高速逆流色谱法

二、分离原理
连续液液萃取过程，固定相和流动相均为液体
问题是：如何在流动相流动时使固定相不动？ 两种基本模式 流体静力学平衡系统
• 洗脱速度太慢，一般需要两天或更长时间。
流体动力学平衡系统
三、仪器结构
高速逆流色谱的仪器流程
柱：长的软管(如聚四氟乙烯管)绕制成
载体：无 固定相：液体。用某一种有机／水两相溶剂体系或双水 和溶剂体系的上层或下层作为色谱过程的固定相，用离 心力场来支撑住柱内的液态相。 流动相：若用溶剂体系中的另一层作为流动相，带着混 合样品由泵的压力推入分离管柱，样品就会穿过两个液 相对流的整个管柱空间。 分离：溶剂萃取过程成千上万次地、高效地、自动连续 地予以完成。各个组分也就会按其在两相中的分配系数 分离开来。
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四、方法特点
1． 固定相、流动相均为液体，完全排除了载体对样品组分的吸 附、玷染、变性、失活等不良影响，能避免不可逆吸附造成的色 谱峰拖尾现象，实现高回收。 2．分离柱容积可大， 没有填料，柱内空间均为有效空间。因此， 样品负载量较大，制备量可从毫克到克量级。 3． 逆流色谱不用填料，分离过程不是淋洗或洗脱过程，而是对 流穿透过程。溶剂用量少，成本低。 4. 逆流色谱的分离效率比不上气相色谱和高效液相色谱等技术， 不宜进行复杂混合物的全分析。 5. 适合用于分离纯化，预处理条件宽松，回收率高，制备量大。
四、高速逆流色谱的溶剂选择
溶剂体系的选择原则
不造成样品的分解或变性 足够高的样品溶解度
样品在系统中有合适的分配系数
固定相能实现足够高的保留
溶剂应该进行分层实验，实验结果决定流速和洗 脱方式 样品要溶解于流动相或固定相之中
五、高速逆流色谱的应用
天然药物的分离和分析
氨基酸、激素、嘌呤、抗生素等分离分析 蛋白质、细胞至微生物的分离等
第9章 高速逆流色谱法
High Speed Countercurrent Chromatography
HSCCC
一、概述
Ito，70年代提出，80年代提出CCC，一种液液 色谱分离技术
逆流分配→液滴逆流色谱→高速逆流色谱
参考书
1.《逆流色谱技术》张天佑，北京科学技术出版社， 1991年 2.《高速逆流色谱分离技术与应用》曹学丽，化学工 业出版社，2009年
黄连生物碱的分离