微生物实验—三平板分离技术1

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土壤微生物的分离纯化实验：微生物的分离、培养和菌种保藏

思考题
❖ 什么叫无菌操作？分离放线菌和真菌为什么需要分别加重铬酸钾和链霉素？
❖ 平板培养时为什么要把培养皿倒置？ ❖ 如何确定平板上某单个菌落是否为纯培养？
Байду номын сангаас
实验七
结束
下周实验
理化因素对微生物的影响
（实验三十二、实验三十四、实验三十八）
每毫升样品中微生物细胞数=
每皿菌落平均数 × 稀释倍数 × 1/取样体积数
混匀凝固
28～30℃ 培养
图7－4 混合法流程图
实验程序 Ⅳ——平板涂抹法（涂布法）
❖ 每人取无菌培养皿1付（每个同学做一只）。在皿底贴上标签，注明分离菌名、稀释度、组别、班级。
❖ 取已熔化的高氏培养基，分别倒15－20ml入培养皿中，铺平，制成平板。
养皿里。 ❖ 3.取已熔化的在水浴锅中保温500C左右的马铃薯培养基（PDA培养基），
分别倒约15－20ml入上述培养皿中，轻轻转动培养皿，使菌液、培养基充分混匀铺平，放在平坦的桌面上，凝固后，倒置于28～300C恒温培养 5～6d。观察真菌菌落形态以及计数菌落。并计算出每g土壤中真菌的数量。即用某一培养皿内真菌的菌落数乘以该培养皿接种液的稀释倍数即得。（见图7－4）
挑取单个菌落接种于斜面培养基上，如果不纯，再移植纯化，最后得到纯培养。
实验程序Ⅵ——四大类微生物菌落形态的比较和
识别
❖ 区分和识别各大类微生物通常包括菌落形态（群体形态）和细胞形态（个体形态）两方面的观察。
❖ 菌落形态：菌落表面湿润：细菌——薄而小，酵母菌——厚而大。菌落表面干燥：放线菌——密而小，霉菌——松而大。
淀粉琼脂培养基马铃薯蔗糖培养基
❖ 无菌水：带有玻璃珠装有99mL无菌水三角瓶

菌种的分离纯化技术——平板划线法

划线的形式有多种，可将一个平板分成四个不同面积的小区进行划线,
第一区(A区)面积最小，作为待分离菌的菌源区，第二和第三区(B、C区) 是逐级稀释的过渡区，第四区(D区)，则是关键区，使该区出现大量的单菌落以供挑选纯种用。为了得到较多的典型单菌落,平板上四区面积的分配应是D＞C＞B＞A。
实验目的
态结构等特征的子细胞的群落。

当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。
菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养
温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。

菌苔：细菌在固体培养基接种线上由母细胞繁殖长成的一片密集的、具有一定形态结构特征的细菌群落，是许多菌落连成一片形成的细菌在斜面培养基接种线上长成的一片密集的细菌群落，不同属种细菌的菌苔形态是不同的

了解平板划线分离纯种的原理，并熟练掌握该操作法。
实验器材
Βιβλιοθήκη 菌悬液牛肉膏蛋白胨培养基无菌培养皿，水浴锅，接种环等。
实验步骤
1．融化培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基放入水浴中加热至融化。 2．倒平板：待培养基冷却至50℃左右，按无菌操作法倒2只平板(每皿约15m1)，平置，待凝固。
实验原理平板划线分离法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞经培养后生长繁殖成单菌落通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种
平板划线技术
王伟青
名词的认识：

菌落：由单个细菌（或其他微生物）细胞或一堆同种细胞在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度；形成肉眼可见有一定形

微生物的分离和纯化实验原理及步骤

实验五微生物的分离和纯化
实验目的：
掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术。

实验原理：
从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。

常用的方法有简易单细胞挑取法；平板分离法。

本实验采用平板分离法：该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化，包括两个方面
1．选择适合于待分离微生物的生长条件等要求或者加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物；2．微生物在固体培养基生长形成的单个菌落可以是一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通
过挑取单菌落而获得一种纯培养。

获得单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术来完成的。

单个菌落并不一定保证是纯培养，纯培养的确定除观察其菌落特征外还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定。

