糖化血红蛋白酶法与HPLC法检测方法学比对分析
酶法测定糖化血红蛋白的方法评价及标本前处理对结果的影响
酶法测定糖化血红蛋白的方法评价及标本前处理对结果的影响陈同庆;周春;陈文清;李振兴;罗兵;唐倩;张文明【摘要】目的:探讨酶法测定糖化血红蛋白(HbA1c)方法学性能及其影响因素。
方法采用酶法测定 HbA1c,评价该方法学的精密度、抗干扰性、回收率、准确性以及标本前处理(抗凝、保存、离心)对结果的影响,分析与高效液相法(HPLC)相关性及偏倚程度。
结果酶法批内高、中、低值变异系数(CV)为1.04%、1.26%、1.37%,批间为1.83%、2.24%、2.64%,与 HPLC 法呈线性相关(r =0.996,P <0.01);HbA1c 靶值浓度为5.20%、6.40%、7.60%、8.80%、10.00%、11.20%,其回收率分别为100.15%、98.91%、98.84%、98.20%、103.62%、99.82%;当葡萄糖小于15.50 mmol/L、尿酸小于516.00μmol/L、胆红素小于217.00μmol/L、三酰甘油小于10.20 mmol/L、尿素小于11.50 mmol/L、清蛋白小于50 g /L、球蛋白小于50 g/L 时,对结果无明显干扰。
肝素钠、乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)、枸橼酸钠抗凝标本 HbA1c 结果在-20~20℃保存3 d 无明显改变(P >0.05);标本500、1000 r/min(R=15 cm)离心不同时间(1、2、5、10 min)以及2000 r/min 离心1 min,其检测结果与3000 r/min 离心5 min 比较,差异有统计学意义(P <0.05)。
结论酶法测定 HbA1c 其精密度、抗干扰性、准确性、线性范围均符合临床要求,与常规方法相比其相关性良好且偏差较小,可完全满足临床对 HbA1c 检测需求。
%Objective To evaluate the methodological performance of the new enzymatic method for detecting glycated hemo-globin(HbAIc)and its influencing factors.Methods HbAIc was detected by the enzymatic method.The precision,anti-interfer-ence,recovery rate,accuracy and the influence of pre-processing(anti-coagulation,preservation,centrifugation)on the detection re-sults were evaluated,its correlation with HPLC and the bias degree were analyzed.Results The within-run coefficients of variation (CVs)forhigh,middle and low value QC samples in the enzymatic assay were1.04%,1.26% and 1.37% respectively and the be-tween-run CVs were1.83%,2.24% and 2.64%,respectively;the enzymatic method showed the linear correlation with HPLC(r=0.996,P <0.01);the HbA1c target value concentrations were 5.20%,6.40%,7.60%,8.80%,10.00% and 11.20% respectively, the recovery rates were100.15%,98.91%,98.84%,98.20%,103.62% and 99.82% respectively;the interference test showed that this method had no significant interference on the detection results when glucose <15.50 mmol/L,UA<516.00μmol/L,bili-rubin <217.00 μmol/L,triglyceride<10.20 mmol/L,urea<11.50 mmol/L,albumin<50 g/L and globulin <50 g/L.The HbA1c detection results in the samples with anti-coagulation by heparin sodium,EDTA-2K and sodium citrate stored for 3 d under -20-20 ℃ had no obvious change(P >0.05);the sample was centrifuged at 500,1 000 r/min(R=15 cm)for different time(1,2,5,10 min)and at 2 000 r/min for 1 min,their detection results had statistical differences compared with the sample centrifuged=3 000 r/min for 5 min (P <0.05).Conclusion The precision,anti-interference,accuracy and linearity range of the enzymatic method all conform to the clinical pared with the conventional method,its correlation is good with small deviation,which can entirely satisfy the demand of the HbAIc detection in clinic.【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2015(000)010【总页数】4页(P1374-1377)【关键词】酶法;血红蛋白 A,糖基化;方法学;性能评价【作者】陈同庆;周春;陈文清;李振兴;罗兵;唐倩;张文明【作者单位】安徽省第二人民医院输血科,安徽合肥 230011;安徽省第二人民医院心内科,安徽合肥 230011;安徽省第二人民医院检验科,安徽合肥 230011;安徽省第二人民医院输血科,安徽合肥 230011;安徽省第二人民医院输血科,安徽合肥 230011;安徽省第二人民医院输血科,安徽合肥 230011;安徽省第二人民医院内分泌科,安徽合肥 230011【正文语种】中文【中图分类】R446.1糖化血红蛋白(HbA1c)是血红蛋白两条B链的N端缬氨酸与葡萄糖非酶化结合而成,其水平不受血糖水平暂时波动的影响,可反映8~12周血糖的平均水平,是判定糖尿病长期控制的良好指标。
