《检验仪器分析》第10章 免疫分析
免疫分析方法20070321
免疫学反应原理单扩散琼脂糖凝胶平板→打孔→点加样本→孵育(过夜) →观察沉淀线可以定性，也可以定量应用：检测抗原抗体。
如免疫球蛋白测定双扩散琼脂糖凝胶平板→打孔(两两对应)→点加样本及对应抗原或抗体→孵育(过夜) →观察沉淀线一般用于定性，也可观察抗原抗体有无交叉反应。
如抗原抗体的鉴定免疫沉淀在试管中加入抗原及抗体，混匀后孵育，观察沉淀的出现环状沉淀：毛细管内进行。
如链球菌的血清学分型对流电泳操作类似于双扩散。
但在两侧施加电场，以加快免疫反应的速度。
适用于抗原抗体检测。
如乙肝表面抗原的检测火箭电泳类似于单扩散，但外加了电场，孔内所加抗原向一特定方向迁移，且迁移沉淀线的长度与抗原的浓度成正比，故可以定量。
如甲胎蛋白的检测。
血球凝集试验将抗体或抗原结合在动物红血球（羊、牛、兔等）上（致敏），当致敏的红血球与相应抗原或抗体相遇时，发生肉眼可见的凝集。
也可制备反向血凝或血凝抑制试验。
血球在致敏前需要进行处理（鞣化），使之不易破坏，也更容易致敏。
如乙肝表面抗原的检测：成本低廉，检测灵敏度也高。
乳胶凝集原理同血球凝集试验，但致敏的是乳胶颗粒，且试剂更易保存。
如细菌抗原的快速检测试剂。
补体结合试验在抗原抗体反应的体系中加入新鲜制备的补体（豚鼠）以及指示系统（红细胞），当有相应的抗原抗体存在并发生反应时，激活补体，红细胞溶解。
若加入与人体的被测抗体相竞争的抗体时，被测抗体消耗掉大量抗原，而无能与指示系统中的抗体反应的抗原剩余，补体不被激活，红血球不被溶解：补体结合抑制试验。
如抗链O检测金标记试验以胶体金致敏抗原，当遇相应抗体时，与之结合并吸附在支持介质上，浓集后形成可见的红色。
一般用于快速试验，卡片式的反应体系方便易用。
但敏感性和特异性不足。
也有用胶体硒的。
如表面抗原、抗HIV等免疫斑点试验原理与金标记法类似，但标记的是酶，在抗原抗体结合后，标记在上面的酶可催化随后加入的显色系统，以出现黑色斑点为阳性。
免疫印迹先将微生物抗原电泳分离，再通过免疫转印技术将琼脂上的抗原转染到硝酸纤维膜上并固定（可裁成小条供多个检测用）。
免疫分析技术和相关仪器
免疫分析技术和相关仪器4.1．酶免疫分析仪4.1.1酶免疫分析技术的分类酶免疫分析(enzyme immunoassay，EIA) 是目前临床应用最多的一类免疫分析技术，可分为非均相(或异相)酶免疫测定和均相酶免疫测定两种方法。
均相酶免疫分析法（homogeneous enzyme immunoassay，HEI）均相酶免疫分析主要有酶扩大免疫测定技术和克隆酶供体免疫测定两种方法。
非均相酶免疫分析法（heterogeneous enzyme immunoassay）常用的酶免疫分析法多为非均相法，又可分为液相酶免疫法和固相酶免疫法两种，以后者最常用，称为酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）。
ELISA是临床上最常用的免疫分析方法，目前常用的酶免疫分析仪都是基于ELISA技术，称为酶免疫分析仪。
4.1.2酶免疫分析仪的类型、工作原理及基本结构根据仪器结构和自动化程度, 针对固相支持物的不同（如微孔板、试管、小珠、磁微粒等）作为吸附免疫试剂的载体，因而设计成不同的酶免疫分析仪，其基本工作原理就是分光光度法，在光电比色计或分光光度计的基础上根据ELISA技术的特点而设计。
包括：微孔板固相酶免疫测定仪器国际上微孔板式ELISA使用的载体为96孔板，采用直接对微板孔测定吸光度（A）的比色计。
(1) 酶标仪酶标仪也称为ELISA测读仪（ELISA reader）,有单通道和多通道两种类型。
自动型多通道酶标仪有多个光束和多个光电检测器，检测速度快。
如8通道的仪器，设有8条光束（或8个光源）、8个检测器和8个放大器。
多通道酶标仪的检测速度较快。
酶标仪的工作原理与主要结构和光电比色计几乎完全相同（见图16-1）。
既可以使用和分光光度计相同的单色器，也可以使用干涉滤光片来获单色光，此时将滤光片置于微孔板的前、后的效果是一样的。
图16-1 酶标仪工作原理酶标仪的工作原理和光路与普通光电比色计的不同之处在于（见图16-2）：比色液的容器不是比色皿，而是用塑料微孔板；酶标仪以垂直光束通过微孔板中的待测液；酶标仪通常使用光密度OD来表示吸光度。
第11章免疫分析
三、酶免疫分析仪的性能评价和维护保养
（一）评价指标和方法
1．滤光片波长精度检查及其峰值测定 2．灵敏度和准确度 3．通道差与孔间差检测 4．零点飘移 5．精密度评价 6．线性测定 7．双波长评价
.
重点是光学部分 1．滤光片波长精度检查 2．通道差与孔间差检测
.
四、酶免疫分析仪的临床应用 １．病原体及其抗体的检测 2．各种免疫球蛋白和细胞因子、补体等 3．肿瘤标志物 4．多种激素 5．药物和毒品
线性范围
.
待测物浓度（ X ）
标记抗体 （二抗）
待测抗 体
间接法原理
包被体
.
包被抗 原
标记抗原
俘获法原理
包被体
.
待测抗体
俘获抗体 （二抗）
标记抗原 待测抗体
双抗原夹心法原理
包被体
.
