细菌与病毒的微生物学检查法
细菌与病毒的研究与诊断方法
细菌与病毒的研究与诊断方法细菌和病毒是人类生活中常见的微生物，它们既可以有益于人类的生活，如在食品发酵和药物制造中的应用，也可以给人类带来危害，如引发各种传染病和感染性疾病。
因此，对细菌和病毒的研究和诊断方法是非常重要的。
一、细菌研究与诊断方法1. 常规的细菌培养和鉴定方法常规的细菌培养是指将临床样本（如尿、血、各种分泌物等）涂在不同的寒暖培养基上，通过寒暖条件、营养物质、PH值等不同的条件，让细菌在试管中生长繁殖，然后利用生长繁殖具有鲜明的形态、色彩、光学性质等特征，进行定种和鉴定。
2. 分子生物学方法分子生物学是近年来发展迅速的一门交叉学科，利用PCR、基因芯片等技术，能够快速、灵敏地检测到微生物。
例如，在肺炎支原体感染诊断中，可以利用PCR检测患者痰样中的肺炎支原体DNA，以便迅速诊断并给予治疗。
3. 聚合酶链式反应（PCR）PCR是一种基于DNA复制过程的反应，可在很短的时间内制备出特定DNA 序列的无数复制品，从而快速检测出目标DNA分子。
利用PCR技术可快速进行基因序列分析、基因型鉴定和突变检测等。
在临床上，PCR已被广泛用于各种微生物的检测，如结核分枝杆菌、肺炎支原体、病毒性肝炎等。
二、病毒研究与诊断方法1. 细胞培养法在有些病毒感染中，病毒会侵入到人体细胞内进行繁殖，这就为病毒的诊断提供了紧凑而可靠的材料。
细胞培养法是通过将感染过病毒的细胞悬浮或培养液样本接种到携带某些特定的生物学特征的细胞系上，观察细胞所产生的病毒病变和症状，确定病毒属于哪种类型。
2. 血清学检测法血清学检测法是通过检测人体血液中的病毒特异性抗体，来判断是否有病毒感染。
典型的血清学检测法包括酶联免疫吸附法（ELISA）、放免检测法等。
这些方法简单，快速，灵敏，更加便于诊断，通常应用于对病毒的早期筛查和疫苗预防等方面。
3. 分子生物学方法分子生物学方法的快速发展为病毒的检测提供了更加准确、敏感、特异的手段。
例如，利用PCR技术可以扩增病毒基因组中的一部分特定序列，从而快速鉴定患者血样中是否出现病毒感染的迹象。
区分四大类微生物的方法
区分四大类微生物的方法微生物是一种微小的生物体，可以只能通过显微镜观察到。
它们广泛存在于自然界的各个角落，包括土壤、水、空气、动植物体内等。
根据其形态、生态和生理特征，可以将微生物分为细菌、真菌、病毒和原生动物。
本文将对这四大类微生物的方法进行详细介绍。
一、细菌：细菌是一类单细胞微生物，形态各异，可以是球形、杆状、螺旋形等。
它们广泛存在于土壤、水、空气、动植物体内等环境中。
区分细菌的方法主要包括：形态观察和染色；生长特性观察；代谢特性检测；分子生物学方法。
1.形态观察和染色：通过显微镜观察细菌的形态特征，如球菌的球形、链球菌的成串排列、杆菌的杆状等。
同时可以使用染色方法，如革兰氏染色和抗酸染色，以区分细菌的壁和膜结构。
2.生长特性观察：通过培养细菌在不同培养基和条件下的生长特性，如菌落形状、颜色等来识别细菌的种类。
3.代谢特性检测：通过检测细菌的代谢产物，如酶的产生、底物利用等，可以判断细菌的代谢特性，并进一步鉴定其种属。
4.分子生物学方法：如PCR扩增、16SrRNA测序等，可以直接检测细菌的遗传物质，进行细菌种属的快速鉴定。
二、真菌：真菌是一类多细胞微生物，主要由菌丝组成，营养吸收方式独特。
区分真菌的方法包括：菌丝结构观察；菌落形态观察；孢子特征观察；分子生物学方法。
1.菌丝结构观察：通过显微镜观察真菌的菌丝形态特征，如菌丝的直径、分支情况、颜色等，来初步判断真菌的种类。
2.菌落形态观察：通过培养真菌在琼脂培养基上形成的菌落形态特征，如菌落的形状、边缘、颜色等，可以进一步确定真菌的种属。
3.孢子特征观察：通过显微镜观察真菌的孢子形态特征，包括孢子的大小、形状、颜色等，可以鉴定真菌的亚属和种属。
4.分子生物学方法：如ITS序列测定、18SrDNA测定等，可以通过检测真菌的遗传物质，进行真菌种属的快速鉴定。
三、病毒：病毒是一类非细胞的微生物，需要寄生于宿主细胞内进行复制。
区分病毒的方法包括：电镜观察；培养宿主细胞；生物化学方法；核酸检测。
病原微生物中细菌常见检测方法有哪些
病原微生物中细菌常见检测方法有哪些病原微生物种类繁多，变异迅速，快速鉴定病原微生物的检验技术也在不断发展前进着。
