微生物平板划线法
微生物平板划线法
2
培养基
在土壤、水、食品、空气以及人和动、植 物中，不同种类的细菌混杂地生活在一起。若 要研究其中某种细菌，就必须将各细菌进行 分离，以得到只含有这一种细菌的纯培养。当 细菌分离成纯种后，常需要接种到有关的培养 基中，以测试其各种生物学性状，不同的细菌
需要不同的培养基进行培养。
培养基的种类
按其物理性状分为： 固体培养基 液体培养基 半固体培养基
变形杆菌培养 物痢疾杆菌培
养物 半固体琼脂
培养基
平板划线法
平板划线法主要是借划线而将细菌在琼脂 平板表面分散开，使单个细菌能固定在某一点， 生长繁殖后形成单个的菌落从而达到分离纯种 的目的。常用于分离单个菌落，也可用于观察 细菌的生长状况和观察某些生化反应。
平板划线法——接种方法
（一）标记 在培养皿底面，用记号笔注明接种
（4）旋转琼脂平板90度，接种环不必再灭菌 ，接三区连续平行划线，划满平板其余部分，此 视为四区。
各区接种线间尽量互不交接，以达到细菌逐 渐稀释的目的。
平板划线法——接种方法
平板划线法——接种方法
（5）划线完毕，将琼脂平板放进皿盖，将培养 皿倒放，送进37℃温箱培养。
（6）培养18~24h后将培养皿取出。观察琼脂平 板表面生长的各种菌落，注意其大小、形状、边 缘、表面结构、透明度、颜色等性状。
的菌名、接种者姓名、日期等。
平板划线法——接种方法
（二）灭菌接种环 点燃酒精灯，右手以持笔式握持接种环
，并放置火焰中烧灼灭菌，先将接种环的接 种丝部分置于火焰中，待金属丝烧红并蔓延 至金属端，再直接烧灼金属环直至烧红，然 后由金属环至金属杆方向快速通过火焰，随 后再反方向通过火焰，如此2~3次。然后将接 种环移开火焰，待其冷却。
细菌划线分离的操作方法
细菌划线分离的操作方法
细菌划线分离是一种常用的微生物学实验技术，它可以将混合菌液中的不同种类的细菌分离出来，以便进行单独的研究和分析。
下面将介绍细菌划线分离的操作方法。
准备好所需的实验器材和试剂，包括培养基、平板、移液管、酒精灯、无菌匀板器、无菌棉签等。
将培养基熔化并冷却至适宜的温度，然后将平板倒置于无菌工作台上。
接着，用无菌匀板器将混合菌液均匀地涂抹在平板上，然后用无菌棉签在涂有混合菌液的平板上划线。
划线的方法有两种，一种是直接在平板上划线，另一种是在平板上贴上无菌的划线纸，然后在划线纸上划线。
划线的目的是将不同种类的细菌分离开来，以便于单独的培养和观察。
划线完成后，将平板放入恒温箱中进行培养。
不同种类的细菌在不同的温度下生长，因此需要根据不同的细菌种类选择适宜的温度进行培养。
一般来说，常见的细菌在37℃下培养24小时左右即可。
培养完成后，观察平板上的菌落情况。
不同种类的细菌在平板上形成的菌落形状、颜色、大小等都有所不同，可以通过这些特征来判断不同种类的细菌是否被成功分离。
如果需要进一步鉴定细菌种类，可以进行生化试验或分子生物学检测等方法。
将分离出来的细菌进行单独的培养和保存。
单独培养可以更好地研
究细菌的生长特性、代谢途径、致病机制等，而保存可以保证细菌的长期保存和使用。
细菌划线分离是一种简单而有效的微生物学实验技术，可以将混合菌液中的不同种类的细菌分离出来，为后续的研究和分析提供了便利。
《平板划线试验》课件
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接种细菌：用无菌接种环蘸取细菌 培养物，在平板上均匀涂抹
观察结果：培养结束后，观察细菌 的生长情况，记录结果
划线分离
准备平板：选择合 适的平板，如琼脂 平板、培养基平板 等
划线：使用无菌操 作，将菌液或菌落 均匀地涂布在平板 上
干燥：将涂布好的 平板放在干燥箱中 干燥，使菌液或菌 落干燥
划线深度过浅或过深都会影响实验结 果，应保持适中的深度
划线角度过大或过小都会影响实验结 果，应保持适中的角度
划线过程中应避免划破平板，以免影 响实验结果
划线过程中应避免划破平板，以免影 响实验结果
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平板划线试验
汇报人：
目录
PART One
添加目录标题
PART Two
平板划线试验简介
PART Three
平板划线试验的步 骤
PART Five
平板划线试验的注 意事项
PART Four
