多管发酵法测定水体中大肠杆菌

多管发酵法测定水体中大肠杆菌

姓名：马文霞学号：320100922240

学院：生命科学学院班级：2010生态班

实验时间：2011年11月9日地点：贺兰堂C104

摘要：生活用水水源常被生活污水或工业废水或人与动物的粪便所污染，因此必须对生活用水及其水源水进行严格的细菌学检测。因为病菌数量少，要从自来水中分离出病原菌非常困难，这样就要找一个合适的指示菌，最广泛应用的指示菌是大肠菌群，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。根据水体中大肠菌群的数目来判断水源是否被粪便所污染，检测大肠菌群的方法有多管发酵法、滤膜法。

关键字：灭菌、划线、接种、镜检

引言：学习检测水中大肠菌群的方法

了解大肠菌群数量与水质状况的关系

材料与器材：

培养基：乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置小套管），三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（瓶）（内有倒置小套管），伊红美蓝琼脂平板，灭菌水。

仪器：载玻片，灭菌带玻璃塞空瓶，灭菌吸管，灭菌试管等。

方法：

1、水样的采集

自来水将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再拧开水龙头流水

5min，以排除管道内积存的死水，随后用已灭菌的三角瓶接取水样，

以供检测。

池水、河水或湖水将无菌的带玻塞的小口瓶浸入距水面10～15cm 深的水层中，瓶口朝上，除去瓶塞，待水流入瓶中装满后，盖好瓶塞，取出后立即进行检测，或临时存于冰箱，但不能超过24h。

2、初（步）发酵实验

将水样分别接入10支装有10ml三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管中，37℃培养48h。

3、平板分离

将经24h和48h培养后产酸产气的发酵管，分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于37℃培养18～24h，将符合下列特征的菌落进行染色镜检。

深紫黑色，有金属光泽；

紫黑色，不带或略带金属光泽；

淡紫红色，中心颜色较深。

4、复发酵试验

经涂片、革兰氏染色、镜检，如为革兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取该菌落的另一部分，重新接种于普通浓度的乳糖蛋白胨发酵管中，每管可接种来自同一初发酵管同类型菌落1－3个，37℃培养24h,结果或产酸又产气，即证实又大肠菌群存在。

证实有大肠菌群存在后，再根据初发酵试验的阳性管数查表

XV-2(P186),即得大肠菌群数。

结果：

10ml水样的阳性管数为三支，查表得每升水样中的大肠菌群数为11. 讨论：

1.进行涂片时的菌落和重新接种于普通浓度的乳糖蛋白胨发

酵管中菌落必须是同一菌落。

2.进行复发酵实验是为了排除杂菌干扰实验结果的可能性。

参考文献：

沈萍、范秀荣、李广武《微生物学实验》高等教育出版社，北京，1999 张琪、白璐、陈勇《微生物学讲义》