糖化血红蛋白--标准化及检测方法比较
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三种国标法的基本原理是通过蛋白质表面净电荷的差异对Hb 进行分离，并未对HbA1c具有 特异性，其结果的溯源仅来自于HPLC 分离的色谱图的峰值，三者所测得“HbA1c波峰”可 能包含其他无法分离开来的非糖化Hb 成分，其测定结果都略高于IFCC 检测值，这同样使 得这三种方法对同一样品所测得的数据不同。
积水医疗酶法生化试剂
糖化血红蛋白检测标准化
● IFCC法：2007 年国际临床化学联合会(IFCC) 重新明确了HbA1c 的命名、 性质、单位: 全称为β 链血红蛋白β链N 末端脱氧果糖基血红蛋白; 特 别强调HbA1c 测定的是“物质分数”，而不是“质量分数”; 推荐使 用( mmol /mol) 作为HbA1c 的单位，此建议为HbA1c 结果数据提供了 非常明确的计量单位，可溯源到溯源链的最高等级国际单位制。
HbA1c常用检测方法之比较
11%
免疫法
离子交换色谱 电泳法 亲和层析色谱
11% 54%
67%
24%
31% 2%
1995年 （889家）
2013年 （3240家）
Source: ngsp pt 2013
HbA1c常用检测方法之比较
方法
原理
优势
酶法
使用特别作用于氨基酸末端 糖化的缬氨酸的酶检测 HbA1c
行业PPT模板：www.1ppt.com/hangye/ PPT素材下载：www.1ppt.com/sucai/ PPT图表下载：www.1ppt.com/tubiao/ PPT教程： www.1ppt.com/powerpoint/ Excel教程：www.1ppt.com/excel/ PPT课件下载：www.1ppt.com/kejian/ 试卷下载：www.1ppt.com/shiti/
伯乐In2it糖化血红蛋白仪
Alere Afinion™ AS100 Analyzer
检测方法：免疫法
化学发光法：又叫离子捕获法，采用 离子捕捉免疫分析法，应用抗原抗体 反应原理，联合荧光标记物，通过连 接带负电的多阴离子复合物，吸附到 带正电的纤维表面，经过一系列彻底 清洗等步骤后，测定荧光强度变化率， 计算浓度。
检测方法：免疫法
比浊法：又有胶乳凝集法和免疫比浊 法两种。可实现和自动化分析仪很好 地结合起来，具有快速、准确、特异 性强、重复性好、灵敏度高、线性范 围宽等优点，可以使用自动化分析仪 进行批量检测。
检测方法：免疫法
免疫层析法：免疫层析法操作简便易 行、快速准确、试剂稳定。更易于实 现POC检测，有助于医生即时获悉患 者血糖水平，并及时给予患者医疗指 导，以避免糖尿病诊断和治疗的延误， 未来有着较为广阔的应用前景。
检测方法：毛细管电泳法
毛细管电泳能分离检测糖化血红蛋 白和血红蛋白的变异体，样品用量 少、操作简便、重复性好、省时、 高效。 完全自动化操作，简单易用，在减 少人为误差的基础上，重复性也得 到了极大提高。
SEBIA全自动高压液相毛细管电泳仪
检测方法：琼脂凝胶电泳法
Hb于酸性缓冲液条件下(pH6.0)，在 琼脂糖凝胶上的电泳迁移取决于Hb 在凝胶上的吸附情况及其所带的电 荷。HbA0因其Ｎ末端的缬氨酸残 基对凝胶的负电荷有高度的亲和力， 因此它的迁移速率减慢。HbA1c因 它所连接的糖的阻断作用，不可再 与凝胶结合，利用HbA1c和HbA0对 凝胶的亲和力不同，导致的电泳迁 移速率也不同，通过电泳将各成分 分开。