目前，应用比较广泛的病原微生物检测方法主要有直接涂片镜检、分离培养、生化反应、血清学反应、核酸分子杂交、基因芯片、多聚酶链反应等，该文对这些检测技术进展做一综述。
对人和动物具有致病性的微生物称为病原微生物，又称病原体，有病毒、细菌、立克次体、支原体、衣原体、螺旋体、真菌、放线菌、朊粒等。
这些病原微生物可引起感染、过敏、肿瘤、痴呆等疾病，也是危害食品安全的主要因素之一。
近年来出现的SARS、高致病性禽流感、西尼罗病毒感染等疾病的传染性极强，往往造成世界性大流行，因此对病原体的检测必须做到快速、准确。
常规病原学检测方法操作繁琐，检测周期长，而且对操作人员技术水平要求比较高。
随着医学微生物学研究技术的不断发展，病原学诊断已不再局限于病原体水平，深入到分子水平、基因水平的检测手段不断出现并被应用于临床和实验室J。
核酸分子杂交技术、PCR技术、基因芯片技术等检测方法，自动化程度高，快速省时、无污染、结果精确，可以准确灵敏地鉴定病原微生物。
1传统的病原微生物的检测方法传统的病原微生物学实验室检查以染色、培养、生化鉴定等为主，将标本直接涂片染色镜检和接种在培养基上进行分离培养是对细菌或真菌感染性疾病进行病原学诊断的常用方法。
1．1直接涂片镜检病原微生物体形体积微小，大多无色半透明状，将其染色后可借助显微镜观察其大小、形态、排列等。
直接涂片染色镜检简便快速，对那些具有特殊形态的病原微生物感染仍然适用，例如淋球菌感染、结核分枝杆菌、螺旋体感染等的早期初步诊断。
直接涂片镜检不需要特殊的仪器和设备，在基层实验室里仍然是十分重要的病原微生物检测手段。
1．2分离培养与生化反应分离培养主要用于临床标本(如血液、痰、粪便等)或培养物中有多种细菌时对某一种细菌的分离。
细菌的生长繁殖需要一定时间，检测周期较长，不能同时处理批量样本。
细菌与病毒的病原学检查法
凝集试验、对流免疫电泳、酶免疫技术、免疫荧光技 术
核酸检测：
1.核酸杂交技术:Southern印迹杂交、Northern印迹 杂交、原位杂交
2.PCR技术 3.基因芯片 4.16rRNA基因序列分析：编码rRNA，保守区、可变 区
三、抗体的检测（血清学诊断）
凝集试验：直接、间接、协同、冷凝集 沉淀试验：环状、絮状、双向、对流电泳 补体结合试验： 酶联免疫吸附试验（ELISA）：
取双份血清，抗体效价比早期高4倍以上有意
义。
第二节 病毒感染的微生物学检查法
一、形态学检查
1.电子显微镜检查
直接镜检法：107颗粒/ml，电镜观察病毒
颗粒的形态和结构
免疫电镜法（IEM）：
标本+特异性抗体 病毒颗粒聚集 电镜 观察
轮状病毒的粪便、HAV、HBV的血清、疱疹 病毒的疱疹液，可早期诊断。
三、病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标
细胞的变化：CPE 红细胞吸附（HAd）： 红细胞凝集： 病毒干扰作用：风疹病毒，埃可病毒,Vero细
胞。
中和试验（NT）：是病毒在活体内或细胞培
养中被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验
空斑形成试验：蚀斑形成单位（PFU），感染
性病毒的滴度用PFU/ml表示。
四、病毒成分的检测
血凝抑制试验
病毒+红细胞 血凝现象
病毒+抗体+红细胞 血凝现象消失
用于流感病毒、副流感病毒的诊断、流行 病学调查及鉴定病毒的型和亚型。
ELISA法：HSV、CMV、EB病毒等
蛋白印迹技术：用已知病毒蛋白检测未
知病毒
病毒抗原的检测：HIV和HBV抗原
病毒核酸的检测
微生物感染的病原学检查法
微生物感染的病原学检查法文/ 张力平微生物感染的病原学检查可查明标本中的病原微生物并对其进行种属鉴定，必要时进行药物敏感试验和毒力检查等，从而协助医生对感染性疾病进行病因学诊断、指导合理用药或观察治疗效果。
微生物感染的病原学实验室诊断方法大致包括：①光学显微镜对标本或组织中的病原体的形态学检查；②病原体的分离培养和鉴定；③用免疫学技术对病原体抗原或相应抗体的检测；④用分子生物学方法对病原体特异性基因的检测。
标本的采集与送检微生物学检查的第一步，方法的正确与否直接影响病原体的检出率，因此应注意下述原则：1．采集标本时应无菌操作，尽量避免污染；盛放标本的容器和培养基应预先进行无菌处理并贴好标签。
2．应选择感染部位或病变明显的部位采集标本，避免周围组织、器官或分泌物中的杂菌污染。