平板划线试验的应 用
单击添加章节标题
平板划线试验简介
平板划线试验的定义
平板划线试验是一 种微生物分离和纯 化的方法
实验结束后，应及时清理实 验台和设备，保持实验室整 洁
实验结果应及时分析，包括 菌落形态、生长情况、抗药
性等
实验报告应及时撰写，包括 实验目的、方法、结果、讨
论等
影响实验结果的因素及解决方法
平板划线试验的准确性受划线速度、 划线深度、划线角度等因素的影响
划线速度过快或过慢都会影响实验结 果，应保持适中的速度
特性
菌落计数：通 过平板划线试 验，可以计算 细菌的数量和
微生物的实验室培养2
5、菌种的保存
1、临时保藏：
接种到固体斜面培 养基，菌落长成后 置于4℃冰箱保存。
2、长期保存：
甘油冷冻管藏法
微生物的类群
病毒界 原核生物界（如细菌、放线菌等） 真菌界（如酵母菌、霉菌等） 原生生物界
•细菌的结构
细胞壁 一般结构 细胞膜
细胞质(核糖体、质粒等) 拟核
特殊结构 荚膜、鞭毛、芽孢
培养基的配制
培养基的种类
• 理想的凝固剂应具备以下条件： –不会被微生物分解利用； –不会因高温灭菌而受到破坏； –在微生物生长的温度范围内保持固体状态 –对微生物及操作人员均无毒害作用； –透明度好、凝固力强； –价格低廉，配制方便。
• 常用的凝固剂——琼脂
–主要成分是硫酸半乳聚糖 –熔点为96℃
凝固点为40℃ –透明度强。
一、无菌技术
A.培养细菌用的培养基或培养皿 灭菌 B.玻棒、试管、烧瓶和吸管 灭菌 C.接种环、接种针 灭菌 D.实验操作者的双手 消毒
二、基本操作程序
1、器具的灭菌 2、培养基的配制 3、培养基的灭菌 4、倒平板 5、微生物接种 6、恒温箱中培养 7、菌种的保存
A.培养细菌用的培养基或培养皿。 B.玻棒、试管、烧瓶和吸管。 C.接种环、接种针。 D.实验操作者的双手。
一、无菌技术
消毒
使用较温和的物理或化学方法仅杀死物 体表面或内部一部分对人体有害的微生 物（不包括芽孢和孢子）。
灭菌
使用强烈的理化因素杀死物体内所有的 微生物，包括芽孢和孢子。
一、无菌技术
• 不加氮源的无氮培养基 分离固氮菌
• 不加含碳有机物的无碳培养基 分离自养型微生物
• 加入青霉素等抗生素的培养基 分离导入了目的基因的受体细胞
平板划线法操作要点docx
平板划线法操作要点 .docx 平板划线法是一种常用的微生物分离纯化方法，用于将一个菌种的单个菌落进行分离、纯化和繁殖。
下面是平板划线法的操作要点：
1.准备所需材料：平皿、接种环、酒精灯、无菌棉签、镊子、培养基等。
2.将培养基倒入平皿中，用无菌棉签均匀涂布在培养基表面。
3.用镊子取出一块无菌滤纸，将其在酒精灯上灼烧后冷却，然后将其放置在培
养基表面。
4.用接种环取少量待分离的菌液，在滤纸上划线，注意不要将线划得过细或过
粗，以避免影响分离效果。
5.将平皿放置在适宜的温度下培养，观察菌落的生长情况。
如果需要，可以进
行第二次划线，以进一步纯化菌落。
6.当菌落长成后，用镊子将单个菌落取出，并将其接种到新的培养基上，以进
行下一步的实验或保存。
注意事项：
1.整个操作过程中，必须保证无菌操作，以避免污染。
2.在划线时，要注意力度和角度，以避免菌液过多或过少。
3.在培养过程中，要保持适宜的温度和湿度，以促进菌落的生长。
4.在取出单个菌落时，要用镊子轻轻夹住菌落，避免将其周围的培养基弄碎。
5.在进行下一步实验或保存之前，要对菌落进行最后的检查，以确保其纯度和
质量。
平板划线法是一种简单而有效的微生物分离纯化方法，但需要一定的操作技巧和经验。
通过不断实践和总结经验，可以逐步提高操作水平和实验效果。
培养基平板划线法实训报告
一、实训目的1. 掌握平板划线法的原理和操作步骤。
2. 熟悉微生物分离纯化的基本方法。
3. 培养无菌操作技能和实验操作规范。
二、实训时间2022年10月15日三、实训地点生物实验室四、实训器材1. 实验材料：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、大肠杆菌混合菌悬液、无菌培养皿、接种环、酒精灯、无菌棉签等。
2. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、显微镜等。
五、实训原理平板划线法是一种常用的微生物分离纯化方法。
