高速逆流色谱

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高速逆流色谱技术

l 高速逆流色谱是液相色谱的一种新技术，无需载体，从几种色谱原理方法可以清晰说明。

大约50年前，根据对两种液体进行分配的理念，产生了两种相似的方法：逆流分配技术和液-液色谱分配技术，即：逆流色谱和液相色谱。

30年前，日本Sanki Engineering Ltd.利用前一种技术开发出了高性能的逆流色谱仪（HPCPC），它结合了液相色谱中的快速、高效和先进技术。

HPCPC尤其在利用色谱技术进行半制备和全制备的应用中倍受瞩目，它和采用色谱柱技术的液相色谱在四个方面具有显著优势：● 无样品损失：因为流动相和固定相都是液体，样品可以全部回收。

● 大容量和高的分离能力：流动相和固定相的体积比明显很高，从而无需更大的理论塔板数，就可以获得更大的容量和更高的分离能力。

● 十分灵活的两相系统：（两种、三种、四种溶剂混合）为了获得一种纯的化合物，实验中需要比较灵活的更改流动相，HPCPC可以很方便地调整两相的极性。

● 溶剂消耗少：相对于色谱柱制备系统，对于同样的制备量，HPCPC的溶剂消耗量只有十分之一，使用逆流色谱在实验室完成分离后，可以直接放大到生产规模。

● 固定相价格低：另一个显著优点是逆流色谱的固定相是溶剂，相比色谱柱中的填充材料价格低很多；而且固定相可以很容易再生，一些添加的物质如手性选择剂或复杂的配位体可以无损失地回收，国际上出版的论文可以提供十分有用的信息和应用参考。

新型的高速逆流色谱仪HPCPC广泛地应用于化学领域的纯化，如抗生素、缩氨酸、丹宁酸、皂角苷、油脂、药品等，将来的发展可以预见更大规模和产量的HPCPC设备出现，在化学领域将更加广泛地应用，如手性药物分离等。

与传统制备液相的优势● 逆流色谱仪HPCPC十分快速由于固定相溶剂通过离心力保留在分配通道中，可以不用顾及分离精度的高低要求而让流动相的流速保持很高。

● 明显优于传统制备液相由于逆流色谱仪HPCPC不需要固定相，不会出现对十分昂贵的样品产生不可逆转的保留，而在传统色谱柱的液相色谱中，经常出现的变性和分解现象在逆流色谱不会产生，同时保留了原来的生物活性。

高速逆流色谱法

HSCCC中溶质可以进入并接触到液态固定相的整个体积；HPLC中，溶质不能进入到固体支撑体内部，仅涂渍在表面的有机层的液-固界面 HPLC有过载现象；
HSCCC进样体积可达到柱体积的20%，广泛用于制备性分离。
参数
固定相机理
溶质与固定相作用
上样量分离效率
操作费用危险性
HSCCC
色谱分离是依据被分离物在两相中分配系数的不同而进行；
逆流色谱是利用物质在两相液体中分配系数的不同实现分离；
分离也可以依据被分离物在一个含有沉淀剂的浓度梯度变化的单一溶剂中的溶解度的不同而实现。
（前提：沉淀剂浓度梯度移动的速度远低于溶剂流速）
溶解度具有很小差异的物质，经过在柱中反复的沉淀和溶解即可达到分离。
二、基本原理
现代逆流色谱仪器体系： 1. 流体静力学平衡体系
2. 流体动力学平衡体系（HSCCC体系）仪器的两个特征：
a 有一个或多个缠绕有多层聚四氟乙烯管的线轴； b 没有旋转密封接头，有一个安装有两个旋转轴的齿轮传动装置，
能产生一个可变的离心力场。
通过公转、自转（同步行星式运动）产生的二维力场，保留两相中的其中一相作为固定相；
广义定义： 1. 任何利用两相不混溶液体的色谱技术； 2. 其中一相以一种相对均匀的方式纵向分布在一根空管
或一系列的腔体中； —— 固定相 3. 同时另一相以一定的速度通过第一相并与之混合。
—— 流动相
减少了溶质分子与固体支撑体之间各种复杂的相互作用；
不仅可以获得高纯度的分离组分；
同时具有较高的回收率和重现性。
离心沉淀色谱（centrifugal precipitation chromatography, CPC）是一种建立在类似于逆流色谱的不用固体支撑体的开放性通道基础上的沉淀和溶解色谱。

