真菌基因组DNA的快速提取
真菌dna提取原理
真菌dna提取原理
真菌DNA提取使用的是脱氧核糖核酸（DNA）的提取和纯化
技术，以获取真菌的基因组DNA。
提取真菌DNA的过程通
常包括以下步骤：
1. 样品准备：收集真菌样品，并将其保存在适当的条件下，以保持其DNA的完整性和质量。
2. 细胞破碎：将真菌样品置于一个离心管中，加入细胞裂解缓冲液，然后使用机械破碎法（如研磨或超声波处理）破坏真菌细胞壁，释放细胞内的DNA。
细胞破碎还可以使用酶或热处
理来增加DNA释放。
3. 核酸沉淀：加入盐溶液和酒精，通过离心将DNA沉淀到管底。
酒精的加入可以使DNA沉淀出来，而其他杂质则被剥离。
4. 洗涤：将沉淀的DNA用乙醇洗涤以去除盐离子和其他污染物，然后用80%的乙醇重悬沉淀。
5. 保存和纯化：将DNA溶解在缓冲液中，并在低温下储存，
以防止降解。
为了纯化提取的DNA，可以使用聚丙烯酰胺凝
胶电泳、硅胶膜或其他DNA纯化方法进行进一步的处理。
在提取真菌DNA的过程中，需要注意细胞壁的破碎、DNA的损伤和杂质的剥离。
通过优化实验条件和使用高质量的试剂，可以最大程度地提高DNA的产量和纯度。
真菌分子生物学鉴定方法
真菌分子生物学鉴定方法
真菌的分子生物学鉴定方法通常包括以下步骤：
DNA 提取：首先需要从真菌样本中提取DNA。
这可以通过商业DNA 提取试剂盒或自制的DNA 提取方法来实现。
PCR 反应：利用聚合酶链反应（PCR）扩增特定的真菌基因片段。
常用的标记基因包括核糖体RNA基因（rRNA）和线粒体DNA等。
对于真菌，常用的靶标基因包括18S rRNA、ITS（内转录间隔区）和28S rRNA等。
测序：对扩增得到的DNA片段进行测序，可以使用Sanger测序或者更先进的下一代测序技术。
序列分析：将测序得到的DNA序列与数据库中的真菌序列进行比对，以确定真菌的物种。
常用的数据库包括GenBank、UNITE等。
构建系统发育树：利用比对后的序列数据构建系统发育树，以了解真菌的亲缘关系和分类位置。
各种DNA提取方法
各种DNA提取方法提取方法提取方法提取方法一，基因组DNA提取方法制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。
在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。
主要是CTAB方法，其他的方法还有1物理方式:玻璃珠法超声波法研磨法冻融法。
2化学方式：异硫氰酸胍法碱裂解法3生物方式:酶法。
根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等试验步骤：1、贴壁细胞用胰酶消化，离心收集。
2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次，离心收集。
试验步骤2再重新作一边。
3、加入5mlDNA提取缓冲液，(10mmol/%SDS)混匀。
4、加入25ul 蛋白酶K使终浓度达到100ug/ml 混匀，50℃水浴3h 5、用等体积的酚抽提一次，2500rpm离心收集水相，用等体积的（酚，氯仿，异戊醇）混合物抽提一次，2500r/min离心收集水相6、用等体积的氯仿，异戊醇抽提一次。
加入等体积的5mol/L的LiCL混匀，冰浴，10min.。
7、2500rpm离心10min.转上清于一离心管中。
加入等体积的异丙醇。
室温10min。
2500rpm离心10min。
弃上清。
8、加入倍体积3mol/L乙酸钠与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。
-20℃20min。
9、12000r/min室温离心5min。
弃上清。
将DNA 溶于适量TE中。
二，外周血DNA提取技术分离外周血白细胞提取方法：试验步骤：1、取人肘静脉血5ml，EDTA抗凝，2500rpm 离心10min。
2、小心吸取上层血浆，分装到3个离心管中。
3、在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15min。
4、2500rpm离心10min，弃上清。
5、加入10ml 溶血液，摇匀，冰浴15min。
6、3000rpm离心10min，弃上清。
7、倒置离心管，去掉残液。
