细胞工程复习题答案

细胞工程复习大纲（2013）一试卷题目类型：名词解释（5个）单项选择（10个）1.5简答题（3题）6-8分问答题（2题）13-15分1.细胞工程概念及其研究内容1.1细胞工程概念：是应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传形状，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。

1.2研究内容:植物细胞培养、动物细胞培养、细胞融合技术、细胞拆合技术、细胞重组技术；2.何为植物组织培养？其意义有哪些？2.1植物组织培养是指从植物体中取出组织、器官，然后模拟机体的生理条件，在体外进行培养，使之生存、形成组织或长成植株的技术过程。

2.2植物细胞培养的意义不需要掌握。

3.在植物组织培养中，培养基一般包含哪些成分？3.1培养基的成分主要可以分水、无机盐、有机物、天然复合物、培养体的支持材料等五大类：3.2水是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。

它是生命活动过程中不可缺少的物质。

3.3无机盐：大量元素N、P、K、Mg、Ca、微量元素：Fe、B，Mn，Zn，Cu，Mo，Co3.4有机物：为不同的培养目的往往要加入一些有机物以利于快速生长。

3.5天然复合物：其成分比较复杂，大多含氨基酸、激素、酶等一些复杂化合物。

3.6激素：生长素与细胞分裂素的比例决定着发育的方向，生长素/细胞分裂素：高，有利于根的形成和愈伤组织的形成；适中，有利于根芽的分化；低，有利于芽的形成。

4.什么是细胞决定？植物细胞全能性？植物细胞分化，再分化？4.1决定性在能识别一个细胞的分化以前，就有了一个预先保证细胞怎样变化的时期，这个阶段称为细胞决定（cell determination）4.2植物体的任何一个细胞都具有生长分化成为一个完整植株的能力，称为植物的全能性。

4.3细胞分化（cell differentiation）是一种类型的细胞在形态结构生理功能和生化特性等方面稳定地转变成另一类型细胞的过程。

4.4再分化（redifferentiation):经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下可有转变为各种不同细胞类型的能力。

5.愈伤组织的概念，其形成分为哪几个期？5.1 愈伤组织：脱分化后的细胞经过细胞分裂产生无组织结构、无明显极性的松散的细胞团，称之为愈伤组织。

5.2外植体中已分化的活细胞，在外源激素的诱导下通过脱分化后形成愈伤组织，这一过程被大致划分为三个时期：诱导期（细胞分裂的准备期）、分裂期（细胞从开始分裂到持续分裂的时期）、形成期（从愈伤组织到器官发生）6原生质体培养有哪些方法？6.1 植物原生质体的培养可以分为液体静止培养、固体平板培养、双层平板培养和固定化原生质体培养等7单细胞培养有哪些技术？并比较其优缺点7.1看护培养：看护培养是指采用一块活跃生长的愈伤组织块来看护单细胞，使单细胞持续分裂和增殖，而获得由单细胞形成的细胞系的培养方法，效果较好而被广泛采用。

不足之处是不能在显微镜下直接观察细胞的生长过程。

7.2微室培养：微室培养是将接种有单细胞的少量培养基，置于微室中培养，使单细胞生长繁殖的培养方法。

微室培养所使用的培养基用量少，可以通过显微镜观察单个细胞的生长、分裂、分化、发育情况。

有利于对细胞特性和单个细胞生长发育的全过程进行跟踪研究。

7.3平板培养：是指将单细胞接种于固体培养基中，在培养皿中进行培养，使细胞生长繁殖，获得由单细胞形成的细胞系的培养方法。

用于培养的单细胞悬浮液必需进行细胞密度的调整。

操作简便，由单细胞生成的细胞团容易观察和挑选，培养效果较好7.4条件培养：是将单细胞接种于条件培养基中进行培养，使单细胞生长繁殖，而获得由单细胞形成的细胞系的培养方法，是在看护培养和平板培养的基础上发展起来的单细胞培养方法。

