亚慢性经口毒性实验设计全
刺五加叶亚慢性经口毒性试验研究
基 础研 究
Ｄ ＯＩ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ５ － ６ ５ ２ １ ． ２ ０ １ ５ ． ２ ４ ． ０ １ １
食品研究与开发
Ｆ ｏ ｏ ｄ Ｒｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ Ａｎ ｄ Ｄｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐｍｅ ｎ ｔ
（ １ ． Ｊ ｉ ｌ ｉ ｎ Ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｉ ａ ｌ Ｃ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ Ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ Ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ １ ａ ｎ ｄ Ｐ ｒ ｅ ｖ ｅ ｎ ｔ ｉ ｏ ｎ ， Ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｃ ｈ ｕ ｎ １ ３ ０ ０ ６ ２ ， Ｊ ｉ ｌ ｉ ｎ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ；
２ ． Ｄ ｅ ｐ ａ ￣ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｎ ｕ ｔ ｉ ｒ ｔ ｉ ｏ ｎ ， Ｊ ｉ ｌ ｉ ｎ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ， Ｊ ｉ ｌ ｉ ｎ １ ３ ２ ０ １ ３ ， Ｊ ｉ ｌ ｉ ｎ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
Ａｂｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ｔｏ ｉ ｎ ｖ ｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｔ ｏ ｘ ｉ ｃ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ａ ｃ ａ ｎ ｔ ｈ ｏ ｐａ ｎ ａ ｘ ｌ ｅ ａ ｖ ｅ ｓ ｏ ｎ ｒ ａ ｔ ｓ ，ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ｂ ａ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ Ｓ ｔ ａ ｎ ｄ ａ ｒ ｄ ｓ ｆ ｏ ｒ Ｔｅ ｓ ｔ ｉ ｎ ｇ ＆ Ａｓ ｓ ｅ ｓ ｓ ｍｅ ｎ ｔ ｓ ｏ ｆ Ｆ ｏ ｏ ｄ，ａ ｎ ｉ ｎ ｅ ｔ ｙ ｄ ａ ｙ ｓ ｆ ｅ ｅ ｄ ｉ ｎ ｇ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｏ ｆ Ａ ｃ ａ ｎ ｔ ｈ ｏ ｐａ ｎ ａ ｘ ｌ ｅ ａ ｖ ｅ ｓ ｗａ ｓ ｃ ｏ ｎ ｄ ｕ ｃ ｔ ｅ ｄ，８ ０ ｒ ａ ｔ ｓ
亚慢性经口毒性实验设计全
硫酸铜亚慢性经口毒性实验设计一、实验目的通过该实验不仅可获得一定时期内反复接触受试物后引起的健康效应、受试物作用靶器官和受试物体内蓄积能力资料，并可估计接触的无有害作用水平，后者可用于选择和确定慢性实验的接触水平和初步计算人群接触的安全性水平。
二、实验原理1.亚慢性毒性实验：是指在实验动物部分生存期内，每日反复经口接触受试物后所引起的不良反应。
2.无有害作用水平（No-adverse-effect level）：是指在实验中不引起任何有害作用的最大染毒剂量，可用每日单位动物体重接触受试物的重量(mg/kg)表示。
三、实验仪器及试剂实验试剂：3%-5%苦味酸、0.5%酸性品红、蒸馏水、无水硫酸铜、水、动物饲料实验动物：健康、6-8周大鼠（80只）实验仪器：灌胃针（16号）、电子天平、动物体重秤、饲养室、烧杯、容量瓶、吸量管、吸耳球、胶头滴管、手术剪、托盘、镊子、药匙等四、实验步骤1. 实验动物的选择：选择80只6-8周，体重在50-100g的健康大鼠，大鼠体重相差不超过10%（±5-10g）。
2. 实验管理：实验前动物先适应环境和饲料5天。
适应期间和实验期间雌雄分笼饲养，所有动物通过灌胃的方式进行染毒，每周染毒7天，连续染毒90天。
3. 实验条件：饲养室温度控制在22±4℃，相对湿度在40%-70%之间，无对流风，昼夜各半。
实验期间正常饲料喂养，饮水不限。
4. 实验动物染色和分组1）抓取大鼠：抓取大鼠前最好戴上防护手套。
进行染色时，可采取左手固定法，只是用拇指和食指捏住鼠耳，余下三指紧捏大鼠背部皮肤，这样便可进行各种简单的实验操作；也可以用左手食指和中指放在颈背部的两侧，拇指和无名指放在胸前，分别用手指夹住左右前肢抓起来。
Tips：辨认大鼠的雌雄：观察生殖器与肛之问的距离，雌性较雄性近具沟；观察生殖突起，雄性较大、较圆，雌性较小具裂缝；仰卧观察乳头，雄性不明显，雌性明显。
2）染色编号：用黄色3%-5%苦味酸0.5%酸性品红对动物进行染色标记，黄色和红色分别代表个位和十位。
亚慢性、慢性毒性及其评价方法
功能蓄积可能是
❑ 由于贮存体内的化学物或其代谢产物的数 量极微，不能检出物质的蓄积 ❑ 或者是由于每次机体接触化学物之后所引 起的损害累积所致
蓄积作用的检测有两类方法
• 理化方法：应用化学分析或其他技术测定 化学物进入机体以后，在体内含量变化的 过程 该方法可确定化学物的半减期，故可 作为检测物质蓄积的方法
二、慢性毒性作用 （chronic toxicity)
（一）概念 慢性毒性：是指实验动物或人长期 （甚至 终生）反复接触外源化学物所产生的毒性 效应。
• 慢性毒性试验的试验期限，应依受试物的 具体要求和实验动物的物种而定 • 如用大鼠试验期限可为1年，用狗则试验期 限可1～2年 • 慢性毒性试验可终生接触受试物 • 如果慢性毒性试验与致癌试验结合进行， 则实验动物染毒时间最好接近或等于动物 的预期寿命
• 蓄积系数法由于分次染毒的设计不同， 分 为： 1. 固定剂量法： ➢ 先测出1次染毒的LD 50（1），然后每天 给予 1/10(1/20) LD 50 直到半数动物死亡为 止， 此时总剂量即为 LD 50（n）
2. 剂量递增法： ➢ 实验开始时 ， 按 0.1 LD 50 × 4 天 ， 0.15LD 50 × 4天，0.22LD 50 × 4天， 0.34LD 50 × 4天，依次类推，最长28天， 试验期间，当化学物引起动物累计死亡一 半时间即可终止，计算K值
3、剂量选择与分组
亚慢性试验的上限剂量，需控制在实 验动物接触受试化合物的整个过程中，不发 生死亡或仅有个别动物死亡，但有明显的中 毒效应，或靶器官出现典型的损伤。此剂量 的确定可参考两个数值，一是以急性毒性的 阈剂量为亚慢性试验的最高剂量；一是以此 化合物LD 50 的 1/20－1/5为最高剂量。
毒理学知识考核题库与答案
毒理学学问考核题库一、单项选择1、化学构造与毒效应之间的关系，以下描述正确的选项是〔〕 [单项选择题] A、化合物的化学活性打算理化性质B、理化性质打算化合物的生物活性C、化合物的生物活性打算该化合物的化学活性D、化合物的化学构造打算其化学活性及理化性质，从而影响其生物活性*E、化合物的生物活性影响理化性质2、甲烷上的氢被卤素取代，表现为肝毒性，以下卤化物中毒性最大的是〔〕[单项选择题] A、CH4B、CH3ClC、CH2Cl2D、CHCl3E、CCl4*3、以下关于化学构造对毒效应的影响，不正确的选项是〔〕 [单项选择题] * A、饱和脂肪烃随碳原子数增加，麻醉作用增加*B、碳原子数一样时，成环化合物毒性大于不成环化合物C、乙烷的毒性<乙烯的毒性<乙炔的毒性D、碳原子数一样时直链化合物毒性大于异构体E、环戊烷＞戊烷4、一般认为在同系化合物中，水溶性越大，毒性越大；以下铅化物毒性最大的是〔〕[单项选择题]A、铅碳酸铅B、一氧化铅*C、碳酸铅D、硝酸铅E、硫酸铅5、婴儿和老人血浆清蛋白水平都较低，所以〔〕 [单项选择题] A、影响化学物质的吸取B、可以阻挡化学物质进人特定的组织C、对化学物质的去除变慢D、增加游离化学物的浓度*E、增加代谢酶的活性6、在高温条件下，外源化学物质〔〕 [单项选择题] A、经呼吸道吸取增加*B、经胃肠吸取增加C、经皮肤吸取削减D、经尿液排出增加E、经汗液排出削减7、外源化学物质接触途径不同，吸取速度就不同，以下染毒途径中吸取最快的途径是〔〕 [单项选择题]A、腹腔注射B、口服C、吸入*D、经皮肤给药E、肌肉注射8、关于化学物质的助溶剂，以下描述错误的选项是〔〕 [单项选择题] A、无毒B、不与化学物质发生反响C、不影响化学物质的毒性D、化学物质在助溶剂中稳定E、助溶剂的浓度必需低于 5%*9、在临床上用药时，常觉察同时服用两种药物，其中一种药物的疗效会减弱，该现象属于联合作用中的〔〕 [单项选择题]A、相加作用B、独立作用C、协同作用D、加强作用E、拮抗作用*10、急性毒性是〔〕 [单项选择题]A、机体连续屡次接触化合物所引起的中毒效应B、机体一次大剂量接触化合物后引起快速而猛烈的中毒效应C、机体〔人或动物〕一次大剂量或 24 小时屡次接触外来化合物后所引起的中毒效应*D、机体接触较大的剂量的化合物所引起的中毒效应E、机体长期接触较低的剂量的化合物所引起的中毒效应11、通过急性毒性试验获得最主要参数是〔〕[单项选择题] * A、NOAELB、LOAELC、阈剂量D、MLDE、LD50*12、急性毒性试验一般观看时间是〔〕[单项选择题] A、1 天B、1 周C、2 周*D、3 周E、4 周13、急性毒性试验对动物年龄的要求是〔〕 [单项选择题] A、刚诞生B、初断乳C、性成熟*D、交配后E、交配前14、关于 LD50 的局限性，以下不正确的选项是〔〕[单项选择题] A、LD50 值赐予有效的信息较少，有用性有限B、LD50 的波动性很大，影响因素多C、LD50 受物种差异影响大D、消耗动物数量大：E、不能推想人类的致死剂量以及中毒后的体征*15、推举的评价皮肤、眼刺激毒性方法是〔〕 [单项选择题] A、寇氏法B、霍恩氏法C、上下移动法D、Draize 试验：*E、FCA 方法16、外源化学物连续地、反复地进入机体，而且吸取速度或总量超过代谢转化排出的速度或总量时，用分析方法在体内测出物质的原型或其代谢产物，称之为〔〕 [单项选择题]A、物质蓄积*B、功能蓄积C、损伤蓄积D、毒性蓄积：E、毒效应蓄积17、亚慢性毒性试验染毒方法的选择原则是〔〕 [单项选择题] A、常用灌胃B、常用胃饲C、常用静式染毒D、常用动式染毒E、选择与人的实际接触方式全都*18、关于食物利用率，以下描述错误的选项是〔〕 [单项选择题] A、为一般性观看指标B、体重增长减慢，则食物利用率确定降低*C、动物每增加 100g 体重所需要的饲料克数D、常以g 体重/100g 饲料来来表示E、每日食量削减，食物利用率不肯定转变19、关于脏器系数，以下描述错误的选项是〔〕[单项选择题] A、某个脏器的湿重与单位体重的比值B、通常是每 100g 体重中某脏器所占的质量C、表示为脏器质量〔g〕/体重〔100g〕D、比较适用于实质性脏器E、增大表示动物的体重降低*[单项选择题]20、在短期重复剂量毒性试验中，机体与毒物接触的时间为〔〕A、14 天B、14-30 天*C、30-90 天D、90-365 天E、终生21、当前对于动物试验提出的“3R原则”是〔〕 [单项选择题] A、慎重、替代、削减B、取代、慎重、替代C、替代、优化、削减*D、取代、削减、优化E 、优化、取代、慎重22、以下关于毒物的毒性的说法，以下哪项正确〔〕 [单项选择题] A、毒性是毒物对机体的生物学效应B、毒性是毒物对机体的损害作用C、毒性是毒物对机体的非损害作用D、毒性是毒物内在的、固有的引起机体有害作用的性质*E、毒物的毒性随毒性试验条件的转变而转变23、毒物对机体发生毒效应取决于以下因素〔〕 [单项选择题] A、毒物的毒性大小B、毒物的剂量大小C、毒物动力学过程D、机体抗损害机制E、以上都正确*24、以下关于毒物的毒性的说法，以下哪项正确〔〕 [单项选择题] A、毒性是毒物对机体的生物学效应B、毒性是毒物对机体的损害作用C、毒性是毒物对机体的非损害作用D、毒性是毒物内在的、固有的引起机体有害作用的性质*E 、毒物的毒性随毒性试验条件的转变而转变25、毒物对机体发生毒效应取决于以下因素〔〕 [单项选择题] A、毒物的毒性大小B、毒物的剂量大小C、毒物动力学过程D、机体抗损害机制E、以上都正确*26、特异质反响是指〔〕 [单项选择题]A、由于机体遗传物质特别而发生的对外来化学物的反响*B 、由于体质弱、机体防范力量差而导致的对化学物的反响C 、机体对某些特别化学物的共同反响D 、机体在化学物以某种特别的接触方式暴露后的反响E 、机体对化学物的免疫反响27、急性，亚慢性，慢性毒性试验分别选择动物年龄为〔〕 [单项选择题] * A、初成年，未成年动物，初断乳*B、初断乳，性刚成熟，初成年C、初断乳，初成年，性刚成熟D、初成年，初断乳，性刚成熟E、性刚成熟，初断乳，初成年28、经典的毒理学争论的对象是〔〕[单项选择题] * A、核素B、微波C、细菌D、病毒E、各种化学物质*29、皮肤致敏试验最常用的动物是〔〕 [单项选择题] * A、大鼠B、豚鼠*C、兔D、小鼠E、乳鼠30、在皮肤刺激试验中最好使用〔〕 [单项选择题] * A、小鼠和大鼠B、大鼠和家兔C、家兔和小鼠D、豚鼠和家兔*E、地鼠和豚鼠31、眼刺激试验使用家兔数量为〔〕 [单项选择题] * A、2～3 只B、3～4 只*C、4～5 只D、5～6 只E、6～7 只32、动式染毒主要优点是〔〕 [单项选择题] * A、装置备有颖空气补充B、受试化合物保持浓度不变C、保证染毒柜内氧气和二氧化碳分压恒定D、温湿度恒定E、以上都是*33、改进寇氏法要求〔〕 [单项选择题] * A、设 5～7 个剂量组B、每个剂量组小鼠不行少于 10 只C、组距为几何级数D、死亡率呈常态分布E、以上都是*34、大鼠急性经口染毒，为了准确地将受试物给入消化道内，多承受〔〕A、喂饲B、灌胃*C、吞咽胶囊D、鼻饲E、饮水35、霍恩法的要求是〔〕 [单项选择题] * A、4 个染毒剂量组B、每组动物 4 只或 5 只C、组距 3、16D、组距 2、15E、以上都是*36、亚慢性毒性试验的目的如下述，但不包括〔〕 [单项选择题] * A、争论受试物亚慢性毒性的特点及靶器官[单项选择题] *B、争论受试物的亚慢性毒性的剂量-反响关系C、为慢性毒性试验和致癌试验的剂量设计供给依据D、确定受试物的致死剂量*E、为制定其安全限量标准供给初步参考依据37、大鼠亚慢性毒性试验连续染毒的期限为〔〕 [单项选择题] * A、14 天B、20 天C、60 天D、90 天* E、1 年38、亚慢性毒性试验期限是〔〕 [单项选择题] * A、环境毒理学 3～6 个月B、食品毒理学 90 天喂养C、工业毒理学 1～3 个月D、食品毒理学 3～6 个月E、以上都对*39、亚慢性毒性试验的一般性指标有〔〕 [单项选择题] * A、特别基团检测B、特别基因测试C、灵敏指标的检查D、动物死亡率E、脏器系数*40、慢性中毒发生的根底是〔〕 [单项选择题] * A、毒物的剂量B、毒物的作用时间C、毒物的蓄积作用*D、毒物的选择作用E、个体差异二、多项选择1、关于LD50的局限性，以下正确的选项是：〔〕A、 LD50 值赐予有效的信息较少，有用性有限*B、LD50 的波动性很大，影响因素多*C、 LD50 受物种差异影响大*D、消耗动物数量大：*E、不能推想人类的致死剂量以及中毒后的体征2、关于LD50的重要毒理学意义，以下正确的选项是：〔〕A、评价和比较外源化学物毒性的大小*B、计算药物的治疗指数等参数*C、通过比较不同染毒途径的 LD50，可获得生物利用度的信息*D、可用来推想毒效应的特点和机制E、为后续毒理学试验供给剂量设计依据*3、长期毒性试验中，合理的剂量设计必需符合以下原则〔〕A、至少包括低、中、高三个剂量组*B、高剂量组可以观看到明显的中毒效应*C、中剂量组有轻度的毒性效应*D、低剂量组观看不到任何毒效应*E、不必设立阴性或阳性比照4、亚慢性毒性试验的剂量设计，以下表达中正确的选项是：〔〕A、只要设三个剂量组即可B、低剂量组观看不到损伤效应，相等于NOAEL*C、中剂量组可以观看到明显的损伤效应，相等于LOAELD、高剂量组可以观看到严峻的损伤效应，甚至消灭动物的死亡E、抱负的剂量设计可以观看到明确的剂量效应关系*5、重复剂量、亚慢性、慢性毒性试验的目的包括〔〕A、长期接触受试物的毒性效应谱、毒作用特点和毒作用靶器*B、观看长期接触受试物毒性作用的可逆性*C、争论重复接触受试物毒性作用的剂量－反响〔效应〕关系*D、确定 NOAEL 和 LOAEL，为制定安全限量供给参考*E、为探讨毒性机制供给线索*6、关于外源化学物质的理化性质对毒效应的影响，以下正确的选项是〔〕 A、脂水安排系数越大，越简洁在脂肪组织中蓄积*B、砒霜在水中溶解度大于雄黄，故其毒性大于雄黄*C、化学物质的粒子越小，分散度越大，外表活性越大*D、挥发性越大的化学物质，其呼吸道吸入的危害性大*E、化学物质微粒的荷电性影响其跨膜转运7、影响化学物质毒效应的环境因素有〔〕A、气象因素*B、动物的年龄C、动物的饲养条件*D、季节或昼夜节律*E、化学物质的接触剂量8、化学物质间的交互作用包括〔〕A、相加作用B、协同作用*C、加强作用*D、独立作用E、拮抗作用*9、外源化学物质的一般毒性作用包括〔〕A、急性毒性作用*B、重复剂量毒性作用*C、亚慢性毒性作用*D、慢性毒性作用*E、致突变作用10、急性毒性试验选择动物的原则〔〕A、对化合物毒性反响与人接近的动物*B、易于饲养治理*C、易于获得，品系纯化*D、生殖力量强*E、价格低廉*三、推断1、外源化学物在体内的贮存库是急性中毒的根底，可以缓解慢性中毒。
安赛蜜对大鼠的亚慢性毒性
基金项目:中央补助食品安全风险监测及标准跟踪评价项目(编号:皖卫财秘[２０２１]１９１号)作者简介:郑思雨,女,安徽省疾病预防控制中心主管技师,学士.通信作者:滕晶晶(１９８３ ),女,安徽省疾病预防控制中心副主任技师,硕士.E Ｇm a i l :２３７７６９２０＠q q．c o m 收稿日期:２０２３Ｇ０４Ｇ０３㊀㊀改回日期:２０２３Ｇ０８Ｇ２４D O I :１０．１３６５２/j ．s p j x ．１００３．５７８８．２０２３．８０２９２[文章编号]１００３Ｇ５７８８(２０２３)１１Ｇ００２３Ｇ０６安赛蜜对大鼠的亚慢性毒性S u b c h r o n i c t o x i c i t y s t u d y of a c e s u l f a m e i n r a t s 郑思雨Z H E N GS i y u ㊀滕晶晶T E N GJ i ng j i n g ㊀杨同金Y A N GT o n g ji n ㊀王㊀岩WA N GY a n ㊀夏㊀新X I A X i n ㊀鲍军辉B A OJ u n h u i (安徽省疾病预防控制中心,安徽合肥㊀２３０６０１)(A n h u iP r o v i n c i a lC e n t e r f o rD i s e a s eC o n t r o l a n dP r e v e n t i o n ,H e i fe i ,A n h u i ２３０６０１,C h i n a )摘要:目的:研究安赛蜜作为食品添加剂的亚慢性毒性.方法:按照G B１５１９３．１３ ２０１５的方法进行亚慢性毒性试验,采用４周龄无特定病原体(S P F )级健康离乳S p r a g u e D a w l e y (S D )大鼠８０只,雌雄各半,设置４个剂量组,分别为阴性对照组和安赛蜜４５００,１５００,５００m g /k g 体重３个剂量组,对大鼠进行９０d 灌胃染毒,试验结束采血测定血常规及生化指标并进行病理学检测对比.结果:安赛蜜４５００,１５００,５００m g /k g 体重３个剂量组动物一般体征正常,试验末期体重增长量㊁总摄食量㊁总食物利用率以及绝对脏器重量㊁脏体比未发现有意义的异常改变;血液学检测值㊁生化指标检测值㊁尿液指标值均在正常波动范围内,与对照组比较差异无统计学意义(P ＞０．０５).动物大体检查未发现心㊁肝㊁脾㊁肺㊁肾㊁睾丸㊁心脏㊁胸腺和肾上腺等脏器的异常改变,组织病理学镜检未发现与受试物相关的病理改变.结论:安赛蜜在整个试验周期对大鼠均未见明显的毒性作用,９０d 经口未观察到有害作用剂量为４５００m g /k g 体重.关键词:安赛蜜;大鼠;亚慢性毒性;经口毒性试验A b s t r a c t :O b je c t i v e :T h i ss t u d y a i m e dt os t u d y t h es u b c h r o n i c t o x i c i t y of a c e s u l f a m e a s a f o o da d d i t i v e a n do b t a i n t h ed o s ag eo fh a r m f u l e f f e c t s n o t o b s e r v e do r a l l y f o r ９０d ．M e t h o d s :A c c o r di n g t oG B１５１９３．１３ ２０１５,e i g h t y ４Ｇw e e k Ｇo l ds p e c i f i c p a t h o g e n Ｇf r e e (S P F )h e a l t h y d e t a c h e dS p r a g u eD a w l e y (S D )r a t s (h a l fm a l e a n dh a l f f e m a l e )w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o ４g r o u p s ．