8、得白细胞，－80℃冻存。
Col-D0601 真菌DNA快速提取试剂盒
真菌DNA快速提取试剂盒Col-D0601试剂盒应用本试剂盒针对真菌特征开发的裂解液DF能够在10分钟内将真菌裂解，10分钟完成真菌的提取和纯化。
提取的基因组DNA完整性高，适合PCR、qPCR、酶切、克隆、Southern杂交、文库构建等。
本试剂盒仅供研究使用，不可用于临床、食品、化妆品等领域。
试剂盒组成组分Col-D0601（50T）编号裂解液DF50mL Col-D0601A洗涤液DFW125mL Col-D0601B洗涤液DFW210mL Col-D0601C 洗脱液F5mL玻璃珠 2.5g Col-D0601DDNA纯化柱50套Col-D0601E备注：第一次使用前，在洗涤液DFW2中加入48mL无水乙醇，并标记“√”，避免重复加入。
保存条件室温保存一年。
自备材料水浴锅或金属浴、无水乙醇、无DNase无RNase离心管、β-巯基乙醇、RNaseA（货号QR0101）使用方法1.真菌培养液1-3mL，12,000rpm离心1分钟，弃培养液。
或收集菌斑100mg。
2.加入1mL裂解液DF和50mg玻璃珠，涡旋震荡5分钟。
3.加入20μLβ-巯基乙醇，65℃孵育2分钟。
4.12,000rpm离心1分钟，取上清。
5.（选做）加入5μL RNase A（10mg/mL），室温静置5-10分钟。
6.加入0.5倍体积无水乙醇，充分混匀。
7.全部加到DNA纯化柱中，12,000rpm离心30秒，倒掉收集管中废液。
8.向DNA纯化柱中加入500μL洗涤液DFW1，12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中废液。
9.向DNA纯化柱中加入500μL洗涤液DFW2，12,000rpm离心30秒，倒掉收集管中废液。
10.重复步骤9一次。
11.12,000rpm离心2分钟，倒掉收集管中废液。
12.将吸附柱放入无DNase无RNase离心管中，加入30-50μL洗脱液F，室温放置1分钟。
13.12,000rpm离心2分钟，得到DNA溶液，-80℃保存。
实验七 真菌DNA的提取
实验七：真菌基因组DNA的提取（CTAB法）一、实验目的：1.初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法。
2.观察提取出来的DNA物质二、实验原理：CTAB法原理CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。
在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl)，CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。
通过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
CTAB提取缓冲液的经典配方Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；EDTA 螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性；NaCl 提供一个高盐环境，使DNP(2,4-二硝基苯酚)充分溶解，在于液相中；CTAB 溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除氯仿：加速有机相与液相分层。
异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。
异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。
另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。
异丙醇：沉淀DNA。
最后用两个梯度酒精冲洗DNA。
