HILIC色谱柱使用注意事项
色谱柱设备安全操作规定
色谱柱设备安全操作规定前言色谱柱是常见的科学实验仪器，广泛应用于许多实验室。
正确使用色谱柱的方法对于准确和可重复的实验结果至关重要，但在使用色谱柱的过程中也存在一些潜在的安全风险。
为了确保实验室人员的安全和实验结果的准确性，制定一份色谱柱设备安全操作规定是非常必要的。
一、设备安全检查在使用色谱柱前，应当进行设备安全检查。
这些检查包括：1.色谱柱的外观检查，确保没有磨损或损坏；2.色谱柱的连接部位检查，确保连接处无渗漏；3.活塞密封检查，确保活塞完整且没有磨损；4.下柱座密封检查，确保下柱座紧密并正确放置；5.流量检查，确保流量没有异常；6.平衡检查，确保使用正确的样品和溶液进行平衡处理。
在进行安全检查时，应当使用安全检查清单，以确保每个检查项都得到充分考虑。
二、安全操作方法在使用色谱柱时，应当遵循以下安全操作方法：1.运输和搬运时，应当注意轻拿轻放，以避免冲撞造成损坏；2.安装和拆卸时，应当按照正确的步骤进行，以免发生意外；3.操作时，应当根据实验要求进行预热、平衡、样品注入和稀释等操作，并按照正确的顺序进行；4.操作过程中应当及时观察色谱柱的运行状态，并注意是否有异常情况发生；5.遇到任何异常情况时，应当立即停止实验，检查其他设备，如溶液盛器、针头等，以确定是否造成了异常；6.操作结束后，应当拆卸色谱柱并进行清洗，保持设备干净整洁。
三、应急处理措施在操作过程中，可能会发生柱裂、弹出样品、溶液外泄等紧急情况。
为应对这些情况，制定一份应急处理措施是十分必要的。
应急处理措施包括：1.柱裂：立即停止实验，将柱子包裹好并用胶带缠绕紧密，以防洒落样品；2.弹出样品：停止实验，用纸巾或吸水棉吸收样品，并进行药品废液处理；3.溶液外泄：立即关闭柱底阀门，用棉纸或吸水棉清理溶液，在地上铺上防滑垫，并进行药品废液处理。
应急处理时，一定要佩戴防护手套、口罩及护目镜等个人防护设备。
四、结论色谱柱是实验室中常见的仪器，而正确的操作方法和应急处理措施则是确保实验人员安全和获得准确可靠结果的关键。
hilic色谱柱使用注意事项
hilic色谱柱使用注意事项
Hilic色谱柱是中国化工科学院和中国科学院西安分院共同开发，经多年老练，由国内多家生产企业生产，是用于各种色谱柱模式的表征和调整的最佳产品。
使用Hilic色谱柱时应注意，1.首先一定要按照本说明书的步骤，按照理论介绍的步骤进行调节，以确保机器的正常使用;2.Hilic色谱柱使用温度上限为39度，过高的温度将破坏使用性能；3.使用Hilic色谱柱之前，应先清洁处理，以避免集尘、污染；4. Hilic色谱柱在使用中应注意避免受力，以免造成裂痕和损坏。
Hilic色谱柱在使用中，应根据实际情况进行合理使用，以获得更好的效果。
此外，建议在使用时注意安全，以免造成受伤和损坏设备。
最后，更换Hilic色谱柱时，须注意正确的配置使用，避免使用不同粒径的色谱柱将影响分析结果。
亲水作用色谱HILIC实用指南
指导与应用手册· 1亲水作用色谱 HILIC实用指南指导与应用手册2 · HILIC实用指南亲水作用色谱(HILIC)实用指南原著作书名:A Practical Guide to HILIC原著作者:Patrik Appelblad, Tobias Jonsson, Einar Pontén, Camilla Viklund and Wen Jiang中文版编辑：Wen Jiang (江文）ISBN 978-91-631-8370-6瑞典SeQuant AB出版, 地址: Box 7956, 907 19 Umeå, Sweden.版权所有© 2005-2008, SeQuant AB2008年2月第一版，第一次印刷，瑞典于默奥(Umeå)修订及额外资料可以在Merck SeQuant公司网页上找到，网址。
如有其它问题及信息反馈，请与info@联系。
HILIC实用指南–指导与应用手册引言本手册旨在介绍一种适用于分析强极性和强亲水化合物的液相色谱分析方法–亲水作用液相色谱(H ydrophilic I nteraction Li quid C hromatography，HILIC)。
主要介绍HILIC的基本理论和该分离模式下的一些实际问题，同时给读者介绍瑞典SeQuant 公司的ZIC ®-HILIC(硅胶基质)和ZIC ®-p HILIC(聚合物基质) 两性离子液相色谱柱(见图1)，以及使用这两种色谱柱分析不同类型亲水化合物的应用实例。
您也会从本手册中获得该类色谱和其他方面的色谱知识。
图1 ZIC ®-HILIC和ZIC ®-p HILIC两性离子固定相的官能团如果本手册不能解决您的HILIC 问题，SeQuant愿为你提供进一步帮助。
首先，建议您登陆SeQuant 公司网站主页()，从那您能找到关于我们产品的最新文献资料、应用报告和技术数据。
HILICpak VG-50 4E柱子使用说明
HILICpakVG-504E柱子使用说明
1、避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。
温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此，在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。
2、应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。
3、一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。
否则反冲会迅速降低柱效。
4、选择使用适宜的流动相(尤其是pH)，以避免固定相被破坏。
有时可以在进样器前面连接一预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。
HILIC 色谱柱的使用
如下是有关HILIC色谱柱的使用：色谱柱的平衡• HILIC色谱柱的平衡使用50倍柱体积的50/50的乙腈/水相缓冲溶液（缓冲液的最终浓度为10mM）平衡新色谱柱 在开始进样前，用20倍柱体积的起始流动相平衡色谱柱进行梯度分析时，进样间隔需要用10倍柱体积起始流动相平衡色谱柱说明：色谱柱平衡不充分将导致保留时间漂移流动相需要注意的问题• HILIC流动相需要注意的问题流动相中总是至少保持5％的极性溶剂（如5％水相缓冲液，5％甲醇或3％甲醇/2%水相缓冲液等），这保证Atlantis HILIC硅胶填料始终被水浸润在流动相或梯度中至少保持有机溶剂（如乙腈）的比例不低于40％不要使用磷酸盐缓冲溶液体系，因为磷酸盐缓冲液在HILIC色谱模式下会析出；使用磷酸则没有问题缓冲系统如甲酸铵或乙酸铵水溶液比甲酸或乙酸的水溶液有重现性更好的结果。
如果不能使用缓冲液而一定要使用流动相添加剂如甲酸，最好使用0.2%的浓度而非0.1% 为得到最好的峰形，在流动相或梯度中总是保持缓冲系统的浓度为10mM进样溶剂需要注意的问题• HILIC进样溶剂需要注意的问题如果可能，尽量用100％乙腈溶解样品进样。
避免使用水配制样品溶液，请选择较弱的HILIC 溶剂如乙腈、甲醇、异丙醇等配制样品溶液。
最常用的进样溶剂为75/25 乙腈/甲醇，这个体系充分平衡了样品的溶解度和峰形两个因素。
不要用水或DMSO做进样溶剂，它们将导致峰形变得很差；使用反相SPE技术将水或DMSO置换成乙腈再进样。
如果不能这样操作，用有机溶剂稀释水或DMSO。
的建议• 其它有关使用HILIC的建议开始时可以运行一个95％乙腈至50％乙腈的梯度，如果样品不保留，使用95/3/2乙腈/甲醇/水相缓冲溶液的流动相进行等度分析将流动相中的水换成甲醇、丙酮或异丙醇也可以增加极性化合物的保留请确保弱洗针溶剂/冲洗溶剂包含和流动相一样的高比例有机相，否则峰形会受到影响。
