室工作者应该穿戴符合标准的实验室防护服，包括实验室外套、手套、护目镜和口罩。
此外，实验室必须配备充足的消毒液、生物安全柜和紫外线灯等设备，以确保实验室环境的无菌和清洁。
2. 微生物保存与传播微生物实验室必须制定合理的微生物保存和传播措施。
首先，所有微生物都必须妥善保存并有明确的标识，以防止误用和混淆。
保存微生物的容器应密封严实，并进行适当的标识和分类。
在传播微生物之前，必须进行适当的消毒和净化处理，以确保微生物不会对环境和其他生物产生危害。
3. 个人防护措施在进行微生物实验时，个人的防护措施至关重要。
实验室工作者必须佩戴符合标准的个人防护装备，包括实验室外套、手套、护目镜和口罩。
实验室外套必须完全覆盖身体，并具有防水和易清洗的特性。
手套必须是无菌的，并定期更换以防止细菌传播。
护目镜和口罩可以有效地防止微生物通过眼睛和口腔进入人体。
另外，实验室工作者在进行实验时应避免接触面部和其他裸露的皮肤部位，以减少微生物的传播风险。
4. 垃圾和污染物处理在微生物实验中产生的垃圾和污染物必须得到妥善处理，以防止微生物的传播和污染。
实验室工作者必须将使用过的培养基、实验器具和废液等放置在防漏盒或密封容器中，并定期进行消毒处理。
实验室废弃物必须按照规定进行分类和处理，以减少对环境和人体的危害。
5. 实验室清洁和消毒实验室的清洁和消毒对于微生物实验的安全至关重要。
微生物室操作规程
微生物室操作规程
《微生物室操作规程》
一、微生物室操作规程的目的
微生物室是进行微生物实验的重要场所，为了保障实验室人员的安全和实验结果的准确性，制定并严格执行微生物室操作规程是必不可少的。
二、微生物室操作规程的适用范围
本规程适用于所有进入微生物室进行操作的人员，包括实验室技术人员、研究人员以及实习生等。
三、微生物室操作规程的要求
1. 进入微生物室前，必须穿戴好实验服、手套、口罩等个人防护用具，并进行必要的消毒处理。
2. 操作前，必须对所需使用的实验器材进行必要的消毒或灭菌处理。
3. 在进行微生物实验时，必须遵守无菌操作的原则，避免污染。
4. 实验结束后，必须对操作台面、实验器材等进行必要的清洁和消毒处理。
5. 微生物室内严禁食品饮料，严禁随意乱丢杂物。
6. 实验室人员必须严格遵守微生物废弃物的处理要求，确保微生物废弃物不对外泄露。
四、微生物室操作规程的实施
1. 实验室负责人应该对微生物室操作规程进行充分的宣传和培训，并确保所有操作人员能够严格遵守规程。
2. 实验室负责人应定期进行微生物室操作规程的检查和复核，发现问题及时进行整改。
3. 实验室负责人应建立微生物室操作规程的记录和档案，并保留一定的时限。
五、微生物室操作规程的违反处理
对于违反微生物室操作规程的人员，实验室负责人应及时进行处罚和教育，严肃处理违规行为，以确保实验室的安全和秩序。
六、微生物室操作规程的总结
微生物室操作规程的制定和执行不仅是一项管理工作，更是对实验室安全和实验结果准确性的保障。
只有所有操作人员能够严格遵守规程，才能确保微生物实验的顺利进行和实验结果的准确性。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
#1
•用酒精消毒伤口 周围皮肤 •最好的标本是吸取物和组织 •最差的标本是拭子
#2
•接种血平皿和麦康凯平皿 •如果是吸取物或组织，进行 革兰染色，将重要结果通知 临床医生
中孵育48小 时
#3
#5
当检出3种或更多病原菌时，报告“混合菌丛”并 描述性列出假单胞菌，金葡菌，变形杆菌，肠道 革兰阴性杆菌等。
主要病原菌：淋病奈瑟菌，滴虫，酵母菌&女性的细菌性阴道病综合征，孕妇携带的B群β溶血链球菌
A. 女性的子宫颈或肛拭子
B. 男性的尿道拭子
#1
血平皿& Thayer-Martin平皿
# 1 接种Thayer-Martin培养基&革兰染色
T-M培养基上的淋球菌
血平皿上的酵母菌
#2
CO2中孵育48小时
CO2孵育72h
对于皮肤癣菌：接种 Mycobiotic和DTM培养基