包被抗原
我们把采用酶标的方法测定物质含量的设备称为 酶标仪。
一般简单的酶标仪只有读数、数据处理的功能， 还需要配置孵育箱，洗板机，人工操作步骤繁琐 。
6、磁微粒固相酶免疫测定仪
瑞士出品的分析系统由分光光度测读仪、磁铁板和 试剂组成：
试剂包括：
抗异硫氰酸荧光素（FITC）抗体
特异抗体或抗原包被的磁微粒（颗粒直径1μm）
FITC结合的特异抗体或抗原
碱性磷酸酶标记的特异抗体或抗原
什么样的反应
底物酚肽（phenolphthalein）磷酸酯
.
.
4、管式固相酶免疫测定仪
1990年德国推出的全自动管式ELISA分析系统和配 套试剂
用链霉亲和素包被的聚苯乙烯管、生物素结合的抗 原或抗体，辣根过氧化物酶标记的抗体和显色底物 ABTS
测定中标准曲线可使用2星期，每次测定只需一点 定标
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xx年xx月xx日
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目录
免疫分析概述免疫分析的实验技术免疫分析的生物化学基础免疫分析的质量控制免疫分析的未来发展趋势免疫分析实例解析
01
免疫分析概述
免疫分析是一种利用抗原-抗体特异性反应原理，对样本中的抗原或抗体进行定性或定量检测的方法。
免疫分析基于抗原-抗体之间的特异性结合反应，通过检测反应产物来对样本中的抗原或抗体进行定性或定量检测。
在自动化免疫分析仪器的基础上，对整个免疫分析流程进行优化，实现全流程自动化，包括样本处理、加样、孵育、洗涤、检测等环节，减少人为操作误差。
免疫分析的自动化
高灵敏度检测试剂的研发
通过提高检测试剂的灵敏度，能够更早地检测出疾病标志物，提高疾病的早期诊断率。
信号放大技术的运用
采用信号放大技术，如量子点、纳米线等纳米材料的应用，能够将信号放大，提高检测灵敏度和准确性。
常见肿瘤标志物的免疫分析
肿瘤标志物的免疫分析
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免疫荧光技术的应用
免疫荧光技术被广泛应用于细胞和组织的免疫标记研究。
01
02
03
免疫印迹技术的原理
免疫印迹技术是一种利用特异性抗体识别蛋白质条带，并通过显色反应显示蛋白质存在的方法。
免疫印迹技术的实验步骤
免疫印迹技术通常包括样品处理、电泳分离、转膜、特异性抗体孵育、显色反应等步骤。
免疫印迹技术的应用
抗原结合部位
抗体分子上发挥效应功能的部位，如补体激活、调理吞噬等。
效应功能部位
抗体的结构与功能
04
免疫分析的质量控制
实验计划的制定
制定详细的实验计划，包括实验目的、实验步骤、实验时间、预期结果等，以便于实验的顺利进行。
免疫检验自动化仪器分析
2016 第二十章免疫检验自动化仪器分析一、A11、免疫比浊测定中，导致钩状现象的主要原因是A、抗体过量B、抗体亲和力差C、抗原分子量偏大D、抗原含量超出检测范围E、体系中离子强度小2、免疫浊度试验的基本原则是A、体系中保持抗原过量B、体系中保持抗体过量C、体系中合适的离子强度D、体系中合适的pHE、必要时可加入增浊剂3、发光物吖啶酯标记的化学发光反应体系应在何种环境中进行A、酸性B、碱性C、中性D、酸性或中性E、碱性或中性4、电化学发光免疫分析（ECUA）常采用的标记物是A、吖啶酿B、ALPC、HRPD、三联吡啶钌E、三丙胺5、前临床治疗药物监测最常采用的方法为A、FPIAB、荧光酶免疫分析C、TRFIAD、ELISAE、免疫比浊分析6、化学发光免疫分析中直接参与发光反应的标记物主要是A、吖啶酯类标记物B、三联吡啶钌标记物C、二氧乙烷标记物D、鲁米诺标记物E、碱性磷酸酶标记物7、下列有关时间分辨荧光免疫测定的叙述中，错误的是A、以镧系螯合物作为荧光标记物B、镧系螯合物具有超短荧光寿命的特点C、可以有效地消除非特异性自然本底荧光的干扰D、在荧光分析的基础上发展起来的E、灵敏度较普通荧光素标记抗体技术高8、电化学发光免疫分析临床应用广泛，在日常工作中一般不用于检测A、肿瘤标记物B、甲状腺激素C、病毒标记物D、血药浓度E、免疫球蛋白9、发光物吖啶酯标记的化学发光反应体系应在何种环境中进行A、酸性B、碱性C、中性D、酸性或中性E、碱性或中性10、吖啶酯作为发光剂的化学发光免疫测定中，叙述错误的是A、氧化反应不需要催化剂B、发光迅速C、反应的本底低D、在酸性环境下进行E、试剂稳定性好11、化学发光的基本原理是发光物由于A、在一定波长激发光照射下发光B、在化学反应中获得能量而发光C、在电子激发态时发光D、在电子激发态返回基态时释光放能量而发光E、某物在化学反应中生成发光物而发光二、B1、A.吖啶酯类B.鲁米诺C.三联吡啶钌D.HRPE.AP<1> 、电化学发光免疫测定中常用的发光底物为A、B、C、D、E、<2> 、化学发光标记免疫测定中常用的发光底物为A、B、C、D、E、<3> 、化学发光酶免疫测定中常用的发光底物为A、B、C、D、E、答案部分一、A11、【正确答案】 D【答案解析】抗体量不足、抗原量过高是导致钩状现象的主要原因。
检验科免疫学常见检测与分析方法
检验科免疫学常见检测与分析方法为了满足你的要求，我将按照“检验科免疫学常见检测与分析方法”的格式来书写文章。
以下是文章的正文：检验科免疫学常见检测与分析方法免疫学是研究机体免疫系统结构、功能及其介导的免疫反应的科学。
在检验科中，免疫学检测和分析方法广泛应用于疾病诊断、药物研发和医学研究等领域。
本文将介绍免疫学常见检测与分析方法，包括间接免疫荧光法、酶联免疫吸附法、流式细胞术和酶联免疫斑点法。
一、间接免疫荧光法间接免疫荧光法是一种检测抗体和抗原相互作用的方法，其原理是利用荧光素标记的二抗结合到已与目标抗原结合的抗体上，通过荧光显微镜观察荧光标记的二抗与抗原结合的情况。
这种方法具有高灵敏度、高特异性和高分辨率的优点，因此被广泛应用于疾病的早期诊断和研究中。