R a t sw e r e a d m i n i s t e r e d４５００,１５００,５００a n d０．０m g /k g B W．a c e s u l f a m e b yg a v a g e f o r ９０c o n s e c u t i v e d a y s ,r e s p e c t i v e l y ．A t t h e e n d o f t h e e x p e r i m e n t ,s a m p l e s o f b l o o dw e r e c o l l e c t e d f o r b l o o d r o u t i n e a n d b i o c h e m i c a l a n a l y s i s ,a n d s o m e o r g a n s w e r e r e m o v e d f o r h i s t o p a t h o l o gi c a le x a m i n a t i o n s ．A l lt h e d a t a o ft h er a t s w e r e c o m p a r e da n de v a l u a t e d w i t ht h ec o n t r o l g r o u p ．R e s u l t s :T h e g e n e r a l p h y s i c a ls i g n s o fa n i m a l si n t h e ３d o s a g e g r o u p s o f a c e s u l f a m e ４５００,１５００a n d５００m g /k g B W．w e r en o r m a l ,a n d n o s i g n i f i c a n ta b n o r m a l c h a n g e sw e r ef o u n di nt h eb o d y w e i g h t g a i n ,t o t a l f o o d i n t a k e ,t o t a l f o o du t i l i z a t i o n r a t e ,a b s o l u t e o r ga n w e i g h t ,a n dv i s c e r a /b o d y r a t i o a t t h e e n d o f t h e e x p e r i m e n t ．T h e v a l u e so fh e m a t o l o g y ,b i oc h e m i c a li nde x e s ,a n d u r i n ei n d e x e s w e r e a l lw i t h i nt h en o r m a lf l u c t u a t i o nr a n ge ,a n dt h e r ew a sn o s i g n if i c a n t d i f f e r e n c eb e t w e e nt h e３e x p e r i m e n t a lg r o u p s a n d th e c o n t r o l g r o u p (P ＞０．０５)．G r o s s e x a mi n a t i o n s h o w e d n o a b n o r m a lc h a n g e si nt h e h e a r t ,l i v e r ,s p l e e n ,l u n g ,k i d n e y ,t e s t i s ,h e a r t ,t h y m u s a n d a d r e n a l g l a n d s ．H i s t o p a t h o l o g i c a l e x a m i n a t i o na l s os h o w e dn o p a t h o l o g i c a l c h a n ge sr e l a t e dt ot h e s u b je c t ．C o n c l u s i o n :A c e s u lf a m eh a sn oo b v i o u s t o x i ce f f e c t so n r a t sd u r i ng th e w h o l et e s t p e r i o d ,t h e N O A E L o f m a l ea n d f e m a l eS Dr a t s i no r a l s u b c h r o n i ct o x i c i t y s t u d y f o ra c e s u l f a m e b o t ha r e ４５００m g /k g B W．K e yw o r d s :a c e s u l f a m e ;r a t ;s u b c h r o n i c t o x i c i t y ;o r a l t o x i c i t y t e s t 安赛蜜甜味纯正而强烈,为蔗糖的２００倍,对光㊁热稳定,p H 适用范围较广(pH 为３~７)[１].作为第４代合成甜味剂,安赛蜜在体内不代谢㊁不蓄积,可以单独使用,也可以与其他甜味剂混合使用并产生很强烈的协同效应,被认为是最有前途的甜味剂之一[２].目前,普遍使用双乙烯酮和氨基磺酸合成安赛蜜,其原料来源广㊁生产成本低,适用于连续的工业化生产[３－４].G B２７６０ ２０１４中规定了安赛蜜作为甜味剂允许使用的类别和最大使用量[５].而食品中超范围㊁超限量使用甜味剂,滥用复合甜味剂等问题比较突出,已成为高度重视的社会问题[６].近年来,人们对食品添加剂的应用越来越重视,对安赛蜜在各食品中含量检测及其风险评估的研究也越来越多[７－１０].欧洲食品安全局(E F S A )及粮农组织/世卫组织食品添加剂联合专家委员会(J E C F A )对安赛蜜作为食品添加剂的安全性已经过严格的风险评估,但中国对安赛３２F O O D &MA C H I N E R Y 第３９卷第１１期总第２６５期|２０２３年１１月|蜜食用的安全性较少有报道,对其连续的㊁长期的食用安全性及相关毒理学评价也缺乏相应研究.随着安赛蜜生产工艺的不同及技术革新,安赛蜜的安全性及其与其他甜味剂的协同使用在长期食用下是否会对人体产生影响仍值得深究[１１－１２].研究拟依据G B１５１９３．１３ ２０１５«食品安全国家标准９０天经口毒性试验»,旨在通过大鼠的９０d经口毒性试验探讨安赛蜜作为食品添加剂的安全性以及得出未观察到有害作用剂量(N O A E L)值,以期为正确认识安赛蜜及食品添加剂提供依据.１㊀材料与方法１．１㊀主要试剂及仪器健康离乳S D大鼠:４周龄,８０只(雌雄各半),清洁级,动物质量合格证号２０２００８１２A a Z Z０６１９０００６８６(雌性)㊁２０２００８１２A a Z Z０６１９０００２０６(雄性),试验动物使用许可证号为S Y X K(皖)２０１９Ｇ０１１,生产许可证号为苏饲证(２０１９)０１００８,浙江维通利华实验动物技术有限公司;安赛蜜:ȡ９９％,安徽维多食品配料有限公司;生化分析仪试剂:美国贝克曼库尔特有限公司;血常规分析试剂:日本S y s m e x(希森美康)株式会社;血凝仪试剂:南京瑞麦科技开发有限公司;尿液分析试剂:桂林优利特医疗电子有限公司;全自动生化分析仪:A U４８０型,美国贝克曼库尔特有限公司;五分类血液分析仪:２０００i型,日本S y s m e x公司;半自动血凝仪:A YW８００１型,南京瑞麦科技开发有限公司;尿液分析仪:３３０型,桂林优利特医疗电子有限公司;多功能酶标仪:S p e c t r a m a x M２e型,美国M D公司;全封闭式组织脱水机:A S P２００S型,德国L e i c a公司;包埋机:B M JＧ３型,中威电子仪器有限公司;石蜡病理切片机:R M２１２６K T型,德国L e i c a公司;显微镜:E c l i p sC i型,日本N i k o n公司;电子天平:P B４０３ＧS/F A C T型,瑞士M e t t l e rT o l e d o 公司.１．２㊀方法１．２．１㊀试验动物及分组㊀８０只大鼠按性别㊁体重随机分成４组,每组２０只,雌雄各半,单笼饲养于安徽省疾病预防控制中心动物房屏障环境中,温度２０~２５ħ㊁湿度５０％~７０％.所有动物试验前进行适应性饲养５d,试验期间大鼠单笼饲养,自由饮水和摄食.１．２．２㊀受试物剂量选择及给予方式㊀分别设高㊁中㊁低３个剂量组,根据WHO联合食品添加剂专家委员会推荐的安赛蜜日均最大摄入量为１５m g/k g,以推荐摄入量的３００倍,即４５００m g/k g体重为高剂量组,中㊁低剂量分别为１５００,５００m g/k g体重(相当于人体推荐摄入量的１００,３３．３倍),另设一个阴性对照组,共４个剂量组.采用灌胃方式经口染毒,灌胃容量为１０m L/k g体重,每日定时染毒一次(每周灌胃６d),持续９０d.１．２．３㊀指标测定(１)一般观察:观察动物的一般表现和中毒体征等,试验期间,前４周每周称体重２次,之后每周称体重１次,每周称量一次饲料,计算饲料消耗和体重增长情况.(２)尿液测定:试验结束时,动物禁食１６h后称重,采集尿液,检测尿蛋白(P R O)㊁尿比重(S G)㊁酸碱度(p H)㊁葡萄糖(G L U)以及隐血(B L D).(３)血液学测定:麻醉取血,检测红细胞数(R B C)㊁血红蛋白含量(H G B)㊁红细胞压积(H C T)㊁白细胞数(W B C)及其分类计数(中性粒㊁淋巴㊁单核㊁嗜酸㊁嗜碱)㊁血小板计数(P L T)㊁凝血酶原时间(P T)㊁活化部分凝血活酶时间(A P T T).(４)血液生化测定:采血进行生化指标检测,包括肌酐(C r)㊁血糖(G l u)㊁总蛋白(T P)㊁白蛋白(A L B)㊁总胆固醇(T C)㊁甘油三脂(T G)㊁丙氨酸氨基转移酶(A L T)㊁门冬氨酸氨基转移酶(A S T)㊁碱性磷酸酶(A L P)㊁谷氨酰转肽酶(G G T)㊁尿素㊁氯㊁钠及钾含量.(５)脏体比:肉眼观察大鼠体表㊁体腔及脏器,称量脑㊁心脏㊁胸腺㊁肾上腺㊁肝㊁肾㊁脾㊁睾丸㊁附睾㊁子宫与卵巢的绝对重量,计算脏器系数.(６)组织病理学检查:对脑㊁甲状腺㊁心脏㊁胸腺㊁肾上腺㊁肝㊁肾㊁脾㊁胃㊁十二指肠㊁结肠㊁胰㊁肠系膜淋巴结㊁卵巢㊁睾丸及膀胱等脏器做组织病理学检查.１．３㊀数据处理使用I B M S P S S２２．０软件进行数据统计分析,以 xʃs表示.计量资料使用方差分析,方差不齐进行数据转换,分类资料用F i s h e r精确分布㊁等级资料用R i d i t方法进行分析.２㊀结果与分析２．１㊀一般临床观察㊁动物体重增长量㊁总摄食量㊁总食物利用率㊀㊀由表１可知,试验期间雌性阴性对照组大鼠及雄性中㊁高剂量组大鼠各死亡１只,各剂量组其余动物染毒期间未见明显中毒体征和其他方面改变.