组织，皮肤刮取物或指甲：将 一小块完整的标本插入琼脂表 面
#2
拭子仅用于酵母菌的分离 －接种血平皿和沙氏平皿
#4
#6
接种后7天内每日观察平皿 ，之后每周两次
光滑菌落＝酵母菌 毛状菌落＝丝状真菌
用通气胶带粘贴平皿的侧面 或两边
#5
将标本研于一滴 10%KOH，加盖玻片后 镜检真菌
杆菌肽
#9
不要报告
咽炎中非致病菌：
• • • • • • •
复方 磺胺
金黄色葡萄球菌 肺炎链球菌 流感嗜血杆菌 卡他莫拉菌
α溶血链球菌 所有革兰阴性杆菌 所有酵母菌
#7
PYR阳性可确证 A群链球菌
#6
β溶血菌落， > 0.5 mm, 对复方磺 胺耐药，对杆菌肽敏感＝A群链球 菌（触酶阴性）
© Ellen Jo Baron 2007; Use with proper attribution
临床微生物基础操作规程
Ellen Jo Baron 教授
美国斯坦福大学临床微生物室主任 "Manual of Clincal Microbiology"细菌学卷主编 ASM"Blood Culture"联合主编
血培养 ................1 脑脊液培养 .............2 粪便培养 ..............3
如果运输时间超过 2 小时，使用 Cary-Blair 培养基（培养沙门菌 & 志 甘油缓冲的盐水最适于霍乱弧菌 贺菌）
如果运输时间超过 2 小时，使用含碳 可 在 床 旁 直 接 接 种 于 Thayer的 Amies 或 Stuart’s 培养基 Martin 培养基
如果运输时间超过 8 小时，使用 Amies 或 Stuart’s 培养基
药敏试验 ..............11
血培养
主要病原菌：沙门菌、布氏杆菌、其他革兰阴性杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌 以下菌应视为非病原菌(除非>1次血培养分离出)：芽孢杆菌属、凝固酶阴性葡萄球菌、草绿色链球菌、棒状革兰阳性杆菌
#3 #2 #1
从两个独立的皮肤位点采血，每瓶 采集10ml
7
Urine Culture尿培养
主要病原菌：大肠埃希菌，变形杆菌，克雷伯菌，其他革兰阴性杆菌，肠球菌，腐 生葡萄球菌，纯的金黄色葡萄球菌
a
b
#2 接种血平皿和麦康凯平
皿
a
b
0.001ml接种环
#3
#1 收集中段尿
注意:
GP C GPC
空气孵育24小时
#6
病人 无症状
有症状但不需 卧床 有症状，性生 活活跃的女性
男性
所有
所有 所有
•革兰阴性杆菌在血平 皿和麦 康凯平皿上均 生长良好 •革兰阳性球菌仅在血 平皿上生长良好
GNR
50,000 cfu/ml
75,000 cfu/ml
尿培养的评估标准
标本类型 清洁留取或留置管留 取 清洁留取
清洁留取
清洁留取
从导尿管中直接留取
外科或膀胱吸取 有争议
#5
若≤ 2 种菌生长，对 每种菌进行鉴定和药 敏试验；
革兰阴性双球菌或球杆 菌→接种巧克力平皿和 血平皿
例如：肺炎克雷伯菌 © Ellen Jo Baron 2007; Use with proper attribution
1
脑脊液（CSF)培养
主要病原菌：B群β溶血链球菌（新生儿），流感嗜血杆菌（2月-2岁儿童）， 肺炎链球菌，脑膜炎奈瑟氏菌
#1
医生通过无菌皮肤 穿刺采集脑脊液 （腰椎穿刺）于无 菌管中。第二管和 第三管用于微生物 学检测。
18小时后传进行次代培养 当培养瓶显示细菌生长时进行 革兰染色和传代培养
35°C 空气中孵育5天 每天检查浊度并翻转培养瓶
革兰阳性球菌→接种血 平皿＋奥普托欣试验
#6
对重要病原菌 进行鉴定 和药敏试验 例如：肺炎链球菌 革兰阴性杆菌→接种血平皿和 麦康凯平皿
#4
CO2中孵育 72h
#5
将重要的革 兰染色结果 尽快通知临 床医生
& SXT 纸片
#2
#3
接种环
#4
在第一区贴相邻的两纸片：复 方磺胺和杆菌肽
将拭子擦拭血平皿（羊血 或马血）的1/5区域
分区画线3或4区
#5