实验器材：
1．菌种米曲霉 (Aspergillus oryzae)。

2．培养基高氏Ⅰ号培养基，牛肉膏蛋白胨培养基，马丁氏琼脂培养基，查氏琼脂培养基。

3．溶液或试剂 10%酚，盛9ml无菌水的试管，盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶，4%水琼脂。

4．仪器或者其他用具无菌玻璃涂棒，无菌吸管，接种环，无菌培养皿，链霉素和土样，显微镜，血细胞计数板等。

微生物实验

微生物学实验实验一一、目的要求二、基本原理➢➢➢三、实验材料每组同学需要准备以下材料（2人/组）：●●●●●●●●●●●●●●四、实验内容（一）、培养基的配制：注意：标签用铅笔书写，以防高温灭菌时蒸汽模糊字迹。

操作图示：四、实验内容培养基配方：1．配制肉汤斜面培养基50 mL 2．配制麦芽汁斜面培养基3．注意事项：◆◆◆◆（二）培养基灭菌四、实验内容（三）包扎1．培养皿：2．吸管：3．三角玻扒：五、实验报告思考题：◆◆◆◆◆◆◆◆实验二一、目的要求➢➢二、基本原理三、实验材料1．各组所需的物品●●●●2．注意事项：①②①②③④四、实验内容1．微生物的斜面接种技术：斜面接种的操作方法：转下页接种菌名及接种划线方式、接种工具：细菌：霉菌：酵母菌：图2-1 各种无菌操作接种技术示意图图2-2 穿刺接种操作过程示意图2．生物的培养技术——培养箱恒温培养法3. 为下次实验准备平板培养基：注意：标签用铅笔书写，以防高温灭菌时蒸汽模糊字迹。

培养基配方：(1)配制肉汤平板培养基100 mL(2)配制麦芽汁平板培养基配制好的培养基进行灭菌！五、实验报告1．观察记录实验结果:微生物琼脂斜面上的生长状况。

2．思考题:◆◆实验三一、目的要求●●二、基本原理三、实验材料1、各组所需物品：•••••2、平板的制备：四、实验内容1. 平板混合分离法：大肠杆菌，枯草杆菌，单球菌（3皿）图3-1 混合倒平板操作法示意图四、实验内容2. 平板划线分离法：（3皿）图3-2 平板划线分离操作法示意图图3-3 平板划线菌落分离效果图四、实验内容3. 平板涂布分离法(3皿)：图3-4 涂布平板操作法示意图四、实验内容4. 平板点殖：黑曲霉，黄曲霉，根霉（3皿）四、实验内容5. 生物的培养技术：培养箱恒温培养法➢➢五、实验报告1、观察记录实验结果：微生物的菌落特征注:菌落特征描写方法参考如下：五、实验报告2、思考题:实验四一、目的要求二、基本原理转下页二、基本原理三、实验材料1. 菌种：2. 每组制片用具：3. 染色剂1套：四、实验内容四、实验内容3.细菌、酵母菌、霉菌的制片技术及个体形态观察：●●●图4-10 涂片制备过程四、实验内容4 注意事项：●●●●。