其原理是利用接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，最终在适宜的条件下形成单菌落，从而分离纯化微生物。
六、实训步骤1. 培养基制备：将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基放入水浴中加热至融化，待冷却至50℃左右，按无菌操作法倒入无菌培养皿中，平置待凝固。
2. 灭菌操作：点燃酒精灯，用无菌棉签蘸取酒精，在酒精灯火焰上方进行消毒，待酒精燃烧完毕后，用无菌接种环蘸取少量大肠杆菌混合菌悬液。
3. 划线操作：将接种环在平板培养基表面连续划线，划线方向应与上一划线方向呈垂直，划线次数根据菌种生长速度和菌液浓度进行调整。
4. 分区培养：将划线后的平板放入恒温培养箱中，根据菌种生长速度设定培养温度和时间。
5. 观察结果：观察培养皿中的菌落生长情况，记录菌落特征，如大小、形状、颜色等。
6. 鉴定纯化：挑选典型单菌落，进行纯化培养，以获得纯种微生物。
七、实训结果与分析1. 划线操作：在平板划线过程中，接种环在培养基表面连续划线，划线方向应与上一划线方向呈垂直，划线次数根据菌种生长速度和菌液浓度进行调整。
2. 分区培养：将划线后的平板放入恒温培养箱中，根据菌种生长速度设定培养温度和时间。
本实验中，大肠杆菌生长速度较快，培养温度设定为37℃，培养时间为24小时。
3. 观察结果：在培养皿中观察到典型单菌落，菌落呈圆形、表面光滑、边缘整齐，颜色为白色。
记录菌落特征，如大小、形状、颜色等。
4. 鉴定纯化：挑选典型单菌落，进行纯化培养，以获得纯种微生物。
微生物平板划线试验
在液体培养基中加入一定量凝固 剂，使其成为固体状态，琼脂含 量一般为1.5%-2.0%
按 物 理 状 态 不 同 划 分
固体培养基 半固体培养基
固体培养基常用来进行微生物的分 离、鉴定、活菌计数及菌种保藏
琼脂含量一般为0.2%-0.7%
观察微生物的运动特征、分类鉴 定及噬菌体效价滴定
液体培养基
不加任何凝固剂 大规模工业生产及在实验室进行 微生物的基础理论和应用方面的 研究
平板划线实验实习
一、相关基础理论－－细菌的培养
一般细菌均可用人工方法进行培养，使其生长繁殖， 以便进一步观察和研究他们的各种生物学特征。为 了获得良好的细菌培养物，在分离培养细菌时，除 采用适宜的培养基，并考虑到其他的培养条件之外， 掌握各种分离培养和接种的基本技术，也是重要环 节。
1、培养基
圆形、突起、边缘整齐、表面光滑、湿润、有光泽， 不透明菌落，直径1～2mm
4、平板划线接种法
图2-4 灭菌接种环
4、平板划线接种法
（3）取菌种 左手持装有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌菌液的 试管，用持有接种环的右手手掌及小指拔取试管塞， 将试管管口迅速通过火焰2~3次进行灭菌。 将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中，取 一接种环的菌液，然后退出菌种管，将菌种管管口 再次通过火焰2~3次灭菌，塞好试管塞，放至原来 的位置。
2、液体培养基接种方法
步骤:（1）用记号笔在待接种培养基上写明标记。 （2）如斜面培养基的接种方法一样，握持菌种管及 接种的肉汤管。 （3）接种环灭菌冷却后，伸入菌种管取少量细菌再 伸入肉汤管内，在接近液面管壁处轻轻研磨， 蘸取少量肉汤调和，使菌混于肉汤中。塞好试 管塞后，摇动液体，使细菌在液体中均匀分布。 （4）接种完毕，将接种环灭菌后放回试管架上。肉 汤管放37℃温箱培养，18～24小时后观察生长 情况。
平板划线接种法步骤
平板划线接种法步骤平板划线接种法是一种用于真菌、细菌等微生物的纯化和鉴定的一种常用方法。
它是通过将微生物的菌落传到平板上，然后用棉签或者铁环划线，将不同的菌落分离开来，以实现纯化和鉴定的目的。
下面将详细介绍平板划线接种法的步骤。
步骤一：准备工作1.打开洁净台，先用五氯酚消毒平板台面和其他实验用具，然后再用75%酒精擦洗。
确保实验室环境的洁净。
步骤二：取菌落1.找到需要接种的菌落，可以在菌液、菌片、菌种保存平板等上找到适合接种的菌落。
注意要选取状态良好、菌落独立、颜色明显的菌落。
2.使用无菌的铁环或棉签，在菌液、菌片、菌种保存平板等培养物上取菌。