糖化血红蛋白常用检测方法
糖化血红蛋白常用检测方法
糖化血红蛋白是指血红蛋白与血糖结合形成的一种化合物,它可以反映人体近3个月内的血糖控制情况。
目前常用的糖化血红蛋白检测方法主要有以下几种:
1. 离子交换色谱法:该方法使用离子交换树脂分离血红蛋白和
糖化血红蛋白,再通过高效液相色谱分析法测定糖化血红蛋白的含量。
2. 免疫测定法:该方法利用特异性抗体与糖化血红蛋白结合,
再通过酶标记或荧光标记等方法检测糖化血红蛋白的含量。
3. 比色法:该方法利用糖化血红蛋白与氨基甲酸钠反应生成的
褐色化合物的吸光度与糖化血红蛋白的含量成正比,通过测定吸光度来计算糖化血红蛋白的含量。
4. 毛细管电泳法:该方法将血液样品通过毛细管,根据血红蛋
白与糖化血红蛋白的电泳迁移率差异来分离并测定糖化血红蛋白的
含量。
以上几种方法各有优缺点,在临床上应根据具体情况选择适当的检测方法。
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糖化血红蛋白高效液相色谱法和金标法的区别
糖化血红蛋白高效液相色谱法和金标法是两种常用的检测糖尿病患者血糖控制情况的方法,它们在原理、操作流程、应用范围等方面存在着一定的差异。
本文将从这些方面对这两种方法进行比较,帮助读者更好地理解它们的异同。
一、原理1. 糖化血红蛋白高效液相色谱法(HPLC)糖化血红蛋白高效液相色谱法是利用高效液相色谱仪对血液中的糖化血红蛋白进行检测的方法。
其原理是利用高效液相色谱柱对血浆样品中的糖化血红蛋白和非糖化血红蛋白进行分离,并通过检测器检测各组分的信号强度,从而 quantitatively 测定血浆中糖化血红蛋白的浓度。
2. 金标法金标法是一种基于化学发光原理的糖化血红蛋白检测方法,其原理是将血浆样品中的糖化血红蛋白与金标记的抗糖化血红蛋白抗体结合,形成复合物,然后通过化学发光仪测定复合物的发光强度,根据发光强度来确定糖化血红蛋白的浓度。
二、操作流程1. 糖化血红蛋白高效液相色谱法(HPLC)(1)取血浆样品,处理样品使之具备色谱法测定的条件。
(2)注射样品至高效液相色谱仪中,经过柱分离和检测器检测。
(3)根据检测结果计算糖化血红蛋白的浓度。
2. 金标法(1)取血浆样品,加入金标记的抗糖化血红蛋白抗体,形成糖化血红蛋白-抗体复合物。
(2)加入化学底物,产生化学发光反应。
(3)用化学发光仪测定发光强度,根据发光强度计算糖化血红蛋白的浓度。
三、应用范围1. 糖化血红蛋白高效液相色谱法(HPLC)HPLC法需要专门的设备和技术人员进行操作,适用于临床检测中心或大型医院。
2. 金标法金标法操作简便,不需要复杂的设备,可以在医院的常规化验室中进行。
金标法更适用于基层医疗机构和社区诊所等地方。
四、总结糖化血红蛋白高效液相色谱法和金标法是两种常用的检测糖尿病患者血糖控制情况的方法,它们在原理、操作流程、应用范围等方面存在着一定的差异。
熟悉这些差异,有助于临床医生根据实际情况选择合适的方法进行检测,以更好地指导糖尿病患者的治疗和管理。
三种方法检测糖化血红蛋白的结果对比分析
三种方法检测糖化血红蛋白的结果对比分析目的:评估免疫比浊法、酶法与离子交换高效液相色谱法测定HbA1c 的结果是否具有可比性。
方法:随机抽取2013年5月检测糖化血红蛋白的标本,同时用三种方法检测糖化血红蛋白。
结果:(HPLC)法的检测结果的平均值与酶法、免疫比浊法检测结果的平均值差异明显,在使用免疫比浊法、酶法检测HbA1c 时,应在报告中注明方法学及标准化的溯源。
以便临床医生对检验科使用的方法学、原理与及参考范围的了解,对病人的诊断、治疗方案、疗效等作出正确判断。
标签:糖尿病、糖化血红蛋白、方法学糖尿病(DM)是常见的、多系统的疾病,影响了碳水化合物、蛋白和脂类的代谢,以及伴有许多退化的并发症。
糖尿病是全世界主要的公共健康问题,已经影响了数亿人,在中国同样情况严重[1]。
糖化血红蛋白是葡萄糖与血红蛋白β链氨基酸末端缬氨酸残基结合产生的一种特定的糖化血红蛋白,它能客观地反应测定前2~3 个月的平均血糖水平,已作为诊断糖尿病的一个标准,在临床上诸多方面广泛应用。
测定方法主要有电泳法、免疫法、层析法、酶法等,其中离子交换高效液相色谱(HPLC)法是公认的金标准检测法[1,2]。
HPLC 法需要特定的仪器,价格昂贵;免疫法、酶法由于可在生化仪上测定,所以已被广泛使用。
为了评估免疫比浊法、酶法测定HbA1c 的结果与离子交换高效液相色谱法的测定结果是否具有可比性,对在我院随机抽取的40例到我院检测糖化血红蛋白的病人的标本,用三种方法检测后,对结果比对分析,现将结果报道如下:1.对象与方法1.1研究对象随机抽取2013年5月40例在安顺市人民医院检测糖化血红蛋白的病人的血标本,同时用三种方法检测糖化血红蛋白。
1.2标本采集清晨空腹采肘静脉血4ml,分装两管用EDTA-2K抗凝,于2小时内同时测定。
1.3检测方法HPLC法的仪器为伯乐D-10,试剂包、校准品、质控品均为原装配套试剂。
免疫比浊法、酶法的仪器使用OLYMPUS AU2700全自动生化分析仪,免疫比浊法的试剂盒为美康试剂盒,酶法试剂盒、标准品均为日本积水医疗株式会试剂。
两种不同方法测定糖化血红蛋白的比较
两种不同方法测定糖化血红蛋白的比较目的比较硼酸亲和层析法(A法)与离子交换高效液相层析法(B法)在测定糖化血红蛋白中的差别,选择一种方便、快捷、准确、适合大批量及自动化的检测方法。
方法A法、B法分别采用硼酸亲和层析法和离子交换高效液相层析法,对两种方法的精密度、变异系数、相关性、甘油三酯的干扰等予以评价。
结果B法在SD、CV等方面的统计数据优于A法,而两种方法的相关系数r =0.98,表明两种方法有高度的相关性,并且高甘油三酯对两种方法均无明显影响。
结论A法人为影响因素大,但是无需特殊仪器,检测时间短,单独标本可随机检测,适合急诊、基层卫生机构的使用。
而B法准确度及精密度高,可进行自动化控制,测量速度快。