二、酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法（ELISA）是一种常用的免疫学检测方法，用于检测抗体或抗原的存在和浓度。
该方法利用酶和底物的反应产生可见的颜色变化，从而判断目标物的存在和数量。
ELISA方法具有操作简单、灵敏度高和可扩展性强的特点，被广泛应用于病原微生物的检测、药物筛选和免疫学研究中。
三、流式细胞术流式细胞术是一种光学技术，用于分析和计数悬浮在流动液体中的细胞。
该方法通过染色和荧光素标记的抗体等实验步骤，通过流式细胞仪实时检测细胞的形态、大小、荧光强度等特征，从而实现对细胞种类和状态的分析。
流式细胞术在免疫学研究和临床诊断中的应用广泛，如检测白细胞亚群、免疫球蛋白等。
四、酶联免疫斑点法酶联免疫斑点法（ELISPOT）是一种高灵敏度、高特异性的单细胞分析技术，用于检测细胞产生的蛋白质分子。
该方法通过将待检细胞分泌的蛋白质与荧光素标记的抗体结合，通过荧光显微镜观察形成的颗粒斑点。
ELISPOT方法被广泛应用于评估免疫细胞的功能和活性，例如检测细胞因子的分泌和细胞毒性。
总结：免疫学在检验科中的检测和分析方法多种多样，包括间接免疫荧光法、酶联免疫吸附法、流式细胞术和酶联免疫斑点法。
临床检验仪器第十一章临床免疫检验仪器习题
第十一章临床免疫检验仪器一、名词解释1.酶免疫分析技术：利用酶的高效催化和放大作用与特异性免疫反应结合而建立的一种标记免疫技术。
2.均相酶免疫分析法：检测过程中抗原抗体反应后，无需分离结合和游离的酶标记物，直接根据反应前后酶活性的改变进行待检物质测定的分析方法。
3.非均相酶免疫分析法：在酶免疫测定中，抗原抗体反应达到平衡后，需分离游离的和与抗原(或抗体)结合形成复合物的酶标记物，然后对经酶催化的底物显色程度进行测定，再推算出样品中待测抗原(或抗体)含量的分析方法。
4.发光免疫分析技术：利用化学发光现象，根据物质发光的不同特征，即辐射光波长、发光的光子数，与产生辐射的物质分子的结构常数、构型、数量等密切相关，通过受激分子发射的光谱、发光衰减常数、发光方向等来判断分子的属性及发光强度进而判断物质的量的免疫分析技术。
5.免疫浊度检测：将液相内的沉淀试验与现代光学仪器和自动分析技术相结合的一项分析技术。
6.放射免疫分析技术：以放射性核素为标记物的标记免疫分析技术。
7.非均相荧光免疫测定法：抗原抗体反应后，先把Ab*Ag 与Ab*分离，然后测定Ab*Ag 或A b*中的标记物的量，从而推算出标本中的A g 量的方法。
8.均相荧光免疫测定法：抗原抗体反应后，Ab*Ag 中的标记物失去荧光特性，不需进行A b*Ag 与A b*的分离直接测定游离的A b*量，从而推算出标本中的A g 量的方法。
9.闪烁体：是将核辐射能激发分子转化成可探测闪光的荧光物质。
常用的有有机闪烁体、无机闪烁体和特殊闪烁体等。
10.时间分辨荧光免疫分析：时间分辨荧光免疫测定是用镧系稀土元素及其螯合物(如 Eu3+螯合物) 作为示踪物标记抗原、抗体、核酸探针等物质，检测标本中的相应抗原或抗体的荧光免疫测定技术。
11.化学发光免疫技术：在检测化学反应中，某些化学基团被氧化后形成激发态，并在返回基态的同时发射一定波长的光子。
仪器利用这种化学基团标记在免疫分析的抗原或抗体上所建立起来的免疫分析为化学发光免疫分析。
免疫分析法
华中科技大学同济医学院药学院药物分析教研室
华中科技大学同济医学院药学院药物分析教研室
三种试剂的作用
抗体
作为标记药物和非标记药物竞争结合的蛋白；
（三）抗原-抗体反应的特点
1、特异性
一种抗原分子只能与由它刺激产生的抗体发生
标记药物
提供可检测的信号（响应值）；
特异性结合反应。
交叉反应（cross reaction）
2014/5/8 Thursday
第一节 概 述
免疫分析法（Immunoassay，IA）是指以特异性 抗原-抗体反应为基础的分析方法。
免疫分析法
SO3H R-N=N R-N=N
SO3H
SO3H N=N-R
间偶氮氨基苯磺酸
对偶氮氨基苯磺酸
邻偶氮氨基苯磺酸
三个同分异构体，当重氮化后和蛋白质结合时，在血清学上 能够互相区别
华中科技大学同济医学院药学院药物分析教研室
标记抗原一抗体的结合率（B％）随着未标记抗 原量（待测物）的增加而减少（呈负相关）。 这种现象称作竞争抑制作用，即未标记抗原量的 增加抑制了标记抗原与抗体的竞争性结合。
华中科技大学同济医学院药学院药物分析教研室
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+
形成肽键 蛋白质的氨基
华中科技大学同济医学院药学院药物分析教研室
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6
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（5）重氮化的对氨基苯甲酸法 具酚羟基的半抗原 带有羧基的半抗原 重氮化的对氨基苯甲酸
合理地利用分子类似物间的交叉反应（Cross reaction）
合物。
华中科技大学同济医学院药学院药物分析教研室
免疫自动化仪器分析
免疫自动化仪器分析
第7页
速率散射比浊分析
❖ 基础原理：抗原抗体结合反应一个动态测定 法，适时检测抗原抗体复合物形成散射光信 号
❖ 最快反应时间（图） ❖ 抗原过量检测（图）
免疫自动化仪器分析
第9页
免疫透射比浊
❖ 基础原理：检测信号是经过溶液光，测量角 度与正前方夹角为0℃（图），保持抗体过量， 形成可溶性AG-AB复合物，使介质浊度发生 改变。
❖ 利用长寿命荧光物质（镧氏元素铕螯合物） 标识抗原或抗体，测定过程中，可利用延迟 时间来消除非特异性荧光干扰（图） 。
免疫自动化仪器分析
第33页
荧光免疫自动化
❖ TRFIA设计中一些注意事项： Stakes位移（图） 解离增强
免疫自动化仪器分析
第35页
荧光免疫自动化
❖ 荧光偏振免疫测定：以小分子物质与大分子 物质旋转差异而使它们对偏振光吸收不一样 为依据检测小分子药品