条件培养基是指含有植物细胞培养上清液或静止细胞的培养基。

8固定化植物细胞的特点？8.1 固定化植物细胞具有稳定性好、产物容易分离、利于连续化生产等特点，但是只适用于可以分泌到细胞外的次级代谢物的生产。

9体外培养的动物细胞有哪些类型？各有何特点？1 贴附型：生长必须有给以贴附的支持物表面, 依靠自身分泌的或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长、增殖。

成纤维细胞、上皮型细胞、游走细胞型、多型细胞型2 悬浮型：生长不依赖支持物表面, 可在培养液中呈悬浮状态生长。

3 兼性贴壁细胞：不严格贴附生长。

10动物细胞贴壁培养经历哪几个过程，特点如何？10.1细胞传一代后，一般经过以下三个阶段：潜伏期（Latent Phase）；细胞接种培养后，先经过一个在培养液中呈悬浮状态的悬浮期。

此时细胞胞质回缩，胞体呈圆球形。

指数增生期（Logarithmic growth Phase）；这是细胞增殖最旺盛的阶段，细胞分裂相增多。

停滞期（Stagnate Phase）。

细胞数量达饱和密度后，细胞遂停止增殖，进入停滞期。

此时细胞数量不再增加，故也称平台期（Plateau）。

11动物细胞培养过程的生长曲线？各个时期有何特色？动物细胞培养用液都有哪些？什么是原代培养？11.1分为：原代培养期、传代期和衰退期。

11.2原代培养期：此期细胞呈活跃的移动，可见细胞分裂，但不旺盛。

初代培养细胞独立生存性差，多呈二倍体核型。

与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性传代培养期：在全生命期中此期的持续时间最长。

在培养条件较好情况下，细胞增殖旺盛，并能维持二倍体核型，为保持二倍体细胞性质，细胞应在初代培养期或传代后早期冻存衰退期：此期细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖；细胞形态轮廓增强，最后衰退凋亡。

11.3水、平衡盐溶液、pH调节液、消化液、抗生素溶液、培养用液11.4原代培养：是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。

较为严格地说是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质，通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养14何为动物细胞传代培养？贴壁型和悬浮型细胞有何不同？14.1原代培养成功后，细胞分裂增殖扩展成片，占满器皿表面，此时需要对其分离重新培养，即开始传代培养。

14.2贴壁型：生长必须有给以贴附的支持物表面, 依靠自身分泌的或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长、增殖。

在传代培养时可以采用消化法,用胰蛋白酶进行消化，使细胞从培养瓶壁上脱落，进行传代培养；悬浮型：生长不依赖支持物表面, 可在培养液中呈悬浮状态生长。

进行传代培养时不能采用消化法，而是需要用离心法，500转/分钟,离心3-5分钟,进行细胞分离,传代培养.15细胞株，细胞系的定义是什么？如何建立？何为单克隆抗体？制备单克隆抗体的一般步骤。

15.1 初代培养物开始第一次传代培养后的细胞，即称之为细胞系。

细胞株从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群，称细胞株。

15.2单克隆抗体: 只针对某一抗原决定簇的抗体分子称为单克隆抗体15.3 单克隆抗体的一般制备步骤:首先将目标动物采用适合的免疫方法进行免疫,使其接受抗原刺激，分泌针对该抗原的特异性抗体B淋巴细胞,它本身是一种终末分化细胞，通常不再进行细胞分裂，存活一段时间后便会死亡——短命细胞。

第二步选择具有恶性增殖的转化细胞骨髓瘤细胞，该细胞只要营养条件适合可永远分裂和存活——长命细胞.第三步使B淋巴细胞和骨髓瘤细胞采用病毒介导或者PEG介导等方法使两个细胞进行融合;第四步细胞融合后采用HAT培养基进行筛选,由于B淋巴细胞本身是一个短命细胞,所以该细胞在培养几代后会自动死亡,而骨髓瘤细胞在H、T存在条件下无法生存，所以经过HAT 培养基的培养筛选，最后只有融合细胞才能正常生长。

