游离甲状腺素操作规程

游离甲状腺素测定标准操作规程

1 检验申请

单独检验项目申请：游离甲状腺素测定 (缩写FT4)；组合检验项目申请：甲状腺功能组合项目测定；临床医生根据需要提出检验申请。

2 标本采集与处理

2.1标本采集

2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。

2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。

2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。

2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。

2.1.5 下列标本为不合格标本

2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。

2.1.5.2 对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。

2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。

2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。

2.2标本保存

2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清, 避免溶血。

2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定8h，普通冰箱中（2～8℃）稳定48h。需较长时间保存应将血清存放于-20℃。冰冻标本仅可冻融一次。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1d的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。

2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置2～8℃冰箱内保存7d。

2.3标本采集的注意事项

2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动。

2.3.2采血后应使血液充分凝固，离心后的血清中不能含有颗粒物或微量纤维蛋白；可使用选用肝素、EDTA抗凝的血液标本。

3 方法原理

采用竞争结合化学发光免疫分析法，其检测原理如下：

第一步：将抗T4抗体-碱性磷酸酶复合物添加至含有样本的反应管中，使FT4与T4抗体结合；

第二步：将链霉亲和素包被的磁珠及生物素化的T4加入反应管中，样本中FT4和生物素化T4竞争结合酶抗体，结合了生物素化的T4的酶标抗体与磁珠上链霉亲和素结合，在反应管中孵化反应后，磁场吸附磁珠，洗去未结合物质。

第三步：将化学发光物添加到反应管内，发光底物（AMPPD）被碱性磷酸酶所分解，脱去一个磷酸基，生成一个不稳定的中间产物，该中间产物通过分子内电子转移产生间氧苯甲酸甲酯阴离子，处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子从激发态返回基态时，产生化学发光，再通过光电倍增管对反应中所产生的光子数进

油校准曲线来确定。

4 试剂及其他用品

4.1试剂：专用游离甲状腺素测定试剂盒，由深圳迈瑞公司出品。未打开的试剂包保存于2～8℃避光保存，可稳定18个月。开启的试剂包载入系统中可使用28d。

4.2试剂盒组分

4.2.1剂盒组分试剂1（Ra）：

组分：包被着链霉亲和素的超顺磁性微粒，悬浮于缓冲液，含防腐剂。

原料及含量：包被着链霉亲的超顺磁性微粒，>0.1g/L；Tris缓冲液，50mmol/L;Proclin300,0.5g/L;叠氮钠，<1g/L。

4.2.2试剂2标记物（Rb）

组分：抗甲状腺素抗体-碱性磷酸酶标记物稀释于缓冲液，含防腐剂。

原料及含量：抗甲状腺素抗体-碱性磷酸酶标记物，>1mg/L；磷酸盐缓冲液，50mmol/L;Proclin300,0.5g/L;叠氮钠，<1g/L。

4.2.3试剂2缓冲液（Rc）

组分：甲状腺素与生物素结合物稀释于缓冲液，含防腐剂。

原料及含量：甲状腺素与生物素结合物，>1mg/L；磷酸盐缓冲液,50mmol/l；Proclin300,0.5g/L；叠氮钠，<1g/L。

4.2.4 试剂包即开即用，临用时轻柔颠倒混匀数次,无须特殊准备。

4.3其他试剂与用品

4.3.1 化学发光底物：通用发光剂底物液。

4.3.2 清洗缓冲液、反应杯等。

5 校准品与校准模式

5.1校准品:深圳迈瑞公司提供的FT4，需贮2～8℃。

5.2校准类型和校准点数目：非线性模式，6个校准点。

5.3校准周期：在同一批号试剂的使用效期内校准曲线有效，但在间隔21d后需要重新校准。每当：①更换试剂批号或出现质控漂移时；②仪器进行全面保养后；③仪器的重要零件更换后，进行一次校准。

5.4校准液重建方法：液体试剂，直接使用。

6 质控品与室内质控规则

6.1质控品：采用深圳迈瑞公司提供配套的质控品。

6.2质控液重建方法：液态质控血清，即开即用，无需特殊准备。

6.3质控品测定：在每一批标本中测定质控血清一次。

6.4质控规则：采用L-J质控图，以±3s为失控限。标准差由本室实验数据得出。

6.5如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正，并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。

7 适用仪器

深圳迈瑞CL-1200i自动发光免疫分析仪。

8 标本检测步骤

→标本测定→结果复核→报告

9 主要分析参数

无须输入操作参数，仪器根据预设的分析项目参数和试剂条码的信息自动进行分析。标本量15 µL。

10 结果计算

仪器根据校准曲线自动给出每个标本测定结果。测定结果单位以ng/dl.

11 检验结果的报告及范围

11.1结果的报告

11.1.1结果经审核后，确认准确无误后发出报告。

11.1.2报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。

11.1.3如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。

11.2报告范围：0.60 ～ 1.20ng/dl ，超过此范围的标本报告为>1.2 ng/dl。对高值标本不作稀释后复测，因为稀释会干扰标本中游离激素和总激素之间的平衡。

12 操作性能

12.1精密度：批内CV＜4.5％；总CV＜5 %。

12.2 分析范围：0.15 ～ 6.0 ng/dl ( 2～77 pmol/L ) 。

12.3灵敏度：0.3 ng/dl。

12.4方法的有限性及干扰因素：胆红素≤10mg/dL、TG≤ 1800mg/dL、Hb≤ 50m g/dL、总蛋白≤10g/dl，测试结果的干扰偏差在±10%范围内。

13 参考范围及医学决定水平

参考值（血清）： 0.60～1.20 ng/dl

14 临床意义

14.1 FT4是具有生理活性的甲状腺素，FT4升高支持甲亢的诊断，而降低可确定甲低的诊断。

14.2血清结合蛋白的量或亲和性改变时会对血清F T4浓度产生影响。

15 结果审核以及与相关项目的联系

15.1由资深专业人员负责检验结果的审核。

15.2审核者认真审核每一个测定结果，对发出报告结果的可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。

15.3相关项目：与其他相关甲状腺激素等的关系，如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因

16 有关引用程序与文件

16.1 CL-1200i自动发光免疫分析仪仪器标准操作规程。

16.2免疫检验室内质控标准操作程序。

16.3检验结果审核程序。

16.4标本送检和接收程序。

17 参考文献

17.1 陆永绥，张伟民主编. 临床检验管理与技术规程. 杭州:浙江大学出版社,