[Abstract] Objective To compare the differences of boric acid affinity chromatography (A method) and ion exchange high performance liquid chromatography method (B method) in the determination of glycated hemoglobin, to select a detection methods of convenient, fast, accurate and suitable for high-volume and automated. Methods Method A and method B were used boric acid affinity chromatography and ion exchange high performance liquid chromatography respectively. Evaluated the two methods about precision,coefficient of variation,correlation analysis and the interference of triglyceride etc. Results Method B was superior to method A in the the statistical data of SD, CV, etc , while the correlation coefficient of two methods was 0.98, indicating that the two methods were highly correlated, and high triglycerides was no significant effect to the two methods. Conclusion Method A is easily influenced by artificial factors, but no special equipment, testing time is short, single specimens can be random testing for the emergency and the use of primary health facilities. Method B is very good in accuracy and precision, can be automated control and with high speed.[Key words] Glycosylated hemoglobin ; Boric acid affinity chromatography; High-performance liquid chromatography糖尿病是一种常见的、终生性的内分泌代谢障碍性疾病,具有慢性高血糖,伴随因胰岛素分泌不足或作用无效引起的糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱,可导致不同脏器的损伤、功能障碍和衰竭,目前发病率仅次于心脑血管疾病和肿瘤。
糖化血红蛋白
1、在一新鲜的血液中加高、中、低三种不同的标准参比物,同时用三种不同方法进行回收试验,每一浓度测定5份,取均值。
2、通过对两种方法进行的准确度、重复性、线性回归,以及其他干扰因素进行综合分析。
Hplc法具有准确性高、重复性好、线性佳,影响因素少,而且操作十分简便,检测时间短等优点。
免疫法法虽然准确度、重复性、回归线性还可以,但受到一定条件的限制,试剂保留时间较短。
3、临床实验室主要使用的测定血中糖化血红蛋白(HbA1c)的方法是免疫比浊法。
方法学的差异对临床样本和质控品的影响不同。
我们依据美国国家临床实验室标准化委员会( NCCLS) 批准的《用患者样本进行方法学对比及偏差估计EP9-A 指南文件》( Method Comparison and Bias Est imat ion Using Patient Samples; Approved Guideline; EP9-A) ,4、我们根据NCCLS 的标准化文件EP9-A 对测定糖化血红蛋白的两种方法进行了比较。
EP9-A 文件为临床实验室设备的使用者及生产厂家提供了对评价测定同一被测物的两种方法之间偏倚的实验设计。
对于使用者, 评价的目的在于两种方法在允许范围内能否得到相同的结果。
在实验室中,经常会进行方法学评价的实验, EP9-A 为临床实验室工作者提供了采用患者样本进行方法学比较的标准化途径。
根据 EP9 -A 文件, 比较实验至少应有 40 例样本,排除异常点数不得多于1个,当 r2< 0. 95 时, 应增加测定样本。
5、因此, 在使用质控品评价或监控方法准确性(如进行室间质评)时,应选择适当的产品。
在使用定值质控品评价方法的准确性时,应考虑测定原理对测定结果的影响。
6、[摘要 ] 目的: 建立高效液相色谱 (HPLC )测定糖化血红蛋白(GHb)方法, 并对其进行评价。
方法: 以 Bio-Rex 70阳离子交换树脂为填料, 在 HPLC仪上采用梯度洗脱分离测定GHb , 对其分析性能进行评价。
糖化血红蛋白检测方法学比对
糖化血红蛋白检测方法学比对引言:糖化血红蛋白是糖尿病患者血液中的一个重要指标,用于评估患者的血糖控制情况。
目前,有多种方法可以检测糖化血红蛋白,本文将对其中几种常用的方法进行比对和分析。
一、离子交换色谱法离子交换色谱法是目前最常用的糖化血红蛋白检测方法之一。
该方法利用离子交换树脂将血液中的糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白分离,通过测定两者的吸收峰面积比值来计算糖化血红蛋白的百分比。
该方法具有操作简单、结果准确可靠的优点,但需要专门的色谱仪器和耗材。
二、免疫测定法免疫测定法是另一种常用的糖化血红蛋白检测方法。
该方法利用特异性的抗体与糖化血红蛋白结合,形成抗原-抗体复合物,再通过测定复合物的光学性质或化学反应来定量糖化血红蛋白的含量。
免疫测定法具有高灵敏度、高特异性的特点,但需要特定的抗体和试剂盒,成本较高。
三、高效液相色谱法高效液相色谱法也是常见的糖化血红蛋白检测方法之一。
该方法利用高效液相色谱仪将血液中的糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白分离,并通过检测两者的峰面积比值来计算糖化血红蛋白的百分比。
与离子交换色谱法相比,高效液相色谱法具有操作简便、分离效果好的优点,但需要专门的仪器和耗材。
四、毛细管电泳法毛细管电泳法是一种新兴的糖化血红蛋白检测方法。
该方法利用毛细管电泳仪将血液中的糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白分离,并通过检测两者的迁移时间差来定量糖化血红蛋白的含量。
毛细管电泳法具有快速、高效、高分辨率的特点,但需要专门的仪器和耗材。
五、比对分析以上几种糖化血红蛋白检测方法各有优劣。
离子交换色谱法和高效液相色谱法操作相对简单,结果准确可靠,适用于大规模的临床检测。
免疫测定法具有高灵敏度和高特异性,可以检测血液中极低浓度的糖化血红蛋白,适用于特殊情况下的检测。
毛细管电泳法具有快速、高效、高分辨率的特点,适用于科研实验室中的研究。