取菌时要尽量避免将其他菌落混入。
步骤三：接种菌落1.将铁环或棉签放入需要接种的琼脂平板中，使用铁环主要是为了划线。
如果使用棉签，则可以先将棉签沾湿后再进行划线。
2.环绕铁环或棉签绕菌液、菌片等培养物附着的地方，注意不要刺破琼脂平板。
如果是用铁环进行划线，可以在琼脂平板上轻轻划动。
步骤四：连续纯化1.完成第一次接种后，在第一次接种的菌落周围进行第二次划线接种，接种方法同第一次。
2.每次划线时要注意将不同的菌落划到不同的区域，以确保菌落之间的纯化。
步骤五：培养和观察1.接种完成后，将平板盖子扣紧，将平板竖立放置，放在适当的温度下培养。
2.观察菌落的生长情况，可以根据菌落的形态、颜色、大小、透明度等性状进行鉴定，重复划线接种步骤，直到得到纯化的菌落。
以上就是平板划线接种法的步骤。
通过这种方法，可以有效地将不同的菌落分离开来，实现菌落的纯化和鉴定。
在操作过程中要注意无菌操作，尽量避免污染。
此外，根据不同的实验需求，还可以进行一系列的后续操作，如菌落转种、菌液接种等，以实现对微生物的进一步研究和应用。
平板划线实验报告
一、实验目的1. 熟悉平板划线法的基本原理和操作步骤。
2. 掌握无菌操作技术，提高实验操作能力。
3. 学习从混合微生物群体中分离纯化单一微生物的方法。
二、实验原理平板划线法是一种常用的微生物分离纯化方法。
其原理是将混合微生物涂布于固体培养基表面，通过接种环在培养基上划线，使微生物在培养基上逐渐稀释，最终形成单个菌落，从而实现微生物的分离和纯化。
三、实验器材1. 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基2. 实验器材：无菌培养皿、接种环、酒精灯、无菌棉签、无菌生理盐水、显微镜等四、实验步骤1. 准备工作（1）将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基放入水浴中加热至融化。
（2）待培养基冷却至50℃左右，按无菌操作法倒2只平板（每皿约15ml），平置，待凝固。
2. 划线分离（1）将接种环在酒精灯上灼烧灭菌，待冷却后，用无菌棉签蘸取待分离的微生物悬液。
（2）在平板培养基上划一条直线，接种环从一侧划到另一侧，划线长度约5cm。
（3）用接种环从划线的一端开始，以螺旋状划线，逐渐减小划线面积，直至在平板上形成单个菌落。
（4）重复以上步骤，分别划线2-3次，使平板上的菌落数量适中。
3. 培养与观察（1）将平板放入恒温培养箱中，培养24-48小时。
（2）观察菌落生长情况，记录菌落特征，如菌落大小、形状、颜色等。
4. 鉴定（1）用接种环挑取单个菌落，接种于新的平板培养基上。
（2）重复培养和观察步骤，直至获得纯化后的微生物。
五、实验结果与分析1. 实验结果（1）平板上的菌落生长情况良好，菌落特征明显。
（2）通过多次划线分离，成功获得纯化后的微生物。
2. 实验分析（1）平板划线法是一种简单、有效的微生物分离纯化方法。
（2）无菌操作技术的掌握对实验结果至关重要。
（3）根据菌落特征，可初步判断分离纯化后的微生物种类。
六、实验总结本次实验成功运用平板划线法从混合微生物群体中分离纯化单一微生物。
通过实验，掌握了无菌操作技术，提高了实验操作能力。
同时，对微生物分离纯化的原理和方法有了更深入的了解。
微生物平板划线法实验报告
微生物平板划线法实验报告一、实验目的1. 熟悉常用微生物培养基的配置方法。
2. 学习并掌握各种无菌操作技术，并用此技术进行微生物稀释分离、划线分离接种。
3. 用平板划线法和稀释法分离微生物。
4. 认识微生物存在的普遍性，体会无菌操作的重要性。
二、实验原理土壤中有数量巨大、种类丰富的微生物，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。
从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
常用的是平板分离法。
平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释，使其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品含菌数。
