钙激活中性蛋白酶-2对肝癌细胞阿霉素耐药性的影响
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它试 剂均 为进 口或 国产分 析纯 。 １ ２ 主 要仪器 及设 备 电泳 仪 及微 型 垂 直 电泳 槽 ． （ 国Ｇ 美 Ｅ公 司 ） Ｇ Ｏ ｈ ｍ Ｘ ， Ｂ Ｘ ｉ ｅ ｉ Ｒ化学发 光及 凝胶 Ｃ 成像 仪 （ 国 Ｓｎ ｅｅ公 司 ） ｅ ｏｈ微 孔 板 阅 读 器 美 ｙ ｇｎ 、ｐ ｃ （ 国 Ｂｏｅ 美 ｉ ｋ公 司 ） 高 速 冷 冻 离 心 机 （ 国 Ｂ ｃ — ｔ ， 美 ｅｋ
维 泰
以及 血管 内皮细胞管腔形成 能力 的影 响 ， 对它们 的抗肿 瘤转 移能力进行 比较 ， 以证实维泰醇的抗肿瘤血管新生及抗 肿瘤 转 移 作 用。方 法 采 用 Ｓ Ｂ法 ， 痕 试 验 ， 胶 酶谱 法 、 Ｒ 划 明 Ｅ ＩＡ、 Ｏ Ｅ ＬＳ Ａ ／ Ｂ染色法 以及管腔 样结 构形成试 验等方法 观察
弃培 养液 ， Ｌ 入 ２ ｌ ｖ 液 （２ １ ｍ０ ． 每孑 加 ０ ｒ溶 Ｍ１ １． Ｉ
基金项 目： 国家 自然科学基金 资助项 目（ ｏ８０ ０ ７ ） 贵州省科技 Ｎ １６ １６ ；
Ｌ ） 孵育４ｈ ， 后 加入 １０ 二 甲基亚砜 ， Ｌ ５ 】 微孑 板阅 读器测各孔的吸光值 （ Ｄ４０ｈ１ ， Ｏ ９ ｉ）计算半 数致北 ｌ
中 国药理 学通报
Ｃ ｉｅ ｈ ｒ ａｏ ｇｃｌ ｕｌｉ ２ １ ｕ ；７ ８ ：１１— ｈｎｓ Ｐ ａｍ ｃｌ ｉ ｌ ｔ ｅ ｏ ａ Ｂ ｅｎ ０ ｌＡ ｇ２ （ ） １ １ ５
网络 出版 时间 ： １ － — ２ １ ：３ 网络 出版 地 址 ：ｔ ：／ ｗ ．ｎ ｉ ｅ ｋ ｍ ／ ｅ ｉ ３ ．０ ６ Ｒ ２ １０ ２ ．６３ ２ １０ ． １ １０ ０ ｈｍ ２ １ ７ ２ ６ ５ ０ ｈ ｐ ／ ｗ ｗ ｃｋ ． ｔ ｃ ｓ ｄ ｔ ｌ ４ １８ ． ． １７ ２ １５ ． １８ １ １＿ ２ ． ｔ ｌ ｔ ｎ／ ａ／ ０ ０
技有 限公 司冻存 ， 苏后 培 养于 Ｄ Ｍ 培 养液 、 复 ＭＥ ３ ￣ 体 积分数 为 ０ １的 Ｆ Ｓ和 ０ ０ ７Ｃ、 ． Ｂ ．５的 Ｃ ， Ｏ。
１ ４ ＭＴ ． Ｔ实验 收集 对数 生 长期 Ｈ ｐ ２细 胞 ， ｅＧ 以 每孑 ０ ０个细胞 的密 度铺 于 ９ Ｌ ０ ５ ６孔板 中 ， 养 １ 培 ２ｈ 后加入 倍 比稀 释 的 Ａ Ｍ（ 个 浓 度 设 ５个 复 孔 ） Ｄ 每 。 上述 条件 培养 ７ （ ８ｈ时换液 和补 充 Ａ Ｍ １次 ） ２ｈ ４ Ｄ 。
ｍａ ｎ公 司 ） 。
以提 高 Ｈ ｐ ２对 Ａ Ｍ敏感性 ， ｅＧ Ｄ 提示 ｅｌａ 一 以作为降低 ａｐｉ ２可 ｎ
