大豆蛋白的提取与含量测定PPT演示文稿
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大豆蛋白的提取与含量测定
法和Folin酚法是一般实验室中常用的方法，它们操作简便
，迅速，不需要复杂而昂贵的仪器。Folin酚法灵敏度高，
比双缩脲法灵敏100倍。
5.
Folin酚法所用试剂是由两部分组成，试剂甲相当于双
缩脲试剂，可与蛋白质中的肽链起显色反应。试剂乙中的
磷钼酸和磷钨酸在碱性条件下不稳定，易被酚类还原而呈
兰色（钼兰和钨兰混合物）。
3、器材：
1. 试管10支 2. 试管架一个 3. 移液管：（5ml、1ml） 4. 移液管架 5. 洗瓶 6. 恒温水浴 7. 723型分光光度计
Folin-酚法测定蛋白质含量工作曲线的制作：
取6支试管（干燥的）按下表顺序分别加入各种试剂并进行反应和测定 K=0.308 B=--0.009 R*R=0.9909
试管号 0 1 2 3 4 5 S
蛋白质标准液（ml） 0 （mg) 0
提取的样品液（ml）
0.2 0.04
0.4 0.08
0.6 0.12
0.8
1.0
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
0.16 0.2
0.8
PH7.8的buffer（ml）
1 0.8 0.6 0.4 0.2
0
0.2
） Folin-甲试剂 （ml
1
1
1
1
1
1
1
于室温下不停地振荡10min
实验原理
大豆中含有丰富的蛋白质、根据提取方法及其其性质的不
同，可以分为水溶蛋白、盐溶蛋白、醇溶蛋白、碱溶蛋白。 将豆粉依次用上述溶剂提取，并用有机溶剂沉淀，可制得各 部分蛋白质的干粉。本实验主要是水溶提取大豆蛋白。
•
称出提出蛋白质的重量，已知原料重量，可以求出蛋白质
大豆蛋白完整版资料42页PPT
文 家 。汉 族 ，东 晋 浔阳 柴桑 人 （今 江西 九江 ） 。曾 做过 几 年小 官， 后辞 官 回家 ，从 此 隐居 ，田 园生 活 是陶 渊明 诗 的主 要题 材， 相 关作 品有 《饮 酒 》 、 《 归 园 田 居 》 、 《 桃花 源 记 》 、 《 五 柳先 生 传 》 、 《 归 去来 兮 辞 》 等 。
Thank you
大豆蛋白完整版资料
6
、
露
凝
无
游
氛
，
天
高
风
景
澈
。
7、翩翩新 来燕，双双入我庐 ，先巢故尚在，相 将还旧居。
8
、
吁
嗟
身
后
名
，
于
我
若
浮
烟
。
9、 陶渊 明（ 约 365年 —427年 ），字 元亮， （又 一说名 潜，字 渊明 ）号五 柳先生 ，私 谥“靖 节”， 东晋 末期南 朝宋初 期诗 人、文 学家、 辞赋 家、散
1
0
、
倚
南
ห้องสมุดไป่ตู้
窗
以
寄
傲
，
审
容
膝
之
易
安
。
6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
Thank you
大豆蛋白完整版资料
6
、
露
凝
无
游
氛
，
天
高
风
景
澈
。
7、翩翩新 来燕，双双入我庐 ，先巢故尚在，相 将还旧居。
8
、
吁
嗟
身
后
名
，
于
我
若
浮
烟
。
9、 陶渊 明（ 约 365年 —427年 ），字 元亮， （又 一说名 潜，字 渊明 ）号五 柳先生 ，私 谥“靖 节”， 东晋 末期南 朝宋初 期诗 人、文 学家、 辞赋 家、散
1
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倚
南
ห้องสมุดไป่ตู้
窗
以
寄
傲
，
审
容
膝
之
易
安
。
6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
《大豆蛋白完整版》PPT课件
食用大豆蛋白对血脂浓度的改变（净变值*）
4 2 0 变 -2
化
百 -4
分
比 -6 -8
-10 -12 -14
