糖化血红蛋白--标准化及检测方法比较
糖化血红蛋白的测定方法及其在 临床中的应用
2、糖化血红蛋白的特性
（1）糖化血红蛋白比例高低的决定因素
取决于血糖的浓度 血糖与血红蛋白的接触时间
红细胞的存活时间
血糖浓度越高，接触时间越长，HbA1c的比例越大
（2）反应近2-3个月的平均血糖水平
人体内红细胞的寿命一般为120天，在红细胞死亡前，血液
中糖化血红蛋白含量也会保持相对不变。因此糖化血红蛋 白水平反映的是在检测前2-3个月内的平均血糖水平。
美国糖尿病学会（ADA）2011年制定了新的GDM诊断标准，
孕24-28周用75g葡萄糖进行口服葡萄糖耐量试（OGTT）， 以空腹、糖后1h 2h血糖5.1、10.0、8.5mmol/L作为cut off 值，3项中任何1项值达到或超过上述标准即可诊断GDM。
但此项检测过程需要多次采血，操作繁琐，给孕妇带来痛
有关报道，此法测定HbAlc时，如果尿素浓度超过 17mmol/L，每升高1mmol/L会使测定值升高0.04%。另外肾 病患者常伴有贫血,红细胞寿命缩短,在解释检测结果时， 要综合考虑。
3.红细胞生存期的改变 当患有溶血、失血性贫血等时，红 细胞代谢加快，HbAlc值通常下降。缺铁性贫血时，衰老的 红细胞所占的比例增高， HbAlc值会假性增高。
8%
9%Biblioteka 死亡的几率21%心肌梗死的几率
14%
Hb
1%
中风的几率
12%
微血管病变的几率
37%
白内障摘除手术的几率
19%
心力衰竭的几率
16%
糖化血红蛋白检测的标准化
实验室中由于不同的测定原理方法所得到的测定值存在较
大差异，为了解决检测结果的可比性和溯源性问题，国际 上GHb测定的标准化工作已进行了多年，美国（NGSP美国糖 化血红蛋白标准化计划）、日本（JDS日本糖尿病学会）、 瑞典（SFKK瑞典临床化学学会）等国家分别建立了HbA1c的 国家标准计划。并且在参考方法、标准物质、检测与治疗 界值、测定方法及数据转换公式上达成共识。
糖化血红蛋白高效液相色谱法和金标法的区别
糖化血红蛋白高效液相色谱法和金标法是两种常用的检测糖尿病患者血糖控制情况的方法，它们在原理、操作流程、应用范围等方面存在着一定的差异。
本文将从这些方面对这两种方法进行比较，帮助读者更好地理解它们的异同。
一、原理1. 糖化血红蛋白高效液相色谱法（HPLC）糖化血红蛋白高效液相色谱法是利用高效液相色谱仪对血液中的糖化血红蛋白进行检测的方法。
其原理是利用高效液相色谱柱对血浆样品中的糖化血红蛋白和非糖化血红蛋白进行分离，并通过检测器检测各组分的信号强度，从而 quantitatively 测定血浆中糖化血红蛋白的浓度。
2. 金标法金标法是一种基于化学发光原理的糖化血红蛋白检测方法，其原理是将血浆样品中的糖化血红蛋白与金标记的抗糖化血红蛋白抗体结合，形成复合物，然后通过化学发光仪测定复合物的发光强度，根据发光强度来确定糖化血红蛋白的浓度。
二、操作流程1. 糖化血红蛋白高效液相色谱法（HPLC）（1）取血浆样品，处理样品使之具备色谱法测定的条件。
（2）注射样品至高效液相色谱仪中，经过柱分离和检测器检测。
（3）根据检测结果计算糖化血红蛋白的浓度。
2. 金标法（1）取血浆样品，加入金标记的抗糖化血红蛋白抗体，形成糖化血红蛋白-抗体复合物。
（2）加入化学底物，产生化学发光反应。
（3）用化学发光仪测定发光强度，根据发光强度计算糖化血红蛋白的浓度。
三、应用范围1. 糖化血红蛋白高效液相色谱法（HPLC）HPLC法需要专门的设备和技术人员进行操作，适用于临床检测中心或大型医院。
2. 金标法金标法操作简便，不需要复杂的设备，可以在医院的常规化验室中进行。
金标法更适用于基层医疗机构和社区诊所等地方。
四、总结糖化血红蛋白高效液相色谱法和金标法是两种常用的检测糖尿病患者血糖控制情况的方法，它们在原理、操作流程、应用范围等方面存在着一定的差异。
熟悉这些差异，有助于临床医生根据实际情况选择合适的方法进行检测，以更好地指导糖尿病患者的治疗和管理。
三种方法检测糖化血红蛋白的结果对比分析
三种方法检测糖化血红蛋白的结果对比分析目的：评估免疫比浊法、酶法与离子交换高效液相色谱法测定HbA1c 的结果是否具有可比性。
方法：随机抽取2013年5月检测糖化血红蛋白的标本，同时用三种方法检测糖化血红蛋白。
结果：（HPLC）法的检测结果的平均值与酶法、免疫比浊法检测结果的平均值差异明显，在使用免疫比浊法、酶法检测HbA1c 时，应在报告中注明方法学及标准化的溯源。
以便临床医生对检验科使用的方法学、原理与及参考范围的了解，对病人的诊断、治疗方案、疗效等作出正确判断。
标签：糖尿病、糖化血红蛋白、方法学糖尿病（DM）是常见的、多系统的疾病，影响了碳水化合物、蛋白和脂类的代谢，以及伴有许多退化的并发症。