肿瘤 化疗 耐药性的潜在靶点。 关键词 ： 肝癌细胞 ； 激活 中性蛋 白酶一 ； 钙 ２ 阿霉素 ； 周期 蛋 白 Ｅ 化疗 ； ； 耐药性
Βιβλιοθήκη Baidu
１ ３ 细 胞株 ．
Ｈ ｐ ２细胞 株 为 广 州启 动 子 生 物科 ｅＧ
化疗 耐 药性 的 机 制 之 一 。研 究 以 钙 激 活 中性 蛋 白
酶 一（ａ ａｎ２ 作 为 对 象 ， 察 其 在 肝 癌 细 胞 中 的 ２ ｃｌ ｉ．） ｐ 观 表 达 ， 其 与阿 霉 素 （ｄｉ ｙｉ， Ｄ 耐 药 之 间 的 及 ａｒ ｍ ｃ Ａ Ｍ） ａ ｎ
关系。
１ 材 料与 方法
钙激活 中性蛋 白酶一 ２对肝癌细胞阿霉素耐药性 的影 响
徐 国强 唐 佳艳 。 ， ， ‘ 向 敏 ， 王 艳 洪 阳 胡 晓霞 王旭东 陈腾 祥 ， ， ， ，
（ 贵阳医学院 １ 生理学教研 室、． ． ２ 附属 ＮＦ ｇｔ内科 、． ． ４ ｇ￣ ３ 附属 Ｎ ．Ｊ科 ， ＿Ｆ ｂ 贵州 贵阳 ５００ ，． 阳市卫生局 ， Ｊ贵阳 ５０８ ） ｇ ５０４４贵 贵 ｉ ５０ １
黑色素瘤细胞 （ １Ｆ ） 长抑制率和 致死率 低于 紫杉醇 ， Ｂ６ １ 生 维
泰醇对黑 色素 瘤细胞 迁 移 、 ＭＰ２表 达和 对血 管 内皮 细胞 Ｍ －
摘要 ： 目的
观察 维泰醇和紫杉醇对肿瘤细胞体外迁 移能力
（ Ｃ ３ ４ 管腔形成的抑制能力 略低 于紫杉醇 。结 论 Ｅ Ｖ０ ）
维泰醇和紫杉醇抗肿瘤转移作用比较
陈 姬 ，陈 娜 ，陈小 宇 ， 张 波， 田 卉， 郑秋 生
８２ ０ ） ３ ０ ２ （ 石河子大 学药 学院， 新疆特种植物 药资源教 育部 重点实验室 ， 新疆 石 河子
ｄｉ１ ．９ ９ ｊｉ ｎ １０ ｏ：０ ３ ６ ／． ｓ．０ １—１７ ．０ １０ ．１ ｓ ９ ８ ２ １ ．８０ ９
（ 国 Ｍ ｒｋ公 司 ） Ｄ Ｍ、 牛血 清 （ Ｂ ） 美 国 美 ｅｃ ， ＭＥ 胎 ＦＳ （
Ｉｖｔ ｇ ｎ 司） 四甲基偶 氮唑 盐 （ Ｆ 、 内烯 酰 ｎ ｉｏｅ 公 ｒ ； ＭＴ ） 聚
胺 、 甲叉 丙 烯 酰胺 （ 国 Ｓｇ ｌｒｈ公 司） 其 双 美 ｉ Ａｄｉ ｍａ ｃ ；
比较 维泰醇与紫杉醇 的抗肿瘤 转 移能 力。结果 维泰醇 对
文献标识码 ： 文章编 号 ：０ １—１７ （０ １ ０ Ａ １０ ９ ８ ２ １ ） ８—１１ — ５ １１ ０ 中国图书分类号 ： ２２７ ； ３９ ２ ；３ ９２ ； ７ — ； ９９ １ １ ８． １ Ｒ ２ ．４ Ｒ ２ ．５ Ｒ ３３ Ｒ ７． １ ５
Ｒ９ ７７． ３
解底 物参 与许 多细 胞 信 号转 导 通 路 的 活动 ， 挥 多 发
种 生物 学功能 。研 究 发 现 ，ａ ａｎ通 过 酶解 细胞 ｅｌ ｉ ｐ