三、实验器材土样10g，牛肉膏蛋白胨培养平板20个，未知菌种平板，当天降雪；平皿，涂棒，接种环，无菌200ul, 1000ul吸头，记号笔，酒精灯，取液器:1000ul 、200ul各一支，培养箱；0.9% 无菌生理盐水，250ml三角瓶中装99ml生理盐水,每瓶加约20粒玻璃珠，250ml三角瓶中99ml生理盐水,作100倍稀释用。
四、实验步骤1. 配置培养基：取牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g，蒸馏水1000ml 配置培养基，调pH至7.2，灭菌。
于讲课前倒板20块。
2. 采集野外样品：选择肥沃土壤,去表层土,挖5~20cm深度的土壤数10g,装入烧杯,带回实验室;取校河水装入烧杯，带回实验室；取新积雪中间层转入烧瓶，带回实验室。
3. 制备土壤稀释液：称取土样1.0g，放入盛99ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，用手振荡5min使土壤均匀分散成为土壤悬液（10-2）。
用200ul的无菌吸头从中吸取0.1ml土壤悬液，注入事先分装有0.9ml无菌水的试管中，吹吸3次，摇匀（10-3）。
类推制得10-4、10-5的土壤悬液。
微生物检验细菌的接种方法
微生物检验细菌的接种方法
常用的细菌接种方法有平板划线分离法、斜面接种法、穿刺接种法、液体和半固体接种法、涂布接种法等。
下面是yjbys小编为大家带来的关于微生物检验细菌的接种方法的知识，欢迎阅读。
一、平板划线分离法
平板划线分离法:是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。
有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必须反复分离多次才可得到纯种。
其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作由点到线稀释而达到分离目的的。
为方便划线，一般培养基不宜太薄，每皿约倾倒20ml培养基，培养基应厚薄均匀，平板表面光滑。
划线分离主要有分区划线法和连续划线法两种(如图1，A、B)。
分区划线法是将平板分四区，故又称四分区划线法。
划线时每次将平板转动60~70°划线，每换一次角度，应将接种环上的菌烧死后，再通过上次划线处划线;
另一种连续划线法是从平板边缘一点开始，连续作波浪式划线直到平板的另一端为止，当中不需灼烧接种环上的菌。
1)连续划线法
将琼脂平皿半开盖倒置于培养箱内至无冷凝水，接种环于酒精灯外焰烧至红透，接种棒也要充分灼烧，最后再集中烧接种环至红。
轻轻摇匀待接种试管，左手手心托待接种试管底侧部，右手执接种环，右手小指拔下试管塞，于酒精灯附近将接种环伸进试管，稍候，再插入待接接种液中，蘸一下，取满一环，抽出、烧塞、盖盖、放回试。
微生物的平板划线实施步骤
微生物的平板划线实施步骤简介微生物的平板划线是一种常见的实验技术，用于分离和培养微生物。
本文档将介绍微生物的平板划线的实施步骤，以帮助科研人员和实验室操作人员正确进行这项实验。
实施步骤1.准备实验室材料和试剂•平板培养基：根据实验需求选择适当的培养基。
•平板：使用无菌的平板，确保表面没有污染。
•微生物菌株：根据实验目的选择合适的微生物菌株。
•微量移液器和移液枪：用于准确地分配微生物样品。
•消毒液：用于消毒工作台和实验室用具。
2.操作准备•消毒工作台：使用消毒液擦拭工作台，确保无菌操作环境。
•打开无菌平板：将无菌平板打开并放置在工作台上，确保表面朝上。
•准备待划线的微生物样品：从保存的微生物培养物中取少量菌株，转移到无菌试管中。
3.划线操作•使用微量移液器或移液枪，将微生物样品滴入无菌平板上。
通常使用几种不同的浓度进行划线，以达到分离不同数量的微生物。
•选择合适的工具（如细胞划线棒），将微生物样品均匀地划线于平板表面。
可以选择直线或斜线方式进行划线。
•注意避免划线区域的交叉感染，每种微生物应有足够的空间进行生长。
•重复上述操作，直到所有的平板都完成划线。
4.平板培养•将划线完成的平板盖上密封膜，避免外界微生物污染。
•将密封膜上标记好实验信息，如时间、菌株名称等。
•将平板倒置放置于恒温培养箱中，根据菌株要求设定适当的温度和培养时间。
•培养结束后，观察平板上的菌落是否符合预期，记录相关数据。
5.清理工作•将使用过的实验器具进行合理的清理和消毒。
