微生物遗传学的几个基本概念(精)

G-BU
A-BU
(2)与碱基起化学反应的诱变剂-----直接引起碱基置换
该类诱变剂与碱基起化学反应，改变碱基的结构，导致错配。
亚硝酸：G-C
A-T 转换互变
各种烷化剂 ：G-C
A-T 互变
羟胺：只引起G-C
A-T 转换（专一性与C起反应）
亚硝酸：对碱基的主要作用是氧化脱胺作用（使氨基变为酮基， 改变配对性质，引起碱基转换） 。
美国加利福尼亚大学的Bruce Ames教授于1966年发明， 因此称为Ames试验
标准菌株要求： 检测鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhmurium) 组氨酸营养缺 陷型菌株(his-)的回复突变率（为了增加试验的敏感性，该菌株 还应包括另外两个突变，一个是造成细胞表面透性增加的深度 粗糙突变型，另一个是丧失切除修复能力的缺失型）。 回复突变(reverse mutation或back mutation)： 突变体失去的野生型性状，可以通过第二次突变 得到恢复，这种第二次突变称为回复突变。
表示方法： 所抗药物的前三个小写斜体英文字母加上“r”表示
strr 和 strs 分别表示对链霉素的抗性和敏感性
（3）条件致死突变型（conditional lethal mutant）203
在某一条件下具有致死效应，而在另一条件下没有致死 效应的突变型。
常用的条件致死突变是温度敏感突变，用ts（temperature sensitive） 表示，这类突变在高温下（如42℃）是致死的，但可以在低温（如 25-30℃）下得到这种突变。
(一)自发突变
(二)诱发突变
通过人为的方法，利用物理、化学或生物 因素显著提高自发突变频率的手段 。
(二)、诱发突变
诱变剂（mutagen）： 凡能提高基因突变频率的因素统称为诱变剂 碱基类似物诱变剂； 与碱基起化学反应的诱变剂； 嵌入诱变剂；
化学诱变剂 诱变剂的种类
物理诱变剂 ：辐射和热 生物诱变剂 ：转座因子
表型：
同上，但第一个字母大写，别表示缺陷型和野生型。
（2）抗药性突变型（resistant mutant）
基因突变使菌株对某种或某几种药物，特别是抗生素，产生抗性。
特点： 正选择标记
（突变株可直接从抗性平板上获得-----在加有相应抗生素的 平板上，只有抗性突变能生长。所以很容易分离得到。）
独立性
某基因的突变率不受它种基因突变率的影响
可诱变性 自发突变的频率可因诱变剂的影响而提高（10-3~10-6 ） 稳定性 可逆性 基因突变后的新性状是稳定的 野生型菌株某一性状可发生正向突变，也可发生反 向的回复突变。
三、基因突变自发性和不对应性的实验证明 如何证明基因突变的非对应性？
三个经典实验: 1.变量实验、 2.涂布实验、 3.影印实验
(1). 转座因子（transposable element)定义：位于染色体或质粒 上的一段能改变自身位置的DNA序列。广泛分布于原核和真核 细胞中。又称“跳跃基因” (2). 转座因子的特点
1) 在转座时，通过转座因子的复制，可将新形成的拷贝以非同 源重组的方式转移到染色体的新部位上； 2) 都携带有编码转座酶的基因，该酶具有转移位置的功能， 是转座所必需的;
第四节 基因突变的机制
一、基因突变的分子基础
生物体在无人工干预下自然发生的低频率突 变（10-6-10-9 ）。它是生物进化的根源。
引起自发突变的原因主要有以下几方面： • 背景辐射和环境因素引起； • 有害代谢产物引起； • 互变异构效应引起的碱基配对错误； • DNA复制过程中碱基配对错误 ； • 转座因子的作用。
2）Newcombe的涂布实验（1949）
选用对T1 噬菌体敏感的 E.coli，以相等数目涂布于 12个平板上 约繁殖了12.3代
在涂布过的一组中， 共长出抗性菌落353 个，比未经涂布过的 （28个菌落）高得多
3）影印实验（replica plating ）Joshua Lederberg and Esther Lederberg（1952 通过使菌不接触抗性环境而检查其抗性菌落的方法
证明突变的性状与引起突变的原因间无直接对应关系！
1）变量实验（fluctuation analysis）Salvador Luria & Max Delbruck(1943)
对噬菌体T1敏感的E.coli 对数期培养物 ，稀释至103/mL,分装两试管，各10 mL
甲管
乙管
与甲管分装的各小管 同时保温24~36h
HNO2
A C G
H（次黄嘌呤） U X（黄嘌呤）
A-T H-T H-C A-T
AT GC GC AT 不引起突变
H-C
G-C
