微生物平板划线试验法

表3 常见的几种细菌的培养和基接种方法举例
平板划线接种法
斜面培养基 接种法
液体培养基 接种法
穿刺接种法
菌种
葡萄球菌和大肠 杆菌的混合菌液
大肠杆菌培养物
大肠杆菌培养物 枯草杆菌培养物
变形杆菌培养物 痢疾杆菌培养物
培养基 普通琼脂平板
琼脂斜面 培养基
普通肉汤 培养基
半固体琼脂 培养基
1、斜面培养基接种法
2、液体培养基接种方法
图2-2 液体培养基接种法
3、穿刺接种法
常用于半固体琼脂培养基、醋酸铅培养基、双糖铁 培养基等的接种，前者用于测定细菌的动力，后二 者则用于观察细菌的生化反应。
3、穿刺接种法
步骤:（1）用记号笔在待接种培养基上写明标记。 （2）如斜面培养基接种法，握持菌种管及待接种 的半固体琼脂培养基。 （3）右手持接种针，灭菌冷却后，以针挑取菌 苔，垂直刺入半固体琼脂培养基的中心，刺 达近管底部，但不必及于管底，然后循原路 退出。 （4）接种完毕，接种针重新灭菌后放至试管架 上，塞好试管塞，37℃培养18～24小时后取 出观察细菌的生长情况。
巧克力琼脂培养基：淋球菌及脑膜炎双球菌在此培养 基上生长较佳
2、常见培养基
选择培养基
亚硒酸盐增菌液：作为沙门氏菌属及某些志贺氏菌属 增菌用
伊红－美蓝琼脂：分离沙门氏及志贺氏菌属细菌 Baird-Parker培养基：用于金黄色葡萄球菌的培养分
离
2、常见培养基
鉴别培养基
三糖铁琼脂：供鉴定肠道细菌用 双糖含铁琼脂：供鉴定肠道细菌用 葡萄糖枸橼酸盐琼脂：共作鉴别大肠杆菌与产气杆菌
常用于细菌的大量繁殖，保存菌种，或观察其某些 生化特性。琼脂斜面、尿素培养基、双糖铁培养基、 柠檬酸盐培养基等具有斜面外形的固体培养基均可 用此法接种。
1、斜面培养基接种法
步骤：（1）用记号笔在待接种的培养管上写明标记。 （2）点燃酒精灯。 （3）左手拇指、食指、中指及无名指分别握持菌 种与待接种的培养基管，使菌种管位于左侧， 斜面部均应向上。 （4）以右手拇指和食指捏持转动两管试管塞，以 便在接种是易于拔取。 （5）右手持接种环，在火焰上烧灼灭菌。
2、液体培养基接种方法
步骤:（1）用记号笔在待接种培养基上写明标记。 （2）如斜面培养基的接种方法一样，握持菌种管及 接种的肉汤管。 （3）接种环灭菌冷却后，伸入菌种管取少量细菌再 伸入肉汤管内，在接近液面管壁处轻轻研磨， 蘸取少量肉汤调和，使菌混于肉汤中。塞好试 管塞后，摇动液体，使细菌在液体中均匀分布。 （4）接种完毕，将接种环灭菌后放回试管架上。肉 汤管放37℃温箱培养，18～24小时后观察生长 情况。
1、斜面培养基接种法
（6）以右手手掌及小指，小指及无名指分别拔取并 夹持两管试管塞，将两管管管口灭菌。
（7）将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管内，从 斜面上轻轻挑取少量菌苔退出菌种管。再伸进 待接种的培养基管，进行斜面培养基接种，从 斜面底部轻轻向顶端弯曲划线，不要触破培养 基表面。
1、斜面培养基接种法
观察微生物的运动特征、分类鉴 定及噬菌体效价滴定
不加任何凝固剂
大规模工业生产及在实验室进行 微生物的基础理论和应用方面的 研究
牛膏蛋白胨培养基是最常用 的基础培养基
基础培养基
在基础培养基中加入某些特殊营养
按
物质制成的一类营养丰富的培养基
用
途
加富培养基
不 同 划
选择培养基
用来将某种或某类微生物从混杂的 微生物群体中分离出来的培养基
平板划线实验实习
一、相关基础理论－－细菌的培养
一般细菌均可用人工方法进行培养，使其生长繁殖， 以便进一步观察和研究他们的各种生物学特征。为 了获得良好的细菌培养物，在分离培养细菌时，除 采用适宜的培养基，并考虑到其他的培养条件之外， 掌握各种分离培养和接种的基本技术，也是重要环 节。
1、培养基
在土壤、水、食品、空气以及人和动、植物中，不 同种类的细菌混杂地生活在一起。若要研究其中某 种细菌，就必须将各种细菌进行分离，以得到只含 有这一种细菌的纯培养。当细菌分离成纯种后，常 需要接种到有关的培养基中，以测试其各种生物学 性状，不同的细菌需要不同的培养基进行培养。
1、培养基
培养基按其物理性状，分为固体培养基、液体培养 基和半固体培养基。
分
鉴别培养基 用于鉴别不同类型微生物的培养基
微生物产生某种代谢产物，与培养 基中的特殊化学物质发生特定的化 学反应，产生明显的特征变化
2、常见培养基
基础培养基
肉浸液培养基：一般细菌都能在此培养基内生长 营养琼脂培养基：一般细菌培养使用 蛋白胨水培养基：靛基质实验
2、常见培养基
加富培养基
血琼脂培养基：可作为肺炎球菌、链球菌、葡萄球 菌、嗜血杆菌等的分离培养，还可用 于某些菌落的溶血作用
培养基按用途，分基础培养基、加富培养基、选择 培养基、鉴别培养基。
在液体培养基中加入一定量凝固 剂，使其成为固体状态，琼脂含 量一般为1.5%-2.0%
按 物
固体培养基
固体培养基常用来进行微生物的分 离、鉴定、活菌计数及菌种保藏
理
状
琼脂含量一般为0.2%-0.7%
态
源自文库
半固体培养基
不 同 划 分
液体培养基
之用
二、细菌的接种方法
将混合的细菌分离的方法有多种，平板划线法即是 其中之一，该方法主要是借划线而将混杂的细菌在 琼脂平板表面分散开，是单个细菌能固定在某一点， 生长繁殖后形成单个的菌落以达到分离纯种的目的。
当细菌分离成纯种后，一般还可用斜面、液体和半 固体培养基来检验细菌的培养特征，因此接种方法 可相应的分为四种。
（8）接种完毕，灭菌两试管的管口，塞好试管塞，并 放至原来的位置上。重新烧灼接种环，灭菌后放回 试管架上。接种好的试管放37℃温箱培养，18～ 24小时候观察生长情况。
1、斜面培养基接种法
图2-1 斜面培养基接种法
2、液体培养基接种方法
可用于观察细菌不同的生长状况，有的呈均匀混浊， 有的呈沉淀生长，还有的在液体表面形成菌膜；另 外还可以供测定细菌生化特性用。凡是肉汤、葡萄 糖蛋白胨水以及各种单糖发酵管等液体培养基均用 此法接种。
3、穿刺接种法
图2-3 穿刺接种法
4、平板划线接种法
常用于分离单个菌落，也可用于观察细菌的生长状 况和观察某些生化反应。沙门氏菌的各属在亚硫酸 铋琼脂平板上呈黑色，具有金属光泽；志贺氏菌属 在HE琼脂平板、SS琼脂平板、麦康凯琼脂平板上 呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。