•处理好微生物废弃物，遵守实验室安全规范。
注意事项•实验操作中，严格遵循无菌操作的原则。
•在划线过程中，要保持手部清洁并定期更换手套，避免交叉感染。
•根据实验需要，合理选择划线方法和培养温度，以获取准确的实验结果。
•解读实验结果时，注意观察菌落形态和颜色的变化。
结论微生物的平板划线是一项常用的实验技术，用于分离和培养微生物。
本文档介绍了微生物的平板划线的实施步骤，涵盖了实验前的准备工作、划线操作、平板培养和清理工作等内容。
微生物接种方法划线法接种及注意事项平板划线接种.pptx
主讲：王娟
目录页
食品营养与检测专业教学资源库
划线法接种定义 试管斜面划线法接种
平板划线法接种
— 1—
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划
• 一、划线接种法定义
线
接 种
定义：
法
及
将微生物的纯种或含菌材料用接种环或接种针挑取，然后在固
注
体培养基表面画直线或曲线，达到接种的作用。斜面接种和平
意
板划线接种就常用此法。
事
项
— 1—
平板划线法接种
1.平板划线法定义 2.工作过程与标准要求
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— 2—
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划
• 三、平板划线接种
线
接 种
1.平板划线法接种定义
法 及 注 意 事
平板划线分离法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不 同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立 分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当 作待分离微生物的纯种。
注
意
事
项
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划
• 三、平板划线接种
线
接 种 法 及
2.工作过程与标准要求
（3）灼烧试管口 让试管口缓缓过火灭菌2~3次(切勿烧得过烫)。
注
意
事
项
— 1—
Байду номын сангаас
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划
• 三、平板划线接种
线
接 种 法 及 注 意
2.工作过程与标准要求
（4）取菌 将灼烧过的接种环伸入试管，先使环接触管内壁，使其冷却。 将已冷却的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液。 将试管口通过火焰，并塞上棉塞。
实验六 平板划线法分离菌种
实验六平板划线法分离菌种一、实验目的1、了解平板划线法分离菌种的基本原理2、练习平板划线法分离菌种的基本操作，掌握无菌操作技术二、实验原理平板划线法是指把杂菌样品通过在平板表面划线稀释而获得单菌落的方法。
一般是将混杂在一起的不同种微生物或同种微生物群体中的不同细胞，通过在分区的平板表面上作多次划线稀释，形成较多的独立分布的单个细胞，经培养而繁殖成相互独立的多个单菌落。
通常认为这种单菌落就是某微生物的“纯种”。
实际上同种微生物数个细胞在一起通过繁殖也可形成一个单菌落，故在科学研究中，特别是在菌种鉴定等工作中，必须对实验菌种的单菌落进行多次划线分离，才可获得可靠的纯种。
平板划线分离对细菌、酵母菌较为适宜，而霉菌和放线菌的分离多采用稀释分离法进行菌种的分离纯化。
具体的划线形式有多种，这里仅介绍一种经过长期实践并证明可获得良好实验效果的方法：将一个平板分成A、B、C、D4个面积不同的小区进行划线，A区面积最小，作为待分离菌的菌源区，B和C区为经初步划线稀释的过渡区，D区则是关键的单菌落收获区，它的面积最大，出现单菌落的概率也最高。
由此可知，这4个区的面积安排应做到D>C>B>A。
鉴别培养基是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使难以区分的微生物经培养后呈现出明显差别，因而有助于快速鉴别某种微生物。
这样的培养基称之为鉴别培养基。