受试物以高㊁中㊁低剂量进行大鼠灌胃染毒９０d,各组动物体重增长量㊁总摄食量㊁总食物利用率与对照组相比差异均无统计学意义(P＞０．０５),认为安赛蜜喂养大鼠９０d对其体重增长㊁摄食量和食物利用率无影响.２．２㊀血液学检测试验结束对各剂量组雌㊁雄大鼠的血液学指标进行４２基础研究F U N D AM E N T A LR E S E A R C H总第２６５期|２０２３年１１月|表１㊀安赛蜜对大鼠体重增长量㊁总摄食量㊁总食物利用率的影响T a b l e １㊀E f f e c t s o f a c e s u l f a m e o nw e i gh t g a i n ,t o t a l f o o d i n t a k e a n d t o t a l f o o du t i l i z a t i o n i n r a t s (n ＝１０)性别组别数量/只体重增长量/g 总摄食量/g总食物利用率/％雄阴性对照１０３１４．６ʃ６１．８２１２０．１ʃ２３３．２０．１５ʃ０．０１低剂量组１０３４７．３ʃ７０．２２２２１．５ʃ２１３．４０．１６ʃ０．０２中剂量组９３３０．８ʃ５８．３２１３４．４ʃ２５２．５０．１５ʃ０．０１高剂量组９３５３．３ʃ７７．３２１７８．１ʃ２２３．３０．１６ʃ０．０２雌阴性对照９１６２．６ʃ３４．５１５２１．３ʃ１４８．２０．１１ʃ０．０１低剂量组１０１５７．１ʃ２１．２１４９９．６ʃ１２３．９０．１０ʃ０．０１中剂量组１０１４４．９ʃ４４．４１４３７．３ʃ２０５．２０．１０ʃ０．０２高剂量组１０１５０．６ʃ４３．４１４３８．４ʃ２３２．８０．１０ʃ０．０２检测,由表２可知,仅雄性大鼠低剂量组血红蛋白浓度和雌性中剂量组血小板计数与对照组相比具有显著性差异(P ＜０．０５),各剂量组之间也未表现出明显的剂量 反应关系.其余各项指标与对照组相比差异均无统计学意义(P ＞０．０５),认为安赛蜜对大鼠血液学指标无影响.２．３㊀血生化指标检测由表３可知,各剂量组雌㊁雄大鼠的血清生化指标结果仅雌性动物低剂量组总胆固醇与对照组比较具有显著性差异(P ＜０．０５).这可能是由于安赛蜜只提供甜味不提供能量,只在味觉上得到甜的感知,使得大鼠进一步增加饮食获得饱腹感,进而导致总胆固醇含量升高[１３].其余各项指标与对照组相比差异均不明显(P ＞０．０５),各剂量组血生化指标均在正常范围内.２．４㊀尿液检测试验结束对大鼠尿液进行检测,由表４可知,各剂量组雌㊁雄大鼠的尿常规指标与对照组相比差异均无显著性差异(P ＞０．０５),各项指标均在正常范围内,提示安赛蜜对大鼠尿常规无明显影响.表２㊀安赛蜜对大鼠血液学指标的影响†T a b l e ２㊀E f f e c t s o f a c e s u l f a m e o nh e m a t o l o gi c a l i n d e x e s i n r a t s (n ＝１０)性别组别数量/只白细胞/(ˑ１０μL －１)红细胞/(ˑ１０４μL －１)血红蛋白/(gL －１)红细胞压积/(ˑ１０－１％)血小板/(ˑ１０３μL －１)中性粒细胞/(ˑ１０μL －１)雄阴性对照１０６１５．６ʃ１７６．０８４４．９ʃ５６．１１４７．６ʃ６．６４２５．０ʃ１６．６１０８３．９ʃ１０２．１６９．６ʃ２１．７低剂量组１０６６８．１ʃ１６１．８８７５．４ʃ３０．８１５４．４ʃ３．１∗４３７．６ʃ８．６１１６５．６ʃ９７．４７９．０ʃ２９．３中剂量组９６４３．３ʃ１４４．５８５９．９ʃ４６．７１４９．１ʃ１０．４４２２．６ʃ３１．１１１９３．８ʃ１４９．９６３．６ʃ２２．９高剂量组９６１６．１ʃ１８７．３８７０．８ʃ２８．８１５０．６ʃ４．０４２８．６ʃ１２．９１１９５．６ʃ１３４．７６１．８ʃ３０．３雌阴性对照９３９３．７ʃ９１．９７６７．１ʃ２８．９１４３．６ʃ４．５４１２．８ʃ１２．０１０２１．１ʃ７８．１５２．９ʃ３１．１低剂量组１０４７１．５ʃ１２７．９７７３．２ʃ４０．２１４５．２ʃ５．７４２０．７ʃ２３．５１０２０．２ʃ１６４．４４５．６ʃ１５．１中剂量组１０３８４．２ʃ１０１．３７５０．８ʃ５０．９１４２．９ʃ９．３４１２．７ʃ２３．１８２５．７ʃ１８９．５∗４１．０ʃ２９．１高剂量组１０３８２．２ʃ１１２．６７６１．３ʃ３２．２１４０．６ʃ５．３４０６．８ʃ１５．２１０３４．０ʃ１３５．４４６．２ʃ２７．４性别组别数量/只淋巴细胞/(ˑ１０μL －１)单核细胞/(ˑ１０μL －１)嗜酸性粒细胞/(ˑ１０μL －１)嗜碱性粒细胞/(ˑ１０μL －１)凝血酶原时间/s活化凝血活酶时间/s雄阴性对照１０５２１．２ʃ１５７．５１６．６ʃ５．４８．２ʃ２．５０．０ʃ０．０１４．９ʃ１．４３１．３ʃ４．７低剂量组１０５６５．４ʃ１５８．８１４．５ʃ４．７９．１ʃ３．２０．１ʃ０．３１３．１ʃ０．６３４．９ʃ９．９中剂量组９５５３．９ʃ１２６．８１８．０ʃ３．８７．９ʃ２．９０．０ʃ０．０１４．９ʃ０．７２８．１ʃ５．７高剂量组９５３０．８ʃ１５５．５１４．９ʃ６．３８．７ʃ３．６０．０ʃ０．０１４．７ʃ０．７２５．４ʃ２．７雌阴性对照９３２８．２ʃ７７．９７．１ʃ３．７５．４ʃ１．３０．０ʃ０．０１３．７ʃ０．９２９．３ʃ７．０低剂量组１０４０８．８ʃ１２３．６１２．１ʃ７．０４．９ʃ１．３０．１ʃ０．３１２．２ʃ０．６３３．５ʃ２．９中剂量组１０３２７．４ʃ１０２．４７．８ʃ４．９８．０ʃ７．１０．０ʃ０．０１２．７ʃ１．０２９．８ʃ６．８高剂量组１０３２３．５ʃ９４．９８．４ʃ５．１４．１ʃ１．７０．０ʃ０．０１２．２ʃ０．６２７．６ʃ５．７㊀†㊀∗表示与阴性对照组比较差异显著(P ＜０．０５).５２|V o l ．３９,N o ．１１郑思雨等:安赛蜜对大鼠的亚慢性毒性表３㊀安赛蜜对大鼠血生化指标的影响†T a b l e ３㊀E f f e c t s o f a c e s u l f a m e o nb l o o db i o c h e m i c a l i n d e x e s i n r a t s (n ＝１０)性别组别数量/只总蛋白/(gL －１)白蛋白/(gL －１)甘油三酯/(mm o l L －１)总胆固醇/(mm o l L －１)血糖/(mm o l L －１)肌酐/(μm o l L －１)尿素/(mm o l L －１)雄阴性对照１０５８．０ʃ４．０３０．９ʃ２．３１．４ʃ０．７１．７ʃ０．２６．５ʃ０．９２９．８ʃ２．９５．３ʃ０．６低剂量组１０６０．２ʃ３．２３１．８ʃ１．２１．３ʃ０．６１．７ʃ０．４７．１ʃ０．８３１．８ʃ１．７５．７ʃ０．４中剂量组９５３．１ʃ１８．９２７．８ʃ９．９１．４ʃ１．０１．５ʃ０．６５．６ʃ２．１２６．９ʃ７．６５．６ʃ０．５高剂量组９５１．８ʃ１８．４２７．３ʃ９．６１．０ʃ０．６１．５ʃ０．６６．４ʃ２．３２７．５ʃ８．３５．４ʃ０．５雌阴性对照９５５．９ʃ２０．１３１．９ʃ１１．４０．９ʃ０．５１．４ʃ０．６５．７ʃ２．１２８．６ʃ８．４５．４ʃ０．５低剂量组１０６６．７ʃ４．８３７．６ʃ２．７１．３ʃ０．９１．９ʃ０．３∗１２．７ʃ１２．５３３．３ʃ３．０５．６ʃ０．４中剂量组１０６２．８ʃ５．５３５．６ʃ４．３１．０ʃ０．４１．６ʃ０．４６．６ʃ０．９３１．７ʃ４．４５．７ʃ０．６高剂量组１０６１．７ʃ３．８３５．５ʃ２．１１．１ʃ０．６１．７ʃ０．３６．８ʃ０．６３０．４ʃ４．１６．０ʃ０．８性别组别数量/只门冬氨酸氨基转移酶/(U L －１)丙氨酸氨基转移酶/(U L －１)碱性磷酸酶/(U L －１)谷氨酰转肽酶/(mm o l L －１)钠/(mm o l L －１)钾/(mm o l L －１)氯/(mm o lL －１)雄阴性对照１０１１８．８ʃ２４．２２６．４ʃ４．２１１１．７ʃ３９．２６．０ʃ０．４１３９．６ʃ１．０４．９ʃ０．６１０２．１ʃ１．３低剂量组１０１２８．２ʃ３７．２２９．４ʃ２．８１２７．０ʃ１９．３６．０ʃ０．６１３９．４ʃ０．８４．８ʃ０．４１０１．５ʃ１．６中剂量组９１２６．７ʃ２１．０２７．６ʃ４．７１１２．７ʃ５４．６６．１ʃ０．４１２６．４ʃ４３．０４．４ʃ１．６９２．７ʃ３０．１高剂量组９１１４．１ʃ２８．９２６．２ʃ１．２１０９．１ʃ１４．４４．９ʃ１．１１２６．３ʃ４３．０４．６ʃ１．７９２．３ʃ３０．０雌阴性对照９９９．１ʃ１７．２２６．０ʃ６．９７３．９ʃ２８．５５．５ʃ０．４１２４．８ʃ４２．１４．２ʃ１．５９１．６ʃ２９．８低剂量组１０１１６．８ʃ２３．５２９．６ʃ６．０６３．５ʃ１０．２６．０ʃ０．３１３８．７ʃ０．９５．３ʃ２．０９９．０ʃ４．８中剂量组１０１１９．３ʃ２８．７２９．１ʃ１２．０８５．０ʃ５１．４５．９ʃ０．４１３８．６ʃ０．８４．３ʃ０．５１００．７ʃ１．５高剂量组１０１０９．３ʃ１２．５２４．７ʃ４．８７７．１ʃ１６．４６．０ʃ０．４１３８．８ʃ０．９４．４ʃ０．５１０１．３ʃ０．９㊀†㊀∗表示与阴性对照组比较差异显著(P ＜０．０５).２．５㊀大体解剖及组织学检查２．５．１㊀大体解剖㊀由表５可知,所有大鼠大体解剖未发现心㊁肝㊁脾㊁肺㊁肾㊁睾丸㊁心脏㊁胸腺和肾上腺等脏器的异常.各剂量组脏器重量与对照组相比均无统计学意义(P ＞０．０５).雌性低㊁中剂量组肝脏系数与对照组具有极显著差异(P ＜０．０１),雄性中剂量组心脏系数㊁肾脏系数㊁高剂量组心脏系数与对照组具有显著性差异(P ＜０．０５).有研究[１４－１５]表明,安赛蜜可增加小鼠肝脏脂肪的生成,诱导脂质异常从而加剧动脉粥样硬化,安赛蜜还可能引起小鼠肠道菌群的改变和体重增加.但这并未导致每个剂量组的指标发生改变,也未在体重增重及脏器重量上有所体现,考虑为单一剂量组的偶发现象.其余各项指标与对照组比较,差异均无统计学意义(P ＞０．０５).２．５．２㊀组织病理学检查㊀由表６可知,试验结束,对高剂量组和阴性对照组所有大鼠的脑㊁甲状腺㊁胸腺㊁心脏㊁肝㊁肾㊁脾㊁肾上腺㊁胃㊁十二指肠㊁结肠㊁胰㊁肠系膜淋巴结㊁卵巢㊁睾丸和膀胱等做组织病理学检查,检查发现的主要病理改变见表７.但这些病理改变无特异性,也无剂表４㊀安赛蜜对大鼠尿常规指标的影响†T a b l e ４㊀E f f e c t s o f a c e s u l f a m e o nu r i n e r o u t i n e i n d e x e s i n r a t s (n ＝１０)性别组别数量/只尿蛋白＃尿比重pH 葡萄糖＃隐血＃雄阴性对照１００１．０１５ʃ０．００６６．４０ʃ０．７４０２低剂量组１００１．０１３ʃ０．００３６．９４ʃ０．１７０１中剂量组９０１．０１１ʃ０．００３６．９５ʃ０．１６０１高剂量组９０１．０１４ʃ０．００２７．００ʃ０．２５００雌阴性对照９１１．０１３ʃ０．００４６．５６ʃ０．４６０１低剂量组１００１．０１６ʃ０．００４６．５５ʃ０．５５００中剂量组１０１１．０１３ʃ０．００３６．５５ʃ０．５５０１高剂量组１００１．０１５ʃ０．０１６６．８５ʃ０．３４００㊀㊀㊀㊀†㊀＃表示该指标用阳性结果数表示.