三、实验材料和仪器用具：材料：板栗疫病病原菌（Cryphonectria parasitica子囊菌亚门、核菌纲、球壳目、间座壳科、内座壳属的栗疫菌）仪器和试剂：离心机、微量移液器、水浴锅、冰箱、石英砂、CTAB、β-巯基乙醇、氯仿/异戊醇（24：1）、异丙醇、70%酒精、95%酒精四、试验方法和步骤：（1）在超净工作台上刮取2mg菌丝于滤纸，吹干，装于灭菌的离心管中；（2）加入500ul经65℃水浴充分溶解的CTAB、2ulβ-巯基乙醇充分混匀；（3）加入石英砂用研磨棒充分研磨；（4）置于65℃水浴锅中水浴一小时，每十分钟颠倒摇匀一次；（5）加入500ul氯仿/异戊醇（24：1），颠倒混匀；（6）室温下，11000rpm离心10min；（7）取上清液，加入0.5×V上清液异丙醇，颠倒混匀；（8）-20℃保存2.5h（9）将离心管从-20℃取出室温12000rpm离心10min；（11）弃去上清，加入70%乙醇750ul，12000rpm离心1min；（12）弃去上清，加入95%乙醇750ul，12000rpm离心1min弃去上清；（13）在超净工作台中吹干。
菌落pcr技术操作流程
菌落pcr技术操作流程菌落PCR技术是一种用于检测微生物菌落中的特定基因或序列的方法。
通过这种技术，可以快速、准确地鉴定微生物菌落中的细菌、真菌或其他微生物种类，为微生物学研究和临床诊断提供了重要的工具。
菌落PCR技术的操作流程如下：1. 菌落提取：首先，需要从培养基上的菌落中提取DNA。
可以使用商业提取试剂盒或自制提取试剂进行提取。
将菌落取出并加入提取试剂，经过离心、洗涤等步骤，最终得到纯净的DNA。
2. PCR反应准备：准备PCR反应体系，包括DNA模板、引物、dNTPs、酶和缓冲液等。
引物是用于扩增目标基因的特异性引物，需要根据目标基因的序列设计。
将这些成分混合均匀，放入PCR仪中。
3. PCR扩增：将PCR反应体系放入PCR仪中，进行扩增反应。
PCR反应通常包括变性、退火和延伸等步骤，通过循环反复进行，最终得到目标基因的扩增产物。
4. 凝胶电泳：将PCR扩增产物进行凝胶电泳分析，可以检测扩增效果和目标基因的大小。
将PCR产物加入琼脂糖凝胶槽中，进行电泳分离，通过紫外光照射观察凝胶中的DNA条带。
5. 测序分析：对PCR扩增产物进行测序分析，可以确定目标基因的序列。
将PCR产物送至测序机进行测序，得到目标基因的序列信息。
6. 数据分析：对测序结果进行数据分析，可以鉴定微生物菌落中的种类和数量。
通过比对数据库中的序列信息，可以确定目标基因的来源和特征。
通过菌落PCR技术，可以快速、准确地鉴定微生物菌落中的细菌、真菌或其他微生物种类，为微生物学研究和临床诊断提供了重要的工具。
这种技术操作简单、快速，可以应用于各种微生物学研究领域。
霉菌提取DNA方法
CTAB法提取真菌基因组DNA1. 取100mg菌体至预先装有300mg石英沙的1.5ml离心管中；2.在离心管中加入500ul 2X的CTAB裂解液（2% CTAB W/V，100mmol/L Tris·Cl, pH8.0, 20mmol/L EDTA, 1.4mol/L NaCl）；3.用专用塑料槌充分研磨得到均一的浆状物；4. 60℃水浴 1 小时（10分钟翻转离心管一次）；5. 加入2/3体积的苯酚/氯仿/异戊醇溶液（25：24：1）, 颠倒混匀(需带手套, 防止损伤皮肤)，室温下静置5-10分钟, 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。
6. 室温下13000rpm离心30分钟；7. 仔细移取上清液至另一1.5ml离心管,重复5-7步骤3-5次，直到两个界面没有沉淀；8.小心加入2倍体积的100%的冷乙醇（-20度）；9.-20度放置3个小时或者过夜；10.4度，13000rpm离心30分钟；11.小心倾去上清，将离心管压在干净吸水纸上吸干；12.沿离心管内壁缓慢加入200ul 70%的冷乙醇（4度）,尽量把壁上的沉淀洗入管底；13.11000rpm，4度离心20分钟；14.倾去上清，晾干；15.加入50-100ul TE（10mmol/L Tris·Cl, pH8.0, 1mmol/L EDTA,300ug Rnase）到离心管中；16.37℃水浴30分钟, 除去RNA；17.重复5-13步骤，加入100ulTE溶解, -20贮存。
18. 取2μl DNA样品在0.7% Agarose胶上电泳, 检测DNA的分子大小。
同时取15μl稀释20倍, 测定OD260/OD280, 检测DNA含量及质量。
丝状真菌组织DNA的提取
生物技术 9 (6) :38 - 41 ,1999 Biotechnology