分离细菌的实验报告

一、实验目的1. 学习细菌分离和纯化的基本方法。

2. 掌握平板划线法和稀释涂布平板法分离纯化细菌。

3. 了解细菌纯化过程中的注意事项。

二、实验原理细菌分离和纯化是微生物学实验中的重要技术，通过将混合菌液中的细菌分离出来，得到单个菌落，从而研究细菌的生物学特性。

本实验采用平板划线法和稀释涂布平板法进行细菌分离。

1. 平板划线法：将菌液滴在琼脂平板上，用无菌接种针划线，使菌液在平板上逐渐稀释，最终形成单个菌落。

2. 稀释涂布平板法：将菌液进行一系列稀释，将适量稀释液涂布在琼脂平板上，使菌液在平板上稀释至形成单个菌落。

三、实验材料1. 实验试剂：牛肉膏蛋白胨培养基、无菌水、生理盐水、无菌棉签、无菌接种针、酒精灯、无菌培养皿、移液器、显微镜等。

2. 实验菌种：待分离的细菌菌液。

四、实验步骤1. 制备牛肉膏蛋白胨培养基：按照实验要求，将牛肉膏蛋白胨培养基溶解于蒸馏水中，调整pH至7.0-7.2，分装于无菌培养皿中，高压灭菌。

2. 菌液制备：将待分离的细菌菌液用无菌生理盐水进行适当稀释。

3. 平板划线法分离：（1）将牛肉膏蛋白胨培养基冷却至50℃左右，倒入无菌培养皿中，待凝固。

（2）用无菌棉签蘸取适量菌液，在平板上划线。

（3）将平板倒置，放入37℃恒温培养箱中培养24小时。

4. 稀释涂布平板法分离：（1）将牛肉膏蛋白胨培养基冷却至50℃左右，倒入无菌培养皿中，待凝固。

（2）将菌液进行一系列稀释，取适量稀释液涂布在平板上。

（3）将平板倒置，放入37℃恒温培养箱中培养24小时。

5. 观察结果：观察平板上的菌落生长情况，记录菌落特征。

五、实验结果与分析1. 平板划线法：在平板上观察到多个菌落，其中有些菌落可能为单个菌落，但有些菌落可能为多个细菌聚集而成。

2. 稀释涂布平板法：在平板上观察到单个菌落，说明菌液已成功分离。

六、实验讨论1. 平板划线法分离细菌时，划线次数和划线速度对分离效果有较大影响。

划线次数过多或过少、划线速度过快或过慢，均可能导致分离效果不佳。

实验三平板分离技术与活菌计数

实验三平板分离技术与活菌计数实验教学课题：实验三平板分离技术与活菌计数实验教学目的：1学习从泡菜中分离微生物的方法，学习无菌操作技术。

2用稀释法分离大肠杆菌和酵母菌。

3用平板划线法分离微生物。

实验教学重点：平板划线分离方法。

实验教学难点：转角划线的轻重。

实验用品：1酵母菌。

2已灭菌的LB、YPD固体培养基各1瓶。

3无菌培养皿10套、无菌EP管10支、泡菜样品、天平、称量纸、药匙、试管架、记号笔、涂布器、1ml、10ml移液管，1000ul、200ul枪头和移液器。

4无菌水(90、带玻璃珠) 1瓶。

实验教学方法与手段：板书讲解+演示实验＋学生动手实验教学课时：4课时教学过程：一、实验方法(一)泡菜稀释分离1取泡菜：取表层以下5-10ml处的泡菜10g，泡菜汁10ml，或放在4℃冰箱中暂存。

2制备稀释液(1)制备泡菜悬液：称泡菜10g，或泡菜汁10ml，迅速倒人带玻璃珠的无菌水瓶中，振荡5-10min，使泡菜充分打散，即成为10-1的泡菜悬液。

(2)梯度稀释：用移液器吸10-1的泡菜悬液1ml，放入装有9ml无菌水的试管中，震荡，即为10-2的稀释液，如此重复，可依次制成10-3-10-8的稀释液。

注意：每一个稀释度换用一支移液管。

3混菌法测定菌落数的方法(1)LB：取原液、10-1两管稀释液各1ml，分别接入相应标号的平皿中，每个稀释度接两个平皿。

然后取冷却至50℃的MRS培养基，分别倒人以上培养皿中(装量以铺满皿底的2／3为宜)，迅速轻轻摇动平皿，使菌液与培养基充分混匀，但不沾湿平皿的边缘，待琼脂凝固即成乳酸菌平板。

倒平板时要注意无菌操作。

(2)酵母菌：先把冷却至50℃的PDA培养基倒入培养皿中，凝固后，取10-4、10-5两管稀释液各200ul，分别接入相应标号的平皿中，每个稀释险接两个平皿。

接着，用涂布棒（灭菌）把菌液涂布均匀，即为酵母菌平板。

4培养：将接种好的平板倒置，即皿盖朝下放置，于28-30℃中温培养，大肠杆菌和酵母菌均培养1-2d。

平板分离技术与活菌计数实验报告

平板分离技术与活菌计数实验报告篇一：微生物学大实验实验报告微生物学大实验实验题目：土壤微生物的分离纯化与鉴定一．实验目的：1.巩固本学期所学的所有微生物实验操作技能。