例如用以检查饮水和乳品中是否含有肠道致病菌的伊红美蓝培养基就是一种常用的鉴别性培养基。
（参考GB4789.38-2012食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数）其配方中含有乳糖、伊红和美蓝，用以鉴别肠道病原菌及其他杂菌。
伊红、美蓝作为指示剂，伊红系酸性染料，当大肠埃希氏菌或产气肠杆菌分解乳糖产酸时，由于细菌带正电荷，所以被伊红着色。
在大肠埃希氏菌中因为伊红与美蓝结合，所以菌落不呈红色，而是蓝紫黑色，且具有绿色金属光泽；菌落呈棕色者为产气肠杆菌；不分解乳糖的肠道病原菌则不着色，有时因产生碱性物质较多，细菌带负电荷，被美蓝着色后，菌落并不呈蓝色，因美蓝与伊红结合，所以菌落为淡紫色。
微生物的纯培养 平板划线法
名词解释
1
平板划线分离法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细 胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单 个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生 物的纯种。有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必须反复分 离多次才可得到纯种。其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作 “由点到线”稀释而达到分离目的的。
划三到五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。 ⑦ 灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划
线，重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的 划线与第一区相连。 ⑧ 将平板倒置放入培养箱中培养。
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实验原理
分类
2
划线的形式有多种，可将一个平板分成四个不同面积的小区进行划线 第一区(A区)面积最小，作为待分离菌的菌源区，第二和第三区(B、C区） 是逐级稀释的过渡区，第四区（D区)，则是关键区，使该区出现大量的 单菌落以供挑选纯种用。为了得到较多的典型单菌落，平板上四区面积 的分配应是D>C>B>A
操作步骤
融化培养基
1
将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基放入水浴中加热至融化。
倒平板
2
待培养基冷却至50℃左右，按无菌操作法倒2只平板（每皿约 15mL），平置，待 凝固。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
步骤实施
① 将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红 ② 在火焰旁冷却接种环，并打开棉塞 ③ 将试管口通过火焰 ④ 将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液 ⑤ 将试管通过火焰，并塞上棉花 ⑥ 左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，
微生物接种方法
常用的几种微生物接种方法接种细菌应用接种针（环）来沾取细菌标本，进行接种。
接种环与接种针为用白金丝或合金丝所制，亦可用电炉丝代替，因它能耐高热且散热快，便于接种前后通过火焰灭菌（整个接种环烧红即达到灭菌目的）。
在使用接种环时一般用右手持笔式较为方便，左手可持培养基进行配合，其接种程序可分为：灭菌接种环→稍冷→沾取细菌样品→进行接种（包括：启盖或塞、接种划线、加盖或塞）→进行接种环灭菌等五个程序。
不同培养基，接种方法也不同，分述如下：一、平板划线接种法（分离培养法）是将细菌分离培养的常用技术，其目的是将混有多种细菌的培养物，或标本中不同的细菌（病原菌与非病原菌）使其分散生长，形成单个菌落或分离出单一菌株，便于识别鉴定。
平板划线接种方法较多，其中以分段划线法与曲线划线法较为常用。