丝状真菌组织 DNA 的提取
韩利刚
(第二军医大学南京军医学院病原学教研室 ,南京 ,210099)
袁 毅 王 罡
(解放军农牧大学农学系 ,长春 ,130062)
用 CTAB 法直接从丝状真菌的新鲜菌丝中提取 DNA ,并将所提取 DNA 进行随
40
生 物 技 术 9 卷 5 期
图 2 引物 OPB08 - P4 的扩增图谱 (左一为分量标记λ - DNA/ EcoR Ⅰind Ⅲ) , 注 :各加样孔的加样顺序见表 1 。
模板 DNA 50ng , Taq 酶 215U 。程序如下 : 94 ℃2min ; 然后 35 个循环 , 94 ℃2min , 72 ℃ 1min ,36 ℃1min ;72 ℃延时 10min 。表面 20μl 石蜡油覆盖 。对照不加模板 DNA ,其它条件 均相同 。
11214 RAPD : 以所提丝状真菌的 DNA 为 模板 ,进行 RAPD 扩增 。 1121411 引 物 : OPB08 - P4 ( GTCCA2 CAC GG) ; OPC07 - P8 ( GTCCC GAC GG) ,均 购自上海细胞所癌基因研究室 。 1121412 RAPD 反应条件 : 反应体积 25μl : dN TP 0. 25mM , MgCl2 310mM ,引物 40ng ,
机引物多态性扩增 ( RAPD) ,得到了较清晰的扩增图谱 ,证明该法为提取真菌 DNA
以用于分子生物学研究的一种有效方法 。
关键词 :DNA 提取 ,丝状真菌 ,RAPD
目前已有多种提取丝状真菌 DNA 的方 法见诸报道 ,如 CTAB 法及氯化苄法等[1 ] 。
一种适合于PCR扩增的真菌基因组DNA提取方法
ｔ ｆ ２ ０ Ａ ８ ｎ １ ｉ ｏ ６ ／ ２ ０ａ ｄ１ ０～１０ ｇ・ 一１Ｄ Ａ ｗ ｒ ｂａ ｅ ｏ ｖｒ ｒｍ ｃｌ （ ｅ ｅ ｈ）ｆ ｉｅｅｔ ｏ Ａ ７ ￣ ｇ Ｎ ｅｅｏ ｔ ｎ ｄｆ ｍ ｅ ｅｙｇａ ｍｙｅ ａ ｗ ｔ ｉ ｔｏ ｆ ｒｎ ｉ ｒ ｉ ｗ ｇ ｄｆ
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ｓｒ ｉ ｓ Ｔ ｅ ｒ ｓ ｄ ａ ｈ ｅ ｌｔ ｓｏ Ｃ ａ ｄ ｔ ｅ ａ ｌ ｅ ａ ｄ ｒ ｌａ ．ｓ ｂ ｅ ａ ｄ ｒ ｌ ｌ ． ｔ ｎ ． ｈ ｙ ｗｅ ｅ ｕ ｅ ｓｔ ｅ ｔｍｐ ａｅ ｆＰ Ｒ ｎ ｈ ｍｐ ｉ ｄ ｂ ｎ ｓ ｗｅ ｅ ｃ ｅ ｒ ｔ ｌ ｎ ｅｉ ｅ ａ ｉ ｆ ａ ｂ ａ ｉ ｓ ｔｃ ｎ ｑ ｅ ｗ ｓｓｍｐ ｅ ｏ ｖ ｎ ｅ ｔａ ｄ ｉ ｅ ｐ ｎ ｉ ｅ ｈ ｃ ａ ｓ ｅ ｉｌ ｄ ｐ ｅ ｏ ｅ ｔ ｃｉｎ ｏ ｎ ａ ｅ ｏ ｃ ｅ ｈ ｉ ｕ ａ ｉ ｌ ，ｃ ｎ ｅ ｉｎ ｎ ｎ ｘ ｅ ｓｖ ，ｗ ｉｈ ｗ ｓｅ ｐ ｃ ａｌ ａ ａ ｔｄ ｔ ｘ ｒ ｔ ｆｆ ｇ ｇ ｎ ｍｉ ｙ ａ ｏ ｕ ｌ ＤＮＡ ｗｉ ｕ ｄ ｎ ｒ ｔ ｉ ｓ ａ ｄ ｐ ｌ ｓ ｃ ｈ ｒ ｅ ． ｔ ａ ｎ ａ ｔｐ ｏｅ ｎ ｎ ｏ ｙ ａ ｃ ａ ｉ ｓ ｈｂ ｄ Ｋｅ ｒ ｓ Ｍｅ ｉｉ ａ ｕ ｇ ，ｅ ｄ ｐ ｙ ｉ ｕ ｇ ，ＤＮ ｅ ｔａ ｔ ｎ，ｉ ｒ ｖ ｄ Ｓ ｔ ｏ ｙ ｗｏ ｄ ： ｄ ｃｎ ｌ ｎ ｉ ｎ ｏ ｈ ｔ ｆ ｎ ｉ ｆ ｃ Ａ ｘ ｒ ｃ ｉ ｏ ｍｐ ｏ ｅ ＤＳ ｍｅｈ ｄ
真菌提取试剂盒
真菌基因组DNA快速抽提试剂盒试剂盒组成组分SK8229，50次SK8230，100次Buffer Digestion24 ml48 mlBuffer PF12 ml24 mlTE Buffer (pH 8.0)10 ml20 ml操作手册1份1份保存方法及注意事项本试剂盒于常温运输，室温（15-25°C）保存，有效期为一年，4°C保存时间更长。
Buffer Digestion中含有刺激性化合物，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。
沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。
产品介绍本试剂盒是生工生物工程（上海）有限公司最新研制成功的一种真菌基因组DNA快速抽提试剂盒。