免疫自动化仪器分析
第3页
自动化免疫仪器种类（应用技术）
❖免疫比浊分析技术
❖ 化学发光、电发光分析技术 ❖ 荧光免疫分析技术 ❖ 放射免疫分析技术 ❖ 酶免疫分析技术 ❖ 流式细胞术
免疫自动化仪器分析
第4页
免疫比浊
❖ 利用抗原抗体结合后溶液浊度改变而检测一 个方法
❖ 此法准确快速，已成为免疫诊疗技术中主要 检测伎俩
❖ 试验要求： 选择亲和力高抗体，抗原抗体复合物要大、
数量要多，反应时间充分。
免疫自动化仪器分析
第12页
胶乳浊度测定法
❖ 基础原理是：将抗体吸附在大小适中、均匀 一致胶乳颗粒上，当碰到对应抗原时，则使 胶乳颗粒发生凝集。单个胶乳颗粒在入射光 波之内不妨碍光线透过，两个或两个以上胶 乳颗粒凝聚时则使透过光降低，这种降低程 度与胶乳颗粒凝聚程度呈正比，当然也与待 测抗原量呈正比（图）
《检验仪器分析》第10章免疫分析
关机
卸载样品盘，清洗管路后关闭仪器
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25
（二）仪器的维护
❖酶免疫分析仪是一种精密的光学仪器，良好的工 作环境不仅能确保其准确性和稳定性，还能够延 长其使用寿命。
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26
安装要求
①仪器放置在无强磁场和干扰电压且噪音低于40分贝 ②操作环境空气清洁，温、湿度适宜 ③避免阳光直射，以延缓光学部件的老化 ④操作时电压应保持稳定 ⑤保持工作台面干燥、干净、水平，有足够操作空间
全自动化学发光 免疫分析仪
采用化学发光技术和磁性微粒子分离技术 相结合，是一个全自动、随机存取、软件 控制的智能分析系统。（雅培）
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31
一、发光免疫分析仪的分型及特点
❖在常温下，某些特定的化学反应产生的能量使其 产物或反应中间态分子激发，形成电子激发态分 子；当其衰退至基态时，释放出的化学能量以可 见光的形式发射，我们把这种现象称为化学发光 （chemiluminescence，CL）
❖ 化学发光免疫根据标记物的不同，有化学发光免 疫分析、电化学发光免疫分析、微粒子化学发光 免疫分析、化学发光酶免疫分析和生物发光免疫 分析等分析方法。现临床以前三者较为常用。
二、酶免疫分析仪的工作原理
❖以临床免疫检 验最常用的酶 标仪为例介绍 酶免疫分析仪 的工作原理。
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12
二、工作原理
返回目录
13
二、酶免疫分析仪的工作原理
❖ 酶免疫分析仪其实就是一台特殊的光电比色计或 分光光度计，根据ELISA技术的特点而设计。
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14
三、酶免疫分析仪的基本结构
❖全自动酶标仪可以将整个系统分为
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4
第一节 酶免疫分析仪
生化技术原理 第十章 免疫分析
二、 分析方法
1．免疫扩散法
该法是根据抗原和抗体在琼脂介质中扩散的结 果，对其性质进行分析的一种方法。 包括：双向免疫扩散和单向免疫扩散。
酶联免疫反应基在固相上
的抗原抗体复合物
与未结合的分离
2
反应
加入待测抗体或
抗原和酶标抗原
或抗体
4
底物显色
定性或定量的分析
ELISA中3种必要的试剂
① 固相的抗原或抗体（免疫吸附剂） ② 酶标记的抗原或抗体（标记物） ③ 酶作用的底物（显色剂）
ELISA的种类和变化
常用于标记的酶： 辣根过氧化物酶 碱性磷酸酶 葡萄糖氧化酶等
3. 荧光标记法
是利用异硫氰荧光素与抗体或抗原生成的复合 物，测定抗原或抗体含量的一种方法。
用荧光素标记时，被标抗体或抗原溶液一定要 比较纯，效果才好。
经标记、分离和浓缩后的抗体，以每安培瓶 1ml的效量进行分装，贮存于-20℃，在数月内 荧光强度基本不变。
抗原性包括： 免疫原性—指诱导特异免疫反应的能力 抗原特异性—指与抗体特异结合的能力
完全抗原：具有这两种能力的物质 半抗原：有些小分子物质，只有抗原特异性而无免 疫原性
（1）抗原的性质
① 决定簇—抗原分子表面的某些化学基团
作用：直接决定免疫化学反应的特异性 决定特异性的强弱的因素：
1） 抗原分子量和暴露在其分子表面决定簇的量 2）亲水性能 抗原分子量越大，暴露在其分子表面的决定簇 越多、亲水性能越好，特异性就越强；反之， 则特异性就越弱。
④ 电荷
抗原分于上分布有一定数量的电荷。它可 使抗原的亲水性增强，促使抗原与抗体之 间的离子相互结合，以利于增加抗原的特 异性。
（2）抗原的制备
动物的免疫系统非常敏感，对极微量的抗原也 能产生相应的抗体。因此，如需制备一种纯抗 体时，就得先制备一种同质性抗原。获得的制 品应在聚丙烯酰胺凝胶电泳过程呈一条区带， 而无杂带。
免疫检验自动化仪器分析
定时散射比浊法测定原理示意图
1. 仪器测定技术要点
(1) 抗原抗体预反应阶段 (2) 反应阶段 (3) 信号检测
2. 抗原过量检测
(1) 抗体适当过量 (2) 对抗原过量进行阈值限定
BN ProSpec全自动特定蛋白分析仪
(三)速率散射比浊法（rate nephelometry）
速率散射比浊法是抗原抗体结合反应的动力学测定 法。所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形成免 疫复合物的量（不是免疫复合物累积的量），连续测 定各时间复合物形成的速率与其产生的散射光信号联 系在一起，形成动态的速率散射比浊法，每项检测仅 1～2min即可完成。
仪器测定技术要点
• 抗原抗体结合 • 电化学发光反应 • 光信号检测 • 检测完毕
电化学发光免疫测定示意图
电化学发光免疫测定工作示意图
AMPPD特性