Atlantis HILIC
Atlantis® HILIC色谱柱的使用注意事项需要注意的问题平衡Atlantis HILIC色谱柱色谱柱需要注意的问题a)使用50倍柱体积的50/50的乙腈/水相缓冲溶液（缓冲液的最终浓度为10mM）平衡新色谱柱（150*4.6 mm的色谱柱柱体积约为2.5mL，250*4.6 mm的色谱柱柱体积约为4.2 mL）b)在开始进样前，用20倍柱体积的起始流动相平衡色谱柱c)进行梯度分析时，进样间隔需要用10倍柱体积起始流动相平衡色谱柱说明：色谱柱平衡不充分将导致保留时间漂移HILIC流动相需要注意的问题a)流动相中总是至少保持5％的极性溶剂（如5％水相缓冲液，5％甲醇或3％甲醇/2%水相缓冲液等），这将保证Atlantis HILIC硅胶填料始终被水浸润b)在流动相或梯度条件下，乙腈的比例不得低于40％c)不要使用磷酸盐缓冲溶液体系，因为在HILIC色谱模式下会析出磷酸盐微晶而造成色谱柱堵塞；如果使用磷酸则没有问题d)使用缓冲溶液体系的流动相（如甲酸铵或乙酸铵水溶液）比单纯添加甲酸或乙酸的水溶液作流动相将得到重现性更好的结果。
对于不能使用缓冲溶液体系而一定要使用流动相添加剂如甲酸的流动相，最佳浓度是0.2%，而不是0.1%e)为得到最好的峰形，在流动相或梯度中总是保持缓冲体系的浓度为10mMHILIC进样溶剂需要注意的问题a)如果可能，尽量用100％乙腈溶解样品进样。
避免使用水配制样品溶液，请选择HILIC模式下洗脱强度较弱的溶剂如乙腈、甲醇、异丙醇等配制样品溶液。
b)最常用的进样溶剂为75/25 乙腈/甲醇，这个体系充分平衡了样品的溶解度和峰形两个因素。
c)不要用水或DMSO做进样溶剂，它们将导致峰形变得很差d)建议使用反相固相提取技术如Oasis® HLB将样品中的水或DMSO置换成乙腈再进样。
如果不适合这样操作，在上样前用有机溶剂如乙腈充分稀释水或DMSO。
其它有关使用HILIC的建议a)开始时可以运行一个95％乙腈至50％乙腈的梯度，如果样品不保留，可以使用95/3/2乙腈/甲醇/水相缓冲溶液的流动相进行等度分析b)将流动相中的水换成甲醇、丙酮或异丙醇也可以增加极性化合物的保留c)请确保所用的洗针溶液和Purge溶液中含有高比例的有机溶剂乙腈（和流动相相似，这和反相色谱恰好相反），否则峰形会受到影响色谱柱清洗、、再生和保存色谱柱清洗Atlantis HILIC硅胶色谱柱的清洗和再生压力骤然升高，保留时间或分离度发生波动往往表明色谱柱被污染了。
色谱柱使用注意事项
色谱柱使用注意事项反相HPLC柱子的清洁和再生反相色谱是迄今在高效液相色谱中应用最广泛的技术，主要是因为它适用于分析极大多数的非极性物质和很多的可离子化的及离子化合物。
大多数用于反相色谱的固定相都是天然的疏水物质，因此，分析物是按照它们与固定相的疏水相互作用的大小来分离的，含有疏水的机制也能以同样的保留方式分离。
表1列举了大部分比较受欢迎的键合在硅胶介质上的固定相。
固定相上还有少数物质－如混合相（例如苯基－己基）、末端封闭和非末端封闭种类和极性嵌入相－也存在于这些键合硅胶上。
还有很多填料用于反相色谱，包括聚合物，聚合物表面涂上硅胶和氧化铝，无机－有机混合物，涂层氧化锆，和石墨化碳。
不同种类的固定相有他们自己的优点和缺点。
反相色谱柱利用各种流动相和添加物可以有很多的应用。
一些技术利用添加物可以改变或修饰填料的表面。
有时候这些添加物有可能会污染键合相表面。
硅胶表面因为有着疏水键合相而有一些别的化学性质。
残留的硅烷醇存在于所有的硅胶键合填料中。
图1描述了不同种类的能出现的硅烷醇，这些硅烷醇具有弱酸性，因此能与某些待分析物合基质成分，特别是碱性成分。
因为硅烷醇的pKa值大约是4.5，离子化能在中性pH条件下发生因此与阳离子产生静电相互作用就有可能发生。
较老的A型硅胶能容纳高浓度金属离子（有时候100ppm或更多），而这能使硅胶表面的酸性更大甚至能发生金属鳌合现象或清除一些化合物。
残留硅烷醇在非末端封闭的硅胶合短链键合相如C2或C4上更让人烦恼。
使用者必须清楚他们所用的固定相表面特殊性质和可能的分析物－固定相表面的相互作用，这样当他们使用反相方法时才能考虑到可能的基质相互作用。
例如，非常疏水的样品基质如玉米油，高芳香物质，和蜡能粘住固定相装填表面并且改变他们的性质。
含有蛋白质物质的生物流体也能吸附在装填表面。
尽管分析者想尽最大努力来保护HPLC柱子，某些分析物－基质污染能使固定相受到有害的影响。
当柱子被污染，它的色谱行为和没被污染的柱子会有些不同。
色谱柱的使用说明
色谱柱的使用说明色谱柱是一种在色谱分析中广泛使用的关键设备，它能够通过分离混合物中的组分以及测定它们的相对含量。
不同的色谱柱具有不同的分离机理和特点，因此每种色谱柱在使用前都需要仔细阅读其使用说明书，以了解其正确的使用方法和注意事项。
以下是色谱柱使用说明的一般内容：1.色谱柱的储存：色谱柱在储存期间需要避光、避湿、避高温，以免对其质量产生不良影响。
柱子应垂直存放，避免受到侧面压力。
定期检查柱子上是否有裂纹、损坏或其他异常情况。
2.安装色谱柱：在安装色谱柱前，需要进行适当的准备工作，如用洗涤剂或溶剂清洗色谱柱，以去除表面的杂质。
然后在柱子的接口处使用密封垫圈，确保柱子和接口之间的密封性。
安装时，需要根据仪器的要求和色谱柱的规格调整柱床高度和流速。
安装完成后，检查柱床是否均匀填充。
3.色谱条件的选择：正确选择色谱条件对于得到准确的分析结果至关重要。
色谱柱的选择应根据样品的特性、分离需求和分析目标来确定。
例如，对于非极性化合物的分离，应使用非极性柱；对于极性化合物的分离，则需要使用极性柱。
此外，还需合理选择进样方式、流速、温度等色谱条件，并根据需要进行优化。
4.样品的制备和进样：对于色谱分析之前，样品可能需要经过一系列的预处理步骤，如萃取、浓缩、溶解等。
进样前，需要对样品进行适当的稀释，以避免柱子堵塞或过载。
确保样品进样前是清洁无杂质的，以免污染柱子或影响分析结果。
还需根据样品的特性，选择适当的进样方式，如气相色谱中的气态进样、液相色谱中的静态进样或动态进样等。
5.色谱的运行和操作：在进行色谱分析时，需要根据选择的色谱条件设置好仪器的运行参数，如载气流速、柱温、检测器灵敏度等。
同时，还需注意检测器的基线稳定性、测量范围、线性范围等，以确保准确的定量分析。
在运行过程中，还需注意实验室的环境条件，如温度、湿度等，并及时记录实验过程和结果。
6.色谱柱的维护和保养：为了延长色谱柱的使用寿命和维持准确的分析结果，需要进行定期的维护和保养工作。
hilic色谱柱原理及注意事项
hilic色谱柱原理及注意事项
HILIC 色谱柱的原理是利用不同极性的物质在相同的流动相中溶解度不同的特性，使不同极性的物质分离开来。
其主要原理如下：
1.HILIC 色谱柱中的固定相为填料，其表面由亲水的有机基团和疏水的硅基组
成。
2.流动相为高极性的有机溶剂（如甲醇），通过泵的加压作用将其注入色谱
柱中，同时流动相也携带少量的水相作为湿润剂，将固定相均匀涂布在填
料表面。
3.待色谱柱中的流动相达到平衡后，样品中的待测物质与流动相中的离子发
生相互作用，通过流动相和固定相之间的分配作用，将样品中的待测物质
分离出来。
在使用HILIC 色谱柱时，需要注意以下几点：
1.填料的选择：选择合适的HILIC 填料，其比表面积、孔径大小等性质需要
满足样品分离的要求。
2.流动相的选择：根据待分离样品的性质选择合适的流动相，一般情况下，
流动相中需要含有一定比例的水相作为湿润剂，以保证固定相在填料表面
的均匀分布。
3.温度和压力的控制：在使用HILIC 色谱柱时，需要控制好温度和压力的条
件，以保证分离效果和柱效。