例如感染性伤口，应从其深部而不是从表面采集标本；若采集龈沟液检查口腔厌氧菌，应将无菌滤纸条深入龈沟中，停留数秒后取出；怀疑细菌性痢疾时，应采集有粘液或脓血的粪便；采集病毒的标本应尽量含有感染的细胞。
3．根据病原体在感染性疾病的不同时期的体内分布和排出部位选择在最佳时间采集适宜标本。
例如，可疑伤寒的病人，在病程的1～2周内取血液，2～3周时则取粪便或尿液送检；怀疑流行性脑膜炎的病人，应选取脑脊液、血液或皮肤上的出血淤斑进行检测；如果进行病毒培养或其抗原检测，一般应取急性期标本，标本采集越早，病毒的阳性检出率越高。
4．对于怀疑细菌感染的标本，尽量在抗生素使用前采集，特别是对抗生素敏感的病原体，如乙型溶血性链球菌、脑膜炎奈瑟菌。
病毒对抗生素不敏感，故无此限制。
而且用于病毒分离培养的标本应加入抗生素，以避免在病毒培养过程中的细菌污染。
5．检查病原体的特异性抗体IgG时，应采集急性期和恢复期双份血清，只有当恢复期血清抗体效价比急性期的效价明显升高达4倍或以上时，方有诊断价值。
检测血清特异性抗体的标本应保存在-20℃。
6．标本采集后应及时送检。
微生物学知识点常见微生物感染的诊断与治疗
微生物学知识点常见微生物感染的诊断与治疗微生物学知识点常见微生物感染的诊断与治疗微生物感染是指人体被各种微生物引起的感染性疾病，包括细菌、病毒、真菌和寄生虫等。
这些微生物感染可以引起各种不同的疾病，严重时可能导致生命危险。
为了有效地诊断和治疗这些感染，了解微生物学知识点是非常重要的。
本文将介绍常见微生物感染的诊断与治疗方法。
一、细菌感染的诊断与治疗细菌感染是最常见的微生物感染类型之一，细菌可以引起肺炎、腹泻、尿路感染等疾病。
首先，诊断细菌感染需要进行病原学检查，包括细菌培养和药敏试验。
细菌培养可以在实验室中培养出细菌，并鉴定其种类，药敏试验则可以测试细菌对不同抗生素的敏感性。
基于这些检查结果，医生可以选择合适的抗生素进行治疗。
常用的抗生素包括青霉素、阿莫西林、头孢菌素等。
二、病毒感染的诊断与治疗病毒感染是另一种常见的微生物感染类型，病毒可以引起感冒、流感、肝炎等疾病。
与细菌感染不同，病毒感染的诊断比较困难，通常需要采用分子生物学检测方法，如聚合酶链式反应（PCR）检测病毒基因片段。
治疗病毒感染主要是针对症状进行对症治疗，如退烧、止咳等。
对一些病毒感染，如流感，也可以使用抗病毒药物，如奥司他韦。
三、真菌感染的诊断与治疗真菌感染可以引起皮肤感染、口腔念珠菌病等疾病。
诊断真菌感染主要是根据病变部位取样进行真菌涂片检查和真菌培养，可以确定感染菌株以及菌株的敏感性。
治疗真菌感染常使用抗真菌药物，如克霉唑、氟康唑等，可以口服或者局部使用。
对于一些顽固性真菌感染，也可以考虑使用静脉抗真菌药物。
四、寄生虫感染的诊断与治疗寄生虫感染包括疟疾、血吸虫病等，常见于热带地区。
寄生虫感染的诊断一般是通过血液检查，如血涂片或者血清学检测来确定感染。
治疗寄生虫感染常使用抗寄生虫药物，如氯喹、莫西沙星等。
治疗的同时，还需要注意症状的缓解和并发症的预防。
五、医院感染的诊断与防治医院感染是指在医疗机构中获得的感染，常与手术、留置导尿管等治疗操作相关。
微生物学细菌感染的检查方法与防治
甲基红 (methyl red) 试验
产气肠杆菌分解葡萄糖产生丙酮酸，后 者经脱羧后生成中性的乙酰甲基甲醇，故 培养液pH＞5．4，甲基红指示剂呈桔黄色， 是为甲基红试验阴性。大肠埃希菌分解葡 萄糖产生丙酮酸，培养液pH＜4．5，甲基 红指示剂呈红色，则为甲基红试验阳性。
枸橼酸盐利用 (citrate utilization) 试验
糖发酵试验
不同细菌分解糖类的能力和代谢产物 不同。例如大肠埃希菌能发酵葡萄糖和 乳糖；而伤寒沙门菌可发酵葡萄糖，但 不能发酵乳糖。即使两种细菌均可发酵 同一糖类，其结果也不尽相同，如大肠 埃希菌有甲酸脱氢酶，能将葡萄糖发酵 生成的甲酸进一步分解为CO2和H2，故 产酸并产气；而伤寒沙门菌缺乏该酶， 发酵葡萄糖仅产酸不产气。
Himalayan palm civet
6+/6
Chinese hare
0+/3
病毒在细胞中增值的指标： 1 细胞变化 2 红细胞吸附 3 干扰现象 4 细胞代谢改变
Uninfected cells
3 days
4 days
Fig. 1
Isolation of SCoV like animal virus in FRhK-4 cell cultures.