糖尿病是全世界主要的公共健康问题，已经影响了数亿人，在中国同样情况严重[1]。
糖化血红蛋白是葡萄糖与血红蛋白β链氨基酸末端缬氨酸残基结合产生的一种特定的糖化血红蛋白，它能客观地反应测定前2～3 个月的平均血糖水平，已作为诊断糖尿病的一个标准，在临床上诸多方面广泛应用。
测定方法主要有电泳法、免疫法、层析法、酶法等，其中离子交换高效液相色谱（HPLC）法是公认的金标准检测法[1，2]。
HPLC 法需要特定的仪器，价格昂贵；免疫法、酶法由于可在生化仪上测定，所以已被广泛使用。
为了评估免疫比浊法、酶法测定HbA1c 的结果与离子交换高效液相色谱法的测定结果是否具有可比性，对在我院随机抽取的40例到我院检测糖化血红蛋白的病人的标本，用三种方法检测后，对结果比对分析，现将结果报道如下：1.对象与方法1.1研究对象随机抽取2013年5月40例在安顺市人民医院检测糖化血红蛋白的病人的血标本，同时用三种方法检测糖化血红蛋白。
1.2标本采集清晨空腹采肘静脉血4ml，分装两管用EDTA-2K抗凝，于2小时内同时测定。
1.3检测方法HPLC法的仪器为伯乐D-10，试剂包、校准品、质控品均为原装配套试剂。
免疫比浊法、酶法的仪器使用OLYMPUS AU2700全自动生化分析仪，免疫比浊法的试剂盒为美康试剂盒，酶法试剂盒、标准品均为日本积水医疗株式会试剂。
两种不同方法测定糖化血红蛋白的比较
两种不同方法测定糖化血红蛋白的比较目的比较硼酸亲和层析法(A法)与离子交换高效液相层析法（B法）在测定糖化血红蛋白中的差别，选择一种方便、快捷、准确、适合大批量及自动化的检测方法。
方法A法、B法分别采用硼酸亲和层析法和离子交换高效液相层析法，对两种方法的精密度、变异系数、相关性、甘油三酯的干扰等予以评价。
结果B法在SD、CV等方面的统计数据优于A法，而两种方法的相关系数r ＝0.98，表明两种方法有高度的相关性，并且高甘油三酯对两种方法均无明显影响。
结论A法人为影响因素大，但是无需特殊仪器，检测时间短，单独标本可随机检测，适合急诊、基层卫生机构的使用。
而B法准确度及精密度高，可进行自动化控制，测量速度快。
[Abstract] Objective To compare the differences of boric acid affinity chromatography (A method) and ion exchange high performance liquid chromatography method (B method) in the determination of glycated hemoglobin, to select a detection methods of convenient, fast, accurate and suitable for high-volume and automated. Methods Method A and method B were used boric acid affinity chromatography and ion exchange high performance liquid chromatography respectively. Evaluated the two methods about precision,coefficient of variation,correlation analysis and the interference of triglyceride etc. Results Method B was superior to method A in the the statistical data of SD, CV, etc , while the correlation coefficient of two methods was 0.98, indicating that the two methods were highly correlated, and high triglycerides was no significant effect to the two methods. Conclusion Method A is easily influenced by artificial factors, but no special equipment, testing time is short, single specimens can be random testing for the emergency and the use of primary health facilities. Method B is very good in accuracy and precision, can be automated control and with high speed.[Key words] Glycosylated hemoglobin ; Boric acid affinity chromatography; High-performance liquid chromatography糖尿病是一种常见的、终生性的内分泌代谢障碍性疾病，具有慢性高血糖，伴随因胰岛素分泌不足或作用无效引起的糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱，可导致不同脏器的损伤、功能障碍和衰竭，目前发病率仅次于心脑血管疾病和肿瘤。