碱性PH环境下，非酶解性的水解很低 热稳定性好 PH9时酶解速度最快，PH9.5时信噪比 最低 发光为持续型，15min达到高峰， 60min内强度维持不变
AMPPD发光反应原理示意图
仪器测定技术要点
• 抗原抗体结合 • 洗涤、分离 • 加入AMPPD发光剂 • 信号检测
碱性磷酸酶标记的化学发光免疫测定示意图
Access全自动酶标记化学发光免疫分析仪
UniCel™DxI 800
IMMULITE 2000型全自动酶标记化学发光免疫分析系统
（三）碱性磷酸酶标记的微粒子荧光免疫分析仪
鲁米诺是一种还原剂，在碱性溶液中被H2O2氧化产生鲁米诺衍生物 （激发态）。它以光量子辐射形式返回基态时，发出微绿色可见光。
鲁米诺增强化学发光的原理
辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫测定示意图
临床医学检验技术(师)：免疫检验自动化仪器分析(题库版)
临床医学检验技术(师)：免疫检验自动化仪器分析（题库版）1、单选抗心磷脂抗体检测最常用的方法是（）A.IIFB.ELISA法C.放免法D.电发光法E.电泳法正确答案：B参考解析：抗磷脂抗体常用ELISA的方法检（江南博哥）测。
2、单选不能刺激机体组织产生自身抗体的抗原是（）A.经化学修饰的组织抗原B.与正常组织成分有交叉反应的外来抗原C.隔绝的体内自身成分D.自身细胞HLA-DR抗原的表达E.高分化的组织抗原正确答案：E参考解析：自身抗体是指针对自身组织，器官、细胞及细胞成分的抗体。
产生自身抗体的抗原包括以下几种：化学修饰的组织抗原；与自身组织成分存在交叉反应的外来抗原；隐蔽抗原；自身细胞HLA-DR抗原的表达以及低分化的组织抗原等。
3、单选在自身抗体检测中，应用最多的是哪类荧光素标记的第二抗体（）A.FITCB.TRITCC.PED.AMCAE.以上均错正确答案：A参考解析：在自身抗体检测中，应用最多的荧光素标记的第二抗体是FITC。
4、单选微粒子化学发光免疫分析最常用的方法是（）A.捕获法B.竞争法C.双抗体夹心法D.间接免疫法E.以上都包括正确答案：C5、单选下列方法中哪一项能提高免疫散射比浊法的灵敏度（）A.使用高强度光源B.加大微粒至检测器的距离C.使用波长更长的入射光D.加大浓度E.使用低强度光源正确答案：A参考解析：使用高强度光源能提高免疫散射比浊法的灵敏度。
6、单选速率散射比浊分析的抗原过置检测时，不出现第二次速率峰值信号表示（）A.被测定抗原量过高，应稀释重测B.被测定抗原量太低，应取上一个稀释浓度C.第一次速率峰值信号是由全部的待测抗原产生D.第一次速率峰值信号不是由部分的待测抗原产生E.以上均不对正确答案：A7、单选速率散射比浊法测定的时间为单位时间内（）A.抗原-抗体复合物形成的最长时间段B.抗原-抗体复合物形成的最快时间段C.抗原-抗体复合物形成最大量的时间段D.抗原-抗体复合物形成的最稳定时间段E.抗原-抗体复合物最初形成的时间段正确答案：B8、单选以下哪种自身抗体是PSS（进行性系统性硬皮病）的特征抗体（）A.抗dsDNA抗体B.抗Jo-1抗体C.抗Scl-70抗体D.抗Sm抗体E.抗SSA/Ro抗体和抗SSB/La抗体正确答案：C参考解析：抗Scl-70抗体是Pss的特征性抗体。
《临床检验仪器与技术》考试复习题库(含答案)
《临床检验仪器与技术》考试复习题库(含答案)一、选择题（每题2分，共40分）1. 以下哪个不是临床检验仪器的主要分类？A. 生化分析仪器B. 免疫分析仪器C. 微生物分析仪器D. 心电图仪器答案：D2. 下列哪个检验项目属于血液学检验？A. 血糖B. 肝功能C. 血常规D. 尿常规答案：C3. 以下哪种方法不属于临床检验技术？A. 光学显微镜检查B. 电子显微镜检查C. 质谱分析法D. 放射免疫分析法答案：B4. 下列哪个检验项目不属于生化检验？A. 血清尿酸B. 血清淀粉酶C. 尿微量白蛋白D. 血清电解质答案：C5. 以下哪个是免疫分析仪器的主要特点？A. 高灵敏度B. 高特异性C. 高精确度D. 所有以上选项答案：D6. 以下哪个检验项目属于微生物检验？A. 血常规B. 尿常规C. 粪便常规D. 细菌培养答案：D7. 以下哪个检验方法不属于分子生物学检验？A. 聚合酶链反应（PCR）B. 基因测序C. 免疫荧光技术D. Western blot答案：C8. 以下哪个不是临床检验的质量控制内容？A. 实验室内部质量控制B. 实验室外部质量控制C. 实验室设备维护D. 实验室人员培训答案：C9. 以下哪个是临床检验实验室的生物安全要求？A. 实验室通风B. 实验室照明C. 实验室防火D. 所有以上选项答案：D10. 以下哪个不是临床检验仪器校准的方法？A. 标准品校准B. 方法学比较C. 仪器间比较D. 系统误差分析答案：D二、判断题（每题2分，共20分）11. 临床检验仪器的发展趋势是高度自动化、智能化和集成化。
（）答案：正确12. 临床检验技术包括传统检验方法和现代检验方法。
（）答案：正确13. 临床检验仪器校准是保证检验结果准确性的关键环节。
（）答案：正确14. 临床检验实验室的生物安全要求仅包括实验室通风和照明。
（）答案：错误15. 免疫分析仪器具有较高的灵敏度和特异性，适用于微量物质的检测。
仪器本科复习题
临床检验仪器学第一章绪论一、名词解释1．分辨率2．线性范围3．灵敏度4.误差5.精密度6.标准差7.线性范围8.偏倚二、问答题1.简述临床检验仪器的特点？2.对临床检验仪器进行维护主要包括哪几方面内容？三、单选题1.检验仪器的特点不包括下列哪一项：A.结够复杂B.技术先进C.准确度高D.对使用环境要求严格2.在检验仪器主要部件中，将样品各个组份加以机械分离或物理区分的装置是：A.取样装置B.预处理系统C.分离装置D.检测器3.误差按性质分类不包括哪一项：A.系统误差B.相对误差C.随机误差D.过失误差4.规定条件下进行多次检测时，所得检测结果间彼此接近的程度是指：A.精密度B.精度C.正确度D.准确度5.精密度是对仪器随机误差大小的评价，常以什么来表示：A.标准差B.平均值C.方差D.偏倚6.噪音的表现形式不包括哪一项：A.抖动B.起伏C.漂移D.震动7.要提高检验仪器检测的精密度，必须相应地提高：A.正确度B.分辨率C.噪音D.响应时间8.下列不属于系统误差特点的是：A.单向性B.可检测性C.重复性D.增加平行测定次数可消除9.医学检验仪器的核心部件是：A.取样装置B.分离装置C.检测器D.显示装置10.下列哪项是指输入与输出成正比例的范围：A.测量范围B.示值范围C.线性范围D.可报告范围11.关于误差，叙述错误的是：A.只要检测中严格按照规范操作，误差是完全可以避免的。