６２基础研究F U N D AM E N T A LR E S E A R C H 总第２６５期|２０２３年１１月|量 反应关系,考虑为自发性病变,与受试物无关,未对其他剂量组进行组织病理学检查.３㊀结论安赛蜜分别以４５００,１５００,５００m g/k g体重(相当于人体推荐摄入量的３００,１００,３３．３倍)的剂量经口染毒９０d,雌㊁雄性大鼠的体重增长㊁摄食量㊁食物利用率均无明显异常;各剂量组的血液㊁血生化㊁尿常规指标㊁脏器重量㊁脏体比等虽出现了部分指标的异常改变,但无剂量表５㊀安赛蜜对大鼠脏器重量的影响T a b l e５㊀E f f e c t s o f a c e s u l f a m e o no r g a nw e i g h t i n r a t s(n＝１０)性别组别数量/只脑心脏胸腺肾上腺肝肾雄阴性对照１０２．０９ʃ０．０９１．６３ʃ０．２７０．４６ʃ０．１２０．０６ʃ０．０２１７．０３ʃ２．５７３．０８ʃ０．４４低剂量组１０２．０８ʃ０．０８１．６４ʃ０．１８０．４３ʃ０．１４０．０４ʃ０．０２１７．７２ʃ２．５９３．０９ʃ０．３３中剂量组９２．１３ʃ０．０８１．５３ʃ０．１５０．４７ʃ０．２６０．０５ʃ０．０１１７．０４ʃ２．０４２．９２ʃ０．３２高剂量组９２．０６ʃ０．１５１．５６ʃ０．２１０．４７ʃ０．１２０．０５ʃ０．０２１７．６３ʃ２．７５３．１２ʃ０．４９雌阴性对照９１．９０ʃ０．０４１．０３ʃ０．１３０．３６ʃ０．１００．０６ʃ０．０１９．０５ʃ１．２６１．９６ʃ０．２１低剂量组１０１．８９ʃ０．０８０．９７ʃ０．１１０．４２ʃ０．１６０．０６ʃ０．０１１０．４３ʃ１．０６２．００ʃ０．１６中剂量组１０１．８８ʃ０．０８０．９４ʃ０．１４０．４１ʃ０．１５０．０６ʃ０．０１９．４９ʃ１．２９１．８８ʃ０．１７高剂量组１０１．９２ʃ０．１２０．９９ʃ０．２００．３８ʃ０．１１０．０６ʃ０．０２８．８７ʃ１．７０１．９４ʃ０．２８性别组别数量/只脾睾丸附睾子宫卵巢雄阴性对照１００．８１ʃ０．２０３．２０ʃ０．２５１．２９ʃ０．１０－－低剂量组１００．７５ʃ０．０６３．３５ʃ０．２９１．２８ʃ０．０９－－中剂量组９０．５６ʃ０．０３３．３９ʃ０．３９１．３１ʃ０．１３－－高剂量组９０．５７ʃ０．０１３．３２ʃ０．４１１．３１ʃ０．１７－－雌阴性对照９０．５４ʃ０．０９－－０．８３ʃ０．２１０．１３ʃ０．０３低剂量组１００．５２ʃ０．０６－－０．７２ʃ０．３１０．１４ʃ０．０３中剂量组１００．５４ʃ０．０９－－０．６７ʃ０．２６０．１３ʃ０．０２高剂量组１００．５４ʃ０．１０－－０．６９ʃ０．２１０．１３ʃ０．０３表６㊀安赛蜜对大鼠脏器系数的影响†T a b l e６㊀E f f e c t s o f a c e s u l f a m e o nv i s c e r a lＧb o d y r a t i o i n r a t s(n＝１０)性别组别数量/只脑/体心脏/体胸腺/体肾上腺/体肝/体肾/体雄阴性对照１００．４１ʃ０．０４０．３２ʃ０．０２０．０９ʃ０．０２０．０１１ʃ０．００３３．３３ʃ０．２９０．６０ʃ０．０５低剂量组１００．３９ʃ０．０５０．３０ʃ０．０４０．０８ʃ０．０３０．００８ʃ０．００４３．２６ʃ０．２３０．５７ʃ０．０６中剂量组９０．４１ʃ０．０４０．２９ʃ０．０２∗０．０９ʃ０．０４０．００９ʃ０．００２３．２４ʃ０．１６０．５６ʃ０．０３∗高剂量组９０．３８ʃ０．０５０．２９ʃ０．０２∗０．０９ʃ０．０２０．０１０ʃ０．００４３．２１ʃ０．１５０．５７ʃ０．０１雌阴性对照９０．６２ʃ０．０６０．３４ʃ０．０４０．１２ʃ０．０３０．０２０ʃ０．００４２．９４ʃ０．２００．６４ʃ０．０２低剂量组１００．６３ʃ０．０４０．３２ʃ０．０２０．１４ʃ０．０５０．０２０ʃ０．００５３．４７ʃ０．３５∗∗０．６７ʃ０．０６中剂量组１００．６７ʃ０．１１０．３３ʃ０．０３０．１４ʃ０．０５０．０２２ʃ０．００５３．３０ʃ０．２１∗∗０．６６ʃ０．０７高剂量组１００．６６ʃ０．１１０．３４ʃ０．０４０．１３ʃ０．０３０．０２０ʃ０．００５３．００ʃ０．２１０．６６ʃ０．０６性别组别数量/只脾/体睾丸/体附睾/体子宫/体卵巢/体雄阴性对照１００．１６ʃ０．０２０．６３ʃ０．０４０．２５ʃ０．０２－－低剂量组１００．１４ʃ０．０２０．６２ʃ０．０９０．２４ʃ０．０４－－中剂量组９０．１４ʃ０．０１０．６５ʃ０．０４０．２５ʃ０．０２－－高剂量组９０．１５ʃ０．０２０．６１ʃ０．０７０．２４ʃ０．０３－－雌阴性对照９０．１８ʃ０．０２－－０．２７ʃ０．０８０．０４ʃ０．０１低剂量组１００．１７ʃ０．０２－－０．２４ʃ０．１００．０５ʃ０．０１中剂量组１００．１９ʃ０．０３－－０．２４ʃ０．１００．０５ʃ０．０１高剂量组１００．１８ʃ０．０２－－０．２３ʃ０．０５０．０４ʃ０．０１㊀㊀㊀†㊀与阴性对照组比较,∗表示差异显著(P＜０．０５);∗∗表示具有极显著性差异(P＜０．０１).７２|V o l．３９,N o．１１郑思雨等:安赛蜜对大鼠的亚慢性毒性表７㊀大鼠脏器病理改变异常结果T a b l e７㊀A b n o r m a l r e s u l t s o f p a t h o l o g i c a l c h a n g e s i n r a t v i s c e r a组织病理改变高剂量组雌(n＝１０)雄(n＝９)阴性对照组雌(n＝９)雄(n＝１０)脑㊀㊀部分组织缺失０１００甲状腺变性坏死㊀㊀０１００炎细胞浸润㊀０１００胸腺㊀萎缩㊀㊀㊀㊀２０１０出血㊀㊀㊀㊀２１１１肝㊀㊀脂肪浸润㊀㊀１１００炎细胞浸润㊀０１００脾㊀㊀血色素沉着㊀００１０肺㊀㊀出血㊀㊀㊀㊀２０１１肾上腺血管扩张㊀㊀０００１空肠㊀炎细胞浸润㊀００１０子宫㊀炎细胞浸润㊀１/０/反应关系,并且异常指标均在参考范围之内,多考虑是偶发因素,无生物学意义;组织病理学检查中部分组织病理改变程度较轻且无组间差异,考虑与试验动物质量及动物自发性病变有关,与安赛蜜的影响无关;雌性大鼠的肝脏系数与对照组比较存在显著性差异,与文献[１６]结果基本一致,安赛蜜对大鼠长期染毒导致体重及肝脏重量的变化,但组织病理学检查未发现异常改变,也未在高剂量组中得以验证,所以多考虑为单一组别的偶发现象.总体来说,在试验条件下以每天４５００m g/k g体重剂量(相当于人体推荐摄入量的３００倍),连续９０d对大鼠进行安赛蜜灌胃染毒,试验动物完全耐受,认为在推荐摄入量以内食用安赛蜜是安全的,大鼠９０d经口未观察到有害作用剂量值雌雄均为４５００m g/k g体重.但是,安赛蜜作为一种新兴污染物存在于环境中对人类是否会产生影响仍是未来研究的重点探讨.参考文献[1]陈英.食品中常见添加剂的检测与评价[D].苏州:苏州大学, 2007:10Ｇ11.CHEN Y.Detection and evaluation of common additives in food[D]. 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缬草胶囊亚慢性经口毒性试验研究
７ｌ． 一 ０
ｃ ｌ ｇ ｃ ｌＲｅ ｅ ｒ ｈ，２ ０ ，４７ ０ — ｌ ． ｏ ｏ ｉ ａ ｓ ａ ｃ ０３ ：５ ９ ５ ５
维普资讯
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江苏预防医学 ２０ ０ ８年 ６月第 １ 卷第 ２期 ９
Ｊａｇ ｕＪＰ ｅ ｄ Ｊ ｎ ２０ ， １ ９Ｎｏ ２ ｉ ｓ ｒｙＭｅ ，ｕ ，０ ８Ｖｏ．１ ， ． ｎ
通过 与巯基 结合 或 通 过 竞 争 或 非竞 争 性 替 代 作 用 ， 置换 出细胞 内抗 氧 化 酶 系 中 的金 属 辅基 ， 低 机体 降 抗 氧化 酶 的活性 ， 机体 清除 自由基 的能力 下降 。 使
［ ］ Ｍｏ ａ ｄ Ｈ．Ｔ ｓｉ ｌｒｔｘｃｔ ｆｄｂｏ ａｅｏ ｉ ｉ ｎ ４ ｈｍｅ ｅ ｔｕａ ｏ ｉｉ ｏ ｉｒｍｏ ｃｔｎｔ ｌ ａｄ ｃ ｙ ｒｅ ｐ ｓｉｌ ｒｔｃｉｎｂ ｒｉ ｙｂ ｔｌｙ ｒｑ ｉｏ ｅＪ．Ｐ ａｍａ ｏ ｓ ｅｐｏｅｔ ｙｔ ｔ ｒ ｕｙｈ ｄｏ ｕ ｎ ［］ ｈｒ ｂ ｏ ｅ ａ ｎ
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［］ 朱善 良，陈龙 ，高伟 ， ５ 等．镉致 大 鼠睾丸 脂质过 氧化及酶活性 变化研究 Ｅ］ Ｊ．中国公共卫生 ，２ ０ ， （ ） ０ —０ ． ０ ３ ６ ：７ ７７ ９ ［ ］ 徐宏伟 ，马爱国．维生 素 Ａ缺乏对 大 鼠生精 能力及 睾丸标 志 ６ 酶活性 的影 响 Ｅ ］ Ｊ ．中国 公共 卫 生，２ ０ ，１ １ ） ９ — ０ ２ ８（ １ ：ｌ２ ８１
亚慢性毒性试验
3-12g
10-30min
13-20g
>30min或积蓄 24
第二阶段：遗传毒性试验，30天喂养试验， 传统致畸试验
遗传毒性试验： 对受试物的遗传毒性以及是否具 有潜在致癌作用进行筛选。 30天喂养试验：对只需进行第一、二阶段毒性试 验的受试物，在急性毒性试验的基础上，通过30 天喂养试验，进一步了解其毒性作用，观察对生 长发育的影响，并可初步估计最大未观察到有害 作用剂量。 致畸试验：了解受试物是否具有致畸作用。
23
中药毒性分级
指标
中毒症状 脏器损害 用量较大时 LD50灌胃（小鼠） 有效量与中毒量距 离
大毒
十分严重 重要脏器 死亡 <5g/kg 十分接近
中毒
严重 重要脏器 死亡 5-15g/kg 较远
小毒
一般副反应 少见脏器损害 不易死亡 16-50g/kg 很远
成人一次服用中毒 量
中毒潜伏期
<3g
<10min
7.辅助降血脂
8.辅助降血糖 9.抗氧化 10.辅助改善记忆
7.调节血脂
8.调节血糖 9.延缓衰老 10.改善记忆
11.缓解视疲劳
12.清咽 13.辅助降血压
11.改善视力
12.清咽润喉 13.调节血压
14
保健食品新功能与原功能对比（调整功能名称（14项）
新功能名称 14.缓解体力疲劳 15.提高缺氧耐受力 16.对辐射危害有辅助保护功能 17.改善生长发育 18.增加骨密度 原功能名称 14.抗疲劳 15.耐缺氧 16.抗辐射 17.促进生长发育 18.改善骨质疏松
真菌保健品11种：酿酒酵母、产朊假丝酵母、乳 酸克鲁维酵母、卡氏酵母、蝙蝠娥拟青霉、蝙辐娥 被毛孢、灵芝、紫芝、松杉灵芝、红曲霉、紫红曲 霉。 益生菌保健品10种：两歧双歧杆菌、婴儿两歧双 歧杆菌、青春两歧双歧杆菌、短两歧双歧杆菌、长 两歧双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、罗 伊氏乳杆菌、嗜热链球菌、干酪乳杆菌干酪亚种。
慢性亚慢性毒性试验
• 至少设三个染毒剂量组 • 一个对照组
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观察指标
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实验检查