（一）分段划线法平板分段划线(左)及培养后菌落分布图本法多用于含菌量较多的标本。
方法是以接种环沾取少许样品先涂布于平板培养基表面一角作为第一段划线（划线时接种环与培养基表面呈45度角），然后将接种环置火焰上灭菌，俟冷（可接触平板试之，如不融化琼脂，即已冷却），于第二段处再作划线，且在开始划线时与第一段的划线相交接数次，以后划线不必再相接，待第二段划完时，再如上法灭菌，接种划线，依次划至最后一段，灭菌接种环。
这样每一段划线内的细菌数逐渐减少，即以获得单个菌落，划线接种完毕，盖好平皿盖，倒置（平板底部向上）于37℃温箱中培养。
（二）连续划线法：此法多用于接种材料中含菌数量不太多的样品或培养物。
方法是先将样品或培养物涂于平板表面的一角，然后用接种环自样品涂擦处开始，向左右两侧划开并逐渐向下移动，连续划成若干条分散的平等线。
二、斜面接种法此法主要用于移种纯菌，使其增殖后用于鉴定或保存菌种。
通常是从平板培养物上挑取某一单独菌落或者从一支已长好的斜面菌种，移种至斜面培养基上，接种步骤如下（以从已长好的斜面菌种转接为例）：（一）左手拿两支试管，一支为经灭菌的斜面，另一支为已长好的菌种。
微生物平板划线法
在培养基上划线，使菌种分散成多个单菌落。
划线：在培养基上划线，将菌种分离成单菌落
用接种环在培养基上划线，将菌种分 离成单菌落。
划线时要从培养基的一端开始，逐渐 向另一端划线，避免交叉。
培养：将培养皿放入恒温箱中培养
将培养皿放入恒温箱中，在适宜的温 度下培养一定时间。
观察并记录菌落生长情况，进行微生 物计数和鉴定。
培养温度和湿度控制
温度控制
培养温度应控制在适宜范围内，一般为37℃ 左右。
湿度控制
保持培养环境湿度适中，避免过湿或过干影 响微生物生长。
定期检查
定期检查培养温度和湿度，确保在适宜范围 内。
04
微生物平板划线法的优缺 点
优点：分离效果好，操作简单
分离效果好
平板划线法能够将混合菌种中的不同微生物逐一分离，获得单一纯种微生物，分离效果显著。
的菌种筛选和鉴定。
微生物平板划线法的历史与发展
历史
最早的微生物平板划线法由英国细菌学家弗莱明于1928年发明，用于分离纯化葡 萄球菌。随着技术的发展，平板划线法不断得到改进和完善，成为微生物学领域 的基本技术之一。
发展
近年来，随着基因组学和合成生物学等新兴领域的发展，微生物平板划线法在技 术和应用方面不断有新的突破。例如，通过改进培养基和划线技术，提高微生物 的分离效率和纯度，进一步推动微生物学研究和生物工程领域的发展。
微生物平板划线法
汇报人：
汇报时间：202X-01-05
目录
• 微生物平板划线法简介 • 微生物平板划线法操作步骤 • 微生物平板划线法注意事项
目录
• 微生物平板划线法的优缺点 • 微生物平板划线法实验结果分析
01
微生物平板划线法简介
平板划线法注意事项
平板划线法注意事项平板划线法注意事项：1、划线时力度不能过大，以免划破培养基。
2、划线时第一区域不能与最后区域相连。
平板划线法通过反复划线分离，可获得微生物的纯种。
资料拓展常用的注射方法1、三点接种在研究霉菌形态时常用此法。
此法就是把少量的微生物注射在平板表面上，成等边三角形的三点，使它各自单一制构成菌落后，去观测、研究它们的形态。
除三点外，也有一点或多点展开注射的。
2、穿刺接种在中草药厌氧菌种或研究微生物的动力时常使用此法。
搞外科手术注射时，用的注射工具就是注射针，用的培养基通常就是半液态培养基。
用注射针煮挑少量的菌种，沿半液态培养基中心向管底并作直线外科手术，如某细菌具备鞭毛而能够运动，则在外科手术线周围能生长。
3、浇混接种将待接的微生物和45℃左右的液态培养基展开混合，这样菌液就达至吸收的目的，等待平板凝结之后，复置最合适温度下培育，就可高出来单个的微生物菌落。
4、涂布接种将菌液放入凝结的平板上面，用涂敷厉害在表面并作往复左右的涂敷，使菌液均匀分布，就可高出来单个的微生物的菌落5、注射接种用口服的方法将待接的微生物桥接至活的生物体内，如人或其它动物中，常用的疫苗预防接种，就是用口服注射，互连人体，去防治某些疾病。
6、活体接种活体注射就是专门用作培育病毒或其它病原微生物的一种方法，因为病毒必须注射于活的生物体内就可以生长产卵。
所用的活体可以就是整个动物；也可以就是某个离体活非政府，比如猴肾等；也可以就是发育的鸡胚。
注射的方式就是口服，也可以就是煮料喂食。