4.柱的平衡与清洗：在使用HILIC 色谱柱前，需要对其进行平衡，以保证其
处于良好的工作状态。
同时，在使用过程中，需要定期对其进行清洗，以
保证其性能的稳定性。
TSKHILICAFCHICIEX系列色谱柱使用冲洗方法
TSKHILICAFCHICIEX系列色谱柱使用冲洗方法色谱柱的冲洗方法对于保护色谱柱、延长使用寿命、提高分离效果至关重要。
下面将分别介绍TSKHILIC、AFC、HIC和IEX系列色谱柱的冲洗方法。
1.TSKHILIC色谱柱的冲洗方法：a.初次使用：先用纯水冲洗柱床两倍柱床体积，以去除柱内可能存在的盐离子和有机溶剂。
b.然后，使用10-20mL纯水/乙醇（80:20，体积比）洗脱样品洗涤剂残留物，同时保护柱内填料。
c.最后，使用纯水冲洗柱床两倍柱床体积，以去除柱床中可能存在的溶剂残留物。
2.AFC色谱柱的冲洗方法：AFC（Affinity Chromatography）色谱柱是一种亲和色谱柱，常用于分离具有特定亲和性的分析物。
以下是一种常用的冲洗方法：a.初次使用：先用公认的吸附剂（如硫酸铵）溶液冲洗柱床两倍柱床体积，以平衡柱内填料，并去除可能存在的污染物。
b.然后，使用适宜pH值的缓冲液（如磷酸缓冲液）进行冲洗，以去除填料和样品中的杂质。
c.最后，使用缓冲液冲洗柱床两倍柱床体积，以达到柱床的稳定状态。
3.HIC色谱柱的冲洗方法：HIC（Hydrophobic Interaction Chromatography）色谱柱是一种疏水相色谱柱，常用于分离疏水性物质。
以下是一种常用的冲洗方法：a.初次使用：先用有机溶剂（如乙醇）冲洗柱床两倍柱床体积，以去除柱内可能存在的水分和杂质。
b.然后，使用含盐缓冲液进行冲洗，使样品组分与填料发生疏水相互作用，以达到最佳分离效果。
c.最后，用纯水冲洗柱床两倍柱床体积，以去除盐离子和有机溶剂残留物。
4.IEX色谱柱的冲洗方法：IEX（Ion Exchange Chromatography）色谱柱是一种离子交换色谱柱，常用于分离带有不同电荷的离子。
以下是一种常用的冲洗方法：a.初次使用：先用纯水冲洗柱床两倍柱床体积，以去除柱内可能存在的杂质。
b.然后，使用合适的缓冲液（含有对应离子交换基团的缓冲液）进行冲洗，以保持样品组分在填料上的稳定吸附。
atlantis t3、dc18和hilic硅基色谱柱使用手册
atlantis t3、dc18和hilic硅基色谱柱使用手册摘要：1.引言2.atlantis t3 硅基色谱柱a.产品概述b.技术参数c.应用领域3.dc18 硅基色谱柱a.产品概述b.技术参数c.应用领域4.hilic 硅基色谱柱a.产品概述b.技术参数c.应用领域5.使用注意事项6.结论正文：atlantis t3、dc18 和hilic 硅基色谱柱是实验室中常用的色谱柱产品。
在本文中，我们将详细介绍这三种色谱柱的使用手册。
1.atlantis t3 硅基色谱柱atlantis t3 硅基色谱柱是一款具有高效分离性能的色谱柱。
其技术参数包括：粒径为3um，长度为150mm，内径为4.6mm。
该色谱柱广泛应用于药物分析、生物制品分析以及食品分析等领域。
2.dc18 硅基色谱柱dc18 硅基色谱柱是一款十八烷基硅烷基键合色谱柱。
其技术参数包括：粒径为5um，长度为250mm，内径为4.6mm。
该色谱柱在生物制品分析、食品分析以及环境分析等领域有着广泛的应用。
3.hilic 硅基色谱柱hilic 硅基色谱柱是一款具有亲水性的硅基键合色谱柱。
其技术参数包括：粒径为3um，长度为150mm，内径为4.6mm。
该色谱柱在药物分析、生物制品分析以及食品分析等领域有着广泛的应用。
在使用色谱柱时，需要注意以下几点：- 避免高温和阳光直射，以免影响色谱柱的使用寿命。
- 避免使用强酸和强碱，以免损坏色谱柱。
- 在使用过程中，应根据实验需要选择合适的色谱柱。
总的来说，atlantis t3、dc18 和hilic 硅基色谱柱是实验室中必不可少的色谱柱产品。
HILIC色谱柱使用注意事项
HILIC色谱柱使用注意事项HILIC（Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography）色谱柱是一种水合作用液相色谱技术，适用于极性化合物的分离和分析。
使用HILIC色谱柱需要注意以下几个方面：1.样品准备：在使用HILIC柱之前，需要确保样品是水溶性的或能够在水溶剂中溶解。
对于非极性或溶解度低的化合物，可以选择在HILIC之前进行样品前处理，如使用极性溶剂预溶解。
2.流动相选择：HILIC色谱柱适用于极性溶剂，如甲醇、乙腈等。
常见的HILIC流动相为水-有机溶剂的混合物。
选择合适的流动相组成对于有效分离是至关重要的。
一般来说，水的含量越高，极性化合物的保留时间越长。
3.pH控制：HILIC色谱柱在分析过程中可能受到溶剂pH的影响，因此对于一些对pH敏感的化合物，需要进行pH调供更好的保留和分离效果。
4.柱温控制：HILIC柱的温度会影响保留时间和分离效果。
在使用HILIC柱的过程中，需要控制柱温，一般常见的温度范围为20-40℃。
不同样品性质和分析需求可能需要不同的柱温设置。
5.柱平衡：新购买的HILIC柱在使用前需要进行柱平衡，这可以提供更稳定的保留时间和重复性。
常见的柱平衡方法是使用几个体积的流动相进行洗脱，直到保留时间稳定。
6.注样量控制：合适的注样量可以确保信号的线性范围和峰形状的良好。
通常推荐的注样量为柱的最大负载能力的5-10倍。
如果注样量过多，可能会导致峰形变宽或峰形不对称。
7.柱清洗和保养：使用HILIC柱后，及时进行柱的清洗和保养是重要的。
一般来说，可以使用合适的洗脱剂进行柱的冲洗，以去除残留的样品和杂质。
柱的保养包括存放在干燥、封闭的环境中，避免与相干混。
总而言之，HILIC色谱柱的使用需要注意合适的样品准备、流动相选择、pH控制、柱温控制、柱平衡、注样量控制以及柱的清洗和保养。
只有在正确的操作下，才能获得准确、可靠、重复性好的分析结果。
HILIC柱使用说明及注意事项
HILIC柱使用说明及注意事项本柱为两性离子的固定相共价结合于多孔硅胶上。
坚固亲水的两性离子官能团使得柱子更适合于亲水相互作用的液相色谱。
带电分析物和中性两性离子固定相之间的弱的静电相互作用力形成特殊的选择性，特别适合在反相柱上保留差的分析物。
ZIC-HILIC柱作为一种工具，它可以改变甚至增强极性和亲水性物质的选择性和峰的分辨率，例如：糖类、代谢物、酸、碱、有机离子、无机离子、金属络合物、氨基酸、肽、蛋白消化液等等。
柱子的硬件和化学兼容性柱子外壳由不锈钢制作而成，可以在pH 3-8范围内使用，不可使用强的碱性溶液以及NaOH作为洗脱剂，柱温最高可加到70摄氏度。
清洗和再生如果柱后压增强或者选择性发生改变，可以使用下面的清洗步骤：30倍柱体积的双蒸水30倍柱体积的0.5M NaCl30倍柱体积的双蒸水第一步使用双蒸水是为了去除有机溶剂和极性杂质，之后跟一段0.5M NaCl 的冲洗，最后去除盐并用80%乙腈平衡。
保存柱子购买时由80%乙腈及5mM NH4Ac (pH 6.8) 保存，该溶剂也适用于柱子的长期保存。
样品使用溶剂及溶剂强度样品应该溶解在60-80%的有机溶剂中或者最初的流动相中。
水的含量要尽量少，弱亲水溶剂如乙腈是比较推荐的。
在自动进样后推荐使用含5%水的清洗溶剂。
亲水溶剂的相对强度如下：丙酮<乙腈<异丙醇<乙醇<甲醇<水。
流动相的探索为了获得可重复的结果，流动相中至少包含3%的水以确保固定相颗粒的足够的水合作用。
HILIC分离的适宜的缓冲体系为甲酸和醋酸盐，因为它们在较高的有机溶剂中仍有很好的溶解性。
避免磷酸盐以及低溶解性的缓冲盐，防止后者在柱床中沉淀。