周 期蛋 白 Ｅ ｃｃｉ Ｅ） 进乳腺 癌 细胞 的增 殖 ， （ｙｌ 促 ｎ 提示
观察阿霉 素作用 下 ， 钙激 活 中性 蛋 白酶 一（ ａ ２ ｃｌ —
６ ０９ ３ Ｅ－ ｉ ： ｑ ｕ ｇ ． ｄ Ｃｌ ９ ５ ９， ｍａ ｌ ｇ ｘ ＠ ｍｃ ｅ ｕ Ｙ；
按上 述 方 法 将 Ｈ ｐ ２细 胞 铺 至 ９ ｅＧ ６孔 板 中 ， 给
予 Ａ Ｍ（ Ｄ０ 或 ｃｌａｎ２抑 制 剂 ｃｌａｔ ｉ ｐ ｐ Ｄ Ｌ ５） ａ ｉ一 ｐ ａｐｓ ｔ ｅ — ａｎ ｔ ｅ ２ ｍ ｌ・ ） 育细胞 ７ ， ｉ （ ０ｎ ｏ Ｌ 孵 ｄ ２ｈ 如上 所述 用 Ｍ Ｔ Ｔ 法检测 细胞 的成 活率 。未予 Ａ Ｍ 和 ｃ ｌ ｓ ｔ ｅ— Ｄ ａ ａｔ ｉ ｐ ｐ ｐ ａｎ
摘要 ： 目的
ｐｉ－） ａ ２ 在肝 癌细胞 （ ｅ Ｇ ） ｎ Ｈ ｐ ２ 中的表 达及其对 细胞存 活率 的 影响 ， 评价其作为抗癌药靶的可能性 。方法 以倍 比稀释 的 Ａ Ｍ作用于 Ｈ ｐ ２细胞 ， Ｄ ｅＧ 用四 甲基偶氮 唑盐 比色 （ Ｆ 实 ＭＴ ） 验检 测 阿 霉 素 （ ｄｉｍ ｅ ， Ｄ ７ 的 半 数 致 死 量 Ａ ｒ ｙｉ Ａ Ｍ） ２ ｈ ａ ｎ （ Ｄ ； 蛋 白质印迹（ ｓ ｒ ｂｏ） Ｌ ） Ｗｅｔ ｎ ｌ 检测 的 Ａ Ｍ（ Ｄ 作 ｅ ｔ Ｄ Ｌ ）
用 下 ，ａｐｉ一 ｃｃｉ Ｅ 的表 达 和 酶 解 情 况 ； 予 ｃｌ ｉ一 ｃｌａ ２和 ｙｌ ｎ ｎ 给 ａ ａｎ２ ｐ 抑 制 剂 （ａｐｓ ｔ ｅｔ ｅ 干 预 后 ， Ｍ丌 法 观 察 Ａ Ｍ 对 ｃｌａｔ ｉ ｐｐｉ ） ａｎ ｄ 用 ． Ｄ
其 是促 进肿瘤 恶性 的重 要 蛋 白， 可能 是 肿 瘤 细胞 也
耐药 性是 肿瘤 复发 以及 复发后化 疗失 效 的重要
原 因 。肿 瘤细 胞与 正常 细胞一 样 ， 到外 界刺 激后 ， 受 也 可 以产 生应 激性 反 应 ， 高 其 对环 境 变 化 的适 应 提
性 ， 是 肿 瘤 细 胞 对 化 疗 产 生 耐 药 性 的 基 本 原 这
收 稿 日期 ：０ ｌ ４— ７修 回稿 Ｅ期 ：０ ｌ ５—１ ２ １ 一０ ０ ｔ ２ １ 一０ ３
１ １ 药 物 和 试 剂 Ｃ ｌａ ａｇ ｕ ｕ ｉ Ｍ— ． ａ ｉ ２ Ｌ ｒｅ Ｓ ｂ ｎｔ（ ｐｎ ｔ ｅ ｎｉｏ ｙ Ｃ ｃ ｎＥ （ Ｅ ２）Ｍｏｓ Ａ （ 国 ｙ ）Ａ ｔ ｄ 、 ｙｌ Ｈ １ ｐ ｂ ｉ ｕｅｍ ｂ 美
Ｃ ｌ Ｓｇ ａ ｎ ｅ ｈ ｏ ｇ ｅ ｉｎｌ ｇ Ｔ ｃ ｎｌ ｙ公 司 ） ｃｌａｔ ｉ ｐ ｐｉ ｌ ｉ ｏ ；ａｐ ｓ ｔ ｅ ｔ ｅ ａｎ ｄ
・
１０ ・ ８ １
中 国 药理 学通 报