瑞典Mono S 方法
2004 年，GE Healthcare 在 其离子交换操作手册中， 详细介绍了Mono S HPLC 方法用于检测HbA1c的操 作步骤。证实Mono S 5/50 GL 柱检测精度上具有优越 性。
糖化血红蛋白检测标准化
2004 年，Hoelzel 等发表了关于HbA1c检测的IFCC 标准法与美国、日本、瑞典3 个国家标准 法之间的比较研究报告。
糖化血红蛋白
标准化及不同检测方法的差异
基蛋生物 市场推广部
Байду номын сангаас
内容目录
1 2 3 4
糖化血红蛋白（GHB） 检测方法及产品示例 糖化血红蛋白标准化 常用检测方法之比较
糖化血红蛋白（GHb）
Hb 血红蛋白
成人血红蛋白分三种， HbA为主要成人Hb
HbA (ßß)
HbA2 ()
HbF ()
95%
1-3.5%
美国NGSP方法
对不同的HbA1c检测 方法采用统一参考标 准(采用HPLC Bio-Rex 70 阳离子交换柱)进行 校准，使不同方法所 测结果具有可比性
日本JDS/JSCC 方法
2000 年，JSCC 启用KO500 阳离子HPLC ，与JDS 合作 设计了新的HbA1c检测校 准物，通过新校准品校准 后的KO500 HPLC HbA1c检 测法，成为JDS/JSCC 的参 考标准化方案
<2%
非糖化Hb HbA0
HbA1
糖化Hb
87-89%
HbA1a
<1%
6-8%
HbA1b
<1%
HbA1c
4%-6%
GHb是指结合了任何形式 碳水化合物的血红蛋白， 血红蛋白与糖基发生非酶 促，形成了不可逆的复合 物。
糖化血红蛋白的形成
血红素
血红蛋白HbA由两个α亚基和两个β亚基组成，α和β亚 基上都有糖化位点，其中β亚基第1位缬氨酸主链氨基 糖化率最高。
检测方法学分类
根据Ghb和非 GHb带电不同 1、离子交换层析 2、电泳法 3、等电点聚焦法
基于Hb上糖基化 基团的结构特点
1、亲和层析 2、免疫法 3、酶法 4、显色法
检测方法：离子交换层析
主要有高效液相色谱法( high performance liquid chromatography， HPLC) 和手工微柱法。此方法是基 于血红蛋白β 链N 末端缬氨酸糖化 后所带电荷不同而建立。在中性 pH条件下，HbA1c 携带的正电荷 相对较少，因此可通过离子交换 层析法将其与其他组分分离。
血红素
α亚基 β亚基
血红素 血红素
HbA1c糖基化位点结构图
根据糖种类，糖基化血红蛋白可分为葡萄糖糖
化、果糖糖化及乳糖糖基化血红蛋白等。人体 内游离的葡萄糖含量远高于其他糖类物质，β 亚基的氮端缬氨酸主链氨基的糖化概率最高， 因此体内大部分糖基化血红蛋白为β 亚基氮端 缬氨酸与葡萄糖的加合物，该物质被命名为 HbA1c。
SEBIA蛋白质电泳仪
检测方法：等电点聚集法
在聚丙烯酞凝胶中加入载体两性介 质（如ampholin）的薄板上形成一 个由阳极到阴极逐渐增加的pH梯度。 溶血液中各个组分将移动到各自等 电点的pH位置上，这样就得到比一 般电泳法更好的分划效果和比较集 中的色带。
GE Ettan IPGphor 3等电聚焦电泳仪
检测方法：亲和层析法
由交联了间氨基苯硼酸的琼脂糖珠作 为分离载体。当总的GHb通过载体时，
硼酸可与整合在血红蛋白分子中的葡
萄糖顺位二醇基发生可逆性结合，使 糖化的Hb选择性地结合于凝胶柱上， 其他非糖化Hb等随缓冲液流出；然