2.再次强调无菌操作概念。

3.初步学习微生物鉴定纯化的方法和思路。

4.学会应用相关手册对微生物进行分类。

二．实验原理：1. 培养基的制备、消毒与灭菌：培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。

在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多。

但是，不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素等。

不同微生物对 pH 要求不一样，霉菌和酵母的培养基的 pH 一般是偏酸性的，而细菌和放线菌的培养基的 pH 一般为中性或微碱性的 ( 嗜碱细菌和嗜酸细菌例外 ) 。

所以配制培养基时，都要根据不同微生物的要求将培养基的 pH 调到合适的范围。

此外，由于配制培养的各类营养物质和容器等含有各种微生物，因此，已配制好的培养基必须立即灭菌，如果来不及灭菌，应暂存冰箱内，以防止其中的微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养的酸碱度所带来不利的影响。

2. 微生物的分离与纯化：自然界中各种微生物混杂生活在一起，要研究某种微生物的特性，首先须使该微生物处于纯培养状态。

从混杂的微生物群体中获得只含有某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。

土壤是微生物生活的大本营，所含微生物无论是数量还是种类都是及其丰富的。

因此，土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，人们可以从中分离到很多有价值的菌株。

本实验将采用平板划线分离法。

3. 平板分离技术与活菌计数：值得指出的是从微生物群体中经分离、生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。

因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征等综合考虑。

有些微生物的纯培养要经过一系列的分离与纯化过程和多种特征鉴定方能得到。

微生物的分离纯化：平板分离法

微生物的分离纯化：平板分离法基本原理分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含某一种或某一株微生物的过程。

平板分离法普遍用于微生物的分离与纯化。

即用接种环将菌种接至平板培养基上，或用移液管、滴管将一定体积的菌液移至平板培养基上，然后培养。

其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求,或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。

包括稀释涂布平板法稀释混合平板法平板划线法土壤由于具备了微生物所需的营养、空气和水分，是微生物最集中的地方，所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的，因此，土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地。

本实验采用三种不同的培养基和方法从土壤中分离细菌、放线菌、酵母菌和霉菌。

操作步骤采样：选取校园内或校园附近地点，用无菌药匙，将表层5cm左右的浮土除去，取5～25cm处的土样约30g，装入事先准备好的无菌瓶内并盖好。

编号并记录地点、时间及其他环境条件。

一般样品取回后应马上分离，以免微生物死亡。

制备土壤稀释液土壤稀释液的制备和稀释液的取样（建议稀释到10-即可）无菌操作1.取三只无菌培养皿，在皿底用记号笔写上稀释度、组别观察分离出的真菌菌落形态。

稀释混合平板法土壤稀释液的制备和稀释液的取样倒平板的无菌操作将融化的琼脂培养基,冷却至50℃左右(以手背能忍受的温度为准)，在酒精灯火焰旁，右手掌心握住三角瓶的底部，左手拿平皿并松动试管塞或瓶塞，用手掌边缘和小指、无名指夹住拔出，灼烧瓶口。

用左手的大拇子将皿盖掀开一缝，至瓶口刚好伸入，向皿内注入培养基（约15 mL,铺满皿底），迅速盖好皿盖。

左手持培养皿稍加旋转摇动，使培养基均匀分布于整个培养皿底部，然后平置于桌面水平位置,待凝后即为平板。

也可将平皿放在火焰附近的桌面上，用左手的食指和中指夹住管塞并打开培养皿，再注入培养基，摇匀后制成平板。

平板划线分离实验报告

一、实验目的1. 熟悉平板划线分离培养法的基本原理。

2. 掌握平板划线分离培养的操作步骤。

3. 学习如何从混杂的微生物中分离纯种细菌。

4. 了解无菌操作技术在微生物实验中的重要性。

二、实验原理平板划线分离培养法是一种常用的微生物分离纯化方法。

其原理是将微生物样品涂布于固体培养基表面，利用微生物在培养基上的生长特性，通过划线操作，逐步稀释微生物，最终获得单菌落，从而实现微生物的分离和纯化。

三、实验器材1. 微生物培养箱2. 无菌操作台3. 玻璃棒、接种环、镊子等无菌操作工具4. 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基5. 菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌混合菌悬液6. 无菌培养皿、酒精灯、记号笔等四、实验步骤1. 准备工作- 将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基放入水浴锅中加热至融化。