糖化血红蛋白
1、在一新鲜的血液中加高、中、低三种不同的标准参比物，同时用三种不同方法进行回收试验，每一浓度测定5份，取均值。
2、通过对两种方法进行的准确度、重复性、线性回归，以及其他干扰因素进行综合分析。
Hplc法具有准确性高、重复性好、线性佳，影响因素少，而且操作十分简便，检测时间短等优点。
免疫法法虽然准确度、重复性、回归线性还可以，但受到一定条件的限制，试剂保留时间较短。
3、临床实验室主要使用的测定血中糖化血红蛋白(HbA1c)的方法是免疫比浊法。
方法学的差异对临床样本和质控品的影响不同。
我们依据美国国家临床实验室标准化委员会( NCCLS) 批准的《用患者样本进行方法学对比及偏差估计EP9-A 指南文件》( Method Comparison and Bias Est imat ion Using Patient Samples; Approved Guideline; EP9-A) ,4、我们根据NCCLS 的标准化文件EP9-A 对测定糖化血红蛋白的两种方法进行了比较。
EP9-A 文件为临床实验室设备的使用者及生产厂家提供了对评价测定同一被测物的两种方法之间偏倚的实验设计。
对于使用者, 评价的目的在于两种方法在允许范围内能否得到相同的结果。
在实验室中,经常会进行方法学评价的实验, EP9-A 为临床实验室工作者提供了采用患者样本进行方法学比较的标准化途径。
根据EP9 -A 文件, 比较实验至少应有40 例样本,排除异常点数不得多于1个,当r2< 0. 95 时, 应增加测定样本。
5、因此, 在使用质控品评价或监控方法准确性(如进行室间质评)时,应选择适当的产品。
在使用定值质控品评价方法的准确性时,应考虑测定原理对测定结果的影响。
6、[摘要] 目的: 建立高效液相色谱(HPLC )测定糖化血红蛋白(GHb)方法, 并对其进行评价。
方法: 以Bio-Rex 70阳离子交换树脂为填料, 在HPLC仪上采用梯度洗脱分离测定GHb , 对其分析性能进行评价。
糖化血红蛋白测定标准化
糖化血红蛋白测定标准化糖尿病(Diabetes Mellitus)是一种多病因的代谢疾病，特点是慢性高血糖，伴随因胰岛素分泌不足或/和作用无效引起的糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱，可导致不同脏器的(长期) 损伤、功能障碍和衰竭。
2003年全球糖尿病患者数量接近2亿，预测2005年将再增加1倍，人群患病率将从0.67%上升到2.3%。
中国现有糖尿病患者4000万，占全球总数的1/5。
我国每年用于治疗糖尿病的直接医疗成本超过180亿，占医疗总费用的4%。
监测血糖水平，对糖尿病的诊治是非常重要的，监测结果可用于评价治疗效果、调节饮食、活动和治疗，以达到最好的血糖控制效果。
血、尿葡萄糖和尿酮体测定对糖尿病的日内管理提供了有用的信息，但无法评价一段时期内的平均血糖控制水平。
糖化蛋白测定，主要是糖化血红蛋白和血清蛋白测定，进一步完善了糖尿病的实验室检测手段，其检测结果可以定量过去数月和数星期的血糖平均水平。
糖化血红蛋白(Glycated hemoglobin, GHB)实验通常是检测由血红蛋白和葡萄糖经缓慢过程且非酶促反应所形成的稳定部分，其合成速率与红细胞所处环境中糖的浓度成正比，积累并持续于红细胞120天生命期中。
由于红细胞允许葡萄糖自由渗透，血液样本中糖化血红蛋白水平反应过去120天内的平均血糖水平。
GHB检测用于常规实验室始于二十世纪七十年代末期，且稳定发展至今，成为评价血糖控制水平的重要指标。
临床实验室中应用的GHB 检测方法主要分为两大类，一类方法基于GHB与非GHB的电荷不同，如离子交换色谱、电泳和等电聚焦方法；另一类方法基于血红蛋白上糖化基团的结构特点，如亲和层析和免疫实验，每种方法各有优缺点，对临床实验室而言，尚无“最佳”方法可以选择。
虽然方法不同，结果的表示不同，但在正确操作和解释的情况下，方法间可以有较好的相关性，并能为临床提供有用的信息。
基于在美国进行的糖尿病控制和并发症临床研究(diabetes control and complications trial, DCCT)，表明了糖尿病患者病程的发展和合并症与血糖控制的密切关系，及血浆葡萄糖水平与HbA1c水平间的关系。