无需使用苯酚、氯仿等有毒试剂。
从100 mg新鲜大型真菌（如蘑菇）样品中可以获得10-20 µg DNA，OD260/OD280比值一般为1.7-1.9。
抽提获得的DNA可用于酶切、PCR、文库构建、Southern blot等相关实验。
标准抽提步骤自备材料：水浴锅、小型高速离心机（最大离心力 ≥12,000 × g）、1.5 ml离心管、75%乙醇、异丙醇、β-巯基乙醇等。
Buffer Digestion在低温下可能产生沉淀，使用前请检查，如有沉淀，请于65°C溶解后使用。
提前将水浴锅调至65°C备用。
1.取50-100 mg新鲜大型真菌（如蘑菇）或20 mg干燥的子实体或菌丝用液氮研磨成粉末，加入到1.5 ml离心管中。
加入400 µl Buffer Digestion和4 µl β-巯基乙醇，震荡混匀。
65°C水浴1 h至细胞完全裂解。
2.加入200 µl Buffer PF，充分颠倒混匀，-20°C冰箱放置5 min。
3.室温10,000 rpm离心5 min，将上清液（500-550 µl）转移到新的1.5 ml离心管中。
真菌dna提取步骤
真菌dna提取步骤
真菌DNA提取是一项重要的实验技术，它可以用于研究真菌的遗传学特性，如基因组结构、功能基因的表达和调控等。
下面将介绍真菌DNA提取的步骤。
步骤一：样品准备
首先需要准备真菌样品，可以是培养物或者从自然环境中采集的真菌菌丝。
如果是培养物，需要在生长期内收集菌丝，如果是野生真菌，需要在采集后尽快处理样品。
步骤二：细胞破碎
将真菌样品放入离心管中，加入适量的研磨珠和研磨缓冲液，使用高速震荡器或者研磨器将样品破碎。
破碎后离心管中的混合物应该是均匀的悬浮液。
步骤三：细胞裂解
将破碎后的真菌悬浮液转移到离心管中，加入适量的裂解缓冲液和蛋白酶K，混合均匀后在60℃水浴中孵育30分钟。
这一步可以使真菌细胞壁和细胞膜破裂，释放DNA。
步骤四：DNA纯化
将裂解后的真菌悬浮液转移到离心管中，加入等体积的酚/氯仿/异丙醇混合液，混合均匀后离心分离。
上层的DNA溶液可以通过吸管转移到新的离心管中，加
入等体积的异丙醇混合液，混合均匀后离心分离。
上层的DNA沉淀可以用70%乙醇洗涤，最后用去离子水溶解DNA。
步骤五：DNA浓度和质量检测
使用分光光度计或者凝胶电泳等方法检测提取的DNA浓度和质量。
DNA的浓度应该在50-100 ng/μL之间，质量应该高，没有明显的降解或污染。
综上所述，真菌DNA提取的步骤包括样品准备、细胞破碎、细胞裂解、DNA 纯化和DNA浓度和质量检测。
这些步骤需要严格控制条件，以确保提取的DNA 质量高、纯度高、浓度适宜，从而保证后续实验的成功进行。
(完整版)新型植物基因组DNA快速提取试剂盒使用说明书
◆新型植物基因组DNA快速提取试剂盒◆目录号DN15◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外新型植物基因组DNA快速提取试剂盒目录号：DN15目录编号包装单位DN1501 50次DN1502 100次DN1503 200次❖适用范围：适用于快速提取植物组织、细胞、真菌基因组DNA❖试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次100次200次RNaseA(10mg/ml)-20℃250 μl500 μl 1 ml 缓冲液AP1 室温25 ml 50 ml 100 ml 缓冲液AP2 室温10 ml 20 ml 40 ml缓冲液AP3/E 室温15 ml 25 ml 50 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇漂洗液WB 室温15 ml 25ml 50ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温15 ml 20 ml 40 ml吸附柱AC 室温50个100个200个收集管（2ml）室温50个100个200个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.裂解液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀，可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解（AP3加入乙醇前可加热，加入乙醇后不可加热），恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