检测病毒抗原及抗体方法
对于一些血清型别不多的病毒或在寻常细胞培养 系统中还不能成功增殖的病毒，直接检测抗原是 快速而实用的方法。这一方法要求标本中有一定 量的抗原和具备高质量的抗体；其原则为免疫学 技术，即用特异标记的抗体检测相应的抗原。可 以用免疫荧光或免疫酶标记抗体检测在病毒感染 局部脱落细胞或分泌物细胞中的抗原，也可用酶 联免疫测定法 (ELISA) 或乳胶凝集法检测抗原。 这一方法在数小时或一天内可获得结果。
病原微生物检测方法
病原微生物检测方法病原微生物是指能引起疾病的微生物，包括细菌、病毒、真菌和寄生虫等。
准确快速地检测和鉴定病原微生物对于疾病的预防、诊断和治疗具有重要意义。
随着科技的发展，病原微生物检测方法也在不断更新和改进。
一、传统的病原微生物检测方法1. 细菌检测：传统的细菌检测方法包括细菌培养和形态学观察。
细菌培养是将样品接种在含有适宜营养物质的培养基上，利用培养条件培养出细菌。
形态学观察则是通过显微镜观察细菌的形态和结构特征。
这种方法需要较长的时间，且存在一定的局限性，如对于难以培养的细菌或细菌数量很少的样品，检测结果可能不准确。
2. 病毒检测：传统的病毒检测方法主要包括电镜观察和病毒培养。
电镜观察是通过电子显微镜观察病毒的形态和结构特征。
病毒培养则是将样品接种在适宜的细胞培养基上，利用细胞培养条件培养出病毒。
这些方法需要较长的时间，且对设备和技术要求较高。
3. 真菌检测：传统的真菌检测方法包括真菌培养和形态学观察。
真菌培养是将样品接种在含有适宜营养物质的培养基上，利用培养条件培养出真菌。
形态学观察则是通过显微镜观察真菌的形态和结构特征。
这种方法需要较长的时间，且对于某些真菌的鉴定存在困难。
4. 寄生虫检测：传统的寄生虫检测方法主要包括显微镜检查和血液检测。
显微镜检查是通过显微镜观察寄生虫的形态和结构特征。
血液检测是通过检测患者的血液中是否存在寄生虫的相关抗体或遗传物质。
这些方法需要专业技术和设备支持，且有一定的局限性。
二、现代的病原微生物检测方法1. 分子生物学方法：分子生物学方法是一种快速、准确的病原微生物检测方法。
其中，PCR（聚合酶链反应）技术可以通过扩增病原微生物的特定基因序列来检测和鉴定病原微生物。
这种方法具有高灵敏度和特异性，且能够快速得到结果。
此外，还有实时荧光定量PCR和循环扩增反应等技术，可以进一步提高检测的灵敏度和准确性。
2. 免疫学方法：免疫学方法是通过检测病原微生物与宿主免疫系统的相互作用来进行检测和鉴定。
微生物致病菌有哪些？如何检测
微生物致病菌有哪些？如何检测微生物致病菌是引起人类和动物疾病的微生物。
它们可以通过不同的途径传播并引发感染，从而对人类和动物的健康造成威胁。
为了及时发现和控制微生物致病菌的传播，科学家们开发了各种检测方法来确定其存在。
这些方法包括培养法、分子生物学技术、显微镜观察和血液检测等。
通过这些检测方法，我们能够更好地了解微生物致病菌的类型和数量，从而采取相应的预防和治疗措施，保护人类和动物的健康。
下面将详细介绍微生物致病菌的类型以及常用的检测方法。
一、微生物致病菌都有哪些（一）细菌：细菌是一类微小的单细胞生物，它们是微生物中最常见的致病菌之一。
许多细菌可以引起人类和动物的感染和疾病。
常见的细菌致病菌包括大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、结核分枝杆菌等。
这些细菌通过不同的途径传播，如食物、水、空气、接触等。
它们可以引起各种感染，包括呼吸道感染、尿路感染、皮肤感染、食物中毒等。
（二）病毒：病毒是一类非细胞的微生物，它们依赖于寄生在其他细胞内进行复制和感染。
病毒可以感染人类、动物和植物，引起各种疾病。
常见的病毒致病菌包括流感病毒、乙肝病毒、艾滋病毒、登革热病毒等。
这些病毒通过空气飞沫、血液、性接触等途径传播。
它们可以引起呼吸道感染、肝炎、免疫系统损伤、出血热等。
（三）真菌：真菌是一类生物体，它们属于真核生物，与细菌和病毒有所不同。
真菌可以包括单细胞的酵母菌和多细胞的霉菌。
虽然大部分真菌是无害的，但某些真菌可以成为致病菌并引起感染。
常见的真菌致病菌包括白色念珠菌、曲霉菌、皮肤癣菌等。
这些真菌可以通过接触受感染的物体或者吸入感染源而传播。
真菌感染通常发生在免疫系统较弱的人群中，例如长期使用抗生素、免疫系统功能低下的人，或者局部皮肤受损的情况下。
（四）放线菌：放线菌是一类革兰氏阳性细菌，它们具有特殊的形态和生物学特征。
放线菌通常在土壤和水体中存在，并且在许多环境中都可以被发现。
尽管大多数放线菌对人类无害，但某些放线菌可以产生有毒物质并引起感染。
病原微生物检测方法及分类介绍
病原微生物检测方法及分类介绍在人类的日常生活中，微生物无处不在，它们是我们生态系统中微小但不可或缺的一部分。
然而，其中一些微生物却可能成为我们的健康威胁，它们被称为病原微生物。
病原微生物包括细菌、病毒、真菌和寄生虫，它们有潜力引发多种疾病，从轻微的感冒到严重的传染病。
一、病原微生物的分类通过对病原微生物进行分类，人们能够更好地了解它们的特性、传播方式以及引发的疾病类型，从而采取更精确的防控措施。
病原微生物的分类依据可以多种多样，包括它们的形态、生长环境、以及致病机制。
通过观察微生物的形态特征，可以将它们划分为不同的类别。
同时，微生物在不同的生长环境中繁殖和生存，这也为分类提供了线索。
此外，了解微生物引发疾病的机制，也有助于将它们分类为不同的类型。
根据分类的依据，病原微生物可以被分为几个常见的类别，包括细菌、病毒、真菌以及寄生虫。
●细菌：细菌是单细胞微生物，有各种形态，可以是球状、杆状、螺旋状等。
它们在各种环境中都存在，有些对人体有益，有些则可以引发疾病，如肺炎球菌和大肠杆菌等。