高速逆流色谱

1.6 葛 Pueraria lobata 葛根素（puerarin）（黄酮） 1.7 苹果 Malus pumila 原矢车菊素(procyanidin)；Procyanidin A及procyanidin
B。 1.8 牛膝 Achyranthes bidentata 牛膝多糖 (多糖) 1.9 宽叶羌活 Notopterygium forbessi notopterol、isoimperatorin。 1.10 红豆杉粗提物 10-脱乙酰浆果紫杉素（10-deacelylbaccatin），紫杉醇
流速范围:0.1-30ml/min 分离流速：2.0-4.0ml/min；压力:0-2MPa
紫外检测器波长：使用汞灯 - 滤光片选择 254 、 280nm ( 标配 )
多种滤光片可选： 313 、 365 、 405 、 436 、 546nm( 选购 )
温控模块（接循环水浴）：温度调控范围 15 ～ 40 ℃，精度 0.5 ℃ ，
轻的为上相，重的为下相），一相为固定相，另一相为流动相。 b) 被分离物质的分配系数（K）范围在0.5-2。K=Cu/CL， Cu是上相中溶质浓度，CL是下相中溶质浓度。K＜＜ 0.5 会导致峰分离度的下降，而K＞＞2，会使保留时间太长，样品峰过宽。

表 1 中列举了常用的溶剂系统。查找溶剂系统可以从左边
步骤2:溶剂系统的优化
区域
化合物极性
A
强极性
B
中极性
C
非极性
溶剂系统正己烷/正丁醇/甲醇/水正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水
正己烷/乙腈
步骤3:溶剂比例的优化
一次只改变一种溶剂的量取少量样品在试管中进行分配系数实验 TLC或HPLC测定实验结果

高速逆流色谱在天然产物分离提取中的应用-PPT

作者王凤美
原料丹参水溶性成分丹酚酸类物质
溶剂体系正己烷-醋酸乙酯-水-甲苯 (1.5:5:5:1.5)
分离物质丹酚酸 B
Tian G L 山茱萸
乙酸乙酯-正丁醇-水(5:1.8:6) 乙酸乙酯-乙醇-水(5:0.5:6)
没食子酸
黄健光
正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水(7:3:6:4) 邻苯二酚和对苯二酚
溶剂系统
正己烷-乙酸乙酯-乙腈-水（2：2:1:0.6:2）乙酸乙酯-乙醇-水（15:1:15）乙酸乙酯-水（1:1）正丁醇-乙酸乙酯-水（2:8:5）乙酸乙酯-水（1:1）乙酸乙酯-乙醇-水（4:1:5）石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水（1:1:1.2:0.8）和石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水（1:1:1.4:0.6）梯度洗脱
原料吴茱萸黄花乌头附子金果榄
绿茶
溶剂体系正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水 (5∶5∶7∶5) 正己烷-乙酸乙酯-甲醇-0.2mol/L HCl (1∶3.5∶2∶4.5) 氯仿-甲醇-0.3mol/L 盐酸 (4:3:2) 氯仿-甲醇-0.2mol/L 盐酸 (2:1:1) 氯仿-甲醇-0.2mol/L 盐酸
Liu R M 秦皮
正丁醇-甲醇-0.5%乙酸(5:1.5:5)
秦皮素、七叶甙、秦皮甙和七叶素
3、7 其她类化合物得分离提取
作者佘佳红
原料银杏叶
溶剂体系氯仿-甲醇-水(4:3:2)
分离物质白果内酯
Du Q Z
穿心莲
正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水(1:4:2.5:2.5)
穿心莲内酯和新穿心莲内酯
大家应该也有点累了，稍作休息
大家有疑问的，可以询问和交流
12
a、仪器对保留值得影响(外因)