两种糖化血红蛋白测定方法的比较
６ １ ） 异 常 组 （ ． ～ １ 和 不 分 组 （ ～ １ ） 并 埘 ． 、 ６１ ４ ． ０ ４） ３ ４ ，
有 关数 据进 行 统 计 分 析 。
１ ４ 统 计 学 处 理 用 Ｅ ｃ ｌ 件 进 行 统 计 学 处 理 ， Ｐ＜ ． ｘｅ 软 以 ０ ０ 为 差 异 有统 计 学 意义 。 ．５
２～７ ３ ６岁 。结 果 表 明 ， 同性 别 、 同年 龄 间 差 异 无 统 计 学 意 不 不
Ｅ Ｊ 樊 国萍 ， 定 勇． 清 ａＬ 岩 藻 糖 苷 酶 在 原 发 性 肝 癌 诊 断 ２ 周 血 —一 中 的应 用 Ｅ］ 淮 海 医 药 ，０ １ ２ （ ）１ ４ Ｊ． ２ １ ，９ ２ ：５． ［ ］ 窦 爱 华 ， 斌 ． 藻 糖 苷 酶 对 原 发 性 肝 癌 的诊 断 意 义 再 评 ３ 徐 岩 价 Ｅ］ 中 国误 诊 学 杂 志 ，０ １ １ （ ）８ ６ Ｊ． ２ １ ，１ ４ ：０ ． ［ ］ Ｎ Ｃ Ｓ Ｅ ａ ａｉｎｏ ｒｃ ｉｎｐｒｏｍ ｎｅｏ ｕｎｉ — ４ Ｃ Ｌ ． ｖ ｌ ｔ ｆ ｅｉｏ ｅｆｒ ａ ｃ ｆｑ ａ ｔａ ｕ ｏ ｐ ｓ ｔ
Ｅ］ 李庆琳 ， ６ 叶跃 红 ， 波 ． 指 标 联 合 检 测 在 肝 病 诊 断 中 的 唐 多 意义 Ｅ］重 庆 医学 ，０ ７ ３ （ Ｏ ：０ ． Ｊ． ２０ ，６ １ ） ９ ７ ［ ］ 刘 培 香 ， 正 泉 ． Ｐ、 Ａ１９ Ａ Ｕ 联 合检 测 对 原 发性 肝 ７ 袁 ＡＦ Ｃ ９ 、 Ｆ 癌 的诊 断 价 值 上 ［］ 中 华 现 代 中 西 医 杂 志 ， ０ ５ ３ ６ ： Ｊ． ２ ０ ， （ ）
（ Ｄ Ａ） 凝 全 血 标 本 ７ 份 Ｅ Ｔ 抗 ３ １２ 试剂与仪器 ． Ｈｂ ｃ Ｈｂ试 剂 及 标 准 、 控 品 来 源 于 北 Ａｌ 、 质 京利德曼公 司， 仪器 为 日立 ７ ０ ６ ０全 自动 生 化 仪 。ＭＱ ２ ０ － ０ ０全
糖化血红蛋白检测方法的标准化PPT课件
注：若无糖尿病症状，尚需另有一次血糖超过11.1mol/l（200㎎/dl)
国际专家委员会建议的HbA1c 诊断糖尿病的切点
• HbA1c≥6.5%作为诊断非妊娠相关的糖尿病的切 点
• 将HbA1c在≥6.0%和≤6.5%范围内的个体定义为 “高危的亚糖尿病状态”
糖尿病的首选诊断标准
• 2009年美国糖尿病协会在糖尿病治疗指南中将 HbA1c列为糖尿病的首选诊断标准。
HbA1c常规测定方法：
Mission
亲和色谱微柱法
操作简单，快速，价廉。据报道EDTA抗凝血标本
优点
在20-24℃下可保存三周，其GHB值仍与第一天同
一血标本值无差异。
缺点
不能测试GHB的单一组分，且包含HbA1c的糖化
组分，但并不影响它作为可靠地糖代谢指标的价值。
HbA1c检测的标准化：
HbA1c标准化
• HbA1c水平反映的是在检测前120天内的平均血糖水平，而与抽血时 间，病人是否空腹，是否使用胰岛素等因素无关，是判定糖尿病长期 控制的良好指标
• HbA1c在患有各种贫血，出血性疾病或应用心得安，吗啡等药物时可 降低，而在服用大量阿司匹林，维生素C或肾功能不全时可增高
HbA1c形成的动力学
优点
价廉，操作快速
缺点
易受以下多种因素的干扰 不稳定型HbA1HbF温度
综上表明：阳离子交换树脂法测定GHB不是一种精确，可靠，重复性强， 灵敏度搞的检测方法。用作要求不太高的衡量糖尿病长期控制水平的监测指 标，尚可勉强采用，而作为要求精确程度高的科研手段是困难的
高压液相法（HPLC)
• 是目前各种GHB测定方法中高效，精确 的方法之一
• 国家，地区标准化（National)：美国，瑞典及日本 • 国际标准化（International)；国际临床化学与医学实验
糖化血红蛋白的标准化
亲和层析法
其它 电泳法10%1%9%11%1%
54%
11%
从室间质评回报统计的在不同时间使用不同的GHB测定方法的实验室比例
目录
1
HbA1c常规测定方法
2
HbA1c检测的标准化
3
HbA1c检测的规范化
标准化
目的:实现检验结果的可比性—是保证检验 质量手段 意义（益处）
可以建立起普遍接受（可用）的参考区间 可以合并分析、比较不同医学中心的研究资 料,促进医学研究和研究成果的转化 能够有效地应用询证医学和检验医学实践指 南
1993 CAP SURVEY(mean± 2SD)
10
50%实验室 报告 HbA1c 21%实验室 报告HbA1 29%实验室 报告GHB 多数实验室结 果与靶值偏倚 很大，不具有 可比性
NGSP （National Glycohemoglobin Standardisation