大部分的分析物缓冲盐的浓度在5-20mM是比较适宜的，上限在200-300mM，主要取决于盐在洗脱溶剂中的溶解度。
TFA和其它离子对试剂坚决不能使用，因为它们会干扰HILIC的分离机制并抑制质谱信号。
典型的洗脱程序等度洗脱：80：20(v:v)乙腈：醋酸铵-水(5-20mM)或者其它适合的缓冲盐梯度洗脱：90%至40%的乙腈，洗脱时间为20min(2.5%/min)。
色谱柱的使用、保存及管理
色谱柱的使用、保存及管理
培训人：*** 2012.12.12
2 一、色谱柱的使用 1.新色谱柱的使用 购进新色谱柱，要按照出厂性能实验方法进行色谱柱性能考察验收，验收合 格后按公司要求进行编号，粘贴标签，建立档案，出厂图谱与验收图谱一并留档。 柱性能考察实验的结果,应给出柱的死时间、保留时间、理论塔板数、峰对称 性（或对称因子）、分离度和柱压等性能指标。 2.日常色谱柱的使用 选择对应的检验品种的色谱柱，正确连接，拧紧两端管线接头，先用10%甲醇 溶液或相应溶液低流速冲洗30min,再切换到流动相，逐步提高流速，平衡色谱柱 30min左右。 待样品分析结束后，先用10%甲醇溶液或相应溶液低流速0.5ml/min冲洗
7
30min后，再用纯甲醇溶液0.5ml/min饱和以上，取下色谱柱，接上堵头，拧紧，
按色谱柱的类型分类放置保管。
3 二、色谱柱的使用注意事项 柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动，要轻拿轻放； 当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路一定要清洗干净； 要注意流动相的脱气；
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色谱柱的管理： 每启用一根色谱柱，在色谱柱上贴上标签，注明启用日期。
每根柱子每两个月保养一次，特别是对于一些使用频率少的柱子，因为放置时
间 长，容易干柱，每一次做好保养记录。
对于确已失效的柱子，做好停用记录，不能随意丢弃，专门存放。
Hale Waihona Puke 6色谱柱使用总结 提高柱温可增加柱效（提高灵敏度）； 减小柱径可增加柱效（提高灵敏度）； 缩短检测器响应时间可增加柱效（提高灵敏度）； 使用高纯硅胶，可增加柱效（提高灵敏度）； 改变流动相pH，可增加柱效（提高灵敏度）； 改变有机相比例，可增加柱效（提高灵敏度）； 改变键合相，可增加柱效（提高灵敏度）； 改变有机添加剂，可增加柱效（提高灵敏度）； 改变流动相配比方式，可增加柱效（提高灵敏度）。
OSAKA SODA PC HILIC系列液相色谱柱说明书(原资生堂)
PC HILIC系列色谱柱使用说明书在此，非常感谢您选购我公司的聚合物包被型PC HILIC系列色谱柱。
PC HILIC系列色谱柱以CAPCELL PAK填料合成技术应用于独有PC（磷酸胆碱）填料素材而诞生的HILIC模式用色谱柱。
磷酸胆碱结构图在亲水性相互作用法（HILIC）机理下，可实现对常规C18色谱柱保留较弱的强亲水性物质的保留。
与未修饰硅胶作为填料的硅胶色谱柱相比，PC HILIC亲水性更强，能够获得更佳保留分离效果。
物性值如下表所示。
pH范围耐压官能团细孔径粒径比表面积2PC 10 5 450 3-7.5 20 为了能够长期且稳定地使用色谱柱，请在熟读该使用说明书后进行正确使用。
1.色谱柱的启用每一根色谱柱在出厂前，都经过了严格的出厂测试，只有满足出厂标准方可出售。
每一根PC HILIC系列色谱柱的柱盒内均含有色谱柱的性能测试报告供使用者查看。
性能测试报告包含了色谱柱柱号，色谱柱规格，填料批次号，理论塔板数和所用的测试条件等的检测数据。
为了保证色谱柱的正常使用，建议在使用前检查以下事项：1.检查色谱柱包装盒是否完整，有无拆封和碰撞痕迹。
2.色谱柱标签是否与包装上的柱号、柱型相符，色谱柱两端堵头是否完整。
3.色谱柱包装盒内是否有色谱柱性能测试报告。
2.色谱柱的安装2.1安装色谱柱之前，请使用不含有缓冲盐、强酸或强碱的流动相对液相色谱系统进行冲洗置换。
2.2为尽量减少死体积，色谱柱的接头使用了外径1/16英寸配管的螺头(MALE NUT)。
请确保装置的配管接头正确连接，并且锥箍的顶端已插入接头内侧(参照图1)。
若配管不匹配，特别是直接使用其他类型色谱柱所用配管时，锥箍前端的配管长度（图1中的V）与色谱柱尾端接头的长度（图1中的L）经常会不同，因而引发故障。
若L＞V，会产生死体积，甚至出现色谱峰展宽或拖尾现象，并且分离变差。
若L＜V，由于锥箍无法密封，所以会导致漏液。
※频繁更换色谱柱，可能会导致螺头的锥箍损坏而发生漏液现象。
HILIC色谱柱使用注意事项
HILIC色谱柱使用注意事项1.样品准备：由于HILIC色谱柱适用于极性和亲水性化合物的分离，因此需要使用水溶性溶剂进行样品制备。
最好避免使用含有高浓度有机溶剂的样品，因为这些溶剂可能会造成柱的沾污或损坏。
2.流动相的选择：在选择流动相时，应优先选择极性溶剂，如甲醇、乙醇和乙腈。
此外，可以添加少量的缓冲剂，以控制溶液的pH值。
请注意，不同的流动相组合可能会对柱的性能产生显著影响，因此在实验前需要进行流动相的优化。
3.柱温的控制：HILIC色谱柱对温度敏感，因此在使用过程中需要控制好柱温。
一些常用的温度范围为20-30摄氏度。
请注意，过高的温度可能会导致柱的浸润性下降，从而影响分离效果。
4.注射量的控制：使用HILIC色谱柱时，注射量的控制也非常重要。
一般来说，较小的注射量可以提高分离效果，但如果注射量太小，可能会导致响应信号过弱。
因此，需要在仪器的线性范围内选择适当的注射量。
5.流速的选择：对于HILIC色谱柱，流速的选择也非常重要。
较低的流速可以提高分离效果，但可能会导致分离时间过长。
较高的流速可以缩短分离时间，但可能会降低分离效果。
因此，需要在选择流速时权衡分离效果和分析时间。
6.柱的保养与保护：为了保护HILIC色谱柱并延长其使用寿命，需要注意以下几点。
首先，使用前请确保柱和流动相达到平衡状态。
其次，在每次使用后用纯水或甲醇进行冲洗，以去除残留的样品和杂质。
最后，在使用后请存放在恰当的溶剂中，避免干燥。
7.样品的选择：由于HILIC色谱柱适用于分离极性和亲水性化合物，样品的选择也非常重要。
推荐使用具有一定极性的化合物进行分析，如氨基酸、酮糖和亲水性药物等。
总之，使用HILIC色谱柱时需要注意样品准备、流动相的选择、柱温控制、注射量的控制、流速的选择、柱的保养与保护以及样品的选择。
通过良好的操作和实验条件的优化，可以有效地提高HILIC色谱柱的分离效果和使用寿命。
HILIC色谱柱使用注意事项
HILIC色谱柱的使用注意事项a)HILIC色谱柱的平衡i.使用50倍柱体积的50/50的乙腈/水相缓冲溶液（缓冲液的最终浓度为10mM）平衡新色谱柱ii.在开始进样前，用20倍柱体积的起始流动相平衡色谱柱iii.进行梯度分析时，进样间隔需要用10倍柱体积起始流动相平衡色谱柱说明：色谱柱平衡不充分将导致保留时间漂移b)HILIC流动相需要注意的问题i.流动相中总是至少保持5％的极性溶剂（如5％水相缓冲液，5％甲醇或3％甲醇/2%水相缓冲液等），这保证HILIC硅胶填料始终被水浸润ii.在流动相或梯度中至少保持有机溶剂（如乙腈）的比例不低于40％iii.不要使用磷酸盐缓冲溶液体系，因为磷酸盐缓冲液在HILIC色谱模式下会析出；使用磷酸则没有问题iv.缓冲系统如甲酸铵或乙酸铵水溶液比甲酸或乙酸的水溶液有重现性更好的结果。
如果不能使用缓冲液而一定要使用流动相添加剂如甲酸，最好使用0.2%的浓度而非0.1%v.为得到最好的峰形，在流动相或梯度中总是保持缓冲系统的浓度为10mMc)HILIC进样溶剂需要注意的问题i.如果可能，尽量用100％乙腈溶解样品进样。