●病毒：病毒是非细胞性微生物，需要寄生在宿主细胞内才能繁殖。
病毒的大小很小，但它们可以引发许多疾病，如流感病毒和HIV等。
●真菌：真菌包括酵母菌和霉菌等，它们是多细胞微生物。
一些真菌对人体有益，但也有一些可以引发感染，如念珠菌和白色念珠菌等。
●寄生虫：寄生虫是一类多细胞微生物，它们依赖于宿主生物来生存。
这些微生物可以引发多种疾病，如疟疾原虫和蛔虫等。
通过对这些不同类别的病原微生物进行分类，医生和研究人员能够更准确地了解它们的特点，从而为制定防控策略和治疗方案提供重要的依据。
同时，这种分类也有助于公众更好地理解不同病原微生物的危害和传播途径，促进健康意识的提高。
二、常见病原微生物检测方法当涉及检测病原微生物，有一系列不同的方法可供选择，以便精确地鉴定感染的种类和程度。
这些方法是医学领域中的关键工具，为医生和研究人员提供了解决疾病问题的有力手段。
常见感染病原体及其检测方法：了解不同微生物的检测方式
常见感染病原体及其检测方法：了解不同微生物的检测方式一、引言感染病原体是指能够进入人体并引发感染的微生物，包括细菌、病毒、真菌和寄生虫等。
这些微生物能够侵入人体，繁殖并对机体造成损害，引发各种感染性疾病。
为了及时、准确地诊断和治疗感染疾病，科学家们开发了一系列的检测方法，用以鉴定不同微生物的存在和病原性。
本文将带您了解常见感染病原体以及它们的检测方法，帮助我们更好地认识和抵抗这些微生物。
二、细菌2.1 培养法培养法是一种传统且常用的细菌检测方法。
它通过将患者样本（如血液、尿液或伤口渗出液等）接种到培养基上，利用培养基提供的适宜条件使细菌繁殖，从而使其形成可见的菌落。
通过观察和分析这些菌落的形态、染色特性和生理生化反应等，可以初步鉴定细菌属种。
2.2 免疫学方法免疫学方法主要利用抗原与抗体之间的特异性反应来检测细菌。
其中，酶联免疫吸附测定（ELISA）和免疫荧光技术是常用的检测方法。
ELISA利用特定的抗体与细菌或其分泌的抗原反应，通过测定产生的光学信号来定量检测细菌的存在。
免疫荧光技术则是在标本中加入荧光标记的抗体，通过观察标本中的荧光信号来判断是否存在细菌感染。
2.3 分子生物学方法分子生物学方法，如PCR和实时荧光定量PCR等，通过检测微生物的核酸特异性序列来定量和鉴定细菌。
这些方法利用特异引物与细菌基因组DNA或mRNA 发生特异性反应，扩增和检测目的序列。
由于其高灵敏度和高特异性，分子生物学方法在实验室中得到广泛应用。
2.4 质谱法质谱法是一种高灵敏度的检测方法，可以对微生物样本进行直接分析。
常用的质谱法包括质谱图谱法（MS）和质谱成像法（MSI）。
MS可以通过检测微生物代谢产物、蛋白质或特定化合物来鉴定微生物。
而MSI则是通过将样本直接贴附在载玻片上，利用激光扫描样本表面进行检测，实现对微生物的快速定性和定量分析。
三、病毒3.1 传统病毒培养法传统病毒培养法是一种检测和鉴定病毒的常用方法。
检验科微生物学常见病原体鉴定与检测方法
检验科微生物学常见病原体鉴定与检测方法微生物学是生物学的一个重要分支，研究微生物及其活动的一切规律，包括形态、结构、生理代谢、生殖方式以及微生物与环境相互作用等。
微生物学在医学检验科中起着重要的作用，可应用于疾病的诊断、病原体的鉴定与检测。
本文将介绍检验科微生物学常见病原体的鉴定与检测方法。
一、细菌的鉴定与检测方法细菌是常见的病原体之一，其鉴定与检测方法主要包括传统培养法、生物化学测试、抗生素敏感性试验、血清学检测以及分子生物学方法。
1. 传统培养法传统培养法是最常用的一种方法，其通过将样品在不同培养基上进行培养，观察细菌的生长形态、菌落特征以及生理代谢等，进而进行鉴定。
2. 生物化学测试生物化学测试是通过检测细菌在特定条件下的生化反应，从而进行鉴定的方法。
常用的生物化学测试包括氧需求量试验、酶活性测试、碳源利用能力测试等。
3. 抗生素敏感性试验抗生素敏感性试验用于确定细菌对不同抗生素的敏感性，常见的试验方法有纸片法、稀释法和电化学法等。
通过这些试验可以了解细菌的耐药性情况，为临床治疗提供指导。
4. 血清学检测血清学检测是通过检测患者体内产生的抗体来确定细菌感染的方法。
包括血清凝集试验、酶联免疫吸附法等，可以快速、准确地检测细菌感染。
5. 分子生物学方法分子生物学方法是近年来发展起来的一种快速、高效的细菌鉴定与检测方法。
包括PCR技术、实时荧光定量PCR技术、DNA测序等。
这些方法通过检测细菌的特异性基因序列，可以准确鉴定细菌种类及其数量。
二、病毒的鉴定与检测方法病毒是一类微生物，其鉴定与检测方法相对复杂，常见的方法包括免疫学检测、核酸检测、电镜观察等。
1. 免疫学检测免疫学检测是通过检测患者体内产生的抗体或抗原来确定病毒感染的方法。
包括酶联免疫吸附试验、免疫荧光试验等。
这些方法能够对病毒进行快速检测，但对检测样本的要求较高。
2. 核酸检测核酸检测是一种常用的病毒鉴定与检测方法，通过提取病毒核酸，利用PCR技术或实时荧光定量PCR技术等方法进行扩增和检测。
医学微生物学(第9版)第二篇 病毒学 第二十四章 病毒感染的检查方法与防治原则
第一节
病毒感染的检查方法 diagnosis of viral infection
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医学微生物学（第9版）
一、标本的采集与送检
1. 采急性期标本 2. 抗生素处理易污染标本 3. 低温保存，尽快送检 4. 血清学诊断采双份血清（发病初期、病后 2~3 周）
医学微生物学（第9版）
二、病毒的分离与鉴定
（二）病毒的鉴定
3. 病毒的感染性及数量测定 （3）空斑形成试验 （plaque forming test）：
