HPLC法同时测定金荞麦片中6个多酚类成分_李敏

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金荞麦片为蓼科植物金荞麦 Fagopyrum dibotorys（ D． Don） Hara 的干燥根茎提取的成药片剂， 具有 清热解毒、 排脓祛瘀、 祛痰止咳平喘的功效， 用于急 性肺脓疡、 急慢性气管炎、 喘息型慢性气管炎、 支气
［1 ］ 管哮喘及细菌性痢疾 。 原药材金荞麦中原花青 主要以高聚物形式存 素类成分的含量占 10% 左右，
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B 为磷酸水 4. 6 mm， 5 μm） ； 流动相： A 为乙腈溶液， 溶液（ 用磷酸调 pH = 3. 0 ） ， 梯度洗脱 （ 0 ～ 25 min， 92% B ； 25 ～ 45 min， 92% B → 91% B ； 45 ～ 60 min， 91% B →90% B ； 60 ～ 61 min， 90% B →92% B ； 61 ～ 70 min， 92% B ） ； 流速： 1. 0 mL·min － 1 ； 检测 波 长： 220 nm； 柱温 35 ℃ 。 2. 2 混合对照品溶液制备 取原儿茶酸、 原花青素 B1 、 儿 茶 素、 原花青素
5 μm ） 色谱柱， 流动相为乙腈与磷酸水溶液 法： 采用反相高效液相色谱法 ， 使用 Shim － pack VP － ODS C18 （ 250 mm × 4. 6 mm，
－1 （ 用磷酸调 pH = 3. 0 ） ， 检测波长 220 nm。样品采用 10% 乙腈回流提取。结果： 6 个多酚类成分 流速 1. 0 mL·min ， 梯度洗脱，
* 通信作者 第一作者 Tel： 13905188648 ； E － mail： guoqing850@ gmail． com， guoqing850@ sohu． com Tel： 18252066527 ： E － mail： 544393951@ qq． com
35 （ 4 ） 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2015 ，
率是 40 kHz ） ， 电 子 天 平 （ 德 国 Sartorius CPA224S TG16 － WS 台式高速离心机， DELTA 320 型 pH 型） ， 计。乙腈（ 色谱纯） ， 纯度 ≥85. 0% ） ， 磷酸 （ 分析纯， 甲醇（ 分析纯） 。 水为蒸馏水， 22120202、 22120208 ） 和 金荞麦片 （ 批号 22120201、 缺金荞麦阴性样品由南通精华制药股份有限公司提 供。对照品原儿茶酸 （ 批号 110809 － 201205 ， 纯度 ≥99. 9% ） 、 儿茶素 （ 批号 110877 － 201203 ， 纯度 ≥ 97. 2% ） 、 表 儿 茶 素 （ 批 号 110878 － 200102 ， 纯度 100% ） 均购自中国食品药品检定研究院， 供含量测 ； B （ 20120722 ， 定用 原花青素 1 批号 纯度 ≥95. 0% ） 购自上海源叶生物科技有限公司； 原花青素 B2 （ 批 号 29106 － 49 － 8 ， 纯度 ≥97. 2% ） 购自天津尖峰生 物有限公司； 原花青素 C1 （ 批号 37064 － 30 － 5 ） 购 自 Germany PhytoLab GmbH ＆ Co． KG。 2 2. 1 方法与结果 色谱条件 色谱柱： Shim － pack VP － ODS C18 （ 250 mm ×
， 其中 其活性较高的组分为原花青素低聚体 ， ［3 ］ 二聚体原花青素 B2 占 0. 19% 。 金荞麦片的现行 在 质量标准中含量测定采用芦丁为对照的紫外检测法 ［1 ］ 测定总黄酮， 限度规定为每片不得少于 0. 4 mg ， 而紫外检测法存在专属性不强的缺点。2010 年版 中国药典收载的金荞麦项下含量测定则采用 HPLC 法测定表儿茶素， 规定限度为 0. 03% ， 指标单一 且含量太低， 不能综合和较全面地反映金荞麦药材 的质量。据国内外文献报道， 目前对原花青素多个 ［5 ］ 单组 分 的 分 析 研 究 很 少， 智 利 Cecilia 等 采 用 HPLC － DAD / ESI － MS 方法， 应用 C18 柱对蚕豆中儿 茶素、 表儿茶素、 多个未知原花青素二聚体、 原花青 素三聚体和原翠雀素二聚体进行了测定 ， 但由于没 有全部的对照品， 对色谱峰进行 MS 和 DAD 光谱定 性归类后， 再用儿茶素和芹菜素作为对照品分别对 原花青素和原翠雀素两大类成分进行了外标定量 ， 但部 分 待 测 峰 未 达 到 基 线 分 离。 意 大 利 Marina 等 采用 UPLC 和 C18 柱分析了绿茶中 6 种儿茶素 类单聚和单聚半体， 虽分离很好， 但未涉及二聚体和
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35 （ 4 ） 药物分析杂志 Chin J Pha6 个多酚类成分
1 2* 3 郭青 ， 张潇 李敏 ，