避免使用水配制样品溶液，请选择较弱的HILIC溶剂如乙腈、甲醇、异丙醇等配制样品溶液。
ii.最常用的进样溶剂为75/25 乙腈/甲醇，这个体系充分平衡了样品的溶解度和峰形两个因素。
iii.不要用水或DMSO做进样溶剂，它们将导致峰形变得很差iv.使用反相SPE技术将水或DMSO置换成乙腈再进样。
如果不能这样操作，用有机溶剂稀释水或DMSO。
d)其它有关使用HILIC的建议i.开始时可以运行一个95％乙腈至50％乙腈的梯度，如果样品不保留，使用95/3/2乙腈/甲醇/水相缓冲溶液的流动相进行等度分析ii.将流动相中的水换成甲醇、丙酮或异丙醇也可以增加极性化合物的保留iii.请确保弱洗针溶剂/冲洗溶剂包含和流动相一样的高比例有机相，否则峰形会受到影响、再生和保存第四节色谱柱清洗色谱柱清洗、A.清洗和再生压力骤然升高，保留时间或分离度发生波动往往表明色谱柱被污染了。
HILIC色谱柱介绍
亲水作用色谱（ HILIC ）是近年来色谱领域研究的热点之一。
本文简介了HILIC 的起源、定义、分离特点；比较了 HILIC 和反相色谱（ RPLC ）的选择特性，讨论了HILIC 与质谱联用技术的特点，并对其使用中的注意事项进行了总结。
1. HILIC的概念亲水色谱（ HILIC ）是一种用来改善在反相色谱中保留较差的强极性物质保留行为的色谱技术。
它通过采用强极性固定性，并且结合高比例有机相/低比例水相组成的流动相来实现这一目的。
而这样的流动相组成尤其有利于提高电喷雾离子化质谱（ESI-MS ）的灵敏度。
2. HILIC的分离机制HILIC 的分离机理在目前还存在着争议，主要包括以下三个方面：（1 ）分配机理（ 2）离子交换（ 3）偶极 -偶极相互作用。
更多的试验现象则表明HILIC的保留机理包含氢键作用、偶极作用和静电作用等多种次级效应，很难将其区分开来。
3.HILIC影响保留的主要因素普遍认为HILIC 保留行为受到多种参数的影响，如固定相的官能团、有机改性剂的含量、流速、柱温、流动相缓冲体系的pH 值、缓冲盐的种类和浓度。
影响样品在固定相上的保留行为的最主要因素都是流动相中有机相的比例，例如乙腈的含量的增加会显著增加样品的保留因子。
在HILIC 分离模式中，溶剂洗脱能力由弱到强为：四氢呋喃 <丙酮 <乙腈 <异丙醇 <乙醇 <甲醇 <水 , 流动相中水是最强的洗脱溶剂。
一般采用乙腈- 水体系作为流动相，其中水相的比例为 5%-40%以保证其显著的亲水作用。
如图 1 所示，将流动相中的水相用甲醇、乙醇、异丙醇代替，随着流动相极性的减小，待测物在柱上的保留就会增强。
Figure 1. HILIC retention as a function of polar modifier. 100 mm length ACQUITY UPLCBEH HILIC column. Peaks: 1 = methacrylic acid, 2 = cytosine, 3 = nortriptyline, 4 = nicotinic acid.4. HILIC 与 RP-HPLC的比较传统的反相色谱（RPLC ）对强极性和亲水性的小分子物质的保留和分离能力较弱，通常流动相需要采用高比例的水相才能实现其保留，然而高比例的水相会导致一系列问题，定相的反浸润和ESI-MS 灵敏度的下降。
Kinetex C18 型号 色谱柱 使用注意事项 和优化说明说明书
Column Care and Optimization Notes色谱柱使用注意事项和优化说明Entretien de colonnes et notes d’optimisationSäulenschutz und Optimierungstipps Istruzioni per la Manutenzione e Note per l’Ottimizzazione Precauciones y notasde optimizaciónGuía para el cuidadoy optimizaciónGuia de Cuidados e Otimização取扱説明書カラムケアと最適化SPECIFICATIONSShipping Solvent• Kinetex C18, EVO C18, XB-C18, C8, Biphenyl, Phenyl-Hexyl, F5 and PFP columns are shipped in Acetonitrile / Water (≥ 50:50 v/v; exactcomposition dependent on column dimensions)• Kinetex HILIC is shipped in Acetonitrile / Water 90:10 (v/v)Test CertificateEach Kinetex C18, EVO C18, XB-C18, C8, Biphenyl, Phenyl-Hexyl, F5 and PFP column is individually tested before shipment. A test certificate showing the separation parameters for the reversed phase test mixture containing uracil, acetophenone, toluene, and naphthalene can be found online at /mysupport.Each Kinetex HILIC column is individually tested before shipment. A test certificate showing the separation parameters for the HILIC test mixture containing toluene, uracil, and cytosine can be found online at/mysupport.If the performance of your Kinetex column is not similar to the test certificate, please review the system optimization tips in this guide or contact Phenomenex.OPERATING PARAMETERSColumn InstallationThe arrows on the column tag indicate the flow direction. Do not operate or back-flush a Kinetex 1.3 µm column in the opposite direction to the one indicated by the arrow on the column tag. Phenomenex recommends the use of HPLC / UHPLC Sure-Lok™ High Pressure PEEK male nut fittings for installation of Kinetex columns on HPLC / UHPLC systems. The convenient one-piece design (AQ0-8503) is pressure rated to 12,000 psi (827 bar), while the 3-piece unit (AQ0-8504 with AQ0-8505), which contains a PEEK nut, a ferrule, and stainless