原理：将适量病毒接种单层细胞，病毒增殖使感染的细胞脱落，形成肉眼可见的空斑， 一个空斑即一个空斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：每个空斑是由一个感染 性病毒颗粒形成的。可测定活病毒数量（感染性病毒量的滴度可用 PFU/ml 表示）
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医学微生物学（第9版）
三、病毒感染的诊断
（一）形态学检查
1. 电镜和免疫电镜检查：病毒形态和大小
（李凡主编的第 8 版医学微生物学 图 27-1，258 页）
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医学微生物学（第9版）
二、病毒的分离与鉴定
（一）病毒的分离培养
2. 鸡胚培养 （1）孵化 9~14 天的鸡胚 （2）优点：对多种病毒敏感，条件易控制，操作简单，成本较低 （3）缺点：无病毒增殖指标；有些病毒可致鸡胚死亡
微生物生长的常用检测方法
微生物生长的常用检测方法微生物生长的常用检测方法微生物包括：细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生生物、显微藻类等在内的一大类生物群体，它个体微小，与人类关系密切。
下面是店铺收集整理的微生物生长的几种检测方法，希望对您有所帮助！一、生长量测定法1.1体积测量法：又称测菌丝浓度法。
通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。
方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。
菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。
这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。
1.2称干重法：可用离心或过滤法测定。
一般干重为湿重的10-20%。
在离心法中，将一定体积待测培养液倒入离心管中，设定一定的离心时间和转速，进行离心，并用清水离心洗涤1-5次，进行干燥。
干燥可用烘箱在105℃或100℃下烘干，或采用红外线烘干，也可在80℃或40℃下真空干燥，干燥后称重。
如用过滤法，丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维膜等滤膜过滤，过滤后用少量水洗涤，在40℃下进行真空干燥。
称干重发法较为烦琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母（activitydryyeast,ADY）,一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。
1.3比浊法：微生物的生长引起培养物混浊度的增高。
通过紫外分光光度计测定一定波长下的吸光值，判断微生物的生长状况。
对某一培养物内的菌体生长作定时跟踪时，可采用一种特制的有侧臂的三角烧瓶。
将侧臂插入光电比色计的比色座孔中，即可随时测定其生长情况，而不必取菌液。
该法主要用于发酵工业菌体生长监测。
如我所使用UNICO公司的紫外-可见分光光度计，在波长600nm处用比色管定时测定发酵液的吸光光度值OD600，以此监控E.Coli的生长及诱导时间。
诊断学-实验室检查-实验室诊断-常用病原学检测
体液
体液
体液
粪便
传播途径 粪-口
慢性感染 否 基因组类型 ssRNA
经皮肤/ 经粘膜
是
dsDNA
经皮肤/ 经粘膜
是
ssRNA
经皮肤/ 经粘膜
是
ssRNA
粪-口
否 ssRNA
Hepatitis B Virus
• 乙型肝炎的病原体 • 在全世界广泛流行，估计全球半数以上人
口已被HBV感染过，5%的人口为HBV慢性感 染 • 中国：乙肝高发区，人群HBsAg的检出率达 9.8%
3200 Base Pair Genome
HBV DNA Polymerase
HBsAg
Both comprised of HBsAg
HBV nomenclature
• HBV: hepatitis B virus • HBsAg: hepatitis B virus surface antigen • HBsAb: hepatitis B virus surface antibody • HBcAg: hepatitis B virus core antigen • HBcAb: hepatitis B virus core antibody • HBeAg: hepatitis B virus e antigen • HBeAb: hepatitis B virus e antibody
中和试验 ELISA
风湿热（抗O试验） 广泛用于病原体的诊断和流行病学调查
玻片凝集试验
试管凝集试验
酶联免疫吸附试验
④细菌的快速鉴定
API细菌数值鉴定系统
PCR技术
姬姆萨染色衣原体包涵体
HSV病毒
被支原体感染的精子
微生物的鉴定与分类方法
微生物的鉴定与分类方法微生物是指在肉眼下无法看到的微小生物，包括细菌、真菌、病毒等多种类型。
微生物在人类社会中具有非常重要的作用，既有益处也有危害。
因此，对微生物进行鉴定和分类是十分必要的，本文将介绍一些微生物的鉴定与分类方法。
一、细菌的鉴定与分类方法1. 形态学方法细菌的形态学特征包括菌体的大小、形状、颜色、质地等。
通过显微镜观察细菌的形态特征，可以初步判断细菌的类别。
2. 染色法常用的染色法有革兰氏染色法、酸杆菌染色法等。