总 胆 固 醇
VLDL HDL LDL
胆
胆
固
固
醇
醇
甘
胆 固 醇
油 三 酯
*净变值：以摄取大豆蛋白食物期间的变化减去摄入对照食物期间的变化
摘自：Anderson,et al.N Engl J Med 1995,333:276
大豆蛋白与健康
安利（中国）日用品有限公司
市场部
蛋白质的基本知识回顾
1、蛋白质的作用 2、蛋白质的构成-氨基酸 3、蛋白质的来源 4、蛋白质的评价方法
蛋白质的消化吸收和利用
食物中的蛋白质+消化液和胃肠道的脱落细胞 消化道中的氨基酸 血液中的氨基酸
结构 作用
调节 作用
运输 作用
能量 作用
缺乏蛋白质的后果
肿瘤中的血管形成
肿瘤血管形成 肿瘤退化
肿瘤生长与转移 肿瘤血管形成抑制
女性青春期食用大豆蛋白和成年后乳 腺癌发病率的关系
1
0.9
0.8
0.7
发 病
0.6
率 0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0 〈1次/月 1-3次/月 1-3次/周 〉4次/周
摘自：Wu et al., Carcinogenesis 23(9):1491-6
蛋白质含量 蛋白质消化率 蛋白质利用率
两种评价指标的比较
蛋白质功效比值（PER）
反映蛋白质利用率 基于动物实验，不能反映人体真实的需要 过量估计某些氨基酸的需要
蛋白质消化率校正氨基酸记分（PDCAAS）
大豆蛋白的提取与含量测定
大豆蛋白的提取与含量测 定
• 引言 • 大豆蛋白的提取 • 大豆蛋白含量的测定 • 实验结果与分析 • 结论 • 参考文献
01
引言
大豆蛋白简介
大豆蛋白是大豆中的重要成分，具有 丰富的营养价值，包括提供人体所需 的氨基酸、蛋白质等。
大豆蛋白具有低脂肪、低胆固醇的优 点，对于降低心血管疾病风险、保持 健康体重等方面具有积极作用。
实验结果
实验结果显示，采用本实验方法提取的大豆蛋白 具有较高的纯度和收率，且操作简便，可用于实 际生产。
对未来研究的建议
深入研究不同溶剂和条件对大豆蛋白提取效果的影响，以进一步优化提取工艺。 探讨大豆蛋白的结构与功能特性，为其在食品、医药等领域的应用提供理论支持。
开展大豆蛋白与其他植物蛋白的比较研究，以全面了解其营养价值和功能特性。
碱提取法
利用碱性溶剂溶解大豆中的 蛋白质，该方法能够较好地 保持蛋白质的生物活性，但 操作较为复杂。
离子交换法
利用离子交换剂吸附大豆中 的蛋白质，该方法具有较高 的选择性，但需要使用大量 的离子交换剂。
膜分离法
利用膜分离技术将大豆中的 蛋白质进行分离，该方法具 有操作简便、分离效果好等 优点。
提取流程
06
参考文献
参考文献
01
参考文献1
大豆蛋白的提取方法主要有碱溶酸沉法、膜分离法、离子交换法等。其
中，碱溶酸沉法是最常用的一种方法，通过调节pH值使大豆蛋白溶解，
再通过调节pH值使其沉淀析出。
02
参考文献2
大豆蛋白的含量测定方法主要有凯氏定氮法、双缩脲法、酚试剂法等。
其中，凯氏定氮法是最常用的一种方法，通过测定大豆样品中氮的含量
应用前景
分析大豆蛋白提取与含量测定的实际应用价值，探讨 其在食品、饲料等领域的应用前景。
• 引言 • 大豆蛋白的提取 • 大豆蛋白含量的测定 • 实验结果与分析 • 结论 • 参考文献
01
引言
大豆蛋白简介
大豆蛋白是大豆中的重要成分，具有 丰富的营养价值，包括提供人体所需 的氨基酸、蛋白质等。
大豆蛋白具有低脂肪、低胆固醇的优 点，对于降低心血管疾病风险、保持 健康体重等方面具有积极作用。
实验结果
实验结果显示，采用本实验方法提取的大豆蛋白 具有较高的纯度和收率，且操作简便，可用于实 际生产。
对未来研究的建议
深入研究不同溶剂和条件对大豆蛋白提取效果的影响，以进一步优化提取工艺。 探讨大豆蛋白的结构与功能特性，为其在食品、医药等领域的应用提供理论支持。
开展大豆蛋白与其他植物蛋白的比较研究，以全面了解其营养价值和功能特性。
碱提取法