❖产品介绍：该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统，适合于从含酚类、多糖类和酶抑制物的植物样品中快速简单地提取基因组DNA。
可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的植物样品DNA的纯化工作。
提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质，纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。
新鲜或干燥的植物组织（细胞）磨碎后经裂解液裂解；蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除；然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 进一步将多糖，多酚和细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
基因组DNA的分离纯化提取方法综述
基因组DNA的分离纯化提取方法综述
1.高盐法：
高盐法是最常用的基因组DNA提取方法之一、该方法利用高浓度盐水（如NaCl）沉淀DNA，同时去除蛋白质和其他污染物。
步骤包括细胞破碎、蛋白质沉淀和DNA沉淀。
此方法简便、廉价，适用于大多数细胞类型。
2.酚酚氯仿提取法：
酚酚氯仿提取法是另一个常用的基因组DNA提取方法。
该方法利用酚
酚提取细胞组织中的DNA，并通过氯仿的添加分离DNA和蛋白质。
此方法
适用于多样的生物标本，如细菌、真菌、植物等。
3.环硅酸盐法：
环硅酸盐法基于DNA与硅颗粒间的结合原理。
在此方法中，细胞裂解后，DNA与硅颗粒结合形成复合物，复合物通过离心和洗涤步骤获得纯化
的DNA。
该方法适用于基因组DNA的高通量纯化。
4.硅基附着法：
硅基附着法也是一种利用硅颗粒的DNA分离纯化方法。
此方法常利用
硅基膜滤板或硅颗粒填充的柱子，使DNA与硅基结合，然后通过洗涤和离
心步骤分离纯化DNA。
该方法适用于小样本量或少量目标DNA的纯化。
5.磁珠吸附法：
磁珠吸附法是一种快速高效的DNA提取方法。
通过特定的磁珠与DNA
的结合，可将DNA快速提取纯化。
该方法通常结合磁力分离和洗涤步骤，
使DNA与磁珠结合，然后通过磁力将DNA分离。
此方法适用于高通量或高
效率DNA提取。
酵母菌DNA提取方法
1.将种子液接入100mL液体YPD培养基中培养48h。
2.离心获取湿菌体，用蒸馏水多次洗涤，放在60℃烘箱中烘干备用。
3.选用Eeup柱式真菌基因组DNA抽提试剂盒对DNA进行提取。
（1）取50-100mg新鲜大型真菌（如蘑菇）或20mg干燥的子实体或菌丝用液氮研磨成粉末，加入1.5mL离心管中。
加入200µL Buffer Digestion 和2µLβ-巯基乙醇，再加入20µL Proteinase K液体，震荡混匀。
56℃水浴1h至细胞完全裂解。
（2）加入100µL Buffer PF，充分颠倒混匀，-20℃冰箱放置5min。
（3）室温10000rpm离心5min，将上清转移到新的1.5mL离心管中。
（4）加入200µL Buffer BD，充分颠倒混匀。
（5）加入200µL的无水乙醇，充分颠倒混匀。
（6）将吸附柱放入收集管中，用移液器将溶液和半透明纤维状悬浮物全部加入吸附柱中，静置2min，再10000rpm温室离心1min，倒掉收集管中的废液。
（7）将吸附柱放回收集管，加入500µL PW Solution，10000rpm离心30s倒掉收集管中的废液。
（8）将吸附柱放回收集管，加入500µL Wash Solution，10000rpm离心30s倒掉收集管中的废液。
（9）将吸附柱重新放回收集管中，于12000rpm室温离心2min，离去残留的Wash Solution。
（10）取出吸附柱，放入一个新的1.5mL离心管中，加入50µL TE Buffer静置3min，12000rpm室温离心2min，收集DNA溶液。