Ｃ ｉ ｓ Ｐ ａｍ ｃｌ ｉ ｌ ｕ ｅｎ ２ １ ｕ ；７ ８ ：１ ８ １ ｈｎ ｅ ｈ ｒ ａｏ ｇｃ ｌｔ ０ １Ａ ｇ２ （ ） １０ ～１ ｅ ｏ ａ Ｂ ｌｉ
网络 出版 时 间 ：０ １ ２ １ —７—２ ６：３ 网络 出版 地 ： ：ｔ ：／ ｗ ． ｎ ｉｎ ｔｋ ｍｓ ｄｔｉ ３ ．０６ Ｒ． １０ ２ ．６ ３ ２ １０ ． １８ ０ ８ ｈｍｌ ２１ ５ ｔ ｈｔ ／ ｗ ｗ ｃ ｋ． ｅ ｃ ／ ｅａｌ ４ １８ ． ２ １７ ２ １５ ． １８ １０ ＿ ｌ． ｔ ￣ ＿ ｐ ／ ／ ０ ０
量。
厅 自然科学基金资助项 目（ ｏ Ｎ 黔科合 Ｊ ［０ ８ ２ ８ ） 字 ２０ ］２ ０ ；
贵州省教育厅 自然科 学研究 资助项 目（ ｏＦ ０ ８—３ Ｎ ２ ０ ） 作 者简介 ： 国强 （９ ４一） 男 ， 徐 １６ ， 副教授 ， 士生导 师 ， 硕 研究 方 向： 分 子 药 理 学 与 神 经 药 理 学 ， 讯 作 者 ，ＦｌＦｘ ０ ５ — 通 ｅ ａ ： ８ １ ／
陈腾祥 （９ ２一） 男 ， １７ ， 博士 ， 副教授 ， 硕士生 导师 ， 研究 方 向： 肿瘤 的转移复发机制与防治， 通讯作者 ，ｅ Ｆ ｘ０ ５ － Ｔ ｌ ａ ：８ １ ／
６ ０ ７ ９ ８ ５８， — ｉ ： ｚ ｔ ｉ ＠ ｑ ． ｏｎ Ｅ ｍａｌ ｇ ｃｘ ｎ ｑ ｃ ｉ
ｔｅ处理 的 Ｈ ｐ ２的 ＭＴ ｉ ｄ ｅＧ Ｔ值 作 为分母 ， 算 其它 组 计
Ｈ ｐ ２细 胞 存 活 率 的 影 响。结 果 ＭＴ ｅＧ Ｔ实验 结 果 显 示 ，
Ａ Ｍ 对 Ｈ ｐ ２的 Ｌ 为 ２ ５ｂ ｏ － Ｄ ｅＧ Ｄ ｎ ． ｔ ｌ Ｌ～； ｓ ｒ ｌ 发 现 ， ｍ Ｗｅｔ ｎｂｏ ｅ ｔ
随 Ａ Ｍ作 用时 间 的延 长 ，ａｐｉ一 Ｄ ｃｌａ ２的表 达 水平 增 高 （ ｎ Ｐ＜ ００ ） 而且被剪 切 的程度 增加 （ ０ ０ ） Ｍ． 检测 Ａ Ｍ ．１， Ｐ＜ ．５ ； ｒ ｒ Ｄ 对 Ｈ ｐ ２的作用发现 ，ａｐｓ ｔ ｅ ｔ ｅ 预的细胞存活率 ｅＧ ｃｌａｔ ｉ ｐｐｉ 干 ａｎ ｄ 明显低 于对 照组 （ Ｐ＜００ ） Ｃ ｃｎＥ被剪切 的程度减 轻 （ ． １ ， ｙｌ ｉ Ｐ ＜ ．）） ０ 【 。结论 １ 肝癌 细胞 Ｈ ｐ ２在 Ａ Ｍ 作用下发生凋亡 ｅＧ Ｄ 的同时 ， 也上调 ｃｌａ 一 ａ ｉ ２的表达水平 和活性 ， ｐｎ 并通 过其信号 通路 降低 对 Ａ Ｍ 的敏感性 ， 针对 ｅｌａ － Ｄ 而 ａｐｉ ２的活性 抑制可 ｎ
ｄ ｉ１ ．９ ９ ｊｉ ｎ １０ ｏ： ３ ６ ／． ｓ ．０ １—１７ ．０ ．８０ ８ ０ ｓ ９ ８ ２ １ ０ ． １ １
理 Ｊ ａ ａ 。Ｃ ｌ ｉ ｐ ｎ是一 种蛋 白质 水解 酶 ， 其通 过有 限酶