利用碱性溶剂溶解大豆中的 蛋白质，该方法能够较好地 保持蛋白质的生物活性，但 操作较为复杂。
离子交换法
利用离子交换剂吸附大豆中 的蛋白质，该方法具有较高 的选择性，但需要使用大量 的离子交换剂。
膜分离法
利用膜分离技术将大豆中的 蛋白质进行分离，该方法具 有操作简便、分离效果好等 优点。
提取流程
06
参考文献
参考文献
01
参考文献1
大豆蛋白的提取方法主要有碱溶酸沉法、膜分离法、离子交换法等。其
中，碱溶酸沉法是最常用的一种方法，通过调节pH值使大豆蛋白溶解，
再通过调节pH值使其沉淀析出。
02
参考文献2
大豆蛋白的含量测定方法主要有凯氏定氮法、双缩脲法、酚试剂法等。
其中，凯氏定氮法是最常用的一种方法，通过测定大豆样品中氮的含量
应用前景
分析大豆蛋白提取与含量测定的实际应用价值，探讨 其在食品、饲料等领域的应用前景。
大豆蛋白质的提取加工课件
件下可减慢变性速度。因此用有机溶剂沉淀蛋白
质时应在低温条件下进行。如利用丙酮沉淀蛋白
质时，必须在0～4℃低温下进行，丙酮用量一般
10倍于蛋白质溶液体积。蛋白质被丙酮沉淀后，
应立即分离，否则蛋白质会变性。
大豆蛋白质的提取加工
第二节 传统大豆制品的加工
大豆蛋白质的提取加工
大豆蛋白质的提取加工
一 传统大豆制品加工的理论基础
大豆蛋白质的提取加工
（二）消泡剂 １、油脚 ２、油角膏 ３、硅有机树脂 ４、脂肪酸甘油脂
大豆蛋白质的提取加工
三 豆腐的制作 原料 清理除杂
计量
浸泡
水洗
磨浆 过滤 煮浆 点浆 蹲脑
成型 豆腐 四 豆腐渣和黄浆水的综合利用 （一）豆腐渣的综合利用：提取膳食纤维；发酵
生产核黄素等 （二）黄浆水的综合利用：发酵生产面包酵母，
大豆蛋白质的提取加工
3有机溶剂引起变性：用醇类等亲水性溶剂 处理，蛋白质变性程度高；反之则反。
此外，还有强酸强碱引起的蛋白质发生氨 基酸链断裂而变性等
大豆蛋白质的提取加工
极性强的有机溶剂能破坏蛋白质的水化层而 使蛋白质沉淀。在等电点时沉淀效果更好。常用 的有机溶剂：丙酮、乙醇
注意事项：
常温下有机溶剂可使蛋白质变性，低温条
4乳化性：以原大豆经研磨制成豆乳，其中油脂并 不分离，蛋白质的乳化性起决定作用。
大豆蛋白质的提取加工
5吸油性：使油脂含量较高的产品不走油， 在贮藏期间保持稳定。
6发泡性：分离大豆蛋白在10min内可使体 积增加至620ml/kg，但时间再长，体积则 开始下降。
7漂白性：生豆粉中含有较高的脂肪氧化酶， 可以分解产中，就是利用大豆蛋白质的亲 水性原理，在水的作用下制成豆浆。然后 通过煮浆，使豆乳中的蛋白质分子的部分 肽键失去折叠状态，再借助凝固剂的作用 使大豆蛋白质粒子沉淀聚集成网状结构， 形成一种似固态的凝胶体——豆脑。
毕业论文--不同色泽豆蛋白含量测定及比较PPT课件
不同色泽大豆蛋白含 量测定及比较
研究背景
研究表明大豆蛋白对心血管疾病、癌
症、更年期综合症、醇中毒症等均有一 定疗效，也有助于降低血浆胆固醇水平、 有助促进骨质健康、有促进肾功能的效果 [1]。由于大豆蛋白具有良好的溶解性、乳 化性、起泡性、持水性和凝胶性等特性， 被广泛应用肉制品和焙烤制品等食品中[2]。
实验方法
取三种不同色泽大豆，磨粉，实验时每 种大豆设三个重复样品，共九个样品，做 标记。实验处理完成时依次进行吸光度值、 蛋白含量、蛋白含氮量的测定。最后计算 蛋白干粉得率和样品中蛋白含氮量。实验 重复三次。
实验公式
（1）粗蛋白含量的计算 粗蛋白含量 (mg/100g)=Y×Va/(Vx×W)×0.001×100 ——公式1 （2）蛋白干粉得率的计算 蛋白干粉得率(％)=(提取的大豆蛋白干粉质 量／用于蛋白提取的大豆粉质量) ×100% ——公式2
参考文献