因此,在选择糖化血红蛋白检测方法时,需要根据实际需求和条件进行选择。
结论:糖化血红蛋白检测是评估糖尿病患者血糖控制情况的重要手段。
酶法测定糖化血红蛋白方法学性能的相关因素研究
酶法测定糖化血红蛋白方法学性能的相关因素研究冯冬霞;杨振斌;刘亚芹;周宪霖【摘要】目的:研究酶法测定糖化血红蛋白(HbA1c)方法性能的相关因素。
方法选取2013年5月至2015年5月于该院就诊的100例糖尿病患者作为研究对象,选取同期非糖尿病患者100例,标本选择患者的血清,各浓度均为0.2 mL 分装待用,将全血标本离心,离心速度800× g ,5 min。
吸取25μL红细胞加入500μL前处理液,充分混匀后由自动生化分析仪进行检测。
线性试验采取 HbA1c 高值标本,用稀释液稀释成1/10、2/10、3/10、4/10、5/10、6/10、7/10、8/10、9/10、10/10,10个梯度,用酶法进行测定。
采用SPSS 19.0统计软件对影响酶法测定的基本因素进行单因素分析,并进行Logistic多因素回归分析。
结果酶法线性范围是2.5%~15.5%,r=0.9920;经计算得到酶法的批内精密度CV 2.54%,批间精密度CV 2.75%。
患者在血红蛋白(Hb)、离心速度、抗凝剂种类、储存温度、储存时间方面差异有统计学意义(P<0.05)。
Logistic多因素回归分析发现,酶法测定 HbA1c与 Hb、离心速度、抗凝剂种类、储存温度、储存时间具有显著相关性(P<0.01)。
结论酶法测定 HbA1c的方法精确度高,影响其性能的相关因素有Hb、离心速度、抗凝剂种类、储存温度、储存时间,在临床上使用酶法测定 HbA1c时注意相关因素。
【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2016(013)007【总页数】3页(P974-976)【关键词】酶法;糖化血红蛋白;相关因素【作者】冯冬霞;杨振斌;刘亚芹;周宪霖【作者单位】山东省聊城市传染病医院检验科 252000;山东省聊城市传染病医院检验科 252000;山东省聊城市传染病医院检验科 252000;山东省聊城市传染病医院检验科 252000【正文语种】中文糖化血红蛋白(HbA1c)是人体血液中红细胞内的血红蛋白(Hb)β链的N末端缬氨酸与血糖结合的产物。
糖化血红蛋白(hplc法)
糖化血红蛋白(HbA1c)是一种测量血糖控制水平的生物标志物。
HbA1c通过使用高效液相色谱法(HPLC法)进行测量。
以下是关于HPLC法测量糖化血红蛋白的详细解答:1. 什么是糖化血红蛋白(HbA1c)?糖化血红蛋白是一种在血液中的蛋白质,其分子结构包括一个血红蛋白分子和一个糖分子。
当血糖水平升高时,葡萄糖与血红蛋白结合形成HbA1c。
由于红血球寿命较长,HbA1c的测量可以反映过去2-3个月的平均血糖水平,因此被广泛用于糖尿病的血糖控制评估。
2. HPLC法是什么?高效液相色谱法(HPLC)是一种用于分离、识别和测量混合物中成分的高效、高分辨率的分析技术。
它通过在高压下将溶液通过色谱柱,利用柱中的填料和流动相的差异,实现各种化合物的分离。
3. HPLC法测量糖化血红蛋白的步骤:a. 样品准备:血液样品通常需要预处理,包括血红蛋白的提取和纯化。
这可以通过加入抗凝剂、洗涤和脱色步骤来实现。
b. 色谱柱选择:选择适当的色谱柱,通常是离子交换柱,以便有效地分离HbA1c。
c. 流动相的选择:选择合适的流动相,通常是带有缓冲剂和有机溶剂的混合物,以确保在色谱柱中发生分离。
d. 梯度洗脱:使用梯度洗脱的方法,通过调整流动相中缓冲剂浓度,使不同的血红蛋白分离出来。
e. 检测器测量:使用 UV 或荧光检测器来检测不同的血红蛋白分子。
HbA1c的浓度由峰的面积或高度来表示。
f. 标准曲线:使用已知浓度的标准品制作标准曲线,以便将样品中的HbA1c浓度进行定量。
4. HPLC法的优势和应用:•高精度和高分辨率: HPLC法具有很高的分辨率,可以准确测量不同形式的血红蛋白。
•广泛应用: HPLC法广泛用于医学实验室中,用于测量糖化血红蛋白,评估糖尿病患者的长期血糖控制。
总的来说,HPLC法是一种可靠、高效、高分辨率的分析技术,用于测量糖化血红蛋白,为糖尿病患者的血糖控制提供了重要的生物标志物。
酶法与高效液相色谱法测定糖化血红蛋白的结果比对分析
酶法与高效液相色谱法测定糖化血红蛋白的结果比对分析目的评估高效液相色谱法(HPLC)与酶化学法测定糖化血红蛋白的结果相关性和偏倚。
方法使用全自动糖化血红蛋白仪D-10采用高效液相色谱法和东芝TBA-120全自动生化分析仪以酶化学法分别测定40例EDTA-K2抗凝血液样本糖化血红蛋白,对结果进行分析比较;计算线性相关系数,直线回归方程和预期偏倚。
结果全自动糖化血红蛋白仪D-10高效液相色谱法的测定均值为7.78%,TBA-120全自动生化分析仪酶化学法测定均值为7.74%,线性回归方程为y=1.0349x-0.3111,r2=0.9923,无显著性差异(P>0.05),糖化血红蛋白可接受偏倚大于预期偏倚可信区间上限。
结论酶化学法与高效液相色谱法结果相关性良好,可满足临床要求。
标签:高效液相色谱法;酶化学法;糖化血红蛋白糖化血红蛋白Alc(HbAlc)是反映血液中葡萄糖水平的一个中长期指标,国际上通常将其做为糖尿病血糖控制的”金指标”[1]。
目前我室采用高效液相色谱法和酶化学法,为给临床提供可靠地检测结果,比较两种检测方法测定HbAlc 的差异,探讨其可比性,现参照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)标准的EP9-A2文件[2],对其进行比较分析。
1资料与方法1.1一般资料收集我院住院患者糖化血红蛋白标本40例,均为EDTA-K2抗凝全血。
1.2仪器和试剂高效液相色谱法:全自动糖化血红蛋白仪D-10及配套试剂标准品;酶化学法:日本东芝TBA-120全自动生化分析仪,试剂和标准品为九强公司提供的HbAlc测定试剂;质控品为美国Bio-Rad公司生产,批号为33860.1.3方法1.3.1精密度实验根据NCCLS EP5-A文件的要求进行精密度实验。
采用美国Bio-Rad公司的中值质控和高值质控。
批内不精密度实验:同一天将2份质控品连续定20次;批间不精密度实验:将2份质控品测定1次/d,连续测定20d。
不同方法检测糖化血红蛋白结果的比较
不同方法检测糖化血红蛋白结果的比较摘要】目的:分析离子交换层析法与酶法检测糖化血红蛋白的结果。
方法:收集2013年12月本院职工体检标本60例,采取新鲜抗凝全血,使用离子交换层析法与酶法检测糖化血红蛋白,分析两种检测结果的准确性与可靠性。
结果:两种检测方法精密度CV检测,对比差异不显著(P>0.05)。
离子交换层析法与靶值的平均偏倚分别为0.05%,酶法检测为0.04%,差异不显著,无统计学意义(P>0.05)。