高速逆流色谱操作步骤

高速逆流色谱操作步骤高速逆流色谱（High-Performance Counter-Current Chromatography，HPCCC）是一种液-液色谱技术，通过在两种不同的不溶溶剂相之间的弯曲螺旋柱中建立逆流运动，实现分离和纯化化合物。

以下是一般的高速逆流色谱的操作步骤：1.系统准备：•确保逆流色谱系统（HPCCC系统）处于良好状态，所有连接都紧固，管路无泄漏。

•根据实验需要选择合适的溶剂相，并准备好两相的溶液。

2.填充柱体：•将两相的溶液分别注入到弯曲螺旋柱的两个相对侧。

柱内建立液-液平衡。

3.样品加载：•在逆流色谱系统中加入待分离的混合物样品。

4.逆流运行：•开始逆流运行，通过外部离心力或其他手段，让两相的流动方向相反。

这样，溶液就会在弯曲螺旋柱中形成逆流。

5.分离：•样品成分在两相中根据其在两相之间的分配系数进行分离。

相对溶剂流动的方向，样品在柱内依次进入高和低浓度的相中，实现分离。

6.收集分离产物：•根据需要，通过调整逆流色谱系统的操作参数，收集某个时间点或某个分离峰的产物。

7.监测：•监测分离过程，可以使用检测器如紫外可见光谱仪（UV-Vis）等进行在线监测。

8.系统维护：•在实验过程中，注意监测溶剂消耗情况，必要时进行补充。

对于柱体的维护和清洗也需要定期进行，以保证仪器的正常运行。

需要注意，高速逆流色谱是一种相对复杂的色谱技术，具体的操作步骤可能会因为使用的设备和实验条件而有所不同。

在进行高速逆流色谱实验时，建议参考具体的仪器操作手册和相关文献，确保按照正确的步骤进行操作。

高速逆流色谱技术

高速逆流色谱技术目录介绍 (1)高速逆流色谱的原理 (1)1.系统描述 (2)1.1主机 (2)1.2恒流泵 (2)1.3紫外检测器 (3)1.4恒温循环器 (3)1.5色谱工作站 (3)2.主机描述 (3)2.1操作 (4)2.1.1传感器控制面板 (4)2.1.2电源开关 (4)2.1.3样品进样口及样品出样口 (4)2.1.4进口 (4)2.1.5出口 (4)2.2六通阀 (4)2.3进样步骤 (8)2.4控制面板 (9)2.4.1功能键介绍 (9)2.4.2控制面板的操作 (9)2.5TBE-300B高速逆流色谱的工作流程 (10)3.安装 (10)3.1检查包裹 (10)3.2安装环境 (10)3.3连接管 (10)3.4连接保温系统的管路 (11)3.5连接信号线 (12)4.操作 (12)4.1准备 (12)4.2操作程序 (12)4.3系统平衡 (13)4.3.1单泵平衡 (13)4.3.2双泵平衡 (14)4.4样品分离 (14)5.维护 (14)5.1清洗系统 (14)5.2警告 (15)6.系统特性及工作参数 (15)附录A (15)附录B (16)附录C (17)同田生物介绍逆流色谱（CCC）是一种无固体载体支持的液-液分配色谱技术。