- 将融化的培养基倒入无菌培养皿中，待冷却至约50℃时，均匀涂布于培养皿底部。

- 待培养基凝固后，用记号笔在培养皿底部标记A、B、C、D四个区域，分别代表菌源区、过渡区、过渡区、关键区。

2. 划线操作- 在无菌操作台中，用接种环挑取少量菌种，从A区开始，按无菌操作法划线至B区、C区，最后划线至D区。

- 划线过程中，每次划线前需用火焰灼烧接种环，以避免污染。

3. 培养- 将划线平板倒置放入培养箱中，在适宜的温度下培养24小时。

4. 观察与记录- 观察平板上的菌落生长情况，记录菌落的形态、大小、颜色等特征。

- 根据菌落特征，挑选典型单菌落进行进一步鉴定。

五、实验结果与分析1. 菌落特征- 在平板划线分离培养过程中，观察到A区菌落较多，B、C区菌落数逐渐减少，D区菌落数量明显减少，且多为单菌落。

- 通过观察，挑选出典型单菌落进行进一步鉴定。

2. 结果分析- 平板划线分离培养法是一种有效的微生物分离纯化方法，通过逐步稀释微生物，最终获得单菌落，从而实现微生物的分离和纯化。

- 在实验过程中，无菌操作是保证实验成功的关键。

任何一次操作不当都可能导致污染，影响实验结果。

微生物分离技术

平皿划线分离法
思考题
• 平板培养时为什么要把培养皿倒置？ • 在划线分离时，为什么每次都需要将接种环上的剩余物烧掉？
微生物分离技术
一、平板倾注法
1、样品作10倍递减稀释至适当浓度
2、加样倾注平板无菌方法，由低浓度开始，从各浓度样品稀释液中各吸取100ul，均匀地放入已写好稀释度的空白无菌平皿中，然后在各平皿中加入已经融化并冷却到45 -50℃的营养琼脂培养基12-15ml，将培养
皿在超净工作台面上轻轻转动，使稀释的菌悬液与
2、37℃培养24-48h检查菌落是否单纯。
3、如不单纯继续按上述方法分离。
划线方法
☻ 接种环灼烧灭菌、冷却
☻ 左手取样品，右手用接种环挑取样品，用已经粘有菌体的接种环于另一新的空白平板中划线分区划线法：灼烧、冷却、区1划线；灼烧、冷却区2 划线；灼烧、冷却、区3划线；灼烧、冷却、区4划线；完毕、灼烧连续划线法：灼烧、冷却、取菌，连续划线，完毕、灼烧
• 样品稀释
• 倒培养基，制成平板。 • 凝固后，吸取相应的样品稀释液0.2mL放在平板上。 • 用灼烧冷却后的无菌玻璃将稀释液在平板表面涂抹均匀。每个浓度做3个平板（重复）。倒置于 370C条件下培养1～2d。
凝固后ຫໍສະໝຸດ 28～ 30℃ 培养涂布法流程图
三、划线分离法
1、挑取单个菌落，分别在平板上做分区和连续划线。
融化的培养基混合均匀，直至培养基凝固。
3、菌落计数
含菌样品的微生物经稀释分离培养后，每一个活菌
细胞可在平板上繁殖形成一个肉眼可见的菌落，故可据平板上菌落的数目推算出每克含菌样品中所含的活菌总数（菌落形成数目）。
每毫升样品中微生物细胞数= 每皿菌落平均数 × 稀释倍数 × 1/取样体积数