提取的DNA可立即进行下一步实验或-20℃保存。
4.对提取的DNA进行PCR扩增。
5.对提取到的DNA进行琼脂糖凝胶电泳实验，检测DNA的提取情况。
真菌dna提取注意事项
真菌dna提取注意事项以真菌DNA提取注意事项为标题的文章一、引言真菌是一类广泛存在于自然界的微生物，具有重要的生态和经济价值。
研究真菌的基因组结构和功能，对于理解其生物学特性、开发新的药物和农业生物技术具有重要意义。
而要进行真菌基因组研究，首先需要进行真菌DNA的提取。
下面将介绍一些真菌DNA提取的注意事项。
二、样品的选择和预处理1. 样品的选择：应选择新鲜、健康的真菌菌丝体或孢子作为提取DNA的样品，确保样品中DNA的完整性和纯度。
2. 样品的处理：在提取DNA之前，需要对样品进行适当的处理，如去除杂质、洗涤等，以确保提取到的DNA质量优良。
三、DNA提取试剂的选择1. 试剂的纯度：选择高纯度的试剂，以减少杂质对DNA提取的干扰。
2. 试剂的稳定性：确保所选试剂的稳定性，避免试剂在提取过程中发生降解或变质。
四、提取条件的优化1. 细胞破碎方法的选择：根据不同真菌的特性，选择合适的细胞破碎方法，如机械破碎、化学破碎或酶解等。
2. 提取缓冲液的配制：根据真菌细胞壁的特性，选择适宜的提取缓冲液，以实现高效的DNA提取。
3. 温度和时间的控制：在细胞破碎和DNA纯化过程中，控制好温度和时间的条件，以充分溶解细胞膜和去除杂质，确保提取到高质量的DNA。
五、DNA质量的评估1. 浓度的测定：使用比色法或荧光法等方法，准确测定提取到的DNA的浓度，以确保后续实验的需要。
2. 纯度的评估：通过比较DNA的吸收光谱，评估提取到的DNA 的纯度，避免样品中的蛋白质、RNA等杂质的干扰。
六、存储和保存1. 存储条件的选择：将提取到的DNA溶液保存在-20℃的冰箱中，避免DNA的降解和变性。
2. 容器的选择：选择无酶、无细菌的无菌离心管或冻存管，避免DNA的污染和降解。
3. 保存时间的控制：根据实际需要和实验进展，控制好DNA样品的保存时间，避免长时间保存导致DNA的降解和变性。
七、结论通过合理的样品选择和预处理、合适的试剂选择、优化的提取条件、准确的DNA质量评估以及合理的存储和保存，可以获得高质量的真菌DNA样品。
真菌dna提取步骤
真菌dna提取步骤真菌是一类广泛存在于自然界中的生物，它们具有多样的形态和功能，有些真菌可以用于食品加工和药物制备，而另一些真菌则会对人类和动物造成危害。
为了更好地了解真菌的生物学特性和分类，科学家们需要对真菌的DNA进行提取和分析。
本文将介绍真菌DNA提取的步骤和注意事项。
一、样品的准备在进行真菌DNA提取之前，需要准备好真菌样品。
通常情况下，真菌样品可以是培养物、菌丝体、孢子或者组织样品。
在收集样品时，需要注意避免污染和损伤，以免影响后续的实验结果。
二、细胞破碎真菌细胞壁比较坚硬，需要通过破碎来释放DNA。
破碎的方法有多种，可以使用机械破碎、化学破碎或者冻融法。
其中，机械破碎是最常用的方法，可以使用高速离心机或者超声波破碎仪来破碎真菌细胞。
三、DNA提取破碎后的真菌细胞中含有大量的DNA，但是还需要进行提取和纯化。
提取的方法有多种，可以使用有机溶剂法、离心柱法或者磁珠法。
其中，有机溶剂法是最常用的方法，可以使用酚/氯仿或者酚/异戊醇来提取DNA。
提取过程中需要注意避免DNA的降解和污染。
四、DNA纯化提取出来的DNA中可能会含有其他杂质，需要进行纯化。
纯化的方法有多种，可以使用酚/氯仿提取、离心柱纯化或者磁珠纯化。
其中，离心柱纯化是最常用的方法，可以使用硅胶柱或者离子交换柱来纯化DNA。
纯化过程中需要注意避免DNA的降解和污染。
五、DNA浓度和质量检测提取和纯化出来的DNA需要进行浓度和质量检测。
浓度检测可以使用分光光度计或者荧光素检测仪来进行。
质量检测可以使用凝胶电泳或者生物分析仪来进行。
检测结果可以帮助科学家们了解DNA 的纯度和完整性，以便后续的实验操作。
六、DNA保存提取和纯化出来的DNA需要进行保存，以便后续的实验操作。
保存的方法有多种，可以使用冰箱、冷冻干燥机或者液氮保存。
其中，液氮保存是最常用的方法，可以将DNA样品冷冻在液氮中，以便长期保存。
总结：真菌DNA提取是一项重要的实验操作，可以帮助科学家们了解真菌的生物学特性和分类。