Program：美国国家糖化血红蛋白标准化计划）
我国201111样本结果 (mean± 2SD）
靶值：6.6 % HbA1c
组 Abbott Architect System/Aeroset组 Bio-Rad HPLC组 TOSOH G7组 Drew DS5/Bio-Rad Diastat组 其它仪器组 实验室数 14 167 69 28 58 平均值 6.55 6.53 6.71 7.21 6.49 中位数 6.59 6.60 6.70 7.05 6.57 标准差 变异系数（%） 最大值 最小值 0.73 0.29 0.42 0.67 0.69 11.15 4.51 6.31 9.30 10.64 7.74 7.10 8.10 8.45 8.00 5.20 5.80 5.00 6.20 4.70
糖化血红蛋白检测金标准
糖化血红蛋白检测金标准糖化血红蛋白检测金标准近年来，糖化血红蛋白检测作为糖尿病管理的重要指标备受关注。
糖化血红蛋白检测金标准是什么？在了解这一主题之前，我们首先需要了解什么是糖化血红蛋白，它在糖尿病管理中的作用以及它的检测标准。
接下来，我们将从浅入深地探讨这一主题，帮助你更加全面地了解糖化血红蛋白检测金标准。
1. 糖化血红蛋白的作用糖化血红蛋白是指血液中的血红蛋白与葡萄糖发生非酶促反应结合形成的新的化合物。
它可以反映出过去两到三个月内的血糖平均水平，因此被认为是糖尿病管理中的重要指标。
它能够帮助医生了解患者的血糖控制情况，从而制定更合理的治疗方案。
2. 糖化血红蛋白的检测方法目前，常用的糖化血红蛋白检测方法主要有HPLC法、凝胶高效液相色谱法和免疫比浊法。
这些方法各有优劣，但目前来看HPLC法被认为是最准确、最稳定的检测方法，被广泛应用于临床实践中。
3. 糖化血红蛋白检测金标准糖化血红蛋白检测金标准是指在进行糖化血红蛋白检测时所需符合的一系列标准和规定。
这些标准通常包括检测方法的选择、标本的采集和保存、实验室的质控要求等方面。
具体来说，金标准要求所选择的检测方法应该具有高准确性、高重现性和较低的干扰因素。
标本的采集和保存也需要遵循严格的规定，以确保检测结果的准确性。
实验室应该有完善的质控体系，确保每一次检测结果都是可靠的。
总结回顾通过以上的了解，我们可以清晰地知道糖化血红蛋白检测金标准是多么重要。
它不仅直接关系到糖尿病患者的治疗效果，也关系到医生对患者病情的准确判断。
我们必须严格遵守糖化血红蛋白检测金标准的要求，以确保检测结果的准确性和可靠性。
个人观点和理解在我看来，糖化血红蛋白检测金标准的制定和执行对于糖尿病管理来说至关重要。
只有通过严格执行金标准，我们才能够获得准确可靠的检测结果，从而更好地指导临床实践和患者的治疗。
我认为在未来的临床实践中，我们还需要不断完善糖化血红蛋白检测金标准，以适应不断变化的医疗需求和技术进步。
三种方法测定糖化血红蛋白比较
三种方法测定糖化血红蛋白比较金强;胡恩赑;杨晓双【摘要】目的比较阳离子交换层析法、胶乳增强法及酶法三种测定糖化血红蛋白的方法.方法对阳离子交换层析法、胶乳增强法及酶法测定糖化血红蛋白的精密度、相关性进行比较.结果阳离子交换层析法、胶乳增强法及酶法的低值批内CV值分别为2.26%、3.35%和3.84%,高值批内CV分别为1.57%、2.38%和2.88%;低值批间CV分别为3.06%、3.78%和7.99%,高值批间CV分别为2.06%、2.91%和4.72 %.以阳离子交换层析法作为对比方法,乳胶增强法与酶法线性方程式分别为Y=1.060 1X+0.069 4,r=0.998;Y=1.021 4X-0.108 5,r=0.989.结论三种方法具有较好的可比性,但胶乳增强法更简便、价廉,值得广大医院推广使用.【期刊名称】《安徽医药》【年(卷),期】2013(017)009【总页数】2页(P1548-1549)【关键词】糖化血红蛋白;阳离子交换层析法;胶乳增强法;酶法;比较【作者】金强;胡恩赑;杨晓双【作者单位】安徽省蚌埠市中心医院检验科,安徽,蚌埠,233000;安徽省蚌埠市中心医院检验科,安徽,蚌埠,233000;安徽省蚌埠市中心医院检验科,安徽,蚌埠,233000【正文语种】中文糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin，HbA1c)作为评价糖尿病长期控制的良好指标，可以指导对糖尿病患者的病情评估、制定治疗方案;但目前检测HbA1c的方法众多，且不同程度存在设备价格高昂、操作繁琐、精度较差等缺点。
我们对常用的三种方法进行比较，现报道如下。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 实验对象收集本院门诊和住院的糖尿病患者及健康体检者EDTA-K2抗凝全血共56例。