一般性 指标
实验室 检查
组织病 理学检
查
外观体征和行为活动、粪便性状、食量 及体重变化等，往往是敏感的综合毒效 应指标。
慢性亚慢性毒性实验
实验目的
剂量-反应(效应)关系，确定NOAEL和LOAEL 毒作用特点和毒作用靶器官 慢性毒性作用的可逆性
无相关毒性资料时，进行危险性评价
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实验准备
实验动 物的选
择
染毒 方式
剂量选 择和分
组
• 两种实验动物，啮齿类和非啮齿类 • 两种性别，每组雌雄各半 • 选择离乳不久的动物
体内生化转化和排泄的重要器官肝和胃 的功能是检查重点，血液是另一个重要 的靶器官。
可以发现受试物毒作用的靶器官，判断 损害的性质和程度，推测可能的毒作用 机制。
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亚慢性毒性试验
毒理学作业农药2,4-滴钠盐原药为白色粉末，水溶性，表1是其对SD大鼠的急性经口试验结果，请根据表中结果，给出该农药的90天亚慢性试验的试验方案，以及如何对保证实验质量予以控制。
表1 2，4-滴钠盐原药对SD大鼠急性毒性实验结果剂量设置高剂量为25%LD50，中剂量为12.5%, 低剂量为6.3%。
雌性LD50为584mg/kg，高剂量为146mg/kg,中剂量为73mg/kg,低剂量为37mg/kg；雄性为501mg/kg，高剂量为125mg/kg，63mg/kg,低剂量为31mg/kg。
根据GB15670《农药登记毒理学实验方法》的农药急性毒性分级标准，2，4-滴钠盐原药的LD50>500mg/kg，属于低度农药。
因此试验时选择SD大鼠的LD50为584mg/kg。
农药2,4-滴钠盐原药SD大鼠亚慢性毒性试验目的;研究喂饲农药2,4-滴钠盐原药对大鼠的亚慢性毒性。
方法：取初断乳 SD大鼠80只，雌雄各半按照体重随机分为4组。
将2,4-滴钠盐原药按146、73、37mg/kg mg/kg剂量分别拌入饲料内经口喂饲染毒90d。
观察：大鼠外观体征、体质量、进食情况等。
在实验中期和末期采血检测检测血液学。
试验末期检测血生化指标以及尿常规检查。
实验结束时处死实验动物，计算脏器指数，并对主要脏器进行病理组织学观察。
1 材料和方法1.1 受试物农药2,4-滴钠盐原药，白色粉末，水溶性，由某地某农药公司提供。
SPF级初断乳大鼠80只，雌雄各半，体质量50~100 g，由XXX实验动物研究所繁育场提供，动物合格证号为医动字第XX-XXXX号。
1.2 饲养与管理SPF 环境条件下，同组同性别两只一笼喂养，自由进食和饮水。
环境温度 21～25℃，相对湿度 40%～60%。
严格控制昼夜交替。
1.3实验方法试验前将雌、雄大鼠各半按体重随机分为3个剂量组和1个对照组，每组20只，将2,4-滴钠盐原药按146、73、37mg/kg mg/kg剂量分别均匀混入饲料中制成颗粒饲料辐照灭菌后分别供高、中、低剂量组动物食用，连续每日一次喂养90d；对照组给予不加受试物的正常饲料。
SD大鼠亚慢性经口毒性试验相关参考值的建立
SD大鼠亚慢性经口毒性试验相关参考值的建立方华;岑江杰;纪磊;上官小来;徐剑【摘要】目的:统计分析本实验室6年间SD大鼠的亚慢性经口毒性试验的主要相关数据,建立参考值.方法:统计SD大鼠实验前后血生化、血常规、尿常规、每周体重和每周进食量数据的平均值、标准差或百分比.结果:在本实验室条件下,雄性大鼠的摄食量随着体重的增长而增长,雌性大鼠体重不断增长,但摄食量并未出现较大增长.血生化、血常规指标和大鼠性别关系不大,实验前后略有差异.尿常规各指标中除PRO雌雄差异明显外,其他指标雌雄无明显差异,阴性率均大于60％.【期刊名称】《浙江化工》【年(卷),期】2013(044)006【总页数】3页(P1-3)【关键词】大鼠;亚慢性经口毒性试验;参考值【作者】方华;岑江杰;纪磊;上官小来;徐剑【作者单位】浙江省化工研究院有限公司,浙江杭州310023;浙江省化工研究院有限公司,浙江杭州310023;浙江省化工研究院有限公司,浙江杭州310023;浙江省化工研究院有限公司,浙江杭州310023;浙江省化工研究院有限公司,浙江杭州310023【正文语种】中文本实验室于2002～2007年开展了46项SD大鼠亚慢性经口毒性试验[1]，积累了大量的原始资料和实验数据。
现整理了其中16批次共160只空白对照组雌性大鼠的主要相关数据：实验前后血常规、血生化、尿常规、每周体重和每周进食量数据，为今后开展该项试验提供背景参考资料，也可供其他实验室参考。
1 材料和方法1.1 试验材料空白剂量组SD大鼠用全价营养标准饲料喂饲，饲料中不添加任何受试药物。
1.2 试验动物2002～2007年，本实验室共采用SPF级SD大鼠16批次，160只，雌雄各半，6周龄。
由上海必凯-西比尔实验动物有限公司提供。
1.3 试验方法空白对照组饲料中不加受试药物，每笼2只动物，自由进食饮水，每日晨添加并称量散失的混配饲料，连续喂饲90 d。
染毒期间每日观察大鼠的一般状况、进食量和体重变化，每周测体重和进食量一次。
化妆品毒理学试验要求
化妆品毒理学试验要求一、急性经口毒性试验。
这就好比是给小老鼠来个突然的“大挑战”。
把化妆品以一定的量喂给小老鼠，如果量很大的时候小老鼠还活蹦乱跳的，那就说明这化妆品急性经口毒性比较低。
这个试验就是想看看化妆品要是不小心被吃进去了，到底有多危险。
要是小老鼠吃了就不行了，那这化妆品可就有点吓人了，肯定得好好改进改进。
二、急性经皮毒性试验。
就像在小动物的皮肤上抹上化妆品，看看会发生啥。
如果这小动物的皮肤接触了化妆品之后，变得红肿啊、有毛病了，那就说明这化妆品对皮肤可能有毒性。
就像你要是把一种化妆品涂在手上，结果手开始发红发痒，那肯定有问题啊。
所以这个试验就是为了确保化妆品直接接触皮肤的时候不会突然搞出什么坏事来。
三、皮肤刺激性/腐蚀性试验。
这试验就像是在给皮肤做个“小考验”。
把化妆品涂在动物或者人的皮肤上（现在越来越提倡用人造皮肤或者细胞试验来替代动物试验啦），然后观察皮肤的反应。
如果皮肤只是有点轻微的发红或者小不舒服，那可能刺激性比较小；但要是皮肤都烂了或者变得特别糟糕，那就是腐蚀性的啦，这可就绝对不能出现在化妆品里啊。
四、眼刺激性/腐蚀性试验。
想象一下把化妆品滴到眼睛里（当然这是试验里才会这么干，可别真的这么试哦）。
要是眼睛只是稍微有点红或者有点异物感，那刺激性可能还在可接受范围。
但要是眼睛肿得像个核桃，还特别疼，那这化妆品肯定是不能靠近眼睛的，这个试验就是要把那些会伤害眼睛的化妆品给揪出来。
五、皮肤变态反应试验。
这个就像是看化妆品会不会让皮肤“发脾气”。
有时候化妆品第一次接触皮肤没事，但多接触几次，皮肤就开始过敏了，起小红疹啊，痒得不行啊。
这个试验就是为了找出那些会让皮肤过敏的成分，就像找出隐藏在皮肤周围的小“捣蛋鬼”一样，这样才能让大家放心地用化妆品。
六、皮肤光毒性试验。
现在很多人喜欢在阳光下用化妆品，这个试验就是看化妆品在光照的情况下会不会变成“皮肤杀手”。
如果涂了化妆品又晒太阳，皮肤变得很糟糕，那这个化妆品就可能有光毒性。
动物毒理学
第二章动物毒理学的基本概念1.毒物：在一定条件下，能对活的机体产生损害作用或使机体出现异常反应的外源化学物质的物质。
2.毒素：是由活的机体产生的一类特殊毒物，且化学结构尚未完全清楚的一类特殊毒物。
毒素一般按其来源分类：植物毒素、动物毒素、霉菌毒素、细菌毒素（内毒素、外毒素）3.毒性：是指外源化学物对机体的易感部位引起有害生物学作用的能力。
毒性参数：（一）致死剂量（1）绝对致死量：LD100（2）最小致死量：MLD或LD01（3）最大耐变量：LD0（4）半数致死量：LD50（5）半数耐受量：TLm（二）阈剂量或无作用剂量（1）阈剂量：最小作用剂量：MEL；最低剂量：LOAEL（2）无作用剂量：NOEL；未观察到损害作用剂量：NOAEL（3）日许量：ADL4.毒作用带：指从生理反应阈剂量开始到致死剂量为止的范围。
急性毒作用带（Zac）：LD50与急性阈剂量之比。
慢性毒作用带（Zch）：化学毒物的急性阈剂量与慢性阈剂量之比。
吸入中毒危险性指数（Iac）5.毒性作用（1）速发作用与迟发作用；（2）局部作用与全身作用；（3）可逆作用与不可逆作用；（4）过敏性反应；（5）高敏感性与高耐受性；（6）特异质反应6.剂量：是决定外源化学物对机体造成损害作用的最主要因素。
7.效应：外源化学物与动物机体接触后引起的有害生物学改变。
8.反应：外源化学物引起出现质效应的个体数量在群体中所占的比率。
剂量—效应关系：是指暴露外源化学物的剂量与在个体或群体中引起某种量效应强度改变间的关系。
剂量—反应关系：是指暴露外源化学物的剂量与在某一群体中出现某种质效应的个体在这一群体中所占的比例关系。
关系曲线有三种：（1）直线：少见，剂量与反应呈正比；（2）S曲线；（3）抛物线：很多毒物呈双相剂量反应关系。
9.损害作用：外源化学物对机体产生的生物学改变是持久的和不可逆的。
10.非损害作用：机体发生的一切生物学变化都是暂时的和可逆的，并在机体代偿能力范围只内。
粉唑醇原药的亚慢性经口毒性研究
粉唑醇原药的亚慢性经口毒性研究【摘要】目的：分析粉唑醇原药亚慢性经口毒性。
方法：收集清洁级SD大鼠100只，采用随机分组形式，分为四组分别为25只，每组雌性与雄性大鼠均半，连续3个月喂饲染毒，包含粉唑醇37.5mg/kg、150mg/kg、600mg/kg，对大鼠血液学、生化指标进行观察。
结果：染毒剂量观察，雌性鼠染毒剂量观察，低剂量组、中剂量组、高剂量组分别为2.8mg/kg、12.0mg/kg、47.3mg/kg，雄性鼠染毒剂量，各组分别为2.8mg/kg、11.5mg/kg、47.2mg/kg。
血液学指标观察，WBC指标雄性高剂量组相比对照组，有显著差异（P＜0.05），MON指标雄性高剂量组与对照组比较，有显著差异（P＜0.05）。
血液生化指标观察，TBIL指标雌性老鼠高剂量组与对照组，组间比较有明显差异（P＜0.05）。
BUN指标观察，高剂量组、中剂量组与对照组组间比较，均有显著差异（P＜0.05）。
结论：大鼠粉唑醇原药应用，毒性作用明显，生化指标、血液学指标均会发生毒性反应，以2.8mgmg/（kgbw·d）用量为最大无作用剂量。
【关键词】亚慢性毒性；粉唑醇原药；无作用剂量作为三唑类药物，粉唑醇作用机制较为独特，表现为残效期长、低毒、广谱、高效等，被用于较多农作物农药制作中。
值得注意的是，该药物应用下有一定的毒理学反应，主要表现在亚慢性毒性方面[1]。
本次研究将以清洁级SD大鼠为对象，分析粉唑醇原药亚慢性毒性。
1资料与方法1.1一般资料收集清洁级SD大鼠100只，采用随机分组形式，分为四组分别为25只，每组雌性与雄性大鼠均半，连续3个月喂饲染毒，包含粉唑醇37.5mg/kg、150mg/kg、600mg/kg。
所有动物均单独喂养，给予纯净水饮用，自由进食。
1.2方法根据大鼠体重在进受试物上进行配置，依据大鼠体重10%，在饲料内加入受试物，饲料内受试物含量为37.5mg/kg、150mg/kg、600mg/kg，连续3个月喂养。