与其他柱色谱相比，逆流色谱不会导致不可逆吸附，样品，变性，污染及等问题。

除此之外，它能够分离分子量从小变到大的化合物，甚至一些生物大分子。

高速逆流色谱（HSCCC）是逆流色谱中的最新的发展。

高速逆流色谱不仅减少的分离时间，而且也极大地提高了分离度和制备能力。

高速逆流色谱的应用：1、制备性地分离毫克到克规模的样品；2、从粗样品中分离目标化合物；3、分离放射性同位素。

高速逆流色谱在分离天然产物中的优势：1、更加方便和迅速；2、不需要对样品进行前处理；3、液-液分配容积系统的选择广泛；4、因为没有固体载体，所以无死吸附，无污染；5、高的重现性及重复性。

高速逆流色谱技术综述

高速逆流色谱技术1.概述高速逆流色谱（high-speed counter current chromatography，简称 HSCCC），是20世纪70年代由美国国立卫生院（National Institute of Health，简称NIH）Ito博士首创，并且在最近10年之内发展迅速，是一种可在短时间内实现高效分离和制备的新型液-液分配色谱技术，这项技术可以达到几千个理论塔板数的。

它具有操作简单易行、应用范围很广、无需固体载体、产品纯度高、适用于制备型分离等特点。

自1982年第一台仪器问世，就开始了HSCCC的现代化进程。

HSCCC用于天然药物化学成分的分离始于1985年，到1989年达到一个高潮。

自2000年9月起国际逆流研究领域每隔2年举行一次世界逆流色谱学术会议。

近几年, 人们对健康的认识越来越深刻, 更多的人追求天然绿色的健康理念, 故HSCCC 作为一种对提取物污染小的制备技术, 它的应用越来越受到了人们的关注。

鉴于HSCCC的显著特点, 此项技术已被应用于生化、生物工程、医药、天然产物化学、有机合成、环境分析、食品、地质、材料等领域。

目前,HSCCC已从制备型发展到了分析型, 甚至是微量分析型, 应用范围也十分广泛[ 2]。

高速逆流色谱技术在我国的应用较早, 技术水平在国际领域也处于领先地位。

目前, 我国是世界上为数不多的高速逆流色谱仪生产国之一。

我国的深圳同田生化技术有限公司是全球第一家多分离柱高速逆流色谱仪专业生产企业。

公司拥有自主知识产权的高速逆流色谱专利技术, 现已研制并生产出TBE 系列分析型, 半制备型TBE 300，300A, 制备型TBE1000高速逆流色谱仪设备。

2.基本原理高速逆流色谱技术(HSCCC)是一种不用任何同态载体的液-液色谱技术，其分离原理是进行分离纯化时，首先选择预先平衡好的两相溶剂中的一相为固定相, 并将其充满螺旋管柱, 然后使螺旋管柱在一定的转速下高速旋转, 同时以一定的流速将流动相泵入柱内。

高速逆流色谱溶剂体系筛选及其联用技术

02 03
拓展高速逆流色谱与其他技术的联用范围
将高速逆流色谱与更多的分析技术联用，如红外光谱、拉曼光谱等，以实现对复杂样品中目标化合物的更全面、更准确的分析和鉴定。
拓展应用领域
将所建立的方法应用于更多领域的实际样品中，如环境污染物、生物大分子等，以拓展其应用范围和应用价值。同时，积极探索高速逆流色谱技术在其他领域中的潜在应用前景。
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研究高速逆流色谱溶剂体系筛选及其联用技术，对于提高天然产物、药物等复杂体系的分离纯化效率具有重要意义。
溶剂体系筛选是HSCCC技术中的关键环节，直接影响分离效果和分离纯度。
国内外研究现状及发展趋势
01
国内外学者在HSCCC溶剂体系筛选方面进行了大量研究，涉及不同类型的溶剂体系和实验条件。
时监测和分离纯化。
案例分析：成功应用实例分享
中药活性成分分离纯化
利用HSCCC-MS联用技术，成功从中药复杂体系中分离出多种活性ห้องสมุดไป่ตู้分，并进行结构鉴定和定量分析。
天然产物化学成分研究
利用HSCCC-NMR联用技术，对天然产物中的化学成分进行在线结构解析和定量分析，为天然产物的开发利用提供有力支持。
分离等。
实验结果可靠性
对实验结果的重复性、稳定性和准确性进行评估，确保实验结果的可靠性。
存在问题及改进方向
实验操作问题
反思实验过程中可能存在的操作不规范、误差较大等问题，提出改进措施，提高实验操作的准确性和可重复性。
溶剂体系选择局限性
讨论当前溶剂体系选择的局限性，探索更多可能的溶剂组合，以扩大高速逆流色谱的应用范围。
02 高速逆流色谱技术基础