HbA1c测定离子交换层析法结果均值为(5.24±0.71)%,酶法测定均值为(5.72±0.65)%,两组结果对比,差异不显著,无统计学意义(P>0.05)。
结论:离子交换层析法法与酶法检测糖化血红蛋白,其精密度较高,检测方法结果差异性不显著,均能完足临床的需求。
【关键词】糖化血红蛋白离子交换层析法酶法【中图分类号】R446.1 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2014)11-0269-02糖化血红蛋白(HbAlc)主要是在非酶促反应作用下,血红蛋白与糖类结合而成的,其合成过程具有缓慢、不可逆特征[1]。
因此,糖化血红蛋白检测,可了解1-2个月前的平均血糖水平,为患者提供个体化、针对性的治疗方法。
糖化血红蛋白的检测方法多种多样,不同的检测方法,其检测原理也各不相同。
为了比较不同方法检测糖化血红蛋白结果,在2013年12月期间,收集了本院职工体检标本分别采取离子交换层析法与酶法进行检测糖化血红蛋白,现将结果报道如下。
1 资料与方法1.1一般资料收集2013年本院职工体检标本60例,其中男性患者21例,女性患者39例,年龄在36~68岁之间,平均年龄为(51.35±2.57)岁,他们大多为非糖病患者。
1.2方法分别用校准品对GH-900PLUS糖化血红蛋白分析仪和日立7180全自动生化分析仪进行校准,采取质控品高低两个值,每批每个浓度测定1 次,重复测定连续时间为3周,进行检测其批内精密度和批间精密度。
三种方法测定糖化血红蛋白比较
三种方法测定糖化血红蛋白比较金强;胡恩赑;杨晓双【摘要】目的比较阳离子交换层析法、胶乳增强法及酶法三种测定糖化血红蛋白的方法.方法对阳离子交换层析法、胶乳增强法及酶法测定糖化血红蛋白的精密度、相关性进行比较.结果阳离子交换层析法、胶乳增强法及酶法的低值批内CV值分别为2.26%、3.35%和3.84%,高值批内CV分别为1.57%、2.38%和2.88%;低值批间CV分别为3.06%、3.78%和7.99%,高值批间CV分别为2.06%、2.91%和4.72 %.以阳离子交换层析法作为对比方法,乳胶增强法与酶法线性方程式分别为Y=1.060 1X+0.069 4,r=0.998;Y=1.021 4X-0.108 5,r=0.989.结论三种方法具有较好的可比性,但胶乳增强法更简便、价廉,值得广大医院推广使用.【期刊名称】《安徽医药》【年(卷),期】2013(017)009【总页数】2页(P1548-1549)【关键词】糖化血红蛋白;阳离子交换层析法;胶乳增强法;酶法;比较【作者】金强;胡恩赑;杨晓双【作者单位】安徽省蚌埠市中心医院检验科,安徽,蚌埠,233000;安徽省蚌埠市中心医院检验科,安徽,蚌埠,233000;安徽省蚌埠市中心医院检验科,安徽,蚌埠,233000【正文语种】中文糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin,HbA1c)作为评价糖尿病长期控制的良好指标,可以指导对糖尿病患者的病情评估、制定治疗方案;但目前检测HbA1c的方法众多,且不同程度存在设备价格高昂、操作繁琐、精度较差等缺点。
我们对常用的三种方法进行比较,现报道如下。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 实验对象收集本院门诊和住院的糖尿病患者及健康体检者EDTA-K2抗凝全血共56例。
1.1.2 试剂和仪器阳离子交换层析法使用DS5型糖化血红蛋白分析仪及配套试剂由英国DREWSCL-ENTIFIC公司提供,胶乳增强法及酶法仪器使用日本日立公司生产的7600-020型全自动生化分析仪,试剂分别由日本第一化学株式会社及宁波美康公司提供。
最全糖化血红蛋白测定的原理与仪器解析
最全糖化血红蛋白测定的原理与仪器解析糖化血红蛋白(HbA1c)是指糖分子与血红蛋白A的糖基化产物。
尽管糖化血红蛋白的生成过程是一个非酶促反应,但当血液中的血糖水平增加时,糖化反应也会增加。
因此,糖化血红蛋白的测定可以反映出患者过去2-3个月内的平均血糖水平,通常用于糖尿病的诊断和疾病管理。
糖化血红蛋白的测定有许多方法,其中最常用的是离子交换层析法(HPLC)和免疫测定法。
下面将详细介绍这两种方法的原理和仪器解析。
1.离子交换层析法(HPLC)离子交换层析法是一种基于糖化血红蛋白与其他血红蛋白成分在离子交换柱中的不同亲和力进行分离的方法。
首先,将样品中的红细胞破碎并溶解,然后经过预处理步骤去除干扰物质。
此后,将溶解的样品装入装有离子交换柱的高效液相色谱仪中。
通过改变梯度洗脱条件,可以将血红蛋白A和其它不同类型的血红蛋白分离开来。
这些分离后的血红蛋白组分通过紫外光检测器进行检测和定量,计算出糖化血红蛋白的百分比。
离子交换层析法对仪器设备的要求相对较高。
需要使用高效液相色谱仪(HPLC)以及配套的离子交换柱和相关的分析软件。
这些设备能够提供高分辨率和高灵敏度的分离和检测,确保准确且可重复的结果。
2.免疫测定法免疫测定法是利用糖化血红蛋白与特异性抗体之间的免疫反应进行测定的方法。
首先,将样品中的红细胞破碎并溶解,然后进行预处理去除干扰物质。
然后,在试剂盒提供的试剂和缓冲液的作用下,糖化血红蛋白与特异性抗体发生免疫反应。
未结合抗体的糖化血红蛋白被洗脱掉,而结合抗体的糖化血红蛋白则与标记的酶或荧光物质形成复合物。
通过测量这些复合物中的酶活性或荧光强度,可以定量测定糖化血红蛋白的浓度。
免疫测定法通常使用酶联免疫吸附检测(ELISA)或免疫荧光法进行糖化血红蛋白的测定。
这些方法对仪器设备的要求相对较低,通常可使用光滑板读数器或荧光光谱仪进行检测。
总结起来,糖化血红蛋白的测定主要采用离子交换层析法和免疫测定法。
离子交换层析法利用离子交换柱对血红蛋白A和其它血红蛋白成分进行分离,然后通过HPLC设备进行定量分析。
糖化血红蛋白测试方法学
糖化血红蛋白测试方法学糖化血红蛋白测试方法学解析糖化血红蛋白(HbA1c)作为评估糖尿病患者血糖控制状况的重要指标,其测试方法学的准确性及可靠性至关重要。
本文将为您详细解析糖化血红蛋白的测试方法及其相关技术要点。
一、糖化血红蛋白概述糖化血红蛋白是红细胞中的血红蛋白与血液中的葡萄糖发生非酶促反应而形成的化合物。
糖化血红蛋白的测定可以反映过去2-3个月内的平均血糖水平,是评价糖尿病患者血糖控制状况的重要指标。
二、糖化血红蛋白测试方法1.高压液相色谱法(HPLC)高压液相色谱法是糖化血红蛋白测定的金标准,具有准确性和重复性好的特点。
该方法通过将血液样本中的血红蛋白与其他蛋白质分离,然后测定糖化血红蛋白的比例,从而得出HbA1c的浓度。
2.免疫比浊法免疫比浊法是一种基于抗原-抗体反应原理的测试方法。
该方法通过特异性抗体与糖化血红蛋白结合,形成免疫复合物,然后通过比浊仪测定复合物的浓度,从而计算HbA1c的值。
3.紫外可见光谱法紫外可见光谱法是通过测定血液样本在特定波长下的吸光度,进而计算糖化血红蛋白的浓度。