[1]沈剑敏.生物化学与分子生物学实验.兰州大学出版 社,2009:119-121. [2]朱文娴,周相玲.不同品种差异对大豆分离蛋白得率 的影响[J].食品科学,2004,22-27. [3]李桂菊,王晓强,何启刚,刘顺湖.碱溶时间对大豆蛋 白提取率和得率的影响.安徽农业科学,Journal of Anhui Agr sci.2011,39(4): 2292-2293,2296. [4]周红霞.大豆蛋白质的提取工艺研究[期刊论文]-中 国饲料,2009(06). [5]张志良,李小方.植物生理学实验指导.高等教育出 版社,2009:120-122
色由红色转变为深蓝色最大吸收峰为595nm。 蛋白质含量在1~1000ug范围内，蛋白质-染 料复合物在595nm处的吸光度与准蛋白质的 含量成正比，符合比尔定律。因此可用考 马斯亮蓝法测定碱溶蛋白粗提液浓度[3]。 最后，采用微量凯氏定氮法测定大豆蛋 白的含氮量[4]。当蛋白质与浓硫酸共热时， 经一系列的分解、碳化和氧化还原反应等 复杂过程，使氮转变成氨，并进一步
研究背景
研究表明大豆蛋白对心血管疾病、癌
症、更年期综合症、醇中毒症等均有一 定疗效，也有助于降低血浆胆固醇水平、 有助促进骨质健康、有促进肾功能的效果 [1]。由于大豆蛋白具有良好的溶解性、乳 化性、起泡性、持水性和凝胶性等特性， 被广泛应用肉制品和焙烤制品等食品中[2]。
实验方法
取三种不同色泽大豆，磨粉，实验时每 种大豆设三个重复样品，共九个样品，做 标记。实验处理完成时依次进行吸光度值、 蛋白含量、蛋白含氮量的测定。最后计算 蛋白干粉得率和样品中蛋白含氮量。实验 重复三次。
实验公式
（1）粗蛋白含量的计算 粗蛋白含量 (mg/100g)=Y×Va/(Vx×W)×0.001×100 ——公式1 （2）蛋白干粉得率的计算 蛋白干粉得率(％)=(提取的大豆蛋白干粉质 量／用于蛋白提取的大豆粉质量) ×100% ——公式2
参考文献
[1]沈剑敏.生物化学与分子生物学实验.兰州大学出版 社,2009:119-121. [2]朱文娴,周相玲.不同品种差异对大豆分离蛋白得率 的影响[J].食品科学,2004,22-27. [3]李桂菊,王晓强,何启刚,刘顺湖.碱溶时间对大豆蛋 白提取率和得率的影响.安徽农业科学,Journal of Anhui Agr sci.2011,39(4): 2292-2293,2296. [4]周红霞.大豆蛋白质的提取工艺研究[期刊论文]-中 国饲料,2009(06). [5]张志良,李小方.植物生理学实验指导.高等教育出 版社,2009:120-122
色由红色转变为深蓝色最大吸收峰为595nm。 蛋白质含量在1~1000ug范围内，蛋白质-染 料复合物在595nm处的吸光度与准蛋白质的 含量成正比，符合比尔定律。因此可用考 马斯亮蓝法测定碱溶蛋白粗提液浓度[3]。 最后，采用微量凯氏定氮法测定大豆蛋 白的含氮量[4]。当蛋白质与浓硫酸共热时， 经一系列的分解、碳化和氧化还原反应等 复杂过程，使氮转变成氨，并进一步
2020年大豆蛋白的提取、干燥、性质测定实验(课件)
2020年大豆蛋白的提取、干燥、性质测定实验（课件）大豆蛋白的提取、干燥、性质测定实验摘要：以大豆为原料,采用碱提酸沉法提取大豆蛋白，以蛋白质提取率为指标，通过查阅文献确定了提取大豆蛋白的最佳工艺:35摄氏度下，ｐＨ 10 ，浸提时间40 min, 液料比2０:1( ｍＬ/g)。
将提取出来的大豆蛋白用真空冷冻干燥装置进行干燥，通过前后称重，计算大豆蛋白的提取率。
利用提取出来的大豆分离蛋白进行大豆蛋白的性质测定实验。
食品体系中的大豆蛋白所具有的功能性如下:功能性质作用方式食品体系溶解度蛋白质溶解性能，与pH等相关饮料类乳化性脂肪乳状液的形成以及稳定肉类、酱类、汤类持水性游离脂肪的吸附肉类、酱类起泡性形成稳定膜、固定气体搅打奶油、甜食粘度增稠作用汤类、肉汁凝胶蛋白质基质的形成凝乳、乳酪凝聚—粘附性蛋白质作为粘附剂香肠、焙烤制品粘弹性面筋中的疏水键，凝胶中的二硫键肉类、焙烤本组决定利用提取的大豆分离蛋白测定大豆蛋白的持水性.关键词: 大豆蛋白、碱提酸沉、真空冷冻干燥、持水性正文：实验材料仪器：天平、烧杯、量筒、玻璃棒、pH试纸、Sigmａ离心机、4℃冰箱、1号离心管、20ｍｌ离心管、５0ml离心管、真空冷冻干燥箱材料：大豆粉、蒸馏水、氢氧化钠溶液、盐酸溶液实验步骤一、大豆蛋白的提取原理：大豆分离蛋白的生产方法常见的有: 超滤膜法、离子交换法、碱溶酸沉法，其中碱溶酸沉法是我国普遍采用的生产工艺。