steel gripping ring, will provide leak-free connections up to 19,000 psi (1,310 bar). A handy fitting tighteningtool (AQ0-8530) is available to facilitate achievement of a leak-free connection.Mobile Phase Restrictions• Kinetex EVO C18 columns are stable from pH 1 - 12 and can be used with typical reversed phase mobile phase (aqueous methanol, aqueous acetonitrile or appropriate aqueous buffer / methanol or aqueousbuffer / acetonitrile mixtures)• Kinetex C18, XB-C18, C8, Biphenyl and Phenyl-Hexyl columns are stable from pH 1.5 to 10* and can be used with typical reversed phase mobile phase (aqueous methanol, aqueous acetonitrile or appropriate aqueous buffer / methanol or aqueous buffer / acetonitrile mixtures)• Kinetex F5 and PFP columns are stable from pH 1.5 to 8.5 and can be used with typical reversed phase mobile phase (aqueous methanol, aqueous acetonitrile or appropriate aqueous buffer / methanol oraqueous buffer / acetonitrile mixtures)• Kinetex HILIC columns are stable from pH 2.0-7.5 and can be used with typical HILIC mobile phase (acetonitrile / aqueous buffer mixtures) * For isocratic conditions only.Use only high purity reagents and high quality chromatography grade solvents to prepare mobile phase. Trace impurities can dramatically degrade column lifetime. Degas and filter all mobile phase prior to use. Ensure sample (and matrix) are completely soluble / miscible with mobile phase. Immiscible solvents or buffer salt precipitation can permanently damage the column.Kinetex® Core-Shell Technology columns provideENGLISH performance gains on any LC system.Please carefully read these care and use notes toobtain the best results on your system.Avoid:• Operating below the lower pH limit specified for each Kinetex column as this will hydrolyze the bonded phase• Operating above the upper pH limit specified for each Kinetex column as this will dissolve the silica• Operating a Kinetex 1.3 µm column in the opposite direction to what is indicated by the arrow on the column tag• Immiscible solvents and buffers• Sudden pressure changesOperating BackpressureThe maximum operating pressure for Kinetex 5 µm and 2.6 μm columnsis 8,700 psi (600 bar)*, and for Kinetex 1.7 μm and 1.3 µm columns it is15,000 psi (1,000 bar). The mobile phase flow rate should be set suchthat the column backpressure does not exceed this maximum operating pressure. Note that operating at or near the maximum pressure willresult in shorter column lifetimes.* 2.1 mm ID columns are pressure stable up to 1,000 bar.Operating TemperaturesKinetex columns can be used up to a maximum temperature of 60 °C. Reduced mobile phase viscosity (and backpressure) and increasedmass transfer rates will be realized above 25 °C. When operating athigh pH (> 8), lower operating temperatures are recommended forlonger column lifetime. Note that operating at or near the maximum temperature will result in shorter column lifetimes.Column Cleaning and RegenerationIf an increase in operating backpressure is observed, reverse flushthe column (do not try this on any Kinetex 1.3 µm column or any other manufacturers’ columns) with reduced flow rates indicated below:2.1 mm0.1 mL/min3.0 mm0.3 mL/min4.6 mm0.5 mL/minReversed Phase (C18, EVO C18, XB-C18, C8, Biphenyl, Phenyl-Hexyl, F5 and PFP)Kinetex reversed