该方法操作简便,但准确性相对较低,适用于快速筛查。
4.电泳法电泳法是将血液样本中的蛋白质通过电泳分离,然后通过染色剂对糖化血红蛋白进行染色,从而测定HbA1c的浓度。
该方法操作复杂,但具有较高的准确性。
三、糖化血红蛋白测试方法学注意事项1.样本采集与处理:采集血液样本时应避免溶血、污染和稀释,确保测试结果的准确性。
2.试剂与仪器:选择合适的试剂和仪器,严格按照制造商的操作规程进行测试。
3.质量控制:定期进行室内质控和室间质评,确保测试结果的可靠性和稳定性。
4.方法学比较:不同测试方法之间存在一定差异,实验室应根据自己的条件选择合适的方法,并进行方法学比较。
四、总结糖化血红蛋白测试方法学的选择对于糖尿病患者血糖控制评估具有重要意义。
实验室应根据自己的条件、需求及测试方法的特点,选择合适的测试方法,为临床提供准确、可靠的糖化血红蛋白检测结果。
三种检测系统测定糖化血红蛋白相关性分析及偏倚评估
三种检测系统测定糖化血红蛋白相关性分析及偏倚评估童华诚;刘慧;张美;马敏敏【摘要】目的比较三种检测系统测定糖化血红蛋白(HbA1c)结果的差异并评价其偏倚度.方法分别使用Bio-Rad D-10糖化血红蛋白分析仪应用高压液相层析法(HPLC)、Roche Cobas全自动生化分析仪以免疫法、Afinion AS100分析仪以亲和色谱法测定HbA1c,对64例血液样本作比对测定,评估各检测系统之间测定结果的相关性和偏倚;应用高低两个水平质控品分别测定三种检测系统的不精密度.结果三种不同检测系统测定糖化血红蛋白的结果有良好的相关性(P<0.01),HPLC和亲和色谱法的总不精密度<2.0%,免疫法总不精密度接近4.0%,符合临床测定的性能要求.以D-10 HPLC为参考检测系统,Afinion亲和色谱法和Roche免疫法测定结果的相对偏倚分别为0.17%和0.13%.结论 D-10 HPLC法、Afinion亲和色谱法和Roche免疫法测定糖化血红蛋白的准确度、精密度和偏倚符合临床要求,Roche免疫法测定HbA1c结果变异系数较大,应以HPLC法作为参考检测系统定期作比对分析.%Objective To discuss the comparability of HbA1c results among three kinds of different assay systems .Methods The CLSI protocol EP-9 was applied to investigate imprecision ,accuracy ,and bias .64 whole blood specimens were measured for HbA1c with HPLC method on Bio-Rad D-10 automated analyzer ,with immunoassay method on the Roche Modular automated biochemicalanalyzer ;and with affinity chromatography method on A finion A S100 analyzer .Two different level control samples were measured to evaluate their analyticalvariances .Results The results of HbA1c were analyzed with the three kinds of assay systems showed that the correlation between D-10 HPLCand A finion A S100 analyzer was excellent (Y =1.032X-0 .061,r= 0 .996 ,P < 0 .01) ;meanwhile the correlation between D-10 HPLC and Roche immunoassay method was excellent ( Y = 0 .9704X + 0 .3545 ,r= 0 .992 ,P < 0 .01) .The total CV s for the different detection systems were :D -10 HPLC 2 .0% and 1.6%,A finion HbA1c assay 1.7% and 1.3%,and Roche Modular HbA1c assay 4 .1%,3 .7% .Conclusion The analytic bias ,imprecision and accuracy on HbA1c measurement with the three kinds of assay systems met the acceptance criteria in the clinically relevantrange .Roche immunoassay was proved larger variance on HbA1c assay ,which should be performed regularly comparison tests with reference method .【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2011(015)007【总页数】3页(P1156-1158)【关键词】高压液相层析法;亲和色谱法;免疫抑制比浊法;糖化血红蛋白【作者】童华诚;刘慧;张美;马敏敏【作者单位】南京同仁医院,医学检验科,江苏,南京,211101;南京同仁医院,医学检验科,江苏,南京,211101;南京同仁医院,医学检验科,江苏,南京,211101;南京同仁医院,医学检验科,江苏,南京,211101【正文语种】中文【中图分类】R466.1糖化血红蛋白是血红蛋白与糖类经非酶促反应结合而成的.它的合成过程是缓慢且不可逆的,其血液浓度反映测定前2-3个月机体平均血糖水平。
高效液相色谱法与酶比色法测糖化血红蛋白的方法学比较
高效液相色谱法与酶比色法测糖化血红蛋白的方法学比较摘要】目的:为了提高检验科糖化血红蛋白(HbAlc)结果的准确度;为了增强与临床之间的互认;为了流行病学调查的研究,本文对高效液相色谱法(HPLC)和酶比色法测HbAlC两种方法的检测结果进行比对。
贝克曼AU5800全自动生化分析仪采用酶比色法测定HbAlC,普门H9糖化血红蛋白分析仪采用高效液相色谱法测定HbAlC,对两种仪器两种方法所检测出的结果进行比对分析。
结论:酶法与HPLC法具有良好的相关性,HPLC更适合本科室的检测环境,精密度较高,线性范围较宽,使用专门的仪器检测,减少项目间的交叉污染,更适用于流行病学的研究,方便快捷,具有很大的市场前景。