此法能够有效地提高产品得率，能充分利用蛋白资源。
生产的分离蛋白不仅除去了可溶性糖类，还除去了不溶性聚糖，因而蛋白质含量高.该种工艺主要是基于调解溶液的 p H 值, 从而调解蛋白质的溶解度，在pH 值调至4。
5 左右时, 由于蛋白质处于等电点状态而凝集沉淀下来, 经分离后得到蛋白沉淀物，再经洗涤、中和、灭菌、干燥即得分离蛋白产品.......感谢聆听1、用电子天平称取大豆粉末1０.０1ｇ,加入２0０ｍl蒸馏水，即液料比为２0:１，搅匀.2、取４０%的氢氧化钠１0ｍl，加入100ml蒸馏水进行稀释，配制成稀碱溶液待用.3、取出pＨ试纸，用配制的稀碱溶液将大豆液料的pH调至10.4、用玻璃棒搅拌液料40min,以使其中的碱溶蛋白充分浸提出来.5、将液料在离心机中30０0r／mｉn离心15min,取其上清液,即蛋白液。
蛋白质含量的测定完整ppt
度，然后抽滤，在3000rpm2离心20分钟0.，2上层清液0为.提8取液，5待0用。 甲5.0mL，混合后 称度取，小 然白后菜抽1滤-4，克在（3菜00杆0r2p-m43克离，心菜20叶分1钟0-2.，克4上）层置清于液研0为钵.提中6取，液加，15m0待0L用蒸。馏放水在置低1温0下分研钟磨成，匀加浆，全部转移至50mL容量瓶中，并定容至刻
以1号为参比，测A750的值4。
0.6
0.4 150 入试剂乙0.5mL，
0进m一L于步试掌管握中分（光三光次度重法复—）—5，求分标别准加曲5线0. .、8准确测定0未.知2样品、20正0 立即混合，37度
0mL，混合后放置10分钟，6加入试剂乙1.0.0
0 250
蛋白质浓度可以从它们的物理化学性质，如折射率、比重、紫
实验步骤 1.标准曲线的制作：按下表操作
吸取提取液和稀释250倍的管血清液各1B. SA
H2O Pr.
步
5mL，立即混合，37度恒号温反应2（0分3钟0。0μg
含量
骤
一 Folin-酚试剂法（Lowry法） Folin-酚试剂反应等方法来求算。
／mL）
μg
蛋称白取质 小浓白度菜可1-4以克从（它菜们杆的2物-41克理，化菜学叶性1质-20，克如）折置射于率研1、钵.比中0重，、加紫5m0L蒸馏各水在试低管温下加研入磨成试匀剂浆，全部转移至50mL容量瓶中，并定容至刻
Folin-酚法所用的试剂由两部分组成。试剂甲相当于双缩脲试 剂，可与蛋白质中的肽键起显色反应。试剂乙（磷钨酸和磷钼 酸混合液）在碱性条件下极不稳定，易被酚类化合物还原而呈 蓝色反应（钼蓝和钨蓝的混合物）。由于蛋白质中含有带酚基 的酪氨酸，故有此颜色反应。因此，用Folin-酚法测定蛋白质 含量灵敏度较高。
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10
3、器材：
试管10支 试管架一个 移液管：（5ml、1ml） 移液管架 洗瓶 恒温水浴 723型分光光度计
11
Folin-酚法测定蛋白质含量工作曲线的制作：
取6支试管（干燥的）按下表顺序分别加入各种试剂并进行反应和测定 K=0.308 B=--0.009 R*R=0.9909
试管号 0 1 2 3 4 5 S
大豆蛋白的提取与含量测定
指导老师 赵建军 曲宁 夏婷 孟繁新
1
蛋白质性质与应用技术关系图
肽
氨基酸
疏 水 性
纸 层 析
亲 水 性
酸 碱
酶
极性
蛋白质
电荷
分 形子 状量
离子交换层析 电泳
离 心
凝 胶 层
析
2
一、大豆蛋白的提取
目的要求
1、掌握大豆蛋白的提取原理和方法 2 、计算粗提产率 2、学习计算蛋白质收率
1
1
1
Hale Waihona Puke 00） 1 Folin-甲试剂 （ml
1
1
于室温下不停地振荡10min
4 Folin-乙应用液（ml）