phase columns can be cleaned by flushing with 10 to20 column volumes of the following solvent mixtures in succession:1) 5:95 Acetonitrile / Water (or Methanol / Water) for buffer removal2) 95:5 Acetonitrile / Water (or Methanol / Water)3) THF (Tetrahydrofuran)4) 95:5 Acetonitrile / Water (or Methanol / Water)5) 5:95 Acetonitrile / Water (or Methanol / Water)6) Equilibrate with mobile phaseHILICKinetex HILIC columns can be cleaned by flushing with 10 to 20 column volumes of:1) 95 % Water / 5 % Acetonitrile (For buffer removal)2) 95 % 100 mM Ammonium Acetate, pH 5.8 / 5 % Acetonitrile3) 95 % Water / 5 % Acetonitrile4) Equilibrate with mobile phaseColumn StorageReversed Phase (C18, EVO C18, XB-C18, C8, Biphenyl, Phenyl-Hexyl, F5 and PFP)Column storage for a period longer than several days is recommended in ≥ 50 % (v/v) acetonitrile or methanol in water. If the mobile phase contained buffer salt, then flush the column with 10 to 20 column volumes of water / acetonitrile or water / methanol to remove the buffer salts before storage. After flushing the column, insert column end plugs securely to prevent evaporation and drying out of the column bed. HILICColumn storage for a period longer than several days is recommended in 90 % (v/v) acetonitrile in water. If the mobile phase contained buffer salt, then flush the column with 10 to 20 column volumes of 90:10 acetonitrile / water to remove the buffer salts before storage. After flushing the column, insert column end plugs securely to prevent evaporation and drying out of the column bed.Kinetex 1.3 µm Operating TipsEvery care should be made to prevent and eliminate microbial growth in mobile phase reservoirs and UHPLC system plumbing when using a Kinetex 1.3 µm column. Some general recommended tips include: Solvents: Use ultra-pure, high quality UHPLC solventsAqueous Mobile Phases: Change daily or add 5-10 % organic modifier to waterMobile Phase-Reservoirs: Rinse aqueous reservoirs with methanol prior to refillingUHPLC System: Flush with isopropanol or methanol weekly OPTIMIZING THE PERFORMANCEOF YOUR KINETEX® COLUMNFlow RateKinetex columns are capable of maintaining high efficiencies with increasing flow rate. To reduce analysis times using Kinetex use shorter length columns (30, 50 or 75 mm) and increase the mobile phase flow rate.There is an optimal Kinetex column for your system and operating conditions.Visit/optimizeto determine the starting Kinetex columndimensions for your method.Subject to Phenomenex Standard Terms and Conditions which may be viewed at /TermsAndConditionsTrademarks Kinetex is a registered trademark, SecurityGuard is a trademark of Phenomenex. Kinetex EVO is patented by Phenomenex. U.S. Patent Nos. 7,563,367 and System OptimizationKinetex ® 2.6 µm core-shell columns operate comfortably withinthe pressure limits of conventional HPLC instruments and rival the performance of sub-2 µm fully porous particles achieved on UHPLC instruments. However, to maximize the benefits from your Kinetex core-shell column do the following:• Minimize sample dispersion before the column1. Gradient elution will minimize dispersion2. In isocratic elution, use an injection solvent that’s weaker than your mobile phase• Optimize detector settings by adjusting the scan rate and/or the time constant to the fastest possible setting such that signal-to-noise (s/n) is not adversely affected.