土壤中微生物的分离

实验三土壤中微生物的稀释分离、纯化及无菌操作技术一、教学目标与基本要求：1、掌握倒平板的技术和分离纯化微生物的基本操作技术。

2、设计实验方案，分离目的菌，并通过后续实验做出初步鉴定。

二、实验内容：1．用稀释法从土壤中分离细菌、放线菌和霉菌。

2．用平板划线法分离纯化微生物。

3．学习斜宜接种、穿刺接种、平板接种、液体接种等接种方法。

三、实验步骤（一）微生物分离的方法有很多种，但常用的有两种：1.平板划线分离法借助划线使混杂的微生物在平板的表面分散开，二获得单个菌落，从而达到分离的目的，具体方法如下： 1)倒制平板：将固体培养基熔化，冷却至50-55℃，然后在酒精灯火焰旁，以右手持培养基，左手拿培养皿，以无菌操作将培养基注入培养皿内，约15ml，轻微转动培养基，使培养基均匀分布，然后静置于水平位置，凝固即成平板，并在皿该边贴上标签。

2.稀释平板分离法稀释手段，使样品分散到最低限度，然后吸取一定量注入平皿内，倒入培养基，摇匀静置凝固后培养，这样被分离的细菌被固定在原处而形成菌落，可作为一种记数方法。

1)制备土壤稀释液：（细菌的分离）以无菌操作，称取样品1g，加入装有99ml无菌水的锥形瓶中，振荡10-20分钟，使土样与水充分混合，即成10-2土壤稀释液，然后用无菌移液管吸取9ml无菌水的试管内，制成10-3的稀释液将此移液管在试管内反复吸冲三次，然后取出移液管，并将其通过火焰，再插入原来包移液管的纸套内，以备再用，振荡10-3 的稀释液试管，再从纸套取出原来的移液管插入已混匀的试管内，再吹洗三次，然后吸出1ml10-3的稀释液至另一支装有9ml 无菌水的试管中，制成10-4稀释液。

用同样方法再制成10-5、10-6的稀释液，稀释完毕后，可用原来的移液管，从菌液浓度最小的 10-6的稀释液开始吸取1ml10-6稀释液，加到相应编号10-6的无菌培养皿内，以相同方法分别吸取1ml10-5、10-4的稀释液加到相应编号为10-5、10-4的无菌培养皿内，整个分离过程见下图。

土壤微生物的分离和纯化实验

实验八土壤微生物的分离和纯化一、目的1.了解从土壤中分离与纯化微生物的基本原理及方法。

2.掌握几种常用的分离的基本操作技术。

二、原理在自然界中,土壤是微生物生活中的最适宜的环境,土壤中存在大量的微生物,但土壤中的微生物是各种不同种类微生物的混合体,因此,为了研究某一微生物的特性,或者要大量地培养和利用某种微生物,必须把它们从这些混杂的微生物群中分离出来。

从而获得某一菌株的纯培养。

这种获得纯培养的方法称之为微生物的分离和纯化三、器材1.牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏l号培养基、马铃薯蔗糖琼脂培养基。

2.盛有100毫升无菌水的三角瓶,9毫升无菌水的试管,无菌吸管,无菌玻璃涂抹棒,10%的酚液,25%的乳酸,土样,接种环,标签。

四、方法(一)涂抹平板分离法1.制备土壤稀释液称取土样10克,放入装有玻璃珠和100毫升无菌水的三角瓶中,振摇15—20分钟,使土与水充分混合,将菌分散,静止片刻,用吸管从中吸取1毫升土壤悬液注人盛有9毫升无菌水试管中,吹吸三次,并振摇使之充分混匀,然后再吸取1毫升注入另一支盛有9毫升无菌水的试管中,以此类推制成10-1、10-2、l0-3、10-4、l0-5……的各种稀释度的土壤悬液。

2.倒平板将牛肉膏蛋白胨培养基,高氏1号培养基,马铃薯蔗糖培养基溶化。

待冷至50—60℃时,在高氏l号培养基中加入10%酚2滴,在马铃薯蔗糖培养基中加入25%乳酸2滴,然后分别倒平板,每支培养基倒一皿(用右手持盛培养基的试管,左手拨出棉花塞,试管口在火焰上灭菌,然后左手将培养皿在火焰附近打开少许,迅速注入培养基,加盖后轻轻摇动培养皿使培养基均匀分布,平放在桌面上,待凝后即成平板。

(见图18)。

3.涂抹将上述每种培养基平板标上10-3、10-4、10-5稀释度,然后用无菌吸管分别从10-5、10-4、10-3稀释度的试管中吸取土壤悬液,每一平板注入0.2毫升,再用灭菌玻璃涂抹刮棒在培养基表面轻轻地涂布均匀,静止5分钟。