文 献标 识 码 ： 文 章 编 号 ：０ １—１７ （ ０ １ ０ Ａ １０ ９ ８ ２ １ ） ８—１０ ０ １８— ４ 中 国 图 书 分 类 号 ： ３９ ２ ； ３ ５ ７ Ｒ ３ ． ０ Ｒ ７ ． ； Ｒ ２ ． ５ Ｒ ４ ． ９； ７５ ７５； ９９ １
维 泰
以及 血管 内皮细胞管腔形成 能力 的影 响 ， 对它们 的抗肿 瘤转 移能力进行 比较 ， 以证实维泰醇的抗肿瘤血管新生及抗 肿瘤 转 移 作 用。方 法 采 用 Ｓ Ｂ法 ， 痕 试 验 ， 胶 酶谱 法 、 Ｒ 划 明 Ｅ ＩＡ、 Ｏ Ｅ ＬＳ Ａ ／ Ｂ染色法 以及管腔 样结 构形成试 验等方法 观察
弃培 养液 ， Ｌ 入 ２ ｌ ｖ 液 （２ １ ｍ０ ． 每孑 加 ０ ｒ溶 Ｍ１ １． Ｉ
基金项 目： 国家 自然科学基金 资助项 目（ ｏ８０ ０ ７ ） 贵州省科技 Ｎ １６ １６ ；
Ｌ ） 孵育４ｈ ， 后 加入 １０ 二 甲基亚砜 ， Ｌ ５ 】 微孑 板阅 读器测各孔的吸光值 （ Ｄ４０ｈ１ ， Ｏ ９ ｉ）计算半 数致北 ｌ
中 国药理 学通报
Ｃ ｉｅ ｈ ｒ ａｏ ｇｃｌ ｕｌｉ ２ １ ｕ ；７ ８ ：１１— ｈｎｓ Ｐ ａｍ ｃｌ ｉ ｌ ｔ ｅ ｏ ａ Ｂ ｅｎ ０ ｌＡ ｇ２ （ ） １ １ ５
网络 出版 时间 ： １ － — ２ １ ：３ 网络 出版 地 址 ：ｔ ：／ ｗ ．ｎ ｉ ｅ ｋ ｍ ／ ｅ ｉ ３ ．０ ６ Ｒ ２ １０ ２ ．６３ ２ １０ ． １ １０ ０ ｈｍ ２ １ ７ ２ ６ ５ ０ ｈ ｐ ／ ｗ ｗ ｃｋ ． ｔ ｃ ｓ ｄ ｔ ｌ ４ １８ ． ． １７ ２ １５ ． １８ １ １＿ ２ ． ｔ ｌ ｔ ｎ／ ａ／ ０ ０
技有 限公 司冻存 ， 苏后 培 养于 Ｄ Ｍ 培 养液 、 复 ＭＥ ３ ￣ 体 积分数 为 ０ １的 Ｆ Ｓ和 ０ ０ ７Ｃ、 ． Ｂ ．５的 Ｃ ， Ｏ。
１ ４ ＭＴ ． Ｔ实验 收集 对数 生 长期 Ｈ ｐ ２细 胞 ， ｅＧ 以 每孑 ０ ０个细胞 的密 度铺 于 ９ Ｌ ０ ５ ６孔板 中 ， 养 １ 培 ２ｈ 后加入 倍 比稀 释 的 Ａ Ｍ（ 个 浓 度 设 ５个 复 孔 ） Ｄ 每 。 上述 条件 培养 ７ （ ８ｈ时换液 和补 充 Ａ Ｍ １次 ） ２ｈ ４ Ｄ 。
ｍａ ｎ公 司 ） 。
以提 高 Ｈ ｐ ２对 Ａ Ｍ敏感性 ， ｅＧ Ｄ 提示 ｅｌａ 一 以作为降低 ａｐｉ ２可 ｎ
肿瘤 化疗 耐药性的潜在靶点。 关键词 ： 肝癌细胞 ； 激活 中性蛋 白酶一 ； 钙 ２ 阿霉素 ； 周期 蛋 白 Ｅ 化疗 ； ； 耐药性
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１ ３ 细 胞株 ．
Ｈ ｐ ２细胞 株 为 广 州启 动 子 生 物科 ｅＧ