高速逆流色谱分离技术

生药
HPLC法测定分配系数
AUi 2 VL AUi 2 VL Ki Ki A A V Ui 1 Ui 2 U A A V
Ui1 Ui 2 U
生药
溶剂系统选择的基本步骤
(1)首先预测要分离物质的极性, 溶解性特点，粗选几个溶剂体系。 (2)建立目标化合物的TLC、HPLC分析条件。（3）利用HPLC测定K，并计算容量因子a，2>K>0.5, a>2，能够获得理想的分离。（4）制备性分离。
利用一种特殊的流体动力学现象使互不混溶的两相溶剂(固定
相和流动相)在螺旋管中高效地接触、混合、分配和传递
其中固定相以一种相对均匀的方式分布在一根聚四氟乙烯管绕成的螺旋管中流动相以一定的速度通过固定相，并按照被分离物质分配系数的不同依次洗脱而获得分离
特殊的流体动力学
生药
固定相的保留
缺点：流动相流速低，每小时只有十几毫升；分离过程长，需要几十小时才能完成一次几个组分的分离．
生药
3.高速逆流色谱的原理
利用螺旋柱在行星运动时产生的离心力，使互不相溶的两相不断混合，同时保留其中的一相，利用恒流泵连续输入另一相，溶质在两相之间反复分配，按分配系数的次序，被依次洗脱。
生药
液－液分配色谱
利用螺旋管的方向性和同步行星式运动产生的二维离心力场形成的单向性流体动力学平衡（HDES）从而实现流动相高速移动时固定相的保留
生药
混合区：在靠近离心轴
心大约有四分之一的区域，两相的激烈混合
静置区：两相溶剂分成
两层，重相在外部，轻相在内部来自以1000转/分的速率进行旋转，在二维力场的作用下分离管柱内混合和传递的频率可达到17次/S，从而实现高效的分离

高速逆流色谱分离纯化抗生素

高速逆流色谱分离纯化抗生素
内容提要
一高速逆流色谱技术简介二溶剂选择在逆流色谱中的重要性三高速逆流色谱技术分离纯化抗生素实
例
一高速逆流色谱技术简介高速逆流色谱( , )
多层盘绕管；平衡物
优缺点（与等液固色谱技术比较)
优点
分离原理不同：互补性强
无需固体作固定相：不存在固体对样品组分的吸附、玷污、变性、失活、拖尾等现象，能实现很高的回收率，节省昂贵的材料消耗和溶剂消耗（的以下），运行使用的后续投入较低
实例：孢绿菌素()的分离
OH NH 2
O OH O OH
NH 2
O
OO
OH
O
R 1H 2C
R2 OH
OH
O
O O
OH OH
OH R3
O
O OH
O
OH HO
O
OH
O
OH
OH OH
O
CH 2OH
OH
OH
OH
OH
OH
O
O NH 2 OH
孢绿菌素：碱性，水溶性，抗菌和毛癣菌等。
化学结构：含七个糖元的元大环内酯化合物，主要有个组分，由于结构非常相似，用等方法难以分离。
二溶剂选择在高速逆流色谱中的重要性分离度: ( ) 提高分离度的方法
:() ,:
样品：极性、溶解度、纯度（预处理）溶剂：两相溶剂的体积应尽量相同，挥发性较强样品溶剂：沉降时间（<秒)，以得到满意的固定相保留率分配系数():上相中样品浓度下相中样品浓度
～, 最佳样品各组分间的分离因子( , 各组分的值之比)
19
Minut es
80 60 40 20 0 -20