1.1.2 试剂和仪器阳离子交换层析法使用DS5型糖化血红蛋白分析仪及配套试剂由英国DREWSCL-ENTIFIC公司提供，胶乳增强法及酶法仪器使用日本日立公司生产的7600-020型全自动生化分析仪，试剂分别由日本第一化学株式会社及宁波美康公司提供。
糖化血红蛋白_标准化与检测方法比较
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检测方法：毛细管电泳法
毛细管电泳能分离检测糖化血红蛋 白和血红蛋白的变异体，样品用量 少、操作简便、重复性好、省时、 高效。 完全自动化操作，简单易用，在减 少人为误差的基础上，重复性也得 到了极大提高。
SEBIA全自动高压液相毛细管电泳仪
检测方法：琼脂凝胶电泳法
Hb于酸性缓冲液条件下(pH6.0)，在 琼脂糖凝胶上的电泳迁移取决于Hb 在凝胶上的吸附情况及其所带的电 荷。HbA0因其Ｎ末端的缬氨酸残 基对凝胶的负电荷有高度的亲和力， 因此它的迁移速率减慢。HbA1c因 它所连接的糖的阻断作用，不可再 与凝胶结合，利用HbA1c和HbA0对 凝胶的亲和力不同，导致的电泳迁 移速率也不同，通过电泳将各成分 分开。
SEBIA蛋白质电泳仪
检测方法：等电点聚集法
在聚丙烯酞凝胶中加入载体两性介 质（如ampholin）的薄板上形成一 个由阳极到阴极逐渐增加的pH梯度。 溶血液中各个组分将移动到各自等 电点的pH位置上，这样就得到比一 般电泳法更好的分划效果和比较集 中的色带。
GE Ettan IPGphor 3等电聚焦电泳仪
糖化血红蛋白
标准化及不同检测方法的差异
基蛋生物 市场推广部
内容目录
1 2 3 4
糖化血红蛋白（GHB） 检测方法及产品示例 糖化血红蛋白标准化 常用检测方法之比较
糖化血红蛋白（GHb）
Hb 血红蛋白
成人血红蛋白分三种， HbA为主要成人Hb
HbA (ßß)
糖化血红蛋白测定标准化
糖化血红蛋白测定标准化糖尿病（Diabetes Mellitus）是一种多病因的代谢疾病，特点是慢性高血糖，伴随因胰岛素分泌不足或/和作用无效引起的糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱，可导致不同脏器的（长期）损伤、功能障碍和衰竭。
2003年全球糖尿病患者数量接近2亿，预测2005年将再增加1倍，人群患病率将从0.67%上升到2.3%。
中国现有糖尿病患者4000万，占全球总数的1/5。
我国每年用于治疗糖尿病的直接医疗成本超过180亿，占医疗总费用的4%。
监测血糖水平，对糖尿病的诊治是非常重要的，监测结果可用于评价治疗效果、调节饮食、活动和治疗，以达到最好的血糖控制效果。
血、尿葡萄糖和尿酮体测定对糖尿病的日内管理提供了有用的信息，但无法评价一段时期内的平均血糖控制水平。
糖化蛋白测定，主要是糖化血红蛋白和血清蛋白测定，进一步完善了糖尿病的实验室检测手段，其检测结果可以定量过去数月和数星期的血糖平均水平。
糖化血红蛋白（Glycated hemoglobin, GHB）实验通常是检测由血红蛋白和葡萄糖经缓慢过程且非酶促反应所形成的稳定部分，其合成速率与红细胞所处环境中糖的浓度成正比,积累并持续于红细胞120天生命期中。
由于红细胞允许葡萄糖自由渗透，血液样本中糖化血红蛋白水平反应过去120天内的平均血糖水平。
GHB 检测用于常规实验室始于二十世纪七十年代末期，且稳定发展至今，成为评价血糖控制水平的重要指标。
临床实验室中应用的GHB检测方法主要分为两大类，一类方法基于GHB与非GHB的电荷不同，如离子交换色谱、电泳和等电聚焦方法；另一类方法基于血红蛋白上糖化基团的结构特点，如亲和层析和免疫实验，每种方法各有优缺点，对临床实验室而言，尚无“最佳”方法可以选择。
虽然方法不同，结果的表示不同，但在正确操作和解释的情况下，方法间可以有较好的相关性，并能为临床提供有用的信息。
基于在美国进行的糖尿病控制和并发症临床研究（diabetes control and complicationstrial, DCCT），表明了糖尿病患者病程的发展和合并症与血糖控制的密切关系，及血浆葡萄糖水平与HbA1c水平间的关系。
检测糖化血红蛋白两种不同方法的比较
检测糖化血红蛋白两种不同方法的比较杜平;尤兰;徐笛;姚文海;王学涵【期刊名称】《新疆医科大学学报》【年(卷),期】2006(029)004【摘要】糖化血红蛋白（HbA1c）为已连接有己糖的HbA1，其可作为糖尿病（DM）长期控制的良好指标，尤其对1型DM和GDM的治疗有监控作用。
糖化血红蛋白的测定方法主要有色谱法、电泳法、免疫法和化学法。
色谱法主要有离子交换层析、HPLC法和亲和法。
免疫法主要包括免疫比浊法、放射免疫法（RIA）、酶免疫法（EIA）、胶乳免疫凝集法（LIAA）等。
本文对竞争性透射免疫比浊法和HPLC法分别测定糖尿病者HbA1c的结果进行比较，以探讨竞争性透射免疫比浊法检测HbA1c其结果的准确性与可靠性。