后用另一种含糖或多羟化合物的缓冲 液将GHb洗脱下来，利用两部分Hb本 身的颜色，在415nm条件下测定并计 算出亲和色谱所测的GHb。
不受变异体的分析干扰，成本低、 反应速度快，无需专有仪器，全自 动生化可用
免疫法 硼酸亲和层析法
使用针对糖化的β链氨基酸 末端的抗体检测HbA1c
糖化的血红蛋白被绑定在硼 酸基团树脂时，非糖化的血 红蛋白组分直接流出分析柱
在使用新一代的试剂盒时分析不受 大多数常见变异体的干扰。根据标 记方法不同，可以应用多个检测平 台，可实现全自动和POC检测
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最小的Hb变异体分析干扰，操作简 单、快速、特异性强，
离子交换HPLC 基于电荷分离血红蛋白组分 能够发现常见的血红蛋白变异体
挑战
不能发现血红蛋白变异体
不能发现血红蛋白变异体，新一代的 试剂盒依然会受到少见变异体的分析 干扰。高浓度样本可能需要稀释
检测的是总糖化血红蛋白，而不是 HbA1c,不能发现血红蛋白变异体。结 合方式为不稳定的键合，会有结合不 稳的情况，影响检测结果 变异体被共洗脱时易被干扰 ，仪器昂 贵，维护成本较高
Bayer 拜安时手持式糖化检测仪
检测方法：酶法
全血经溶血处理后，用特异蛋白内切
酶将Ｈｂ酶解消化成果糖氨基酸，再 经果糖氨基酸氧化酶作用下产生过氧
化氢（H2O2），H2O2的浓度与血液中 GHb的含量呈正比。 H2O2在过氧化物 酶的作用下与相应的色原耦联，发生 颜色变化，根据其变化程度可得H2O2 浓度，进而得知样本中GHb的含量。
毛细管电泳法
基于电荷分离血红蛋白组分
能够发现血红蛋白变异体，，样品 用量少、操作简便、重复性好、省 时、高效
工作流程复杂，需要特定的仪器，设 备成本高
积水医疗酶法生化试剂
糖化血红蛋白检测标准化
● IFCC法：2007 年国际临床化学联合会(IFCC) 重新明确了HbA1c 的命名、 性质、单位: 全称为β 链血红蛋白β链N 末端脱氧果糖基血红蛋白; 特 别强调HbA1c 测定的是“物质分数”，而不是“质量分数”; 推荐使 用( mmol /mol) 作为HbA1c 的单位，此建议为HbA1c 结果数据提供了 非常明确的计量单位，可溯源到溯源链的最高等级国际单位制。
HbA1c常用检测方法之比较
11%
免疫法
离子交换色谱 电泳法 亲和层析色谱
11% 54%
67%
24%
31% 2%
1995年 （889家）
2013年 （3240家）
Source: ngsp pt 2013
HbA1c常用检测方法之比较
方法
原理
优势
酶法
使用特别作用于氨基酸末端 糖化的缬氨酸的酶检测 HbA1c
行业PPT模板：www.1ppt.com/hangye/ PPT素材下载：www.1ppt.com/sucai/ PPT图表下载：www.1ppt.com/tubiao/ PPT教程： www.1ppt.com/powerpoint/ Excel教程：www.1ppt.com/excel/ PPT课件下载：www.1ppt.com/kejian/ 试卷下载：www.1ppt.com/shiti/
伯乐In2it糖化血红蛋白仪
Alere Afinion™ AS100 Analyzer
检测方法：免疫法
化学发光法：又叫离子捕获法，采用 离子捕捉免疫分析法，应用抗原抗体 反应原理，联合荧光标记物，通过连 接带负电的多阴离子复合物，吸附到 带正电的纤维表面，经过一系列彻底 清洗等步骤后，测定荧光强度变化率， 计算浓度。