高速逆流色谱仪介绍

e™ 分析型高速逆流色谱仪
•
利用专利的平衡和减震技术设计的分析型高速逆流色谱仪，高速旋转时保持最佳平衡，机械性能稳定，噪音低；
• •
分析型分离柱，单柱体积 30ml，分离快速，用于实验室快速分析和分离实验条件摸索；分离转速 1,500-1,800rpm,与实验室半制备型 OptiChrome 相当，可实现分离条件的直接放大；
江阴逆流科技有限公司
HSCCC-高速逆流色谱 OptiChrome™ 制备型高速逆流色谱仪
•
利用专利的平衡稳定技术设计的高速逆流色谱仪，高速旋转时保持最佳平衡，机械性能稳定，噪音低；
• •
二/三柱制备型，OptiChrome 型单柱体积 100~340ml，柱体积 300~1000ml，优化的仪器参数实现分离转速每分钟 1200 转，离心重力场>100g，以实现高固定相保留率和高分辨率；
固定相保留低，造成固定相载提高固定相保留率，增加样量低，严重影响制备通量，样品负载量难以满足制备要求；
分离条件摸索溶剂体系繁多，分离模式灵活，提供快速的条件摸索手段繁复耗时而在半制备实验条件摸索耗时和工艺放大途径；构建逆间耗试剂耗样品，效率非常低；流色谱分离纯化数据库
HSCCC-高速逆流色谱 RCF 为离心重力场（相对离心力）, R 为公转半径，即分离柱的自转轴与公转主轴之间的距离（mm 为单位），为公转角速度（rpm，转/分钟）。
高速逆流色谱系统构成下图为常见的高速逆流色谱分离系统构成示意图：
中低压恒流泵
高速逆流色谱仪
紫外检测器
色谱工作站
溶剂
• •
制备样品量达克级；单位柱体积洗脱时间 30min，分离速度快，制备效率高；与 FastChrome™ 分析型 HSCCC 具有线性放大关系，在分析型仪器上摸索的分离体系和分离条件能够直接放大；

高速逆流色谱法的概况及应用

高速逆流色谱法的概况及应用高速逆流色谱( High-Speed Countercurrent Chromatography，HSCCC) 是Yoichiro Ito 博士于二十世纪八十年代首先研发、应用并发展起来的一种新型液-液分配色谱技术；HSCCC运用同步多层螺旋管进行行星式离心运动，使得在互不相溶的两相溶剂系统中可以实现样品在短时间内的高效分离，从而制备样品[1,2]。

高速逆流色谱技术不需要固体支撑物，主要根据样品在两相中所具有的不同分配系数进而对样品进行分离，相对于其他色谱技术如高效液相色谱、柱色谱等来说，具有高回收率、无吸附损耗、无峰拖尾等优点。

1、HSCCC法概况1.1 HSCCC法的基本原理HSCCC属于液 -液分配色谱，所以其基本分离原理与其他同类色谱技术相同，即利用物质在两相间分配系数的差别进行分配。

而 HSCCC将两溶剂的分配体系置于高速旋转的螺旋管内 ,建立起一种单向性流体动力平衡体系。

螺旋管的运动形式，是在自身自转的基础上，同时绕一公转轴旋转，成行星运动[3]。

这样 ,加在分配体系上的离心力场不断发生变化，使两相溶剂充分的混合和分配，从而达到洗脱分离目的。

HSCCC技术已经广泛应用于天然产物的分离。

1.2 溶剂系统的选择利用 HSCCC分离物质的关键是溶剂系统的选择。

经查阅多篇文献，总结要点如下。

对用于 HSCCC分离的溶剂体系，应该满足这几方面的要求：1)不造成样品的分解与变性；2)足够高的样品溶解度；3)样品在系统中有合适的分配系数值；4)固定相能实现足够高的保留[4]。