化疗 耐 药性 的 机 制 之 一 。研 究 以 钙 激 活 中性 蛋 白
酶 一（ａ ａｎ２ 作 为 对 象 ， 察 其 在 肝 癌 细 胞 中 的 ２ ｃｌ ｉ．） ｐ 观 表 达 ， 其 与阿 霉 素 （ｄｉ ｙｉ， Ｄ 耐 药 之 间 的 及 ａｒ ｍ ｃ Ａ Ｍ） ａ ｎ
关系。
１ 材 料与 方法
钙激活 中性蛋 白酶一 ２对肝癌细胞阿霉素耐药性 的影 响
徐 国强 唐 佳艳 。 ， ， ‘ 向 敏 ， 王 艳 洪 阳 胡 晓霞 王旭东 陈腾 祥 ， ， ， ，
（ 贵阳医学院 １ 生理学教研 室、． ． ２ 附属 ＮＦ ｇｔ内科 、． ． ４ ｇ￣ ３ 附属 Ｎ ．Ｊ科 ， ＿Ｆ ｂ 贵州 贵阳 ５００ ，． 阳市卫生局 ， Ｊ贵阳 ５０８ ） ｇ ５０４４贵 贵 ｉ ５０ １
黑色素瘤细胞 （ １Ｆ ） 长抑制率和 致死率 低于 紫杉醇 ， Ｂ６ １ 生 维
泰醇对黑 色素 瘤细胞 迁 移 、 ＭＰ２表 达和 对血 管 内皮 细胞 Ｍ －
摘要 ： 目的
观察 维泰醇和紫杉醇对肿瘤细胞体外迁 移能力
（ Ｃ ３ ４ 管腔形成的抑制能力 略低 于紫杉醇 。结 论 Ｅ Ｖ０ ）
维泰醇和紫杉醇抗肿瘤转移作用比较
陈 姬 ，陈 娜 ，陈小 宇 ， 张 波， 田 卉， 郑秋 生
８２ ０ ） ３ ０ ２ （ 石河子大 学药 学院， 新疆特种植物 药资源教 育部 重点实验室 ， 新疆 石 河子
ｄｉ１ ．９ ９ ｊｉ ｎ １０ ｏ：０ ３ ６ ／． ｓ．０ １—１７ ．０ １０ ．１ ｓ ９ ８ ２ １ ．８０ ９
（ 国 Ｍ ｒｋ公 司 ） Ｄ Ｍ、 牛血 清 （ Ｂ ） 美 国 美 ｅｃ ， ＭＥ 胎 ＦＳ （
Ｉｖｔ ｇ ｎ 司） 四甲基偶 氮唑 盐 （ Ｆ 、 内烯 酰 ｎ ｉｏｅ 公 ｒ ； ＭＴ ） 聚
胺 、 甲叉 丙 烯 酰胺 （ 国 Ｓｇ ｌｒｈ公 司） 其 双 美 ｉ Ａｄｉ ｍａ ｃ ；
比较 维泰醇与紫杉醇 的抗肿瘤 转 移能 力。结果 维泰醇 对
文献标识码 ： 文章编 号 ：０ １—１７ （０ １ ０ Ａ １０ ９ ８ ２ １ ） ８—１１ — ５ １１ ０ 中国图书分类号 ： ２２７ ； ３９ ２ ；３ ９２ ； ７ — ； ９９ １ １ ８． １ Ｒ ２ ．４ Ｒ ２ ．５ Ｒ ３３ Ｒ ７． １ ５
Ｒ９ ７７． ３
解底 物参 与许 多细 胞 信 号转 导 通 路 的 活动 ， 挥 多 发
种 生物 学功能 。研 究 发 现 ，ａ ａｎ通 过 酶解 细胞 ｅｌ ｉ ｐ
周 期蛋 白 Ｅ ｃｃｉ Ｅ） 进乳腺 癌 细胞 的增 殖 ， （ｙｌ 促 ｎ 提示
观察阿霉 素作用 下 ， 钙激 活 中性 蛋 白酶 一（ ａ ２ ｃｌ —
６ ０９ ３ Ｅ－ ｉ ： ｑ ｕ ｇ ． ｄ Ｃｌ ９ ５ ９， ｍａ ｌ ｇ ｘ ＠ ｍｃ ｅ ｕ Ｙ；