B.误差是指测得值与真值之间的差异。
C.误差有两种表示方法：绝对误差与相对误差。
D.误差按照性质可分为：系统误差、随机误差与过失误差。
12. 在允许误差极限内，仪器能检出的被检测值的范围称为：A．测量范围B．示值范围C．线性范围D．分辨率13. 检测仪器的核心部分是：A．取样装置B．检测器C．分离装置D．信号处理系统14. 实验室自动化的发展趋势是：A．单个仪器自动化B．系统自动化C．模块自动化D．全实验室自动化判断题1．检验仪器灵敏度越高，最小检测量越小。
免疫分析法
2.抗原特异性
• 抗原决定簇（基） • 载体决定簇和半抗原决定簇 • 共同抗原和交叉反应
一、抗原决定簇
1、概念 抗原决定簇（antigenic determinant, AD) 是指抗原中决定抗原特异性的特殊化学基团，又称为 表位（epitope)。表位的性质、数目和空间构象决定着 抗原的特异性。抗原通过AD与相应淋巴细胞表面的抗 原受体结合，激活淋巴细胞，引起免疫应答。 2、种类和数量 一个抗原分子可以有一种或多种不 同的AD ，一种AD决定着一种特异性，多种AD决定着 多种特异性 3、部位 位于抗原表面的AD能直接被相应淋巴细 胞所识别，称功能性决定簇，存在抗原分子内部的AD 无激发免疫应答的功能，称隐蔽决定簇。只有经理化 因素处理后，使之暴露可能成为新的功能决定簇。
热力学分析： 半抗原和载体蛋白结合后热力
学特征会有变化，差异可通过差示扫描量热法 （DCS）等方法测定。
定量测定方法 相对含量测定法： 通过 ELISA 法比较半抗原
与载体蛋白的相对结合量。
绝对含量测定法： 半抗原具有与载体蛋白完
全不同的广谱吸收特征，且半抗原在此特定波 长下具有较强的吸收；或能利用特定的化学反 应定量测定半抗原的量，且不与载体蛋白发生 反应。
抗原的两种特性：免疫原性和抗原特异性 免疫原性（immunogenicity)，能刺激机体发生免疫
应答，产生抗体和致敏淋巴细胞的能力。 抗原特异性能与相应抗体或致敏淋巴细胞发生特异性 结合的能力。 凡具有免疫原性和抗原性的物质称为完全抗原 只有抗原特异性而不具有免疫原性的物质称为半抗原 半抗原+蛋白质——完全抗原 赋予半抗原以免疫原性的蛋白质称为载体。
二、AD的分类
构象决定簇：序列上不相连而依赖于蛋白 质或多糖的空间构象形成的决定簇，多暴 露于分子表面。 顺序决定簇：一段相连的氨基酸序列所形 成的决定簇，多位于抗原分子内部。 功能性AD：分子表面，易被识别。 隐蔽性AD：分子内部。 B细胞决定簇：分子表面。 T细胞决定簇：分子内部。
生物免疫分析技术
ELISA试剂盒
第二十九页，讲稿共三十七页哦
第三十页，讲稿共三十七页哦
酶联免疫井
第三十一页，讲稿共三十七页哦
几种酶标分析仪
DNM-9602A酶标分析仪
DNM-9602G酶标分析仪
DNM-9602 标配酶标分析仪
第三十二页，讲稿共三十七页哦
4.3 放射免疫法
放射免疫测定（radioimmunoassay，RIA）是1959 年由Berson和Yalow首先用于糖尿病患者胰岛素含量
例如，在测定血清中某一物质的含量时，化敏感度约为5～ 10μg/ml 。
第二十一页，讲稿共三十七页哦
特点二：特异性 其特异性来自抗体或抗原的选择性。抗原抗体
的结合实质上只发生在抗原的抗原决定簇与抗体的 抗原结合位点之间。由于两者在化学结构和空间构 型上呈互补关系，所以抗原抗体反应具有高度的特 异性。
C 加入酶标记的抗球蛋白抗体，此时酶标记抗体与吸附的抗原 抗体复合物结合，温育后清洗；
D 加入酶作用底物（或称基质），酶分解底物并显色，用光电比色计测 定底物显色深浅，即可推知抗体量。
第十七页，讲稿共三十七页哦
（三）竞争法
此法可用于检测小分子抗原。
第十八页，讲稿共三十七页哦
步骤：
A 将已知抗体吸附于固相载体表面，温育后清洗；
第八页，讲稿共三十七页哦
• 测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但 仍保留其免疫活性，
• 然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（ 标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活 性，
• 当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应 结合后，再加上酶 的相应底物，即起 催化水解或氧化还 原反应而呈颜色。
4. 4 荧光免疫法
免疫荧光技术是根据抗原抗体反应具有高度的特异 性，以荧光素（常用的有异硫氰酸荧光黄FITC和 罗丹明RB200)作为标记物，与已知抗体结合。然后
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3．精密度
4．灵敏度
5．通道差与孔间差检测
6．线性范围
7．双波长评价
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五、仪器的操作与维护与常见故障处理
开机 接通接线板电源，打开酶标仪器开关，仪器 开始自检，自动预热2~3分钟。 打开酶联软件，进入主菜单，选择测量模式 以及某些参数 将离心好的样品，放入样品盘，选择相应的 测定程序以及试剂盘。 检查无误后，按”开始”键，酶标仪对样品 开始进行测试 测定结束后，保存测定结果，并用外置打印 机打印结果