最后再对制备的单克隆抗体进行检测。

17病毒如何促进细胞融合？以仙台病毒为例，简述其步骤。

仙台病毒（HVJ）是最早用于动物细胞融合的融合剂，毒力低、对人的危害小、易被紫外线灭活。

形态为圆球形，由RNA核心、衣壳和囊膜组成；仙台病毒的囊膜上有许多刺突，每个刺突都是一个单价血细胞凝集素，仙台病毒能够凝集血细胞和其他细胞的能力与刺突的存在是分不开的刺突具有唾液酸苷酶的活性，能水解寡糖链上的唾液酸残基，因而可以依赖刺突的唾液酸苷酶活性攻击细胞表面基本过程：①足够数量的病毒颗粒附着在细胞膜上起搭桥作用，使细胞聚集在一起；②黏结部位质膜被破坏，形成通道，细胞质流通并融合，病毒也随之进入细胞质；③两个细胞合并变圆，形成融合细胞；④恢复贴壁培养；⑤选择性培养基中筛选杂交细胞。

18简述原生质体的融合基本过程.（1）化学融合：利用化学融合剂，促使原生质体互相靠近、粘连融合的方法。

可采用PEG融合，采用50%的PEG ，在PH6.0，温度37度条件下进行融合，或者可以采用（2）电融合：利用改变电场来诱导原生质体彼此连接成串，再施以瞬间强脉冲使质膜发生可逆性电击穿，促使原生质体电融合的方法。

融合效率高（60%）、对原生质体伤害较小、对融合细胞数易于控制。

在直流电脉冲的诱导下，细胞膜表面的氧化还原电位发生改变，使异种细胞粘合并发生质膜瞬间破裂，进而质膜开始连接，直到闭和成完整的膜，形成融合体。

19何为细胞拆合？有哪些方法？简述其原理19.1 细胞拆合：从活细胞中分离出细胞器及其组分，然后在体外一定条件下将不同细胞来源的细胞器及其组分进行重组，使其重新装配成为具有生物活性的细胞或细胞器的一种实验技术。

19.2（一）物理拆合法紫外线或激光将核破坏，再用微玻璃针或微吸管将其他细胞核吸入。

特点：费时耗力，能产生去核细胞只是细胞的残片而不是含有全部胞质成分的去核细胞，胞质内细胞器以及代谢物的分布会有很大差别，给解释实验结果带来困难。

⏹（二）化学拆合法：1967年Carter意外发现一种霉菌培养物的滤液中分离到代谢产物能诱发小鼠L细胞的排核作用，并具有一些其他生物学效应，定名为细胞松弛素。

⏹（1）干扰细胞质的分裂，引起细胞表面形状的改变和排出核；⏹（2）抑制细胞的运动；⏹（3）阻碍细胞的吞噬或胞饮作用；⏹（4）降低细胞的黏着程度；⏹（5）阻止神经细胞轴突的生长；⏹（6）影响葡萄糖和核苷酸的摄取；⏹（7）影响甲状腺素的分泌和生长激素的释放以及影响细胞质的流动等。

⏹不同细胞对CB敏感性不同，排核作用的快慢和比率取决于所用CB剂量的大小以及处理时间的长短。

20胞质体如何制备？简述离心脱核法操作步骤、制备胞质体的方法有玻璃盖片法、塑料片法、载玻片法、离心管法、培养皿法、培养瓶法以及悬液法等。

凡是用作细胞培养的器皿几乎均可用作制备胞质体。

⏹（一）去核细胞的制备⏹2、具体步骤（离心脱核法）⏹（1）37℃预温的CB溶液（10ug/mL和小牛血清5%）5ml加入50ml离心管内；⏹（2）把生长有细胞的塑胶板面朝下，水平放入CB溶液中（注意勿在板下形成气泡），在圆板上压上一个圆形的栓，以防止圆板移动位置；⏹若圆板是玻璃制品时，则先用硬质聚乙烯制的脱核环放入离心管中，再加CB溶液10ml，把玻璃板细胞朝下放在圆环上。