微生物的纯种分离技术—微生物的纯种分离技术

二、微生物分离纯化的方法
1.斜线法
平板划线分离的方法
2.曲线法
3.方格法
4.放射法
5.四格法
二、微生物分离纯化的方法
（二）利用液体培养基分离纯培养
稀释法原理：连续稀释，使一只试管里分配不到一个微生物如果大多数平行稀释管里没有微生物生长，那么有微生物生长的试管得到的培养物就是纯培养物
二、微生物分离纯化的方法
1、微生物纯种分离的原理 2、微生物纯种分离的方法利用固体培养基分离、利用液体培养基分离、单细胞分离、选择培养分离
任务 1、如何检验平板上某个单菌落是不是纯培养？ 2、请问在平板培养细菌为什么要倒平板培养？
将含菌的样品加入还比较烫的琼脂培养基，再倒平板，易造成某些热敏感菌的死亡某些好氧菌会在琼脂中间缺氧影响生长
二、微生物分离纯化的方法
涂布 v3、平板划线分离法（streak plate method）
特点：快速、方便分区划线：适用于浓度较大的样品连续划线：适用于浓度较小的样品。
模块七微生物的分离纯化技术
Isolation and purification of microorganisms
任务二、微生物的纯种分离技术
知识目标：
掌握常用的纯种分离技术
掌握纯培养概念
技能目标：
能利用不同的方法进行微生物的分离与纯化
任务二、微生物的纯种分离技术
内容导入分离(isolation)：从混杂微生物群体中获得只含有某一种微生物的过程称为微生物分离与纯化。
如果稀释度适宜，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养特点：操作较麻烦，染菌几率大，对好氧菌、热敏感菌效果不好

实验三微生物的平板分离技术

三、实验器材和试剂
接种环，接种针，涂布棒，无菌吸管酒精灯，记号笔，标签，火柴，灭菌培养皿菌种，平板，培养基
四、实验操作
1、倒平板
将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏Ⅰ号琼脂培养基、马
丁氏琼脂培养基加热溶化，冷至55-60℃时，在马丁氏
琼脂培养基中加入链霉素溶液（终质量浓度为30μg/m l），混均匀后无菌操作倾入无菌培养皿中，培养基温度
塞子拨出，然后用右手夹住塞子。左手持培养
皿并将皿盖在火焰旁打开一缝，迅速倒入培养基约20ml，加盖后轻摇培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，平置于桌面上，待凝后为平板。
2、制备土壤稀释液：
称取土样10g，放入盛90ml无菌水的三角烧瓶中，震荡约20min，使土样与水充分混合，使细胞分散。用移液枪无菌吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的离心管中充分混匀，此为10-1稀释液，以此类推制成10-2，10-3，10
实验三微生物的平板分离技术
一、目的要求 1．掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术；
2．学习观察来自土壤中的三大类群微生物的菌
落形态特征。
二、实验原理
微生物的纯培养要经过一系列的分离与纯化过程和多种特征鉴定方能得到。从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。平板分离法主要有平板划线分离法和稀释涂布平板发，后者除能有效分离纯化微生物外，还可用于测定样品中活菌数量。
平板菌落计数法是将待测菌液经适当稀释，涂布在
平板上；经过培养后在平板上形成肉眼可见的菌落。统
计菌落数，根据稀释倍数和取样量计算出样品中细胞密度。由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，平板上形成的每个菌落不一定是单个细胞生长繁殖而成，有的可能来自2个或多个细胞。因此，平板菌落计数的结果往往比样品中实际细胞数低，这就是现在使用菌落形成单位（colony-forming unit，CFU）取代以前用绝对菌落数来表示样品活菌含量的原因。

平板分离技术实验报告

一、实验目的1. 了解平板分离技术的基本原理和方法。

2. 掌握无菌操作技术，提高实验操作技能。

3. 学习使用平板分离技术从混杂微生物群体中分离纯化目标菌株。

二、实验原理平板分离技术是一种常用的微生物分离纯化方法，其基本原理是将含有多种微生物的样品进行适当稀释，使其中的微生物分散成单个细胞，然后将其接种到固体培养基上，经过培养，由单个细胞繁殖形成的菌落可以代表原样品中的一个纯种微生物。