检测方法：免疫法
比浊法：又有胶乳凝集法和免疫比浊 法两种。可实现和自动化分析仪很好 地结合起来，具有快速、准确、特异 性强、重复性好、灵敏度高、线性范 围宽等优点，可以使用自动化分析仪 进行批量检测。
检测方法：免疫法
免疫层析法：免疫层析法操作简便易 行、快速准确、试剂稳定。更易于实 现POC检测，有助于医生即时获悉患 者血糖水平，并及时给予患者医疗指 导，以避免糖尿病诊断和治疗的延误， 未来有着较为广阔的应用前景。
检测方法：毛细管电泳法
毛细管电泳能分离检测糖化血红蛋 白和血红蛋白的变异体，样品用量 少、操作简便、重复性好、省时、 高效。 完全自动化操作，简单易用，在减 少人为误差的基础上，重复性也得 到了极大提高。
SEBIA全自动高压液相毛细管电泳仪
检测方法：琼脂凝胶电泳法
Hb于酸性缓冲液条件下(pH6.0)，在 琼脂糖凝胶上的电泳迁移取决于Hb 在凝胶上的吸附情况及其所带的电 荷。HbA0因其Ｎ末端的缬氨酸残 基对凝胶的负电荷有高度的亲和力， 因此它的迁移速率减慢。HbA1c因 它所连接的糖的阻断作用，不可再 与凝胶结合，利用HbA1c和HbA0对 凝胶的亲和力不同，导致的电泳迁 移速率也不同，通过电泳将各成分 分开。
瑞典Mono S 方法
2004 年，GE Healthcare 在 其离子交换操作手册中， 详细介绍了Mono S HPLC 方法用于检测HbA1c的操 作步骤。证实Mono S 5/50 GL 柱检测精度上具有优越 性。
糖化血红蛋白检测标准化
2004 年，Hoelzel 等发表了关于HbA1c检测的IFCC 标准法与美国、日本、瑞典3 个国家标准 法之间的比较研究报告。
糖化血红蛋白
标准化及不同检测方法的差异
基蛋生物 市场推广部
Байду номын сангаас
内容目录
1 2 3 4
糖化血红蛋白（GHB） 检测方法及产品示例 糖化血红蛋白标准化 常用检测方法之比较
糖化血红蛋白（GHb）
Hb 血红蛋白
成人血红蛋白分三种， HbA为主要成人Hb
HbA (ßß)
HbA2 ()
HbF ()
95%
1-3.5%
美国NGSP方法
对不同的HbA1c检测 方法采用统一参考标 准(采用HPLC Bio-Rex 70 阳离子交换柱)进行 校准，使不同方法所 测结果具有可比性
日本JDS/JSCC 方法
2000 年，JSCC 启用KO500 阳离子HPLC ，与JDS 合作 设计了新的HbA1c检测校 准物，通过新校准品校准 后的KO500 HPLC HbA1c检 测法，成为JDS/JSCC 的参 考标准化方案
<2%
非糖化Hb HbA0
HbA1
糖化Hb
87-89%
HbA1a
<1%
6-8%
HbA1b
<1%
HbA1c
4%-6%
GHb是指结合了任何形式 碳水化合物的血红蛋白， 血红蛋白与糖基发生非酶 促，形成了不可逆的复合 物。
糖化血红蛋白的形成
血红素
血红蛋白HbA由两个α亚基和两个β亚基组成，α和β亚 基上都有糖化位点，其中β亚基第1位缬氨酸主链氨基 糖化率最高。
检测方法学分类
根据Ghb和非 GHb带电不同 1、离子交换层析 2、电泳法 3、等电点聚焦法
基于Hb上糖基化 基团的结构特点
1、亲和层析 2、免疫法 3、酶法 4、显色法
检测方法：离子交换层析
主要有高效液相色谱法( high performance liquid chromatography， HPLC) 和手工微柱法。此方法是基 于血红蛋白β 链N 末端缬氨酸糖化 后所带电荷不同而建立。在中性 pH条件下，HbA1c 携带的正电荷 相对较少，因此可通过离子交换 层析法将其与其他组分分离。