【总页数】1页(P357-357)【作者】杜平;尤兰;徐笛;姚文海;王学涵【作者单位】新疆医科大学第五附属医院检验科,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学第四附属医院检验科,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学第五附属医院检验科,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学第四附属医院检验科,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学第五附属医院检验科,新疆,乌鲁木齐,830011【正文语种】中文【中图分类】R446【相关文献】1.两种检测糖化血红蛋白方法的方法学比较 [J], 时勇2.两种方法检测糖化血红蛋白比较分析 [J], 吴长蓉;唐熟能3.两种方法检测糖化血红蛋白结果的比较 [J], 钟志强4.两种糖化血红蛋白检测方法的比较和性能评价 [J], 刘凌云;赵元明5.两种不同方法测定糖化血红蛋白的比较 [J], 邱升强因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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检测方法：亲和层析法
由交联了间氨基苯硼酸的琼脂糖珠作 为分离载体。当总的GHb通过载体时，
硼酸可与整合在血红蛋白分子中的葡
萄糖顺位二醇基发生可逆性结合，使 糖化的Hb选择性地结合于凝胶柱上， 其他非糖化Hb等随缓冲液流出；然
后用另一种含糖或多羟化合物的缓冲 液将GHb洗脱下来，利用两部分Hb本 身的颜色，在415nm条件下测定并计 算出亲和色谱所测的GHb。
检测方法：毛细管电泳法
毛细管电泳能分离检测糖化血红蛋 白和血红蛋白的变异体，样品用量 少、操作简便、重复性好、省时、 高效。 完全自动化操作，简单易用，在减 少人为误差的基础上，重复性也得 到了极大提高。
SEBIA全自动高压液相毛细管电泳仪
检测方法：琼脂凝胶电泳法
Hb于酸性缓冲液条件下(pH6.0)，在 琼脂糖凝胶上的电泳迁移取决于Hb 在凝胶上的吸附情况及其所带的电 荷。HbA0因其Ｎ末端的缬氨酸残 基对凝胶的负电荷有高度的亲和力， 因此它的迁移速率减慢。HbA1c因 它所连接的糖的阻断作用，不可再 与凝胶结合，利用HbA1c和HbA0对 凝胶的亲和力不同，导致的电泳迁 移速率也不同，通过电泳将各成分 分开。
HbA1c常用检测方法之比较
11%
免疫法
离子交换色谱 电泳法 亲和层析色谱
11% 54%
67%
24%
31% 2%
1995年 （889家） pt 2013
HbA1c常用检测方法之比较
方法
原理
优势
酶法
使用特别作用于氨基酸末端 糖化的缬氨酸的酶检测 HbA1c
糖化血红蛋白
标准化及不同检测方法的差异
基蛋生物 市场推广部
内容目录
1 2 3 4
糖化血红蛋白（GHB） 检测方法及产品示例 糖化血红蛋白标准化 常用检测方法之比较
糖化血红蛋白（GHb）
Hb 血红蛋白
成人血红蛋白分三种， HbA为主要成人Hb
HbA (ßß)
HbA2 ()
HbF ()
95%
1-3.5%
检测方法：免疫法
比浊法：又有胶乳凝集法和免疫比浊 法两种。可实现和自动化分析仪很好 地结合起来，具有快速、准确、特异 性强、重复性好、灵敏度高、线性范 围宽等优点，可以使用自动化分析仪 进行批量检测。
检测方法：免疫法
免疫层析法：免疫层析法操作简便易 行、快速准确、试剂稳定。更易于实 现POC检测，有助于医生即时获悉患 者血糖水平，并及时给予患者医疗指 导，以避免糖尿病诊断和治疗的延误， 未来有着较为广阔的应用前景。
Bayer 拜安时手持式糖化检测仪
检测方法：酶法
全血经溶血处理后，用特异蛋白内切
酶将Ｈｂ酶解消化成果糖氨基酸，再 经果糖氨基酸氧化酶作用下产生过氧
化氢（H2O2），H2O2的浓度与血液中 GHb的含量呈正比。 H2O2在过氧化物 酶的作用下与相应的色原耦联，发生 颜色变化，根据其变化程度可得H2O2 浓度，进而得知样本中GHb的含量。
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伯乐In2it糖化血红蛋白仪
Alere Afinion™ AS100 Analyzer
检测方法：免疫法
化学发光法：又叫离子捕获法，采用 离子捕捉免疫分析法，应用抗原抗体 反应原理，联合荧光标记物，通过连 接带负电的多阴离子复合物，吸附到 带正电的纤维表面，经过一系列彻底 清洗等步骤后，测定荧光强度变化率， 计算浓度。
<2%