4
4
立即摇匀，在55℃恒温水浴中保温5min，用流水冷却1min后， 测A650
9
4、Folin试剂乙：在2升磨口回流装置的烧瓶内，加钨酸钠 （NaWO4·2H2O）100g，钼酸钠（NaMoO·2M2O）25g， 蒸馏水700ml，85%的磷酸50ml，浓盐酸100ml，充分 混合后，小火回流10小时，再加硫酸锂（Li2SO4）150g， 蒸馏水50ml及数滴溴。然后开口沸腾15min，以驱除过量 的溴，冷却后定容到1000ml，过滤后呈金黄色，于棕色瓶 中保存，可使用多年。
4
4
4
4
4
立即摇匀，在55℃恒温水浴中保温5min，用流水冷却1min后，测A650
A650值
？ 0 0.184 0.317 0.425 0.536 0.668
12
2、样品测定：取三支试管（平行）各加入待测的蛋白质样品液1ml和空
白 ，如下操作：
试管号
空白
1
2
蛋白质稀释液（ml） （mg)
0
PH7.8的buffer（ml）
实验原理
大豆中含有丰富的蛋白质、根据提取方法及其其性质的不同， 可以分为水溶蛋白、盐溶蛋白、醇溶蛋白、碱溶蛋白。将豆粉依 次用上述溶剂提取，并用有机溶剂沉淀，可制得各部分蛋白质的 干粉。本实验主要是水溶提取大豆蛋白。
称出提出蛋白质的重量，已知原料重量，可以求出蛋白质的收 率。
3
试剂和器材
1、试剂 （1）10%Nacl （2）0.2%NaoH （3）75%乙醇 （4）6mol/L HCL （5） 1mol/L HCL （6）1 mol/L NaoH
上述制备的Folin试剂乙的贮备液浓度一般在2mol/L左右， 几种操作方案都是把Folin试剂乙稀释至1mol/L的浓度作为 应用液，我们是把贮备液于作用前稀释18倍，使之浓度为 0.1mol/L略高。这种稀释18倍后的Folin试剂乙就是下文称 之为应用液，Folin试剂乙贮备液浓度的标定，一般是以酚 酞 为 指 示 剂 ， 用 Folin 试 剂 乙 去 滴 定 1 mol/L 左 右 的 标 准 NaOH溶液，当溶液颜色由红变为紫灰色，再突然变成黑绿 既为终点。如果用NaOH去滴定Folin乙，终点不太好掌握， 溶液的颜色是由浅黄色变为浅绿色，再变为灰紫色为终点。
2、器材 （1）离心机 （2）烧杯 （3）滴管 （4）PH试纸等
4
操作方法
1、水抽提 将豆粉5g用约50毫升左右的蒸馏水少量多次的添加
搅 拌 ， 常 温 下 搅 拌 抽 提 1 5 min， 3800r/min 离 心 15min，取上清液，如上清液不清澈再经过滤。取上 清液1毫升稀释100倍留做蛋白测定。
蛋白质标准液（ml） 0 （mg) 0
提取的样品液（ml）
0.2 0.04
0.4 0.08
0.6 0.12
0.8
1.0
0.16 0.2
0.8
PH7.8的buffer（ml）
1 0.8 0.6 0.4 0.2
0
0.2
） Folin-甲试剂 （ml
1
1
1
1
1
1
1
于室温下不停地振荡10min
Folin-乙应用液（ml） 4
其余上清液加入等体积在冰箱中预冷的丙酮，用滴 管少量多次慢慢滴加（搅拌），用6mol/L和1 mol/L HCL， 调 PH4.5~5.0，3800r/min， 离 心 1 5 min， 收集沉淀物，反复用丙酮搅拌洗涤离心2次，放入表面 皿上，60度烘干，得到粉末状蛋白质干粉，称重，计 算粗产率。
5
8
试剂和器材
1、材料： 本实验所提取大豆蛋白水提取液，经合适稀释至可测 定范围。
2、试剂： （1）0.03mol/L PH7.8的磷酸缓冲液。 （2）200μg/ml的标准酪（牛血清）蛋白溶液。 （3）Folin试剂甲：（俗称碱性铜试剂）：10g NaoH溶于400ml水中，再加50gNa2CO3； 称0保.2存取5可g0C用.u5一SgO个酒4月；石。以酸上钾两溶钠液溶混于合8定0容m到lH520O0中m，l，再冰箱加
蛋白质产物重量
蛋白质产率=
×100%
原料总重量
