益肾健脾养血通利方对多囊卵巢综合征大鼠模型胰岛素样生长因子-1 mRNA表达的影响

益肾健脾养血通利方对多囊卵巢综合征大鼠模型胰岛素样生长因子-1 mRNA表

达的影响

（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）

【摘要】目的观察益肾健脾养血通利方对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠模型胰岛素样生长因子-1(IGF-1) mRNA表达的影响,从而在分子水平初步探讨该方治疗PCOS的可能机制。方法SD雌性大鼠72只,随机分为正常对照组、模型组、克罗米芬组及中药小、中、大剂量组,除正常对照组外,其余各组皮下埋植左旋炔诺孕酮硅胶棒,建立PCOS大鼠模型,应用原位杂交法观察IGF-1 mRNA在大鼠多囊卵巢中的表达。结果模型组IGF-1 mRNA表达明显高于对照组,图像半定量分析显示中药治疗组均能减少IGF-1 mRNA的表达。结论益肾健脾养血通利方具有降低大鼠多囊卵巢中IGF-1 mRNA的表达,改善胰岛素抵抗状况的作用。

【关键词】多囊卵巢综合征；益肾健脾养血通利方；胰岛素样生长因子-1；动物模型

Abstract：Objective To investigate the effects of Yishen Jianpi Yangxue Tongli Fang (YSJP) on IGF-1 mRNA expression in the ovary of PCOS rat, and study its mechanism on the molecular level. Methods Seventy two female SD rats were randomly divided into normal control group, model group, clomifene group and low-, mid-, high-dose Chinese medicine group. The animal model established by capsulae levonorgestreli silasticus was used to observe the IGF-1 mRNA expression in ovary by hybridization in situ. Results IGF-1 mRNA expression of PCOS model group was higher than the normal control group obviously. The semi-quantitative image analysis showed that TCM treatment could decrease IGF-1 mRNA expression. Conclusion Yishen Jianpi Yangxue Tongli Fang could decrease the IGF-1 mRNA expression in ovary and improve the insulin resistance of PCOS rats.

Key words：polycystic ovary syndrome；Yishen Jianpi Yangxue Tongli Fang；IGF-1；animal model

目前,多数学者认为胰岛素抵抗和高胰岛素血症与多囊卵巢综合征(PCOS)的发病密切相关,是PCOS主要特征之一。大量研究表明,胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在PCOS胰岛素抵抗、高胰岛素血症及高雄激素血症中起着重要作用。全国名老中医柴松岩根据多年临床经验认为,本病多因脾肾不足、痰湿阻遏而发病,其经验方益肾健脾养血通利方具有明显改善PCOS患者月经状况、促进排卵及妊娠的作用

[1]。本研究应用原位杂交法观察IGF-1 mRNA在大鼠多囊卵巢中的表达,从而在原有基础上从分子水平探讨该方治疗PCOS时,对其病理生理过程的可能作用。

1 实验材料

1.1 动物

雌性SD大鼠,24日龄,中国科学院遗传与发育生物学研究所动物中心提供,许可证编号：SCXK(京)2002-0006。

1.2 药物与试剂

健脾益肾养血通利方浸膏,单味药均购自同仁堂药店,经鉴定为正品；中国中医科学院医学实验中心制剂室精制；临床人用量为120 g 原药材/d,批号041002。枸橼酸氯米芬胶囊,上海衡山药业有限公司生产,批号040501；注射用人绒毛膜促性腺激素(HCG),上海第一生化药业有限公司生产,批号030610；左旋炔诺孕酮硅胶棒,黑龙江省丹东市鸭绿江制药厂生产,批号20010101；焦碳酸二乙酯(DEPC),Sigma公司产品。

2 实验方法

2.1 分组

72只SD雌性大鼠随机分为6组：正常对照组、模型组、克罗米芬组(25 mg/kg)及中药小(5 g/kg)、中(10 g/kg)、大(20 g/kg)剂量组(分别相当于人用量的2.5、5、10倍),每组12只。

2.2 造模及给药

参照文献[2]方法,常规饲养3 d后,除正常对照组外,其余5组皮

下埋植左旋炔诺孕酮硅胶棒(3 mm,内含左旋甲基炔诺酮3.6 mg),于27日龄时每只动物皮下注射HCG 1.5 U,每日2次,共9 d,正常对照组每日注射等容积生理盐水。克罗米芬组及中药各剂量组分别按照上述剂量灌胃给予克罗米芬及健脾益肾养血通利方浸膏,连续6周；正常对照组及模型组灌胃给予常水。提前12 h禁食不禁水,戊巴比妥钠麻醉,冰盘上快速游离卵巢,4%多聚甲醛(0.1 mol/L PBS配制,内含0.1%DEPC)固定组织,进行石蜡切片。采用原位杂交方法,按照试剂盒说明书要求进行IGF-1 mRNA检测。

3 统计学方法

实验数据以x±s表示。采用Motic6.0软件和原位杂交病理图像分析系统对结果进行图像分析。根据图像分析系统采集的数据,对每个统计场的目标平均光密度和面密度进行统计。

4 结果

原位杂交结果显示,IGF-1 mRNA阳性表达信号为棕黄色,位于细胞胞浆；模型组表达明显高于对照组。图像半定量分析显示,中药治疗组均能减少IGF-1 mRNA的表达。见表1。表1 益肾健脾养血通利方对PCOS大鼠卵巢IGF-1 mRNA表达的影响（略）注：与正常对照组比较,##P＜0.01；与模型组比较,*P＜0.05,**P＜0.01

5 讨论

IGF-1是一种能促进合成代谢的多肽,其结构类似胰岛