十四、亚慢性经口毒性试验
十四、亚慢性经口毒性试验Subchronic Oral Toxicity Test1 范围本规范规定了啮齿类动物亚慢性经口毒性试验的基本原则、要求和方法。
本规范适用于检测化妆品原料的亚慢性经口毒性。
2 规范性引用文件OECD Guidelines for Testing of Chemicals ( No. 408, May 1981 )3 试验目的在估计和评价化妆品原料的毒性时，获得受试物急性毒性资料后，还需进行亚慢性经口毒性试验。
通过该试验不仅可获得一定时期内反复接触受试物后引起的健康效应、受试物作用靶器官和受试物体内蓄积能力资料，并可估计接触的无有害作用水平，后者可用于选择和确定慢性试验的接触水平和初步计算人群接触的安全性水平。
4 定义4.1 亚慢性经口毒性(Subchronic oral toxicity)是指在实验动物部分生存期内，每日反复经口接触受试物后所引起的不良反应。
4.2 无有害作用水平（No-adverse-effect level ）是指在试验中不引起任何有害作用的最大染毒剂量，可用每日单位动物体重接触受试物的重量（mg/kg）表示。
当受试物是混入动物饲料或饮水中进行染毒时，可用每公斤饲料或每毫升饮水中受试物重量（mg/kg, mg/mL）表示。
5 试验的基本原则以不同剂量受试物每日经口给予各组实验动物，连续染毒90d，每组采用一个染毒剂量。
染毒期间每日观察动物的毒性反应。
在染毒期间死亡的动物要进行尸检。
染毒结束后所有存活的动物均要处死，并进行尸检以及适当的病理组织学检查。
6 试验方法6.1 实验动物和饲养环境6.1.1动物种系的选择常规选择啮齿类动物，首选大鼠。
一般选用6周～8周龄的大鼠。
动物体重的变动范围不应超出平均动物体重的10%。
若该试验为慢性试验的预备试验，则在两个试验中所用的动物种系应当相同。
6.1.2 动物的性别和数量每一剂量组实验动物至少应有20只（雌雄各半），但是考虑到亚慢性试验的重要性，应适当增加每组雌雄动物数。
食品毒理学_河南农业大学中国大学mooc课后章节答案期末考试题库2023年
食品毒理学_河南农业大学中国大学mooc课后章节答案期末考试题库2023年1.按照毒作用发生的部位分为（）。
参考答案:局部作用和全身作用2.到达剂量又称（）或生物有效剂量，是指吸收后到达靶器官（如组织、细胞）的外源化学物和／或其代谢产物的剂量。
参考答案:靶剂量3.（）指化学物质不引起受试对象出现死亡的最高剂量。
若高于该剂量即可出现死亡。
参考答案:最大耐受剂量(MTD或LD0)4.20世纪60年代，震惊世界的“（）”(1961)和Rachel Carson的著作（）的出版（1962)，极大地推动了毒理学科学的发展。
参考答案:反应停事件_《寂静的春天》5.（）是食物中毒性白细胞缺乏症（ATA）的病原物质。
参考答案:T-2毒素6.毒物按其来源可分为（）。
参考答案:内源性毒物和外源性毒物7.化学物引起机体损害的能力是（）。
参考答案:毒性8.机体接触化学物质的量或给予机体化学物质的量是（）。
单位：mg/kg体重，mg/cm2皮肤。
参考答案:剂量9.Mithridates米塔拉达梯六世(公元前131～前63)可能是系统研究（）的第一人，因而被认为是（）创始人。
参考答案:人体毒物_临床毒理学10.按毒物的化学性质分为（）。
参考答案:金属毒物_挥发性毒物和非挥发性毒物_其他毒物（如箭毒碱、一氧化碳、硫化氢等）_阴离子毒物11.1994、2003、2014年我国分别正式颁布、实施、修订了（）。
《食品安全性毒理学评价程序》12.（）指允许正常成人每日由外环境摄人体内的特定化学物质的总量，在此剂量下，终生每日摄人该化学物质不会对人体健康造成任何可测量出的健康危害，单位用（）表示。
参考答案:mg／(kg bw)_每日容许摄入量(ADI)13.化学物的物理特性在（）方面影响毒性效应。
参考答案:脂/水分配系数_电离度_挥发度_分散度14.古希腊人认为，医药学既是一门艺术，又是一门科学。
他们对（）有着深入广泛的了解。
参考答案:植物毒物、金属毒物和解毒剂15.( ) 又称外剂量，是指外源化学物与机体（如人、指示生物、生态系统）的接触剂量，可以是单次接触或某浓度下一定时间的持续接触。
95%三氟羧草醚原药对大鼠的亚慢性毒性
研 究受 检样 品 ９ ％三 氟 羧 草 醚 原 药 对 大 鼠 ９ ５ ０ｄ 亚慢 性经 口染 毒 的毒 性 效 应 及 其靶 器 官 ， 出其 亚 慢 求 性经 口染毒 的最 大无 作 用 剂量 ， 其 安 全使 用 和制 定 为 防护措 施 提 供 依 据 。 目前 文 献 中 尚未 发 现 关 于 ９ ％ ５ 三 氟羧草 醚 原药 对大 鼠的亚慢性 毒性 资 料 。
１ 材 料 与 方 法
１ ． ４ ２、 ８ ． ０ ９、 ５． １ ５ ７和 ｌ ８、４． １ ５． ／ ｇ ０． ４ ２、 ７ ４ ｍｇ ｋ 。
２２ 临床观 察 各组 动 物 在 行 为 、 动 、 食 、 态 、 ． 活 进 步 毛色 、 对外 反应 和粪 便 等方 面未 见明显 改 变 。 ２３ 摄 食 量 雄 性 高 剂量 组 大 鼠摄食 量 在 染 毒 的第 ． ９～１ ３周 明显 低 于 对 照组 （ Ｐ＜０ ０ ） 雌 性 第 １ ．５ ； ３周 高 剂量 组 和 对 照 组 摄 食 量 分 别 为 （ ８ ． ２ ７ ２±９０ ． ）ｇ和
根 据《 农药 登记毒 理学 试 验方 法（ Ｂ １６ ０ １９ ） Ｇ ５ ７ ．９ ５ 》
进 行试 验 …。
（０ ． ７ ２ ； ３ ２ ３土 ．）ｇ 雌性 高 剂量组 大 鼠摄食 量 在染 毒 的第 ５～ｌ 周 明 显低 于对 照组 （ ３ Ｐ＜０ ０ ） ．５ 。雌性 第 ｌ ３周 高 剂量组 和 对 照 组 的摄 食 量 分 别 为 （４ ． ２ １５土８６ ． ）ｇ和 （６ ． ３ ８ ， ２ １３土 ．）ｇ 雌性 中剂量 组大 鼠摄食 量 在染 毒 的第 ｌ ３周（５ ． ５ ８ 也 明 显低 于对 照组 （ ２６ ７土 ．）ｇ Ｐ＜０ ０ ） ．５ 。 ２４ 体 重 ． 雄 性 高剂量 组 大 鼠第 ｌ ～ｌ ｌ ３周 体 重 明显 低 于对 照组 （ Ｐ＜０ ０ ） 雌性 高剂 量组 第 ５～ｌ ．５ ； ３周体 重 及 中剂量组 第 １ ３周 体重 明显 低于 对照组 （ Ｐ＜００ ） （ ．５ 。 染 毒结 束 时雄性 高剂 量组 和 对照组 动物 的体 重 分别 为 （７ ． ４９ ２±３ ．）ｇ和 （ ｌ ． １５ ５ ％ ２±４ ． ）ｇ 雄 性 高 剂 量 组 ５７ ， 和对照 组 动物 的体重 分别 为 （７ ． 土２ ． ） ２ １５ １８ ｇ和 （ Ｐ＜ （
消毒产品毒理学试验要求
消毒产品毒理学试验要求听好啦！消毒产品的毒理学试验要求就像给消毒产品来一场大体检呢。
一、急性经口毒性试验。
1. 目的。
这就像是看这个消毒产品如果不小心被人吃进去（当然这是意外情况啦），会有多危险。
它能告诉咱们这个产品对身体的毒性到底有多大，是像被小蚂蚁咬一口那么轻，还是像被大老虎咬了那么严重呢。
2. 试验对象。
一般会用小白鼠之类的小动物来做试验。
想象一下，这些小动物就像小小的“试毒员”，不过我们会好好照顾它们的哦。
3. 分级标准。
如果小动物吃了这个消毒产品后，没什么大反应，那这个产品的急性经口毒性就比较低；要是小动物吃了之后，出现很严重的症状，甚至死亡，那这个产品的毒性就比较高啦。
就像考试打分一样，根据小动物的反应给消毒产品的毒性打个分，分为实际无毒、低毒、中等毒、高毒、剧毒这些级别呢。
二、急性吸入毒性试验。
1. 原理。
这是模拟人不小心吸入了消毒产品的挥发物的情况。
就好像你走进一个刚喷了好多消毒产品的房间，要是这个产品的挥发物有毒，那你就可能会受到伤害啦。
2. 操作。
把小动物放在一个有消毒产品挥发物的环境里，看它们的反应。
要是小动物在这个环境里像平时一样活蹦乱跳，那这个消毒产品的急性吸入毒性可能就比较小；要是小动物开始咳嗽、呼吸困难或者更严重的情况，那这个产品的挥发物可能就比较危险啦。
三、皮肤刺激试验。
1. 过程。
2. 意义。
这个试验对咱们人类可重要啦，因为咱们经常会用消毒产品擦手、擦桌子什么的，要是这个产品对皮肤刺激大，那用起来可就糟心了，说不定还会让我们的皮肤变得像砂纸一样粗糙呢。
四、眼刺激试验。
1. 试验内容。
这个试验有点像在小动物的眼睛里滴眼药水，只不过这个“眼药水”是消毒产品。
然后看小动物的眼睛会不会变得红红的、流泪、或者角膜有没有受损。
要是小动物的眼睛像星星一样明亮，没有什么变化，那这个消毒产品对眼睛的刺激性就小；要是眼睛变得又红又肿，那这个产品对眼睛就很刺激，就像往眼睛里撒了沙子一样难受。
经口毒性实验
急性经口毒性试验Acute Oral Toxicity Test1 范围本方法规定了动物急性经口毒性试验的基本原则、技术和要求。
本方法适用于评价化学品的急性毒性作用。
2 规范性引用文件OECD Guideline for Testing of Chemicals (No. 401. Feb. 1987 ) OECD Guideline for Testing of Chemicals (No. 425. Feb. 2001 ) USEPA OPPTIS Health Effects Guideline (Series 870.1100 June 1996)3 试验目的3.1 检测化学品对实验动物的急性毒性作用和强度。
3.2 为亚急(慢)性等毒性试验提供剂量选择的依据。
3.3 试验结果可作为化学品急性毒性分级和标签标识。
４定义4.1 急性经口毒性(Acute Oral Toxicity): 一次或在24h内多次经口给予实验动物受试样品后，动物在短期内出现的健康损害效应。
4.2 经口半数致死剂量（Oral Median Lethal Dose）: 经口一次或24h内多次经口给予受试样品后，引起实验动物总体中半数死亡的毒物的统计学剂量。
以单位体重接受受试样品的质量(mg/kg bw或g/kg bw)来表示。
4.3 剂量-反应关系(Dose-response Relationship)：表示化学毒物的剂量与某一群体中质效应的发生率之间的关系。
5 试验基本原则以经口灌胃法给予各试验组动物不同剂量的受试样品，每组用一个剂量，染毒剂量的选择可通过预试验确定。
染毒后观察动物的毒性反应和死亡情况。
试验期间死亡的动物要进行尸检，试验结束时仍存活的动物要处死并进行大体解剖。
本方法主要适用于啮齿类动物的研究，但也可用于非啮齿类动物的研究。
6 试验方法6.1 受试样品的处理受试样品应溶解或悬浮于适宜的赋形剂中，（不溶性固体或颗粒状物质研磨、过100目筛）建议首选水或食用植物油（如玉米油）作溶剂，也可考虑使用其它赋形剂（如羧甲基纤维素、明胶、淀粉等）等配成混悬液；不能配制成混悬液时，可配制成其它形式(如糊状物等)，但不能采用具有明显毒性的有机化学溶剂。
2.亚慢性毒性试验设计