这些染色方法可以通过染色后的颜色反映出不同细菌的内部构造和化学成分。
3. 生化试验法利用不同细菌对同一物质的不同反应进行分类。
比如利用MM测试葡萄糖在酵母菌中的代谢反应情况，初步判断出酵母菌的种类。
二、真菌的鉴定与分类方法1. 形态学方法真菌的形态学特征与细菌相似，包括菌体的大小、形状、颜色、质地等。
通过显微镜观察真菌子实体的形态，可以初步判断真菌的类别。
2. 细胞壁化学成分分析法真菌的细胞壁主要由多糖、蛋白质和小分子化合物组成，通过分析细胞壁中的化合物种类和含量，可以对真菌进行分类。
3. 分子生物学方法利用PCR扩增真菌的特定基因或DNA序列，然后对扩增产物进行分析，可以快速准确地对真菌进行鉴定和分类。
三、病毒的鉴定与分类方法1. 组织培养法通过利用感染病毒的细胞进行培养，观察细胞的病变情况并检测病毒复制情况，确定病毒类型。
2. 免疫学方法利用病毒所携带的特异抗原，通过免疫学试验检测血清中的抗体和抗原，对病毒进行鉴定和分类。
3. 分子生物学方法利用PCR扩增病毒的特定基因或DNA序列，然后对扩增产物进行分析，可以快速准确地对病毒进行鉴定和分类。
总之，微生物的鉴定与分类方法有多种，需要根据不同微生物类型采用不同方法。
除了以上三类微生物外，还有其他微生物如真菌的一种子类物质被称作酵母菌,氧化器类蛋白與乙白酒酵母等微生物也需要进行分类和鉴定，才能最大程度地了解其性质和应用前景。
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难以早期诊断
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第二节 病毒感染的微生物学检查法
形态学 病毒的分离鉴定
在培养细胞中增殖的鉴定指标
病毒成分的检测 病毒抗体的检测
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（一）病毒的形态学检查
电子显微镜（ EM）
免疫电镜, IEM
光学显微ห้องสมุดไป่ตู้（CM）
包涵体 内基小体（Negri body）
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毒力检测
半数致死量 LD50 半数感染量 ID50
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二、检测病原菌成分
抗原的检测 核酸的检测
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（一）抗原的检测
利用已知的特异性Ab检测Ag的方法 常用的方法有
玻片凝集 协同凝集试验 ELISA 免疫荧光法
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ELISA
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（二）核酸检测方法
聚合酶链反应（PCR） 核酸杂交技术
Medical Microbiology
医学微生物学
Department of Microbiology, HMU 哈尔滨医科大学 微生物学教研室
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DDeeppaarrttmmeenntt ooff MMiiccrroobbiioollooggyy,, HHaarrbbiinn MMeeddiiccaall UUnniivveerrssiittyy
Southern blot Northern blot Dot blot In situ hybridization
基因芯片(Gene chip) 16S rRNA
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16sRNA基因序列分析
只存在于原核细胞型微生物的染色体基因中 16sRNA，23sRNA, 5sRNA 可变区和保守区
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MIC & MBC
最低抑菌浓度，MIC 最低杀菌浓度，MBC
全自动分析仪
全自动细菌鉴定仪
全自动生化分析仪
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（五）检测毒力-动物实验
1. 常用动物
Mouse Guinea Pig Rabbit Dog Monkey
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接种途径
皮内 皮下 腹膜内 静脉 颅内 椎管内 鼻内 灌胃
hooded Bunsen burner
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细菌动力的检测
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化脓性球菌
葡萄球菌
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链球菌
肠道杆菌
细菌形态无特异性可采用生化 学检查法-鉴别细菌的重要方法
沙门氏菌
大肠埃希菌
志贺菌 实用文档
（二）生化试验
糖发酵试验
H2S试验 枸橼盐利用试验
鉴定中最重要的生化反应※ 乳糖发酵试验
肠道非致病菌（埃希菌属） 发酵乳糖、产酸产气＋
抗原 核酸
检测患者血清中特异性抗体
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一、细菌学诊断