平板分离技术包括稀释平板分离法和划线平板分离法两种。

三、实验材料1. 样品：土壤样品、水样等。

2. 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、牛肉膏蛋白胨液体培养基等。

3. 仪器：无菌培养皿、接种环、酒精灯、移液器、培养箱等。

4. 试剂：无菌生理盐水、无菌水等。

四、实验步骤1. 培养基制备与灭菌（1）称取适量的牛肉膏、蛋白胨和琼脂，加入适量的蒸馏水，加热溶解，调节pH至7.0-7.2。

（2）将溶解后的培养基分装至无菌培养皿中，每皿约15ml。

（3）将培养皿放入高压蒸汽灭菌器中，121℃灭菌20分钟。

（4）待培养基冷却至50℃左右，打开培养皿盖，待凝固。

2. 样品稀释（1）取一定量的样品，加入适量的无菌生理盐水，进行10倍稀释。

（2）重复上述步骤，进行100倍、1000倍稀释。

3. 接种（1）取无菌接种环，蘸取适量稀释后的样品，在平板培养基表面进行划线接种。

（2）划线时，从一端开始，以螺旋形或放射形划线，将菌液均匀分布在平板培养基表面。

4. 培养与观察（1）将接种后的平板放入培养箱中，37℃培养24小时。

（2）观察菌落生长情况，记录菌落特征，如大小、形状、颜色等。

5. 菌落纯化（1）挑取单个菌落，进行划线接种。

（2）重复上述步骤，直至获得纯化菌落。

五、实验结果与分析1. 通过平板分离技术，成功从土壤样品中分离出多种微生物。

2. 不同稀释倍数的样品在平板培养基上形成的菌落数量不同，稀释倍数越高，菌落数量越少。

3. 通过观察菌落特征，初步判断分离出的微生物种类。

平板分离微生物步骤

平板分离微生物步骤一、样品采集在进行微生物的分离之前，首先需要采集样品。

样品可以是来自土壤、水体、食品、人体等各种环境和生物体中的微生物。

采集样品时要注意避免外界污染，使用无菌工具进行采集，并尽量避免样品暴露在空气中的时间过长。

二、制备悬浮液采集到的样品一般是固体或液体的，需要将其转化为悬浮液以便于后续的处理和分离。

对于固体样品，可以将其加入适量的无菌生理盐水或缓冲液中，用均质器均质处理，使微生物均匀分散在溶液中。

对于液体样品，可以直接取适量的样品进行处理。

三、稀释与接种为了避免微生物过于密集而难以分离，需要对悬浮液进行适当的稀释。

稀释过程中要注意使用无菌的稀释液和容器，并进行严格的无菌操作。

将适量的悬浮液分别取出，进行稀释，然后采用传染板法或涂布法将稀释液接种到含有适宜培养基的培养皿上。

四、培养条件控制不同的微生物对于培养条件有不同的要求，为了获得纯种的微生物，需要对培养条件进行控制。

首先是温度的控制，根据微生物的生长温度范围进行培养，可以是常温培养、低温培养或高温培养。

其次是培养基的选择，根据微生物的营养需求选择适宜的培养基配方。

还有其他因素如pH值、氧气含量等也需要进行控制。

五、分离与纯化在培养基中，微生物会随着时间的推移不断生长，形成菌落。

利用菌落形态的差异，可以通过目测或显微镜观察，选择不同的菌落进行分离。

通过无菌的处理工具，将目标菌落划分到另外的培养皿中，进行进一步的培养和纯化。

六、鉴定与鉴定分离出的微生物一般需要进行鉴定和鉴定，以确定其分类和特性。

鉴定方法可以包括形态学观察、生理生化试验、分子生物学等。

通过这些方法，可以确定微生物的种类、亚种或菌株，并了解其生长特性、代谢特性等。

以上就是一般微生物分离的基本步骤。

通过这些步骤，我们可以从复杂的样品中分离出纯种的微生物，并对其进行鉴定和研究。

微生物分离技术在微生物学研究、医学诊断和工业生产等领域都有着广泛的应用。