2.亚慢性毒性试验设计概念亚慢性毒性是指实验动物连续多日接触较大剂量的外来化合物所出现的中毒效应。
所谓较大剂量，是指小于急性LD50的剂量。
试验目的亚慢性毒性试验的目的，主要是探讨亚慢性毒性的阈剂量或阈浓度和在亚慢性试验期间未观察到毒效应的剂量水平，且为慢性试验寻找接触剂量及观察指标。
亚慢性试验期限亚慢性毒性试验的期限“多日”的确切天数，至今尚无完全统一的认识。
一般认为在环境毒理学与食品毒理学中所要求的连续接触为3～6个月，而在工业毒理学中认为1～3月即可。
这是考虑到人类接触大气、水和食品污染物的持续时间一般较久，而在工业生产过程中接触化合物仅限于人一生中的工作年龄阶段，且每日工作不超过8小时之故。
现有学者主张进行实验动物90天喂饲试验为亚慢性毒性试验，即将受试物混合物饲料或饮水中，动物自然摄取连续90天。
这是由于有研究报道认为动物连续接触外来化合物3个月，其毒性效应往往与再延长接触时间所表现的毒性效应基本相同，故不必再延长接触期限。
相应地主张呼吸道接触可进行30天或90天试验，每天6小时，每周5天。
经皮肤试验进行30天。
实验动物和染毒途径1、实验动物的选择亚慢性毒性作用研究一般要求选拔两种实验动物，一种为啮齿类，另一种为非啮齿类，如大鼠和狗，以便全面了解受试物的毒性特征。
由于亚慢性毒性试验期较长，所以选择被动物的体重(年龄)应较小，如小鼠应为15g左右，大鼠100g左右。
2、染毒途径亚慢性毒性试验接触外来化合物途径的选择，应考虑两点：一是尽量模拟人类在环境中接触该化合物的途径或方式，二是应与预期进行慢性毒性试验的接触途径相一致。
具体接触途径主要有经口、经呼吸道和经皮肤三种。
剂量选择与剂量分组亚慢性试验的上限剂量，需控制在实验动物接触受试化合物的整个过程中，不发生死亡或仅有个别动物死亡，但有明显的中毒效应，或靶器官出现典型的损伤。
此剂量的确定可参考两个数值，一是以急性毒性的阈剂量为亚慢性试验的最高剂量；一是以此化合物LD50的1/20~1/5为最高剂量。
第五章 慢性和亚慢性毒性作用及其试验方法 毒理学课件
4）如果仅有急性毒性试验结果，则可将LD50的1／10、1 ／50、1／100和1／1000作为剂量分组范围。 一般情 况下，LD50的1／10往往可引起显著中毒；1／100～ 1／50相当于慢性中毒阈剂量；1／1000则低于最大 无作用剂量，按此分组时，实际接触量的100倍也可 考虑在内。
5） 2020/11/11 对照组一律喂不含被检物的普通饲料。
三、受试物给予方式
1) 通常将受试物混入饲料，采用动物自由采食的方式。 2) 若受试物有异味，动物拒食，则可利用动物饥不择
食的特性，将受试物与少量饲料混合制成“药饵”， 夜间只供饮水，不给饲料，早、晚各给一次药饵， 每次一小时。挥发性受试物也适用此法。 3) 若将受试物混入饮水中，要计算每日饮水量。 4) 以上方法都不能采用时，才采用灌胃法。
5. 脏器系数 ： 即脏器重量与体重之比，也称脏体比。 其中肝体比与肾体比已成常规。其它脏体比视情况而 定。
此外，还可根据具体情况参考有关资料选用其它有意义的 指示，如心电图、肌电图、脑电图等等，以及行为和 免疫功能方面的指标
2020/11/11
• 第三节 • 慢性毒性试验的简化问题
2020/11/11
化等改变出现迅速，可为慢性毒性试验筛选敏感指标； （5）亚慢性毒性试验也常用于研究毒物代谢及中毒机理。
2020/11/11
• 第二节 试验设计 •
2020/11/11
一、实验动物 1 实验动物 种别的选择
（1）对被检物质的代谢过程基本与人类相似， （2）如无法掌握这一情况，应尽量选用敏感动物。根据
2）受试物如为一化学物质，总的原则应该考虑到希望通 过慢性毒性试验能找出最大无作用量和中毒阈剂量。
2020/11/11
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硫酸铜亚慢性经口毒性实验设计
一、实验目的
通过该实验不仅可获得一定时期内反复接触受试物后引起的健康效应、受试物作用靶器官和受试物体内蓄积能力资料，并可估计接触的无有害作用水平，后者可用于选择和确定慢性实验的接触水平和初步计算人群接触的安全性水平。
二、实验原理
1.亚慢性毒性实验：是指在实验动物部分生存期内，每日反复经口接触受试物后所引起的不良反应。
2.无有害作用水平（No-adverse-effect level）：是指在实验中不引起任何有害作用的最大染毒剂量，可用每日单位动物体重接触受试物的重量(mg/kg)表示。
三、实验仪器及试剂
实验试剂：3%-5%苦味酸、0.5%酸性品红、蒸馏水、无水硫酸铜、水、动物饲料
实验动物：健康、6-8周大鼠（80只）
实验仪器：灌胃针（16号）、电子天平、动物体重秤、饲养室、烧杯、容量瓶、吸量管、吸耳球、胶头滴管、手术剪、托盘、镊子、药匙等
四、实验步骤
1. 实验动物的选择：选择80只6-8周，体重在50-100g的健康大鼠，大鼠体重相差不超过10%（±5-10g）。
2. 实验管理：实验前动物先适应环境和饲料5天。
适应期间和实验期间雌雄分笼饲养，所有动物通过灌胃的方式进行染毒，每周染毒7天，连续染毒90天。
3. 实验条件：饲养室温度控制在22±4℃，相对湿度在40%-70%之间，无对流风，昼夜各半。
实验期间正常饲料喂养，饮水不限。
4. 实验动物染色和分组
1）抓取大鼠：抓取大鼠前最好戴上防护手套。
进行染色时，可采取左手固定法，只是用拇指和食指捏住鼠耳，余下三指紧捏大鼠背部皮肤，这样便可进行各种简单的实验操作；也可以用左手食指和中指放在颈背部的两侧，拇指和无名指放在胸前，分别用手指夹住左右前肢抓起来。
Tips：辨认大鼠的雌雄：观察生殖器与肛之问的距离，雌性较雄性近具沟；观察生殖突起，雄性较大、较圆，雌性较小具裂缝；仰卧观察乳头，雄性不明显，雌性明显。
2）染色编号：用黄色3%-5%苦味酸0.5%酸性品红对动物进行染色标记，黄色和红色分别代表个位和十位。
大鼠分为左、中、右三区，左上区、左中部和左下肢分别表示1、2、3或者10、20、30，如图1。
图1
3）称重：
（1）使用前，先检查动物称的称量盘是否干净，若有脏污，应清洁干净后再装好， 确保称量盘中没有任何东西。
（2）将专用的动物体重称放平并调好零点；
（3）将专用的称量容器置于体重秤上，对体重秤作去皮重、回零调整； （4）取已编号的动物逐一放入专用容器中，读取电子秤显示的动物体重并记录。
4）随机分组：80只大鼠分成随机分4组，分别为高剂量组、中剂量组、低剂量组、对照组，每组20只，且雌雄各半。
（1）在随机数表上任意指定一个点抄录数字，抄录的数字个数等于区组数减1，并以横向的顺序抄录数字，本实验4个区组抄录3个数字。
以后的区组按顺序依次抄录数字； （2）每个区组的随机数字除以4，得到的余数可为0,1,2,3。
余数为1分配到高剂量组；余数为2分配到中剂量组组；余数为3分配到低剂量组组；余数为0分配到对照组。
如2个编号的余数相同，后一个编号的分配依次后退1组。
区组第4个数字为填补余缺，组内缺那组就填入哪组。
5.剂量设计与剂量分组
根据《中华人民共和国化学品啮齿类动物亚慢性经口毒性试验方法》GB/T 21763-2008及急性经口毒性实验的结果，剂量设计为表1：
表1：实验剂量分组表
6.灌胃处理
每日早上8点对大鼠进行一次性灌胃，每天对大鼠进行正常饲料喂养。
灌胃量（mg/kg ）=大鼠最初的体重（kg ）*标准灌胃量（ml/kg ）*各组硫酸铜溶液浓度（mg/ml ） 1）硫酸铜溶液的配制：溶液配制采用称量法，等容量稀释，每只大鼠灌胃等量的硫酸铜溶液。
采用1: K 系列稀释法配制不同浓度的受试液，以组间浓度间隔3倍递减（K=3）
，确定
各剂量组所需受试液浓度；
A:已知实验最高剂量组剂量（mg/kg）为LD50/20,大鼠按等容量方法给予受试药液，即10ml/kg,故预实验最高剂量组所需受试液的浓度（mg/ml）(母液浓度)为LD50/200（C1）；
B:选择蒸馏水作溶剂配制浓度为C1的受试液，取M ml作为母液，从母液中取出m ml供丙组（最高剂量组）用，然后取m ml溶剂加入剩余母液中混匀，稀释后的母液浓度为
C2(C1:C2=1:K)，即中剂量组所要求的浓度；
C:从中取出m ml供中剂量组接毒用，然后再加入m ml溶剂，其稀释后的浓度为
C3(C2:C3=1:K), 即低剂量组所需的浓度。
D：确定母液总量：M=m/1-K
2）大鼠的捉拿与固定：
（1）根据步骤四-4-1）捉拿大鼠。
（2）将大鼠捉拿出鼠笼后，放在粗糙的物体表面。
一只手用一定力度将大鼠向尾巴方向拉紧，这时动物会抓紧粗糙面不放，立即用另一只手的大拇指和食指抓住大鼠的耳后及双耳之间的皮肤，固定大鼠的头部，使其不能左右摇晃。
（3）中指和无名指将大鼠背部皮肤压在手掌中，使大鼠背部皮肤拉紧，限制其四肢的活动。
最后将小指压在大鼠尾根部，防止大鼠在灌胃过程中尾巴来回甩动，以确保灌胃的顺利进行。
3）灌胃器的插入与推注：
（1）将大鼠固定好之后，在灌胃器插入大鼠食道之前，一定要将大鼠头部与颈部处于一条直线上，可以通过拇指与食指的调动完成。
（2）将灌胃针沿大鼠的左侧嘴角进针，先从口角插入口腔内，然后用灌胃针往后压住大鼠头部，使其口腔与食道成一直线。
（3）再将灌胃针从舌面紧沿上腭进入食道。
这时有的大鼠会出现类似于人的呕吐反应，这是正确的反应。
然后继续轻轻进入，灌胃管插入约1/2 处。
（4）药物推注一定要缓慢，慢慢推注顺利后，可以加快推注速度。
4）记录
如表2
表2：灌胃处理记录表
五、临床观察
1.观察期限为90天，每日两次（早八点晚五点）检查并记录动物有无濒死征象或死亡。
表3：动物死亡情况记录表
2.每周一次，在相同时间、相同环境对所有动物进行详尽的临床观察，以高剂量组为例，其他类推，如表4（实际表格编号一栏应有20列，由于排版受限，表中只列举了4列）：
表4：高剂量组临床观察表
3.每周测量一次饲料、饮水消耗量；
六、临床检查
1.眼科学检查：在实验前对所有动物和实验结束时，先对高剂量组和对照组应用适当的眼科器械进行眼科检查。
如果观察到异常，需对其他染毒组也进行检查。
2.血液学检查：在实验接近结束时进行。
包括红细胞比积、血红蛋白浓度、红细胞计数、白细胞计数及其分类、血小板计数和凝血时间、凝血能力的测定。
3.血液临床生化测定：在动物濒死或被处死之前进行。
应测试血清或血浆中的钠、钾、空腹血糖、总胆固醇、尿素、血尿素氮、肌酐、总蛋白和白蛋白；两项以上的反应肝脏损伤的酶活性，如血清丙氨酸转氨酶(ALT)、血清天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶、谷氨酰胺转肽酶、山梨醇脱氢酶活性等
4.尿液：在实验的最后一周进行。
采用分段收集尿量的方式收集尿液，检查以下指标:外观、体积、渗透压、pH值、蛋白质、葡萄糖和血/血细胞。
5.大体解剖：观察，并测量记录死亡时的体重、脏器重量及脏器系数（脏器重/体重），脏器包括心、肝、脾、肺、肾、脑、睾丸、卵巢等。
6.病理组织学检查
七、实验结果和报告
1.每只动物的数据，以1号大鼠为例（表5）：
表5：大鼠实验结果表
3.结果的讨论
4.结论。