样品盘
试剂盘 急诊标本
60个标本
13种试剂
60个标本
24种试剂
75或30个标本
18或25种试剂
均可随到随做，无需中断运行
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五、仪器的使用与维护及常见故障的处理
开机 打开仪器电源，等待仪器自检，按 “STARTUP”键启动 进入菜单，设定测量参数，放置检测试剂和 消耗品 将被测样品放入样品架，输入起始样品栏的 位置和起始样品编号，选择样品的测试项目 按已设定的参数和程序，按“Run”键仪器 自动检测 测定结束后，可以选择需要浏览的结果，打 印报告 取出试剂放入冰箱，清理废弃物，清洗探针 44 后，关闭仪器
以临床免疫检 验最常用的酶 标仪为例介绍 酶免疫分析仪 的工作原理。
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二、工作原理
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二、酶免疫分析仪的工作原理
酶免疫分析仪其实就是一台特殊的光电比色计或 分光光度计，根据ELISA技术的特点而设计。
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三、酶免疫分析仪的基本结构
全自动酶标仪可以将整个系统分为 加样系统 温育系统 洗板系统 判读系统 机械臂系统 这些 系统 既相 互独 立又 联系 紧密。
全自 动化 学发 光免 疫分 析仪
参数设置 样品装载 样本测定 结果 关机
五、操作与维护及常见故障处理
开机 打开仪器主电源和显示器，开机仪器进行初 始化
全自 工作前准备 在主屏幕进行系统设置后，装入各类耗材， 动微 并按要求进行质控和定标 粒子 将样本装入标本架，在试验菜单下输入标本 样品装载 化学 架号、标本号以及检测项目 发光 确认标本装载无误后，开始测定操作，仪器 样本测定 会自动检查耗材和校准状态 免疫 分析 测定结果可自动打印，也可以在菜单下选择 结果 浏览结果，以标准模式发送结果 仪
关机
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卸载标本，清理废弃物，清洗管路后，让仪 45 器处于24h待机状态
五、操作与维护及常见故障处理
开机 打开供水系统和操作电源，开启启动程序， 输入操作者ID，进入软件，启动系统操作
全自 工作前准备 设置仪器参数，装载各种耗材，运行校准程 动电 序，再运行质控和定标 化学 将样本装入标本架，选择标本类型，输入标 样品装载 发光 本架号、标本号以及检测项目 免疫 确认启动条件后，按“Start”键，仪器会自 样本测定 动对标本进行测定 分析 仪 可以在仪器上选择浏览结果，也可以打印检
传送舱
全自 动微 粒子 化学 发光 免疫 分析 仪
电子 系统
微电脑 控制
主探针 系统
流体 系统
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分析 系统
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三、发光免疫分析的基本结构
全自动电化学发 光免疫分析仪 控制单元
就是一台完整 的计算机，并 配有支架及打 印系统。
核心单元
主要由条形码 阅读器、标本 舱位、标本架 转盘、模块轨 道等组成。
2．真空压力不足
3．发光体错误
4．轨道错误
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第三节
免疫浊度分析仪
免疫浊度技术将现代光学仪 器与自动分析检测系统相结 合应用于免疫沉淀反应，可 对各种液体介质中的微量抗 原、抗体、药物及其他小分 子半抗原物质进行定量测定 。
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一、免疫浊度分析仪的分型
（一）免疫浊度技术的分类 根据检测原理的不同，免疫浊度技术分为透射光 免疫浊度法（turbidimetric immunoassay）和散射 光免疫浊度法（nephelometry immunoassay）。
③避免阳光直射，以延缓光学部件的老化
④操作时电压应保持稳定
⑤保持工作台面干燥、干净、水平，有足够操作空间
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日常维护
①仪器外部的清洁 ②检查加样系统 ③清洁仪器内部 ④每日仪器工作结束后的维护 ⑤处理废弃物
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月维护
①使用仪器厂商提供的软件执行检查程序，并打印检 查结果报告归档；
分析模块
是检测系统的核 心，主要包括预 清洗区、测量区 、试剂区、耗品 区。
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四、性能评价
目前应用于临床检 验的发光免疫分析 仪有很多种类，具 有检测速度快、精 度好、重复性高、 条码识别系统、24 小时待机、系统稳 定等特点。
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四、性能评价
项目
测定速度 最小检测量 重复性 全自动化学发 光免疫分析仪 60~180个/h 10-15g/ml CV≤3% 全自动微粒子 化学发光免疫 分析仪 >100个/h ≥10-15g/ml CV≤3% 全自动电化学发 光免疫分析仪 >80个/h ≥10-15g/ml CV≤3%
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发光免疫分析的基本种类及常用标记物