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（一）形态学检查
1. 光学显微镜检查法：细菌染色检查法
革兰染色法 抗酸染色法 负染法
2. 暗视野检查：用于检查活菌、螺旋体及其动力 3. 荧光显微镜
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脑脊液的直接涂片染色-肺炎链球菌
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链球菌
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淋病奈瑟球菌-脓液直接涂片
肠道致病菌（志贺菌属、 沙门菌属等）不发酵乳糖 —
（三）血清学鉴定
利用含已知的特异性抗体的免疫血清， 检测未知的细菌抗原，对细菌进行种的 鉴定 志贺菌属、沙门菌属
常用方法是玻片凝集试验
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（四）药物敏感试验
测定抗生素或其他抗微生物 制剂在体外抑制细菌生长的 能力
方法： 扩散法、稀释法
保守区：所有的细菌所共有 可变区：属和种的特异性
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PCR
Gene Chip
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三、抗体的检测
用已知细菌或其Ag检测相应的特异性Ab及其量 的多少，作为某些病原菌感染的辅助诊断
急性期和恢复期双份血清，恢复期效价升高≥4倍 有诊断价值
方法
玻片或试管凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、 冷凝集试验、ELISA
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结核分枝杆菌
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霍乱弧菌
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暗视野显微镜
钩端螺旋体
肺炎双球菌
病原菌的分离培养/直接涂片
大小 形态 颜色 表面性状 透明度 溶血性
Flame sterilize wire loop, metal forceps, etc before and after use in a
直接凝集实验 协同凝集实验 乳胶凝集实验 免疫荧光检测 ELISA等
核酸杂交 聚合酶链反应 （PCR） DNA芯片
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凝集反应 沉淀反应 补体结合试验 中和试验 ELISA等
细菌 病原学 检查法
细菌学 诊断
形态学检查 分离培养,纯培养 生化试验 血清学鉴定 药物敏感试验 毒力实验 动物实验
检测 病原菌成分
第七章
细菌与病毒的微生物学检查法
微生物学教研室 Jiz-Zhao
j12zhao@
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教学大纲
掌握内容
标本的采集和送检原则 病原菌的检验程序 细菌感染的血清学诊断及常用方法
了解内容
病原体的抗原成分、核酸及其他成分的检测方法
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病原学检查的目的
进行病因学诊断 指导合理用药 观察治疗 进行传染病的流行病学调查
HAV Negri body
（二）病毒的分离培养的方法
三 动物接种：动物模型
大
培 鸡胚接种： 9～14d
养
方 法
组织培养
器官培养
组织培养
细胞培养
原代细胞培养 二倍体细胞培养 传代细胞培养
病毒分离培养及鉴
血凝抑制实验 中和实验 PCR检测
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病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标※
细胞病变（cytopathy) ※ 红细胞吸附 (hemadsorption) 病毒干扰作用 (viral interference) 中和试验 (neutralization test, NT) 空斑形成试验 (plaque formation)
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无菌操作：避免杂菌污染
标本的采集和送检六原则※
采集病变明显部位 不同期不同标本
用抗生素以前
采集双份血清 运送注意保存
第一节 细菌感染的微生物学检查法
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可疑细菌感染
直接形态学 检查
细菌分离培养
采集标本 细菌成分检测
血清学实验 双份血清
特异性抗体检测
鉴定
抗原检测 核酸检测
形态学检查 生化学检查 血清学鉴定 药物敏感实验 动物（毒力）实验
实用文档
细胞病变—细胞病变效应※ （CPE）
50%组织细胞感染量 TCID50:
根据有无细胞病变来判断病毒感染性和毒力的指标
细胞病变效应（CPE）
A：未感染病毒的HeLa细胞；B：被柯萨奇病毒B3感染后，细胞变圆、皱缩，细胞折光性减弱；C：被腺病 毒感染后，细胞肿胀，折光性增强，呈葡萄状排列。200