按上 述 方 法 将 Ｈ ｐ ２细 胞 铺 至 ９ ｅＧ ６孔 板 中 ， 给
予 Ａ Ｍ（ Ｄ０ 或 ｃｌａｎ２抑 制 剂 ｃｌａｔ ｉ ｐ ｐ Ｄ Ｌ ５） ａ ｉ一 ｐ ａｐｓ ｔ ｅ — ａｎ ｔ ｅ ２ ｍ ｌ・ ） 育细胞 ７ ， ｉ （ ０ｎ ｏ Ｌ 孵 ｄ ２ｈ 如上 所述 用 Ｍ Ｔ Ｔ 法检测 细胞 的成 活率 。未予 Ａ Ｍ 和 ｃ ｌ ｓ ｔ ｅ— Ｄ ａ ａｔ ｉ ｐ ｐ ｐ ａｎ
摘要 ： 目的
ｐｉ－） ａ ２ 在肝 癌细胞 （ ｅ Ｇ ） ｎ Ｈ ｐ ２ 中的表 达及其对 细胞存 活率 的 影响 ， 评价其作为抗癌药靶的可能性 。方法 以倍 比稀释 的 Ａ Ｍ作用于 Ｈ ｐ ２细胞 ， Ｄ ｅＧ 用四 甲基偶氮 唑盐 比色 （ Ｆ 实 ＭＴ ） 验检 测 阿 霉 素 （ ｄｉｍ ｅ ， Ｄ ７ 的 半 数 致 死 量 Ａ ｒ ｙｉ Ａ Ｍ） ２ ｈ ａ ｎ （ Ｄ ； 蛋 白质印迹（ ｓ ｒ ｂｏ） Ｌ ） Ｗｅｔ ｎ ｌ 检测 的 Ａ Ｍ（ Ｄ 作 ｅ ｔ Ｄ Ｌ ）
用 下 ，ａｐｉ一 ｃｃｉ Ｅ 的表 达 和 酶 解 情 况 ； 予 ｃｌ ｉ一 ｃｌａ ２和 ｙｌ ｎ ｎ 给 ａ ａｎ２ ｐ 抑 制 剂 （ａｐｓ ｔ ｅｔ ｅ 干 预 后 ， Ｍ丌 法 观 察 Ａ Ｍ 对 ｃｌａｔ ｉ ｐｐｉ ） ａｎ ｄ 用 ． Ｄ
其 是促 进肿瘤 恶性 的重 要 蛋 白， 可能 是 肿 瘤 细胞 也
耐药 性是 肿瘤 复发 以及 复发后化 疗失 效 的重要
原 因 。肿 瘤细 胞与 正常 细胞一 样 ， 到外 界刺 激后 ， 受 也 可 以产 生应 激性 反 应 ， 高 其 对环 境 变 化 的适 应 提
性 ， 是 肿 瘤 细 胞 对 化 疗 产 生 耐 药 性 的 基 本 原 这
收 稿 日期 ：０ ｌ ４— ７修 回稿 Ｅ期 ：０ ｌ ５—１ ２ １ 一０ ０ ｔ ２ １ 一０ ３
１ １ 药 物 和 试 剂 Ｃ ｌａ ａｇ ｕ ｕ ｉ Ｍ— ． ａ ｉ ２ Ｌ ｒｅ Ｓ ｂ ｎｔ（ ｐｎ ｔ ｅ ｎｉｏ ｙ Ｃ ｃ ｎＥ （ Ｅ ２）Ｍｏｓ Ａ （ 国 ｙ ）Ａ ｔ ｄ 、 ｙｌ Ｈ １ ｐ ｂ ｉ ｕｅｍ ｂ 美
Ｃ ｌ Ｓｇ ａ ｎ ｅ ｈ ｏ ｇ ｅ ｉｎｌ ｇ Ｔ ｃ ｎｌ ｙ公 司 ） ｃｌａｔ ｉ ｐ ｐｉ ｌ ｉ ｏ ；ａｐ ｓ ｔ ｅ ｔ ｅ ａｎ ｄ
・
１０ ・ ８ １
中 国 药理 学通 报
Ｃ ｉ ｓ Ｐ ａｍ ｃｌ ｉ ｌ ｕ ｅｎ ２ １ ｕ ；７ ８ ：１ ８ １ ｈｎ ｅ ｈ ｒ ａｏ ｇｃ ｌｔ ０ １Ａ ｇ２ （ ） １０ ～１ ｅ ｏ ａ Ｂ ｌｉ