甲基磺酸乙酯（EMS） 烷化剂作用的主要机理是引起碱基上某些能形成氢键的 集团发生烷基化。 甲基磺酸甲酯（MMS） 烷化位点主要在鸟嘌呤的 N‐7位和腺嘌呤的N‐3位上， 硫酸二乙酯（ DES ） 烷化剂 烷化后的碱基也像碱基结构类似物一样能引起碱基配对的错 N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍 (NTG) 误。 氮芥、硫芥 烷化剂的另一作用是使嘌呤整个地从 DNA链上脱下来， 环氧乙烷 产生一个缺口，在与缺口相对应的位点上就能配上任何一个 碱基，从而引起转换或颠换。
Ames试验
斑点试验和平板掺入试验
方法步骤
• 1．菌株鉴定 用于测试的菌株，需经基因型和 生物学性状鉴定，符合要求才能投入使用。 菌种：TA97、TA98、TA100和TA102 鉴定项目：（1）脂多糖屏障丢失 （2）R因子 （3）紫外线损伤修复缺陷 （4）自发回变 （5）回变特性——诊断性试验
1.化学诱变剂
(1)碱基类似物----间接引起置换的诱变剂 一类与正常碱基结构相似的物质，称为碱基类似物。 如：5-BU, 8-NG, 2-AP等。 它们在DNA复制中能掺入DNA 分子中，由于其产生异构体的频 率高，因此发生的错误配对可引起碱基的置换。 A-T 加入5-BU A-T A-T G-C A-BU
(3) 热 短时间的热处理也可诱发突变，热的作用是使胞 嘧啶脱氨基而成为尿嘧啶，从而通过碱基配对错误而 引起GC→AT的转换； 另外，热也可引起鸟嘌呤‐脱氧核糖键的移动， 从而在DNA复制时出现包括两个鸟嘌呤的碱基对， 在下一次的DNA复制中该碱基对错配就会引起 GC→CG的颠换。
3. 生物诱变剂(转座因子)及其诱变机制
3)两端都有正向或反向末端重复序列。
(3) 根据分子结构和遗传性质，转座因子可分为3类： 插入序列（Insertion sequence, IS） 仅含有编码转座所必需的转座酶的基因，两端存在9～41bp的反 向重复序列 。但其插入可干扰基因的正常读码序列，导致基因失 活或引起突变。 转座子（Transposon, Tn） 除转座基因外，还有抗药性基因。分为复合转座子和复杂转座子 Mu噬菌体 是以大肠杆菌为宿主的温和性噬菌体。它在几方面不同于另一 种温和噬菌体λ：第一、Mu DNA几乎可以插入到宿主染色体的 任何一个位点上；第二、 DNA 两端没有粘性末端；第三、会引 起宿主的被插入基因的基因突变。
2. 物理诱变剂及其诱变机制
紫外线，x-射线，γ –射线，快中子，超声波等 (1) 紫外线（UV） 紫外线是实验室中常用的非电离辐射诱变因子，其作用 机制主要是能引起： DNA链的断裂、 DNA分子双链的交联、 嘧啶的水合作用 相邻碱基形成嘧啶二聚体（TT，TC,CC）等。 其中最主要的效应是胸腺嘧啶二聚体的形成。 胸腺嘧啶二聚体通常出现在同一DNA单链上两个相邻 的胸腺嘧啶之间，也可出现在两条DNA单链之间。两种情 况导致结果不同。
四、基因突变的类型
1. 按照突变的表型分类： 营养缺陷型 抗性突变型 条件致死突变型 选择性突变株 （能在选择性培养基上或其它的 选择性条件下迅速选出或鉴别出）
形态突变型 抗原突变型 产量突变型
非选择性突变株
下面介绍几种常用的突变型及其分离
（1）营养缺陷型（auxotroph）
一种缺乏合成其生存所必须的营养物（包括氨基酸、维生素 、碱基等）的突变型，只有从周围环境或培养基中获得这些 营养或其前体物（precursor）才能生长。
很多烷化剂除了能诱发点突变外，还能诱发染色体畸变。由于 染色体畸变常为辐射所诱发，所以这些物质又称为拟辐射物质。 NTG： 诱变作用强，称为超强诱变剂（突变率1%）； 能诱发邻近位置的基因同时发生突变，即所谓并发突变。
(3) 移码突变的诱变剂－嵌入诱变剂
吖啶类染料（如原黄素，吖叮黄（橙），ICR类等）具 有类似碱基对的扁平结构，能插入DNA分子的碱基对之 间，使DNA结构变形，导致 DNA在复制过程中的滑动， 引起DNA链中插入或缺失一个或几个核苷酸，产生移码 突变。 ICR：一系列烷化剂和吖啶分子相结合的化合物
(2) X‐射线、γ‐射线、快中子
X‐射线、γ‐射线、快中子等属于电离辐射。以X‐ 射线为例解释该类诱变剂诱变机理： X‐射线的诱变作用有直接和间接两种方式： (1) 直接作用是引起DNA双链间氢键的断裂、DNA单 链的断裂、不同DNA分子之间的交联等。 (2) 间接作用是电离辐射能从水或有机分子中产生自 由基，这些自由基作用于DNA分子，引起缺失和损伤。自 由基对嘧啶的作用更强烈。 此外，X射线还可能使细胞中形成一些碱基类似物， 突变由这些碱基类似物所诱发。与紫外线不同的是，电离 辐射可通过玻璃和其他物质，穿透力强，能达到生殖细胞 ，因此常用于动植物的诱变育种。
2. 按照突变所引起的遗传信息的改变情况可分为三种： 同义突变
表型不发生改变（密码子是简并的,如CGU变成CGC， 但都编码精氨酸）；
错义突变
改变的密码子编码的氨基酸改变了；
无意义突变
终止密码子（UAA, UAG, UGA）
其它突变类型
毒力、生产某种代谢产物的发酵能力的变化等在实际应用 中具有重要意义突变类型, 一般都不具有很明显或可直接检测 到的表型。其突变株的获得往往需要较大的工作量。