• Minimize the extra-column volume between the injector and the column, and between the column and the detector1. Minimize the length of all connection tubing2. Use 0.12 mm ID (0.005 in.) tubing whenever possiblea) 0.17 mm ID (0.007 in.) tubing is acceptableb) Avoid, if possible, using 0.25 mm ID (0.010 in.) tubing3. Use extremely low dead-volume fittings4. Ensure all connecting tubing is seated properly at every connection • Use a micro volume flow-cell1. Standard flow cells on conventional LC systems can be >10 µL2. For best results, replace standard flow cells with <3 µL flow cells (<2 µL when using 2.1 mm ID columns)NOTE : To convert existing HPLC and UHPLC methods for use on Kinetex columns we have created a conversion calculator, available on the Phenomenex website: /optimizeExtending Column LifetimePhenomenex recommends the use of the SecurityGuard ™ ULTRA guard cartridge system to extend the lifetime of your Kinetex column, especially with samples extracted from complex matrixes. Ideally, samples must be completely dissolved in the mobile phase or filtered through a syringe filter of approximately 0.20 µm porosity.ENGLISH SecurityGuard ULTRA Cartridge Holder Cartridge HolderOrdering InformationAJ0-9000SecurityGuard ULTRA Cartridge Holder ea SecurityGuard ULTRA Cartridges© 2015 Phenomenex, Inc. All rights reserved.技术规范保存溶剂• Kinetex® C18、EVO C18、XB-C18、C8、Biphenyl、Phenyl-Hexyl、F5和PFP寄送时保存在乙腈/水中（≥ 50:50 v/v; 确切比例取决于柱规格）• Kinetex HILIC保存在乙腈/水90:10（v/v）中测试证书每支Kinetex C18、EVO C18、XB-C18、C8、Biphenyl、Phenyl-Hexyl、F5和PFP色谱柱在装运前都经单独测试。
HILIC柱使用注意
HILIC柱使用注意
1.首次使用时，用50%水：50乙腈（缓冲终浓度10mM）平衡50倍
柱体积；
首次进样前，用流动相平衡20倍柱体积；
走梯度时，每个样之间平衡10倍柱体积。
2.柱体积：150mm*2.1mm，3µm→0.5mL；
100mm*2.1mm，3µm→0.4mL；
50mm*2.1mm，3µm→0.1mL。
3.pH适用范围：1-5，配完流动相后测pH。
4.流动相中至少有5%的极性溶剂（如水，甲醇或3%甲醇/2%水），
至少有40%有机溶剂（乙腈）。
5.乙酸铵或甲酸铵作为缓冲的重现性比甲酸或乙酸好。
如果必须用，
0.2%的浓度更合适。
6.样品溶剂最好是100%有机溶剂（如乙腈），尽量避免用水或者
DMSO溶样品。
7.洗针液和purge的极性溶剂浓度与流动相一样高。
8.流动相pH的选择：
甲酸铵：2.75—4.75
乙酸铵：3.76—5.75。
9.起始摸条件时，走梯度：95%乙腈→50%乙腈；若无保留，等度，
流动相用95:3:2（乙腈：甲醇：水缓冲液）。
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HILIC色谱柱的使用注意事项
a)HILIC色谱柱的平衡
i.使用50倍柱体积的50/50的乙腈/水相缓冲溶液（缓冲液的最终浓度为10mM）平
衡新色谱柱
ii.在开始进样前，用20倍柱体积的起始流动相平衡色谱柱
iii.进行梯度分析时，进样间隔需要用10倍柱体积起始流动相平衡色谱柱说明：色谱柱平衡不充分将导致保留时间漂移
b)HILIC流动相需要注意的问题
i.流动相中总是至少保持5％的极性溶剂（如5％水相缓冲液，5％甲醇或3％甲醇/2%
水相缓冲液等），这保证HILIC硅胶填料始终被水浸润
ii.在流动相或梯度中至少保持有机溶剂（如乙腈）的比例不低于40％
iii.不要使用磷酸盐缓冲溶液体系，因为磷酸盐缓冲液在HILIC色谱模式下会析出；
使用磷酸则没有问题
iv.缓冲系统如甲酸铵或乙酸铵水溶液比甲酸或乙酸的水溶液有重现性更好的结果。
如果不能使用缓冲液而一定要使用流动相添加剂如甲酸，最好使用0.2%的浓度而
非0.1%
v.为得到最好的峰形，在流动相或梯度中总是保持缓冲系统的浓度为10mM
c)HILIC进样溶剂需要注意的问题
i.如果可能，尽量用100％乙腈溶解样品进样。
避免使用水配制样品溶液，请选择
较弱的HILIC溶剂如乙腈、甲醇、异丙醇等配制样品溶液。
ii.最常用的进样溶剂为75/25 乙腈/甲醇，这个体系充分平衡了样品的溶解度和峰形两个因素。
iii.不要用水或DMSO做进样溶剂，它们将导致峰形变得很差
iv.使用反相SPE技术将水或DMSO置换成乙腈再进样。
如果不能这样操作，用有机溶剂稀释水或DMSO。
d)其它有关使用HILIC的建议
i.开始时可以运行一个95％乙腈至50％乙腈的梯度，如果样品不保留，使用95/3/2
乙腈/甲醇/水相缓冲溶液的流动相进行等度分析
ii.将流动相中的水换成甲醇、丙酮或异丙醇也可以增加极性化合物的保留
iii.请确保弱洗针溶剂/冲洗溶剂包含和流动相一样的高比例有机相，否则峰形会受到影响
、再生和保存
第四节色谱柱清洗
色谱柱清洗、
A.清洗和再生
压力骤然升高，保留时间或分离度发生波动往往表明色谱柱被污染了。
请根据如下说明清洗色谱柱。
硅胶色谱柱：用50/50的乙腈/水清洗以去除极性污染物。
如果清洗无效，可用5:95的乙HILIC硅胶色谱柱
腈:水清洗色谱柱.
如果系统压力上升至超过设定的压力限或者突然出现色谱峰分叉，通常是需要更换保护柱的信号。
B.色谱柱的保存
如果四天之内不使用色谱柱，请将柱子保存在95％乙腈中；不要将色谱柱保存在缓冲盐流动相中，如果流动相中含有缓冲盐，先用10倍柱体积的HPLC级水清洗色谱柱然后换上95％乙腈保存。
如果中间不用水“过渡”清洗有可能在使用95％乙腈时造成盐析出。