网络 出版 时 间 ：０ １ ２ １ —７—２ ６：３ 网络 出版 地 ： ：ｔ ：／ ｗ ． ｎ ｉｎ ｔｋ ｍｓ ｄｔｉ ３ ．０６ Ｒ． １０ ２ ．６ ３ ２ １０ ． １８ ０ ８ ｈｍｌ ２１ ５ ｔ ｈｔ ／ ｗ ｗ ｃ ｋ． ｅ ｃ ／ ｅａｌ ４ １８ ． ２ １７ ２ １５ ． １８ １０ ＿ ｌ． ｔ ￣ ＿ ｐ ／ ／ ０ ０
量。
厅 自然科学基金资助项 目（ ｏ Ｎ 黔科合 Ｊ ［０ ８ ２ ８ ） 字 ２０ ］２ ０ ；
贵州省教育厅 自然科 学研究 资助项 目（ ｏＦ ０ ８—３ Ｎ ２ ０ ） 作 者简介 ： 国强 （９ ４一） 男 ， 徐 １６ ， 副教授 ， 士生导 师 ， 硕 研究 方 向： 分 子 药 理 学 与 神 经 药 理 学 ， 讯 作 者 ，ＦｌＦｘ ０ ５ — 通 ｅ ａ ： ８ １ ／
陈腾祥 （９ ２一） 男 ， １７ ， 博士 ， 副教授 ， 硕士生 导师 ， 研究 方 向： 肿瘤 的转移复发机制与防治， 通讯作者 ，ｅ Ｆ ｘ０ ５ － Ｔ ｌ ａ ：８ １ ／
６ ０ ７ ９ ８ ５８， — ｉ ： ｚ ｔ ｉ ＠ ｑ ． ｏｎ Ｅ ｍａｌ ｇ ｃｘ ｎ ｑ ｃ ｉ
ｔｅ处理 的 Ｈ ｐ ２的 ＭＴ ｉ ｄ ｅＧ Ｔ值 作 为分母 ， 算 其它 组 计
Ｈ ｐ ２细 胞 存 活 率 的 影 响。结 果 ＭＴ ｅＧ Ｔ实验 结 果 显 示 ，
Ａ Ｍ 对 Ｈ ｐ ２的 Ｌ 为 ２ ５ｂ ｏ － Ｄ ｅＧ Ｄ ｎ ． ｔ ｌ Ｌ～； ｓ ｒ ｌ 发 现 ， ｍ Ｗｅｔ ｎｂｏ ｅ ｔ
随 Ａ Ｍ作 用时 间 的延 长 ，ａｐｉ一 Ｄ ｃｌａ ２的表 达 水平 增 高 （ ｎ Ｐ＜ ００ ） 而且被剪 切 的程度 增加 （ ０ ０ ） Ｍ． 检测 Ａ Ｍ ．１， Ｐ＜ ．５ ； ｒ ｒ Ｄ 对 Ｈ ｐ ２的作用发现 ，ａｐｓ ｔ ｅ ｔ ｅ 预的细胞存活率 ｅＧ ｃｌａｔ ｉ ｐｐｉ 干 ａｎ ｄ 明显低 于对 照组 （ Ｐ＜００ ） Ｃ ｃｎＥ被剪切 的程度减 轻 （ ． １ ， ｙｌ ｉ Ｐ ＜ ．）） ０ 【 。结论 １ 肝癌 细胞 Ｈ ｐ ２在 Ａ Ｍ 作用下发生凋亡 ｅＧ Ｄ 的同时 ， 也上调 ｃｌａ 一 ａ ｉ ２的表达水平 和活性 ， ｐｎ 并通 过其信号 通路 降低 对 Ａ Ｍ 的敏感性 ， 针对 ｅｌａ － Ｄ 而 ａｐｉ ２的活性 抑制可 ｎ
ｄ ｉ１ ．９ ９ ｊｉ ｎ １０ ｏ： ３ ６ ／． ｓ ．０ １—１７ ．０ ．８０ ８ ０ ｓ ９ ８ ２ １ ０ ． １ １
理 Ｊ ａ ａ 。Ｃ ｌ ｉ ｐ ｎ是一 种蛋 白质 水解 酶 ， 其通 过有 限酶
文 献标 识 码 ： 文 章 编 号 ：０ １—１７ （ ０ １ ０ Ａ １０ ９ ８ ２ １ ） ８—１０ ０ １８— ４ 中 国 图 书 分 类 号 ： ３９ ２ ； ３ ５ ７ Ｒ ３ ． ０ Ｒ ７ ． ； Ｒ ２ ． ５ Ｒ ４ ． ９； ７５ ７５； ９９ １