非糖化Hb HbA0
HbA1
糖化Hb
87-89%
HbA1a
<1%
6-8%
HbA1b
<1%
HbA1c
4%-6%
GHb是指结合了任何形式 碳水化合物的血红蛋白， 血红蛋白与糖基发生非酶 促，形成了不可逆的复合 物。
糖化血红蛋白的形成
血红素
血红蛋白HbA由两个α亚基和两个β亚基组成，α和β亚 基上都有糖化位点，其中β亚基第1位缬氨酸主链氨基 糖化率最高。
最小的Hb变异体分析干扰，操作简 单、快速、特异性强，
离子交换HPLC 基于电荷分离血红蛋白组分 能够发现常见的血红蛋白变异体
挑战
不能发现血红蛋白变异体
不能发现血红蛋白变异体，新一代的 试剂盒依然会受到少见变异体的分析 干扰。高浓度样本可能需要稀释
检测的是总糖化血红蛋白，而不是 HbA1c,不能发现血红蛋白变异体。结 合方式为不稳定的键合，会有结合不 稳的情况，影响检测结果 变异体被共洗脱时易被干扰 ，仪器昂 贵，维护成本较高
SEBIA蛋白质电泳仪
检测方法：等电点聚集法
在聚丙烯酞凝胶中加入载体两性介 质（如ampholin）的薄板上形成一 个由阳极到阴极逐渐增加的pH梯度。 溶血液中各个组分将移动到各自等 电点的pH位置上，这样就得到比一 般电泳法更好的分划效果和比较集 中的色带。
GE Ettan IPGphor 3等电聚焦电泳仪
检测方法学分类
根据Ghb和非 GHb带电不同 1、离子交换层析 2、电泳法 3、等电点聚焦法
基于Hb上糖基化 基团的结构特点
1、亲和层析 2、免疫法 3、酶法 4、显色法
检测方法：离子交换层析
主要有高效液相色谱法( high performance liquid chromatography， HPLC) 和手工微柱法。此方法是基 于血红蛋白β 链N 末端缬氨酸糖化 后所带电荷不同而建立。在中性 pH条件下，HbA1c 携带的正电荷 相对较少，因此可通过离子交换 层析法将其与其他组分分离。
不受变异体的分析干扰，成本低、 反应速度快，无需专有仪器，全自 动生化可用
免疫法 硼酸亲和层析法
使用针对糖化的β链氨基酸 末端的抗体检测HbA1c
糖化的血红蛋白被绑定在硼 酸基团树脂时，非糖化的血 红蛋白组分直接流出分析柱
在使用新一代的试剂盒时分析不受 大多数常见变异体的干扰。根据标 记方法不同，可以应用多个检测平 台，可实现全自动和POC检测
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美国NGSP方法
对不同的HbA1c检测 方法采用统一参考标 准(采用HPLC Bio-Rex 70 阳离子交换柱)进行 校准，使不同方法所 测结果具有可比性
日本JDS/JSCC 方法
2000 年，JSCC 启用KO500 阳离子HPLC ，与JDS 合作 设计了新的HbA1c检测校 准物，通过新校准品校准 后的KO500 HPLC HbA1c检 测法，成为JDS/JSCC 的参 考标准化方案
三种国标法的基本原理是通过蛋白质表面净电荷的差异对Hb 进行分离，并未对HbA1c具有 特异性，其结果的溯源仅来自于HPLC 分离的色谱图的峰值，三者所测得“HbA1c波峰”可 能包含其他无法分离开来的非糖化Hb 成分，其测定结果都略高于IFCC 检测值，这同样使 得这三种方法对同一样品所测得的数据不同。
积水医疗酶法生化试剂
糖化血红蛋白检测标准化
● IFCC法：2007 年国际临床化学联合会(IFCC) 重新明确了HbA1c 的命名、 性质、单位: 全称为β 链血红蛋白β链N 末端脱氧果糖基血红蛋白; 特 别强调HbA1c 测定的是“物质分数”，而不是“质量分数”; 推荐使 用( mmol /mol) 作为HbA1c 的单位，此建议为HbA1c 结果数据提供了 非常明确的计量单位，可溯源到溯源链的最高等级国际单位制。
瑞典Mono S 方法
2004 年，GE Healthcare 在 其离子交换操作手册中， 详细介绍了Mono S HPLC 方法用于检测HbA1c的操 作步骤。证实Mono S 5/50 GL 柱检测精度上具有优越 性。
糖化血红蛋白检测标准化
2004 年，Hoelzel 等发表了关于HbA1c检测的IFCC 标准法与美国、日本、瑞典3 个国家标准 法之间的比较研究报告。
血红素
α亚基 β亚基
血红素 血红素
HbA1c糖基化位点结构图
根据糖种类，糖基化血红蛋白可分为葡萄糖糖
化、果糖糖化及乳糖糖基化血红蛋白等。人体 内游离的葡萄糖含量远高于其他糖类物质，β 亚基的氮端缬氨酸主链氨基的糖化概率最高， 因此体内大部分糖基化血红蛋白为β 亚基氮端 缬氨酸与葡萄糖的加合物，该物质被命名为 HbA1c。
毛细管电泳法
基于电荷分离血红蛋白组分
能够发现血红蛋白变异体，，样品 用量少、操作简便、重复性好、省 时、高效
工作流程复杂，需要特定的仪器，设 备成本高