而对于溶剂体系选择的原则，Ito博士本人总结的几个要点是这样描的：1)待分析组分应易溶于溶剂系统 ,并不与之发生反应；2)溶剂体系的各组分应分成体积比例适合的两相，以免浪费溶剂；3)组分在溶剂系统中的分配系数 K应为适当的定值 (0.5≤K≤1)；4)固定相的保留值要满足一定要求 (保留值越大峰形越好 )。

高速逆流色谱分离法

⾼速逆流⾊谱分离技术是⼀种不⽤任何载体或⽀撑体的液-液分配⾊谱技术。

该技术分离效率⾼，产品纯度⾼，不存在载体对样品的吸附和污染，具有制备量⼤和溶剂⽔泵少等优点，可⼴泛应⽤于⽣物⼯程、医学、医药、化⼯、⾷品等领域。

上世纪80年代后期，⼴泛应⽤于天然药物成分的分离制备和分析中。

有报道⽤该技术研究⽣物碱、黄酮、蒽醌、⾹⾖素等成分的分离都取得了较好的效果。

⾼速逆流⾊谱分离法不仅适⽤于⾮极性化合物的分离，也适⽤于极性化合物的分离，还可以应⽤于进⾏中药粗提物中各组分的分离或进⼀步的纯化精制。

该技术有望成为中药有效成分质量标准研究、分析的⼀种新⽅法，也会成为中药制剂⽣产的⼀种新型分离技术。

高速逆流色谱

其中固定相以一种相对均匀的方式分布在一根聚四氟乙烯
管绕成的螺旋管中
流动相以一定的速度通过固定相，并按照被分离物质分配
系数的不同依次洗脱而获得分离
固定相的保留利用螺旋管的方向性和同步行星式运动产生的二维离心力场形成的单向性流体动力学平衡（HDES）从而实现流动相高速移，留在柱子中固定相的多少是影响样品分离效果的重要因素。一般来说，样品的分离度随着固定相保留值的增加而提高。溶剂体系中各物质的物理特性与固定相的保留值有密切关系。其中粘度对固定相的保留值的影响较大，粘度低的溶剂体系一般具有较高的固定相保留，而高粘度的溶剂系统固定相保留值相对较低，表面张力、两相之间的比重差等也可以影响样品中固定相的保留。
高速逆流色谱的工作流程
高速逆流色谱条件的选择
对用于HSCCC分离的溶剂体系应满足要求 (1) 溶剂体系不会造成样品的分解与变性； (2) 对样品有足够的溶解度； (3) 样品在溶剂体系中有合适的分配系数，一般认为分配系数在0.2～2的范围内较为合适，针对不同的仪器，在上机后根据不同的情况进行一步调试； (4) 固定相能够实现足够高的保留。
高速逆流色谱
汇报内容
一.高速逆流色谱的发展二.高速逆流色谱的原理三.高速逆流色谱的特点
一.高速逆流色谱发展
逆流色谱起源于20世纪50年代多极萃取技术
但是多级萃取设备庞大复杂，溶剂体系容易乳化，溶剂耗量大，分离时间长。
液滴逆流色谱 DCCC（20世纪70年代）
缺点：流动相流速低,每小时只有十几毫升;分离过程长,一般需要几十小时才能完成一次几个组分的分离；连接处容易出现渗漏
三.高速逆流色谱特点
不存在样品的不可逆吸附，理论回收率100%