血红素
α亚基 β亚基
血红素 血红素
HbA1c糖基化位点结构图
根据糖种类，糖基化血红蛋白可分为葡萄糖糖
化、果糖糖化及乳糖糖基化血红蛋白等。人体 内游离的葡萄糖含量远高于其他糖类物质，β 亚基的氮端缬氨酸主链氨基的糖化概率最高， 因此体内大部分糖基化血红蛋白为β 亚基氮端 缬氨酸与葡萄糖的加合物，该物质被命名为 HbA1c。
SEBIA蛋白质电泳仪
检测方法：等电点聚集法
在聚丙烯酞凝胶中加入载体两性介 质（如ampholin）的薄板上形成一 个由阳极到阴极逐渐增加的pH梯度。 溶血液中各个组分将移动到各自等 电点的pH位置上，这样就得到比一 般电泳法更好的分划效果和比较集 中的色带。
GE Ettan IPGphor 3等电聚焦电泳仪
检测方法：亲和层析法
由交联了间氨基苯硼酸的琼脂糖珠作 为分离载体。当总的GHb通过载体时，
硼酸可与整合在血红蛋白分子中的葡
萄糖顺位二醇基发生可逆性结合，使 糖化的Hb选择性地结合于凝胶柱上， 其他非糖化Hb等随缓冲液流出；然
后用另一种含糖或多羟化合物的缓冲 液将GHb洗脱下来，利用两部分Hb本 身的颜色，在415nm条件下测定并计 算出亲和色谱所测的GHb。
不受变异体的分析干扰，成本低、 反应速度快，无需专有仪器，全自 动生化可用
免疫法 硼酸亲和层析法
使用针对糖化的β链氨基酸 末端的抗体检测HbA1c
糖化的血红蛋白被绑定在硼 酸基团树脂时，非糖化的血 红蛋白组分直接流出分析柱
在使用新一代的试剂盒时分析不受 大多数常见变异体的干扰。根据标 记方法不同，可以应用多个检测平 台，可实现全自动和POC检测
PPT模板下载：www.1ppt.com/moban/ 节日PPT模板：www.1ppt.com/jieri/ PPT背景图片：www.1ppt.com/beijing/ 优秀PPT下载：www.1ppt.com/xiazai/ Word教程： www.1ppt.com/word/ 资料下载：www.1ppt.com/ziliao/ 范文下载：www.1ppt.com/fanwen/ 教案下载：www.1ppt.com/jiaoan/
最小的Hb变异体分析干扰，操作简 单、快速、特异性强，
离子交换HPLC 基于电荷分离血红蛋白组分 能够发现常见的血红蛋白变异体
挑战
不能发现血红蛋白变异体
不能发现血红蛋白变异体，新一代的 试剂盒依然会受到少见变异体的分析 干扰。高浓度样本可能需要稀释
检测的是总糖化血红蛋白，而不是 HbA1c,不能发现血红蛋白变异体。结 合方式为不稳定的键合，会有结合不 稳的情况，影响检测结果 变异体被共洗脱时易被干扰 ，仪器昂 贵，维护成本较高
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检测方法：酶法
全血经溶血处理后，用特异蛋白内切
酶将Ｈｂ酶解消化成果糖氨基酸，再 经果糖氨基酸氧化酶作用下产生过氧
化氢（H2O2），H2O2的浓度与血液中 GHb的含量呈正比。 H2O2在过氧化物 酶的作用下与相应的色原耦联，发生 颜色变化，根据其变化程度可得H2O2 浓度，进而得知样本中GHb的含量。
毛细管电泳法
基于电荷分离血红蛋白组分
能够发现血红蛋白变异体，，样品 用量少、操作简便、重复性好、省 时、高效
工作流程复杂，需要特定的仪器，设 备成本高