Folin酚法测定蛋白质浓度见第二实验部分
6
二、Folin酚法测定蛋白质含量
目的要求
掌握Folin酚法测定蛋白浓度的原理和方法
实验原理
蛋白质浓度可以从它们的物理化学性质，如比重、紫外 吸收，折射率等测定而得知；或用化学方法，如定氮、双缩脲 反应，Folin酚试剂反应等方法来计算。其中双缩脲法和Folin 酚法是一般实验室中常用的方法，它们操作简便，迅速，不需 要复杂而昂贵的仪器。Folin酚法灵敏度高，比双缩脲法灵敏 100倍。
Folin酚法所用试剂是由两部分组成，试剂甲相当于双缩 脲试剂，可与蛋白质中的肽链起显色反应。试剂乙中的磷钼酸 和磷钨酸在碱性条件下不稳定，易被酚类还原而呈兰色（钼兰 和钨兰混合物）。
7
由于蛋白质中含有带酚基的酪氨酸还原呈兰色，溶液 兰色的深浅与蛋白浓度成正比。因此用Folin酚法测定 蛋白质含量，灵敏度较高。 样品中含酚类化合物及柠檬酸均有干扰作用，如果样 品酸度较高则显色较浅，要提高碳酸钠一氢氧化钠的 浓度。此法也可测定溶液中酪氨酸和色氨酸的浓度。 Folin酚法有不少个别改进的操作方法，但基本原理都 是一个，只是在各溶液的浓度及填加量上、保温的温 度及保温时间上有所不同而已，本实验所介绍的是本 室常用的，灵敏度较高的操作方法。
3、器材：
试管10支 试管架一个 移液管：（5ml、1ml） 移液管架 洗瓶 恒温水浴 723型分光光度计
11
Folin-酚法测定蛋白质含量工作曲线的制作：
取6支试管（干燥的）按下表顺序分别加入各种试剂并进行反应和测定 K=0.308 B=--0.009 R*R=0.9909
试管号 0 1 2 3 4 5 S
大豆蛋白的提取与含量测定
指导老师 赵建军 曲宁 夏婷 孟繁新
1
蛋白质性质与应用技术关系图
肽
氨基酸
疏 水 性
纸 层 析
亲 水 性
酸 碱
酶
极性
蛋白质
电荷
分 形子 状量
离子交换层析 电泳
离 心
凝 胶 层
析
2
一、大豆蛋白的提取
目的要求
1、掌握大豆蛋白的提取原理和方法 2 、计算粗提产率 2、学习计算蛋白质收率
1
1
1
Hale Waihona Puke 00） 1 Folin-甲试剂 （ml
1
1
于室温下不停地振荡10min
4 Folin-乙应用液（ml）
4
4
立即摇匀，在55℃恒温水浴中保温5min，用流水冷却1min后， 测A650
9
4、Folin试剂乙：在2升磨口回流装置的烧瓶内，加钨酸钠 （NaWO4·2H2O）100g，钼酸钠（NaMoO·2M2O）25g， 蒸馏水700ml，85%的磷酸50ml，浓盐酸100ml，充分 混合后，小火回流10小时，再加硫酸锂（Li2SO4）150g， 蒸馏水50ml及数滴溴。然后开口沸腾15min，以驱除过量 的溴，冷却后定容到1000ml，过滤后呈金黄色，于棕色瓶 中保存，可使用多年。
4
4
4
4
4
立即摇匀，在55℃恒温水浴中保温5min，用流水冷却1min后，测A650
A650值
？ 0 0.184 0.317 0.425 0.536 0.668
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2、样品测定：取三支试管（平行）各加入待测的蛋白质样品液1ml和空
白 ，如下操作：
试管号
空白
1
2
蛋白质稀释液（ml） （mg)
0
PH7.8的buffer（ml）
实验原理
大豆中含有丰富的蛋白质、根据提取方法及其其性质的不同， 可以分为水溶蛋白、盐溶蛋白、醇溶蛋白、碱溶蛋白。将豆粉依 次用上述溶剂提取，并用有机溶剂沉淀，可制得各部分蛋白质的 干粉。本实验主要是水溶提取大豆蛋白。
称出提出蛋白质的重量，已知原料重量，可以求出蛋白质的收 率。
3
试剂和器材
1、试剂 （1）10%Nacl （2）0.2%NaoH （3）75%乙醇 （4）6mol/L HCL （5） 1mol/L HCL （6）1 mol/L NaoH