高速逆流色谱原理及应用

高速逆流色谱High Speed Counter Current Chromatography(HSCCC)Outline1. Principle2. Properties3. Applications分配定律：Nernst, 1891 年，Ｋ＝Ｃ1／Ｃ2两组分K相差较大：较小：一次萃取可得到分离多次萃取•1941, Martin & Synge级联链型萃取，开创了分配色谱技术•1944，Craig 非连续式逆流分溶(countercurrent distribution, CCD)•1966，Ito 离心式螺旋管逆流色谱(countercurrent chromatography,CCC)•1981，Ito 高速逆流色谱High Speed Counter Current Chromatography (HSCCC)液液分配色谱的新纪元CCD法（Countercurrent distribution，反流分布法，逆流分溶法）：是一种多次连续的液-液萃取分离过程Principle 液－液分配色谱or 逆流色谱¾利用一种特殊的流体动力学现象使互不混溶的两相溶剂(固定相和流动相)在螺旋管中高效地接触、混合、分配和传递¾其中固定相以一种相对均匀的方式分布在一根聚四氟乙烯管绕成的螺旋管中¾流动相以一定的速度通过固定相，并按照被分离物质分配系数的不同依次洗脱而获得分离特殊的流体动力学？逆流色谱(CCC)的原理•流体静力平衡体系（hydrostatic equilibrium system,HSES)•流体动力平衡体系（hydrodynamic equilibrium system,HDES)HSES液滴逆流色谱(droplet CCC, DCCC)收集器进样器溶剂泵约300根管柱上行法收集器进样器溶剂泵约300根管柱下行法优点：DCCC仪器轻巧简便，能避免乳化或泡沫的产生。

高速逆流色谱

高速逆流色谱属于逆流色谱的范畴，逆流色谱是一种新型的分离手段，它的主要分离原理是利用样品在固定相和流动相之间的差异也就是分配比不同而进行分离的，值得注意的是逆流色谱的固定相和流动相都是液体，其主要优点是没有传统色谱的死吸附，样品的回收率高等特点。

逆流色谱源于逆流分溶法，也就是用实验室经常使用的分液漏斗进行连续的液液萃取，根据样品在两种互不相溶的溶剂中分配比不同而进行分离。

逆流色谱早期发展的方法有液滴逆流色谱，旋转小室逆流色谱等。

但是作为一种分离手段，早期发展的逆流色谱不能满足高效快速的分离，分离的周期很长，效率很低。

在70年代，Ito 博士成功开发了一种能够高效快速分离的逆流色谱－高速逆流色谱。

但高速逆流色谱也有很多种设计，经过几十年的发展，现在的高速逆流色谱一般是采用同步行星式的设计，其主要是利用在高速旋转状态产生的二维离心力场的作用下使两种互不相溶的溶剂快速有效的对流或分割----或者说混合或分层，从而使样品能够在短时间内进行成千上万次萃取，根据样品中的物质分配系数的不同而进行分离的一种方法。

HSCCC 有几个突出优点：（1）无不可逆吸附。

聚四氟乙烯管中的固定相无需载体液-液色谱系统，故而消除了气- 液和固- 液色谱中因使用载体而带来的吸附现象，特别适于分离极性物质和生物活性物质；（2）高回收率。

由于流动相和固定相均为液体，样品可全部回收，分离纯化与制备可同步完成，故特别适于制备性分离；（3 ）操作简便。

因固定相为液体，体系更换与平衡方便、快捷。

与HPLC 相比，HSCCC 进样量较大，最多可达数克，是HPLC 的数百倍；与常压、低压色谱相比，HSCCC 的分离能力强，有些样品经一次分离即得到1个甚至多个单体，且分离时间短，数小时即可完成，纯度多在98％以上。

高速逆流色谱作为一种比较新颖的分离方法，影响因素主要有溶剂体系的选择，旋转速度，流动相的流速，温度等影响。

溶剂体系选择即条件的摸索，相当于传统色谱摸流动相的条件，不同的是高速逆流色谱条件的摸索主要是指样品在固定相和流动相两者之间的分配的比值，待分离的样品的K值最好在0.6-1.5范围之内，这样才会有一个好分离效果。

高速逆流色谱

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