种类
化学发光免疫分析 电化学发光免疫分析 微粒子化学发光免疫 分析
常用标记物
氨基酰肼类及其衍生物，如5-氢基邻苯二 甲酰肼(鲁米诺)等 三联吡啶钌 二氧乙烷磷酸酯（金刚烷）等
化学发光酶免疫分析
生物发光免疫分析
辣根过氧化物酶
荧光素
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（二）常用的发光免疫分析仪的特点
结果 测报告，以标准模式发送结果 卸载标本，清理废弃物，清洗管路后，关闭 46 主电源，关闭供水系统 关机
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（二）仪器的维护
1．日保养 保持机器外壳干净。检查系统基本状态 ，之后再 按保养程序进入清洗系统进行清洗针。 2．周保养 检查主探针上、下导轨，进行特殊清洗 。每周保养后一定要做系统检测。
采用化学发光技术和磁性微粒子分离技术 相结合，是一个全自动、随机存取、软件 控制的智能分析系统。（雅培） 采用微粒子化学发光技术对人体内的微量 成分以及药物浓度进行定量测定。（贝克 曼）
全自动化学发光 免疫分析仪
全自动微粒子化学 发光免疫分析仪
磁性微珠包被采用“链酶亲和素-生物素” 全自动电化学发光 新型固相包被技术，使检测的灵敏度更高， 免疫分析仪 线性范围更宽，反应时间更短。（罗氏）
②检查所有管路及电源线是否有磨损及破裂;
③检查样品注射器及与之相连探针是否有泄露及破损;
④检查微孔探测器是否有堵塞物;
⑤检查支撑机械臂的轨道是否牢固，并检查机械臂及 其轨道上是否有灰尘。
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（三）常见故障处理
1．洗板头堵塞 此故障在该分析仪最为常见
2．加样注射器和硅胶管连接处漏水或脱落
3．开机自检时报试剂盘错误
液路动力系统
软件控制系统
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温育箱
反应板
存储器
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16
X-Y头架
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17
样品架 50根装 50×3
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18
4根独立 上下 吸移管
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19
检
测 光
纤
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20
反应板
反应板 夹具
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21
清 洗 装 置
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22
供水箱
废水箱
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四、性能评价
目前国内已经初步建立起一套酶免疫分析仪 性能的评价体系。 1．噪声检测 2．准确度
3．月保养 每月用专用不锈钢小刷刷洗1次主探针、 标本采样针、试剂针的内部。生理盐水反复冲洗 针内部，针外部用酒精擦拭干净，然后上好针。
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（三）常见故障处理
全自动的发光分析仪一般都具备很好自我诊断功 能，一旦有故障发生时，仪器一般都能自动检测 到，显示错误信息并伴有报警声。 1．压力表指示为零
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二、发光免疫分析的工作原理
（一）全自动化学发光免疫分析仪
这种免疫分析技术又称为微量倍增技术，包括：
①竞争法：多用于测定小分子抗原物质。 ②夹心法：多用于测定大分子的抗原物质。
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（二）全自动微粒子化学发光免疫分析仪 应用经典的免疫学原理，小分子物质采用竞争法或 抗体捕获法进行测定，而大分子物质采用夹心法 。
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4
第一节
酶免疫分析仪
酶免疫分析（enzyme immunoassay，EIA）
目前临床免疫检验最常用 的分析技术，具有灵敏度 高，特异性强，试剂稳定 ，操作简单、快速且无放 射性污染等优点。
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5
一、酶免疫分析仪的分型
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6
（一）酶免疫分析技术的分类
根据抗原抗体反应后是否需要分离结合与游离的 酶标记物，可分为：
均相酶免疫分析法
测定对象主要是激素、药物 等小分子抗原或半抗原，其 测定模式为竞争抑制法，无 需分离结合和游离的酶标记 物。主要有酶扩大免疫测定 技术和克隆酶供体免疫测定 技术两种方法。
非均相酶免疫分析法
需采用适当的方式将游离的和 结合的酶标记物加以分离，可 分为液相酶免疫法和固相酶免 疫法两种，后者称为酶联免疫 吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay， ELISA）。
第十章 免疫分析相关仪器
主讲人：周振华
教学基本要求
掌 握（1）免疫分析相关仪器检测的基本原理 （2）免疫分析相关仪器的基本结构
（3）免疫分析相关仪器的使用与维护