【关键词】糖化血红蛋白;酶比色法;高效液相色谱法【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2017)26-0146-02Comparison of the methods for the determination of glycosylated hemoglobin by high performance liquid chromatography and enzyme colorimetryWang Conghui, Chen Jie, Yang Xiaobo, Liu Pingping,Department of clinical laboratory; the 253rd Hospital of PLA,010051,China【Abstract】Objective To improve the inspection of glycosylated hemoglobin (HbAlc) in order to enhance the accuracy of the results; and between clinical recognition; in order to study the epidemiological investigation, based on high performance liquid chromatography (HPLC) and enzyme colorimetry HbAlC two methods detection results were compared. Backman AU5800 automatic biochemical analyzer using enzymatic colorimetric method for determination of HbAlC, H9 of the glycosylated hemoglobin analyzer was determined by high performance liquid chromatography HbAlC, detected by the two instruments, the results of the two methods were compared and analyzed. Conclusion The enzyme method and HPLC method have a good correlation, HPLC is more suitable for the detection of environmental department, high precision, wide linear range, detection of specialized equipment, reduce the cross contamination between projects, research, more suitable for epidemiological convenient and has good market prospect.【Key words】Glycosylated hemoglobin enzyme colorimetric method high performance liquid chromatography近年来,随着人们生活水平的提高,糖尿病的发病率也越来越高,且死亡率也在逐年递增,目前糖尿病在全世界的主要发病病因中占第3位,已成为仅次于心血管疾病和癌症的第三大死亡原因[1]。
两种不同原理的方法测定糖化血红蛋白的结果比对评估
两种不同原理的方法测定糖化血红蛋白的结果比对评估糖化血红蛋白(glycated hemoglobin, HbA1c)是一种反映血液中长期平均血糖控制的指标,被广泛用于糖尿病的诊断和管理。
由于糖尿病患者需要经常监测血糖变化情况,因此对于测定糖化血红蛋白结果的准确性和可靠性非常重要。
本文将介绍两种不同原理的方法来测定糖化血红蛋白的结果,并对两种方法进行比对评估。
第一种方法是离子交换色谱法(ion exchange chromatography, IEC)。
该方法通过将血液样品中的血红蛋白分离成不同的亚型,进而测定HbA1c的浓度。
该方法的原理是根据血红蛋白中糖化部分的不同电荷特性,利用离子交换树脂将血红蛋白分离。
IEC方法的优点是准确性高,结果稳定可靠,且可以同时测定不同亚型的HbA1c,提供更详细的信息。
然而,IEC方法也存在一些缺点。
首先,IEC方法需要较为复杂的仪器设备和操作技术,对实验人员的要求较高。
其次,IEC方法在测定过程中耗时较长,通常需要几十分钟到数小时不等,不适用于急诊或临床实验室中的高通量样本测定。
此外,IEC方法对于样本的质量较为敏感,可能受到血红蛋白变异、疾病状态以及药物干扰等因素的影响。
第二种方法是免疫测定法,主要包括免疫比浊法(immunoturbidimetric assay)和免疫荧光法(immunofluorescence assay)。
这些方法使用具有特异性的抗体与HbA1c结合,并通过测量与免疫复合物相关的光学信号来定量测定HbA1c的浓度。
免疫测定法相对于IEC方法而言,更加简便、快速和高通量,适用于临床实验室的高负荷工作。
然而,免疫测定法也存在一些局限性。
首先,它可能受到其他血红蛋白亚型的干扰,导致结果的误差。
其次,不同试剂商和方法之间可能存在差异,影响不同实验室测定结果的一致性和可比性。
此外,免疫测定法通常不能提供关于HbA1c的亚型信息,限制了对HbA1c的深入了解。
糖化血红蛋白色谱法和酶法
1. 糖化血红蛋白色谱法(Glycated Hemoglobin Chromatography): • 糖化血红蛋白是指血红蛋白与血液中的葡萄糖结合形成的化合 物。 • 糖化血红蛋白色谱法通过将血液样本中的糖化血红蛋白与未糖化 的血红蛋白分离,并通过色谱技术进行定量分析。 • 这种方法测量的是血红蛋白中葡萄糖与血红蛋白结合的A1c)。
2. 酶法(Enzymatic Method): • 酶法通过使用特定的酶反应测量血液中的糖化血红蛋白。 • 在酶法中,酶会与糖化血红蛋白反应产生可测量的化学信号。 • 这种方法通常使用自动化的分析仪器进行测量,可以得到糖化血 红蛋白的百分比或绝对值。
这两种方法在临床实践中被广泛使用,特别是用于评估糖尿病患者的长期血糖
控制情况。HbA1c 水平是一个重要的指标,可用于监测血糖的长期平均水平, 提供糖尿病管理和治疗的参考依据。
在使用这些方法进行测量时,还应考虑到可能影响测量结果的因素,如血红蛋 白变异、贫血和其他血红蛋白变体的存在。因此,在进行糖尿病管理时,建议 在临床医生的指导下进行血糖监测和解读结果。
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[ 2 ] 张建立 , 石春雷 , 汪英 , 等. 应用 右旋糖酐应 注意 的几个 问题[ J ] .