在烛缸中37° C孵育过夜并检查 平板；若阴性，继续孵育 过夜 总孵育时间＝48小时
#8
报告结果：
1+ to 4+ A群β溶血链球菌 或 1+ to 4+ 非A群β溶血链球菌 或 未检出β溶血链球菌
.如果为组织，在无菌的小盘上将 #2 其捣碎，然后在含硫肉汤中将其 研磨成匀浆
#1
•用酒精消毒皮肤后或者在手术时 采集标本 •将抽吸物或组织置于厌氧转运小 玻璃瓶中 •拭子不能用于厌氧培养 •将体液置于血培养瓶和ACD管中
#3
•将研磨后的组织接种于BAP, Mac, Bru, BBE, CM肉汤, & LKV (可选择) •革兰染色&将重要结果报告 给医生
若>2种菌生长，报 告“混合菌群”
100,000 cfu/ml
有意义的病原菌 CFU/ml 100,000
1-2 种病原菌。>2 种视为污染
100 纯培养的肠杆菌科菌
1000 潜在病原菌
100 个所有种类的潜在病原菌
任何数量（肉汤增菌，厌氧菌） 任何酵母菌
#4
菌落计数
© Ellen Jo Baron 2007; Use with proper attribution
非病原菌：酵母菌，草绿色链球菌，凝固酶阴性葡萄球菌
病人需用水清洁口腔， 深咳肺部痰， 不要唾液
肺炎链球菌
#1
• 进行革兰染色以评价标本是否适于接 种。 • 向临床医生尽快报告重要的革兰染色 结果
#2
拒绝：大量 扁平 上皮细胞
好：很少扁平 上皮细胞
奥普托欣纸片
胆汁溶菌＋
#3
接种巧克力平皿，血 平皿和麦康凯平皿
#1
血平板要优于麦康 凯，避免不同的细菌 混在一起
#2
将菌落混匀于 5ml的生理盐水 中制成淡的、均 一的悬浊液
Draw lines on card
© Ellen Jo Baron 2008; Use with proper attribution
9
抽吸物和组织标本的厌氧培养
主要致病菌: 金黄色葡萄球菌、化脓链球菌、其他ß-溶血链球菌、铜绿假单胞菌、其他革兰阴性杆 菌、 梭状芽孢杆菌、 梭菌属、拟杆菌属、其他厌氧菌 非致病菌: 凝固酶阴性葡萄球菌、少量棒状革兰阳性杆菌
Campy琼脂
革兰染色显示弯曲或螺旋形 的杆菌
弯曲杆菌属
氧化酶阳性、湿润 的米色菌落
#5
血平皿上氧化酶阳性的革兰阴性 杆菌需进一步鉴定
将菌落接种TCBS或含0-6％盐浓 度的肉汤中。
© Ellen Jo Baron 2007; Use with proper attribution
3
生殖道标本培养
金黄色葡萄球菌
奥普托欣＋
#5
对重要病原菌进行 鉴定&药敏试验
肺炎克雷伯菌
#4
CO2中孵育 48小时
流感嗜血杆菌
© Ellen Jo Baron 2007; Use with proper attrib ution
6
咽部标本培养
杆菌肽
#1
拭子
拭子擦取咽部和 扁桃体。不要碰 触舌头和面颊。
主要病原菌：A群β溶血链球菌。 选择性报告：溶血隐秘杆菌
上下吸取 10次以上 混匀沉淀
2
© Ellen Jo Baron 2007; Use with proper attribution
粪便培养
重要的病原菌：沙门菌、志贺菌、弯曲杆菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌、产毒性大肠杆菌&难辨梭菌（在 常规的实验室可能检测不出）
#3
#1
粪便标本采集后30 分钟内进行接种或 置于cary-blair运输 培养基中
接种血平皿，麦康凯平皿，Hektoen 或DCA，若怀疑弧菌则还接种TCBS 平皿。37 ° C 空气孵育48h
#2
选择血性或脓性的部 分进行接种
#4
麦康凯、HEK或DCA平皿上不利用乳 糖的革兰阴性杆菌需进一步鉴定。
#6
将菌落接种至Campy琼脂 或使用滤纸法。微需氧环 境下37-42° C 孵育 72 h
最少1ml，最佳>5ml
#2
1500×g离心15分钟 （可能的话）
#7
将一大滴沉淀 滴在玻片上。 不要涂开。 自然干燥并进行革兰染色。 如见到大量多形核白细胞则 强烈支持感染