上述制备的Folin试剂乙的贮备液浓度一般在2mol/L左右， 几种操作方案都是把Folin试剂乙稀释至1mol/L的浓度作为 应用液，我们是把贮备液于作用前稀释18倍，使之浓度为 0.1mol/L略高。这种稀释18倍后的Folin试剂乙就是下文称 之为应用液，Folin试剂乙贮备液浓度的标定，一般是以酚 酞 为 指 示 剂 ， 用 Folin 试 剂 乙 去 滴 定 1 mol/L 左 右 的 标 准 NaOH溶液，当溶液颜色由红变为紫灰色，再突然变成黑绿 既为终点。如果用NaOH去滴定Folin乙，终点不太好掌握， 溶液的颜色是由浅黄色变为浅绿色，再变为灰紫色为终点。
2、器材 （1）离心机 （2）烧杯 （3）滴管 （4）PH试纸等
4
操作方法
1、水抽提 将豆粉5g用约50毫升左右的蒸馏水少量多次的添加
搅 拌 ， 常 温 下 搅 拌 抽 提 1 5 min， 3800r/min 离 心 15min，取上清液，如上清液不清澈再经过滤。取上 清液1毫升稀释100倍留做蛋白测定。
蛋白质标准液（ml） 0 （mg) 0
提取的样品液（ml）
0.2 0.04
0.4 0.08
0.6 0.12
0.8
1.0
0.16 0.2
0.8
PH7.8的buffer（ml）
1 0.8 0.6 0.4 0.2
0
0.2
） Folin-甲试剂 （ml
1
1
1
1
1
1
1
于室温下不停地振荡10min
Folin-乙应用液（ml） 4
其余上清液加入等体积在冰箱中预冷的丙酮，用滴 管少量多次慢慢滴加（搅拌），用6mol/L和1 mol/L HCL， 调 PH4.5~5.0，3800r/min， 离 心 1 5 min， 收集沉淀物，反复用丙酮搅拌洗涤离心2次，放入表面 皿上，60度烘干，得到粉末状蛋白质干粉，称重，计 算粗产率。
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试剂和器材
1、材料： 本实验所提取大豆蛋白水提取液，经合适稀释至可测 定范围。
2、试剂： （1）0.03mol/L PH7.8的磷酸缓冲液。 （2）200μg/ml的标准酪（牛血清）蛋白溶液。 （3）Folin试剂甲：（俗称碱性铜试剂）：10g NaoH溶于400ml水中，再加50gNa2CO3； 称0保.2存取5可g0C用.u5一SgO个酒4月；石。以酸上钾两溶钠液溶混于合8定0容m到lH520O0中m，l，再冰箱加
蛋白质产物重量
蛋白质产率=
×100%
原料总重量
Folin酚法测定蛋白质浓度见第二实验部分
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二、Folin酚法测定蛋白质含量
目的要求
掌握Folin酚法测定蛋白浓度的原理和方法
实验原理
蛋白质浓度可以从它们的物理化学性质，如比重、紫外 吸收，折射率等测定而得知；或用化学方法，如定氮、双缩脲 反应，Folin酚试剂反应等方法来计算。其中双缩脲法和Folin 酚法是一般实验室中常用的方法，它们操作简便，迅速，不需 要复杂而昂贵的仪器。Folin酚法灵敏度高，比双缩脲法灵敏 100倍。
Folin酚法所用试剂是由两部分组成，试剂甲相当于双缩 脲试剂，可与蛋白质中的肽链起显色反应。试剂乙中的磷钼酸 和磷钨酸在碱性条件下不稳定，易被酚类还原而呈兰色（钼兰 和钨兰混合物）。
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由于蛋白质中含有带酚基的酪氨酸还原呈兰色，溶液 兰色的深浅与蛋白浓度成正比。因此用Folin酚法测定 蛋白质含量，灵敏度较高。 样品中含酚类化合物及柠檬酸均有干扰作用，如果样 品酸度较高则显色较浅，要提高碳酸钠一氢氧化钠的 浓度。此法也可测定溶液中酪氨酸和色氨酸的浓度。 Folin酚法有不少个别改进的操作方法，但基本原理都 是一个，只是在各溶液的浓度及填加量上、保温的温 度及保温时间上有所不同而已，本实验所介绍的是本 室常用的，灵敏度较高的操作方法。