中国社区医师 , 1 9 9 3 , 8 ( 1 ) : 1 2 — 1 3 .
[ 3 ] 张利军. 用甘油 消除右 旋糖 酐对 总蛋 白测定 的干扰 E J ] . 检 验 医
检 验 医 学 与 临床 , 2 0 0 9 , 6 ( 4 ) : 2 8 6 .
约为 3 h [ 。但 从 以上 的病 例来 看 在 使 用 右 旋 糖 酐 的 过 程 中 蛋 白测 定 均 有 异 常 升 高 , 而停 药 后 有 复 查 的 3例 病 例 来 看 , 最 短 的是 5 d , 因此 建 议 临 床 医 生 如 果 在 使 用 右 旋 糖 酐 过 程 中 发 现
学, 1 9 9 1 , 6 ( 1 ) : 9 .
以上 再 复 查 , 以 确 定 血 清 蛋 白的 准 确 值 。 3 . 4 有文献报道 , 在 双 缩 脲 试 剂 中添 加 1 5 mL / L甘 油 , 可 有
[ 4 ] 高志亮. 防 止 右旋 糖 酐 对 血 清 总 蛋 白定 量 的 干 扰 [ J ] . 检验 医学 ,
右 旋 糖 酐 之 前应 先进 行 蛋 白 的 测定 , 消 除 由此 造 成 的总 蛋 白测
定影响。
( 收稿 日期 : 2 O 1 3 - 0 4 — 1 8 )
参 考 文 献 [ 1 3 宋新华. 右旋糖酐干 扰双缩脲法 检测血清 总蛋 白的实验研 究[ J ]
-
检 验技 术与 方法 ・
D oI : 1 0 . 3 9 6 9 / J . i s s n . 1 6 7 3 — 4 1 3 0 . 2 0 1 3 . 2 0 . 0 4 4 文献标识码 : A 文 章编 号 : 1 6 7 3 — 4 1 3 0 ( 2 0 1 3 ) 2 O 一 2 7 3 0 — 0 2
糖化 血 红蛋 白酶 法与 HP L C法检 测 方 法 学 比对 分 析
唐 寅
( 张 家港 市 中 医 医 院检 验 科 , 江 苏 张 家港 2 1 5 6 O 0 )
摘 要 : 目的 应用 E P e v a ] u a t o r 软件对酶法糖化血红蛋白( Hb Al c ) 试 剂 盒 与 离子 交 换 高 效 液 相 色谱 法 ( HP L C) 测 定 系统 进 按 照 美 国 临床 实验 室标 准委 员会 ( C L S I ) E P 9 一 A2 一 I R 文件 规 定 程 序 , 使 用 酶 法 及 HP L C 法 两种 方 法 , 对 人
行 方 法 学 比 对 。 方法
抗 凝 全 血进 行 Hb Al c 测定 , 应用 E P e v a ] u a t o r 软 件 中的 定 量 方 法 学 比 较 ( AMC) 模 块 对 结 果 进 行 比 对 分 析 。结 果 酶 法 试 剂 与
HP I c法 结 果 相 符 , 相 关性 好 。AMC分 析 表 明 , 其 De mi n g回 归方 程 为 : y一 1 . 0 0 4 x一0 . 1 0 0 ( r 一0 . 9 9 4 6 ) , 可 满 足 临床 检 测 需 求 。
结 论 同 HP L C法 相 比 , 酶 法检 测 Hb Al c 相 关 良好 , 偏 差较 小 , 可 完 全 满 足 临 床 对 Hb Al c 检 测需求 , 可 以作 为 中 小 型 医 院常 规 检
测 Hb Al c 的方法。E P e v a l u a t o r 软 件 是 中 小 型 医 院 临床 检 验 实验 室在 引入 新 方 法 或 者 新 检 验 系统 进 行 方 法 学 评 价 的 有 效 方 法 。 关键词 : 糖化血红 蛋白; 酶 法 ; HP I C法 ; 方 法 学 比对 ; E P 9 一 A2 一 I R; E P e v a l u a t o r
国际检验 医学杂志 2 0 1 3 年1 0 月第3 4 卷第2 0期
I n t j L a b Me d , O c t o b e r 2 0 1 3 , V o 1 . 3 4 , N o . 2 O
自 肾排 出 , 3 ~4 d内排 出 5 O ~7 o , 低 分 子 右 旋 糖 酐 半 衰 期
一
E S ] 张选玉 , 江福民 , 李素芳 , 等. 血 清 总 蛋 白测 定 右 旋 糖 酐 引 起 干 扰 的消除方法[ J ] . 临 床 检验 杂 志 , 1 9 9 1 , 9 ( 4 ) : 4 4Байду номын сангаас— 4 5 .
[ 6 ] 齐振普 , 冯毓 卿 , 巫清凤 , 等. 能 消除脂质与 葡聚糖 干扰的 总蛋 白
测定方法[ J ] . 国外医学临 床生物 化学与检 验学分 册, 1 9 9 4 , 2 ( 增
刊) : 1 8 6 — 1 8 7 .
问题 , 但考虑成本及操作 问题 , 建 议 临 床 医生 在 给 患 者 使 用
[ 7 ] 陆永绥 , 潘秋英 , 陈秀枢 , 等. 血 清 总 蛋 白测 定 不 同 双 缩 脲 试 剂 及 标准化评价[ J ] . 临 床 检验 杂 志 , 1 9 9 6 , 1 4 ( 3 ) : 1 1 5 - 1 1 7 .
1 9 9 2, 7 ( 1 ): 3 2 - 3 3 .
效 地 消 除这 一 干 扰 , 恢 复 血 清 总 蛋 白测 定 的 准 确 性 ] , 或 将 双
缩 脲 试 剂 中 的酒 石 酸 钾 钠 含 量 加 大 , 氢氧化 钠浓度 降低 , 其 他 成 分 不变 , 改 良后 的双 缩 脲 试 剂 可 消 除 右 旋 糖 酐 对 总 蛋 白测 定 的 干 扰 ] 。 因此 , 对 于检 验 科 来 说 可 通 过 以 上 方 法 来 解 决 这