真菌DNA提取的六种方法
真菌DNA提取方法方法一：取出约0.1 g 菌丝体,加入1 mL 裂解缓冲液( Tris-HCl 100 mmol/L (p H 9.0) ; EDTA 100 mmol/ L ;NaCl 400 mmol/L ;2 %SDS) ,加入少许石英砂,在研钵中将菌丝进行充分研磨。
将菌体移入1.5 mL 的离心管中,于65℃水浴保温30 min ,每10 min 取出充分混匀1 次。
加入等体积的苯酚∶氯仿∶异戊醇(体积比为24 ∶24 ∶1) ,轻轻混匀5min ,12 000 r/ min 离心10 min 。
吸取上清液,加入等体积氯仿,轻摇5 min ,12 000r/ min 离心10 min 。
收集上清液,加入0.75 倍体积的异丙醇沉淀DNA ,用70 %乙醇冲洗2～3 次后自然风干,加入500μL 1 ×TE 缓冲液溶解DNA 。
加入2 μL RNase( 10 mg/ mL ) , 37 ℃水浴保温30min 。
加入等体积苯酚∶氯仿(体积比为1 ∶1) ,轻摇5 min ,12 000 r/ min 离心10 min 。
取上清液加入等体积氯仿,轻摇5 min ,12 000 r/ min 离心10 min 。
吸取上清液,用2 倍体积的无水乙醇沉淀DNA , -20 ℃短暂放置后,12 000 r/ min 离心。
用70 %的乙醇洗涤沉淀DNA 2 次,自然风干后溶于适量0.1 ×TE缓冲液中,贮存于- 20 ℃备用。
方法二1.实验试剂（1）DNA提取液：0.2M Tris-HCl（pH 7.5），0.5M NaCl，0.01M EDTA，1％SDS（2）3M NaAc（3）TE：10 mmol/L Tris-HCl pH8.0，1 mmol/L EDTA（4）酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)（5）氯仿:异戊醇(24:1)（6）异丙醇（7）无水乙醇（8）75%乙醇（9）RNaseA2.实验步骤（1）取真菌菌丝0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉（2）加入4mL提取液，快速振荡混匀（3）加入等体积的4mL的氯仿:异戊醇(24:1)，涡旋3～5min（此处是粗提没有加酚，可以节约成本）（4）1000rpm，4℃，5min（5）上清用氯仿:异戊醇(24:1)再抽提一次（10,000rpm，4℃离心5min）（6）取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇或2.5倍体积的无水乙醇沉淀, 混匀, 静置约30 min （7）用毛细玻棒挑出絮状沉淀，用75%乙醇反复漂洗数次，再用无水乙醇漂洗1次，吹干，重悬于500ul TE中（8）加入1ul RNaseA （10mg/mL），37℃处理1h（9）用酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次（10,000rpm，4℃离心5min）（10）取上清，1/10V 3M NaAc，2.5V体积的无水乙醇，-70℃沉淀30min以上。
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丝状真菌基因组DNA的快速提取
1）取少许石英砂于1.5mL离心管中，用移液枪吸入600μL DNA 提取缓冲液（1M Tris-Cl(pH 8.0) 50mL；0.5M EDTA(pH 8.0) 100mL；20%SDS 100mL；5M NaCl 100mL；650mL无菌水定容至1L）；
2）挑取少量酵母培养基上生长的气生菌丝于上述离心管中；
4）加入提前配好的等体积的Tris饱和酚-氯仿溶液（V/V为1:1，约
600ul），涡旋6min，室温静置5min；
5）室温下，13000rpm离心20min；
6）用移液枪小心吸取约350μL的上清液，转移至一新的离心管中，加入2.5倍体积的冰冻无水乙醇（约1ul），上下颠倒混合均匀后，于-20℃中放置
2h；
7）室温下，12000rpm离心10min；
8）弃上清液，用75%乙醇洗沉淀1次；用手弹起沉淀
9）倒去上清，倒扣放置，放于超净台吹10min，使乙醇挥发晾干，加入
80μL无菌水溶解沉淀。