（ 1． 南京中医药大学， 南京 210008 ； 3． 中国药科大学， 南京 210038 ） 南京 210023 ； 2． 江苏省食品药品监督检验研究院 ， 摘要 B2 、 C1 ） 含量的同时测定方法 。 方 目的： 建立金荞麦片中 6 个多酚类成分（ 原儿茶酸、 儿茶素、 表儿茶素及原花青素 B1 、
Simultaneous determination of six polyphenols in Jinqiaomai tablets by HPLC
LI Min1 ， GUO Qing2* ， ZHANG Xiao3
（ 1． Nanjing University of Chinese Medicine， Nanjing 210023 ， China； 2． Jiangsu Institute of Food and Drug Control ， Nanjing 210008 ， China； 3． China Pharmaceutical University， Nanjing 210038 ， China）
Abstract
Objective ： To develop a method for simultaneous determination of six polyphenols（ protocatechuic acid ，
catechin， epicatechin， and procyanidins B1 ， B2 ， C1 ） in Jinqiaomai tablets． Methods： An HPLC method was adopted for the analysis， which was performed on a Shim － pack VP － ODS C18 （ 250 mm × 4. 6 mm， 5 μm ） column with the mobile phase of acetonitrile and phosphoric acid solution（ pH = 3. 0 ） in a gradient elution， the flow rate was 1. 0 mL ·min － 1 ， and the detection wavelength was 220 nm． The samples were pre － processed with 1 h reflux in 10% acetonitrile solution． Ｒesults： The six polyphenols were separated perfectly by chromatography without disturbing peaks from negative samples． Their average recoveries were 95. 4% － 104. 8% （ ＲSD 1. 3% － 4. 6% ， n = 6） ， the repeatabilities were expressed by ＲSD with values of 1. 3% － 3. 5% （ n = 6 ） ， and linearity ranges of protocatechuic acid ， catechin， epicatechin and procyanidins B1 ， B2 ， C1 were respectively 0. 013 － 0. 065 μg （ r2 = 1. 000 0 ） ， 0. 024 － 0. 058 － 0. 288 μg（ r2 = 0. 999 9 ） ， 0. 033 － 0. 164 μg（ r2 = 0. 999 8 ） ， 0. 080 － 0. 402 μg 0. 121 μg（ r2 = 0. 999 9 ） ， 2 2 （ r = 0. 999 8 ） ， 0. 035 － 0. 177 μg（ r = 0. 999 0 ） ． The six polyphenols in the sample solution were stable within 24 h． The total contents of protocatechuic acid ， catechin， epicatechin， and procyanidins B1 ， B2 ， C1 in 3 batches of Jinqiaomai tablets were respectively 2 451. 85 μg per tablet， 1 965. 32 μg per tablet， 2 570. 28 μg per tablet． Conclusion： The methodology validation proved the developed method can effectively control the quality of Jinqiaomai tablets， and can be used as a new assay method in the quality standard as well． Keywords： Jinqiaomai tablets； protocatechuic acid ； catechin； epicatechin； procyanidin； ＲP － HPLC method； methodology validation