实验须知和分光光度计的使用

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四、生化四大技术的介绍
分光光度法 电泳技术 层析技术 离心技术
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五、分光光度计原理
I0
I
L
T＝I/I0 透光率 A：吸光度、消光度、光密度
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任何物质对光线都有吸收，而且每种物质 都有其特有的吸收光谱。 相同物质在同一 条件下，其吸收光谱的强度－吸光度 （A absorb ）与该物质的含量成正比例关系。 因此把根据物质吸收光谱的特性进行定性 或定量分析的方法称为吸收光谱法或分光 光度法。
➢ 将实验物品带离实验室者，除处以适当罚款外， 扣除20分。
➢ 实验报告不按时完成者，扣除10分。
➢ 每次实验课后由带教老师评出该次平时成绩。
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三、酸、碱及苯酚的急救处理
（一）酸
强酸如硫酸、硝酸、盐酸、王水（是硝酸与盐酸
的混合物）等（其中硫酸作用最强，盐酸居末），
对皮肤、粘膜的刺激和腐蚀作用极强。
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朗伯－比尔（Lambert-Beer）定律：
A＝-logI/I0=-logT=KCL A：光密度，吸光度，消光度。
I：透过光强度。
I0：入射光强度。
I0
I
T：透光度
K：消光系数。 L
C：溶液浓度。
L：溶液厚度。
吸光度与溶液的浓度和液层的厚度的乘积成正比
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标准液：已知的待测物质浓度。
A=KLC
A标/A测=KLC标/KLC测
C测=C标ⅹA/A标
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空白液
溶剂空白液： 欲测物有色其他无色 。 试剂空白液： 试剂不加样品。 样品空白液： 不加显色剂。 平行操作空白液：无欲测物。 不显色空白液： 控制操作不发生显色反应 褪色空白液： 加褪色剂。
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分光光度计构造
➢ 平时成绩的得分包括以下六项：实验态度、实验 纪律、实验操作、仪器爱护、实验报告及实验后 清洗。
➢ 旷课者当次无实验成绩及得分。
➢ 请假一次扣除40分，二次及以上者每次扣70分， 直至平时成绩扣完为止。
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➢ 迟到或早退一次者扣除10分，二次及以上者每次扣 除15分，直至平时成绩扣完为止。
光源 单色器 狭缝 比色杯
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检测系统
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７２１-Ｅ型分光光度计使用步骤
2.调到指定波长
4.放入黑体对光，调Ｔ＝０，拿出黑体
5.将空白液、标准液、待测液按顺序放入比 色杯架，空白液置于光路中。
6.T=100% ；A=0
7.按Ｍｏｄｅ至Ａ，关盖，拉动比色槽，进 行记录
8.取出比色杯，清洗
皮肤损伤可用大量清水冲洗，或用4％碳酸氢钠溶
液冲洗，再以生理盐水冼净，并按灼伤治疗。
若吸收了强酸立即选服2.5％氧化镁溶液ห้องสมุดไป่ตู้镁乳
（75％氢氧化镁混悬液）、石灰水的上清液（含
0.17氢氧化钙）、极稀的肥皂水、氢氧化铝凝胶、
生蛋清、牛奶等。忌用碳酸氢钠及碳酸钠（因可产
生大量气体导致胃穿孔）。
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9.调Ｍｏｄｅ至Ｔ，比色槽归位
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分光光度计使用注意事项
1. 分光光度计属精密仪器，应精心爱护使用。防 震、防潮、防腐蚀。
2. 比色杯里的液体要在2/3～3/4之间，不易过多。 放在比色箱里之前要擦干表面液体，以防腐蚀 仪器。
3. 不可用手、滤纸、毛刷等物擦拭比色杯的光滑 面，用手拿时只能拿其磨砂面。
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（二）碱 强碱包括氢氧化钠、氢氧化钾、次氯酸钠、氧化
钠、氧化钾以及腐蚀作用较弱的碳酸钠、碳酸钾、 氢氧化钙、氧化钙、氢氧化铵等，具有腐蚀性。
皮肤损伤可用大量清水冲洗。 若误吸收了强碱立即内服弱酸溶液如食用醋
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（三）苯酚 不慎粘在皮肤上，以10%～4O%乙醇或聚乙二醇
擦洗受染皮肤，再用清水冲洗至无苯酚味为止。也 可用甘油、植物油擦洗皮肤，肥皂水、温水洗涤， 灼伤部用饱和硫酸钠溶液或5％碳酸氢钠湿敷。
4. 比色杯不要放置在仪器面上，以免液体腐蚀仪 器表面。
5. 比色杯的清洗。
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六、用分光光度法测定硫酸铜的浓度
硫酸铜标准液：4% 硫酸铜吸收峰：650nm
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➢ 实验完毕，由指导教师负责检查清点实验用的仪 器、工具。学生应办好交接手续，做好清洁卫生， 及时切断电源、关好水龙头，经指导教师同意后方 可离开实验室。
➢ 本守则由指导教师和参加实验的人员共同监督， 严格执行。
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二、实验课平时成绩评分标准
➢ 实验课占期末总评的20%，其中操作考试和平时成 绩各占10%。
实验须知和分光光度计的使用
生化与分子生物学教研室
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一、学生实验守则
➢实验前应认真预习，明确实验目的、步骤，回答老 师的提问。
➢ 进入实验室必须保持安静，不准高声谈笑，注意 环境卫生，不准吸烟，不随地吐痰，不乱抛纸屑 杂物，爱护公物。
➢实验时应严肃认真，专心细致，要准确记录实验 数据，严格遵守操作规程，节约水电和试剂，注 意安全，爱护实验仪器设备，如发生事故时，应 迅速停止实验，设法制止事态的扩大，并立即向 指导老师报告。
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➢ 使用精密、贵重仪器，应先了解性能和操作方法， 未经老师同意，不得任意操作，违者按有关规定处 理。
➢ 实验中不准动用与本实验无关及他人使用的仪器 设备、材料和元件。如损坏丢失仪器、配件、工 具等，均应查清原因，及时上报，按已定的赔偿 办法办理；如隐瞒事故不报者，从重处理。
➢ 实验后要认真填写好实验报告(包括认真分析实 验结果、精确处理数据、图表)，如不符合要求 的实验报告，应退给学生重做。