高速逆流色谱仪

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高速逆流色谱技术

l 高速逆流色谱是液相色谱的一种新技术，无需载体，从几种色谱原理方法可以清晰说明。

大约50年前，根据对两种液体进行分配的理念，产生了两种相似的方法：逆流分配技术和液-液色谱分配技术，即：逆流色谱和液相色谱。

30年前，日本Sanki Engineering Ltd.利用前一种技术开发出了高性能的逆流色谱仪（HPCPC），它结合了液相色谱中的快速、高效和先进技术。

HPCPC尤其在利用色谱技术进行半制备和全制备的应用中倍受瞩目，它和采用色谱柱技术的液相色谱在四个方面具有显著优势：● 无样品损失：因为流动相和固定相都是液体，样品可以全部回收。

● 大容量和高的分离能力：流动相和固定相的体积比明显很高，从而无需更大的理论塔板数，就可以获得更大的容量和更高的分离能力。

● 十分灵活的两相系统：（两种、三种、四种溶剂混合）为了获得一种纯的化合物，实验中需要比较灵活的更改流动相，HPCPC可以很方便地调整两相的极性。

● 溶剂消耗少：相对于色谱柱制备系统，对于同样的制备量，HPCPC的溶剂消耗量只有十分之一，使用逆流色谱在实验室完成分离后，可以直接放大到生产规模。

● 固定相价格低：另一个显著优点是逆流色谱的固定相是溶剂，相比色谱柱中的填充材料价格低很多；而且固定相可以很容易再生，一些添加的物质如手性选择剂或复杂的配位体可以无损失地回收，国际上出版的论文可以提供十分有用的信息和应用参考。

新型的高速逆流色谱仪HPCPC广泛地应用于化学领域的纯化，如抗生素、缩氨酸、丹宁酸、皂角苷、油脂、药品等，将来的发展可以预见更大规模和产量的HPCPC设备出现，在化学领域将更加广泛地应用，如手性药物分离等。

与传统制备液相的优势● 逆流色谱仪HPCPC十分快速由于固定相溶剂通过离心力保留在分配通道中，可以不用顾及分离精度的高低要求而让流动相的流速保持很高。

● 明显优于传统制备液相由于逆流色谱仪HPCPC不需要固定相，不会出现对十分昂贵的样品产生不可逆转的保留，而在传统色谱柱的液相色谱中，经常出现的变性和分解现象在逆流色谱不会产生，同时保留了原来的生物活性。

高速逆流色谱综述

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转速流速温：在有机相中加入有机酸或碱，水相中加
入无机反离子作用：有机酸在有机相和固定相中的分配系数作为量度，样品的分配系数与其的差距决定各样品的出峰时间特点：分离容量大、分离纯度和效率高等优点。特别适用于分离那些在较宽的pH 1～10内,可形成稳定的可离子化的物质
pH区带精制逆流色谱分离制备苦参中生物碱
苦参是一种传统的中药，在中国被用于治疗多种疾病，如：解热剂，利尿剂，驱虫剂和解毒药。苦参的根中含有超过 10种的生物碱，它们之中槐果碱和苦参碱是治疗癌症的主要有效成分。但这二者结构性质相近，在分离时，普通的方法难以取得良好的效果。利用pH区带精
制逆流色谱，可以将其很好的分离。
此项技术己被广泛应用于中药成分分离、保健食品、生物化学、生物工程、天然产物化学、有机合成、环境分析等领域
HSCCC原理
高速逆流色谱仪利用螺旋管的自转和公转同步同向行星式运动所产生的变化离心力场将固定相保留在螺旋管中，允许流动相快速流过螺旋管并与固定相进行连续高效的混合和分配，达到一种特殊的流体动力学平衡——单向流体动力学平衡
HSCCC特点与prep-HPLC的比较
回收率高溶剂系统灵活洗脱方式灵活多样制备量大费用低重复性好

回收率低甲醇-水等度或梯度制备量小色谱柱价格昂贵重复性不好
影响HSCCC分离效果的因素

固定相的保留值
外因：仪器对保留值的影响内因：溶剂体系物理因素对保留值的影响
高速逆流色谱综述
生研1005 周沫 2010001272
HSCCC简介
高速逆流色谱(High-speed Countercurrent Chromatography，简称 HSCCC)，于1982年由美国国立卫生院Ito博士研制开发的一种新型的、连续高效的液液分配色谱技术。该技术由于不需要固体支撑体，物质的分离依据其在两相中分配系数的不同而实现。

EMC-500A高速逆流色谱仪分离实验过程详解

EMC-500A高速逆流色谱仪分离邻二苯酚，间苯二酚流程一．仪器条件1. EMC-500A高速逆流色谱仪转向：正向(正向定义：见仪器标识)；转速：800转/分钟2. 8823B紫外检测器波长254纳米；灵敏度2A3. EMC-P10泵流量2毫升/分钟(压力保护值设定1mpa)4. 3057记录仪纸速：6厘米/小时；量程：100mv5. 进样器：2毫升二．连接管路连接顺序：溶剂—滤头—泵入口(下)—泵出口(上)—进样器入口(“接输液泵”)—进样器出口(“接制备柱”)—主机管路入口(标记端)—主机管路出口—检测器入口(下)—检测器出口(上)—收集瓶(初期建议使用100ml量筒，以辨认液体分层)注意：用手拧接头组件(不提倡使用扳子等工具，以免超负荷损坏)连接管路完成后，泵入蒸馏水以检查管路有无液体异常泄露。

三．溶剂系统：共1000毫升1. 正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水=1/0.8/1/0.8(V/V)(所用溶剂均为分析纯)2. 固定相：上相流动相：下相3. 样品：邻二苯酚(化学纯，市售厂)4. 间苯二酚(分析纯，市售)四．操作过程1. 配制溶剂系统按正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水=1/0.8/10.8(V/V体积比)共1000ml，用量筒至一玻璃容器内，脱气，分层分离。

——在实验开始前1天，将溶剂配置在同一玻璃容器(推荐磨口三角瓶)内混合震摇，注意排气，超声波脱气30分钟后，移液至同一分液漏斗密闭静置饱和。

在实验开始前1小时内，将两相溶剂分开放置在两玻璃容器内，并密闭静置，防止蒸发。

2. 样品制备在一玻璃容器内将预先使用天平称量的80毫克邻二苯酚和100毫克间苯二酚混合物溶于3毫升下相中，超声波脱气(溶解至溶液内无固体，如有固体应过滤，以防止塞管路)，并密闭静置，防止蒸发。

3. 连接泵将泵入口(下)连接的滤头放入固定相(上相)瓶内，完全浸入液面以下闭合泵电源开关，启动泵，设定压力保护值1mpa(兆帕)。

按ph键。

高速逆流色谱仪原理特点及应用

高速逆流色谱仪原理特点及应用一、简介高速逆流色谱（HPLC）是一种高效、精准的分析技术，它广泛应用于化学、制药、环保、食品等领域。

高速逆流色谱仪是高速逆流色谱技术的核心设备，能够对各种化合物进行分离和检测。

在本文中，我们将介绍高速逆流色谱仪的原理、特点及应用。

二、原理高速逆流色谱仪使用液相色谱技术，其基本原理是将待测样品溶液经过一定的处理后，注入色谱柱，通过色谱柱内液相的物理化学作用，将各种组分分离出来，并用检测器检测分离出来的化合物。

高速逆流色谱仪相较于其他色谱仪的优势在于可以在极短的时间内完成大量的分离、检测等操作。

高速逆流色谱仪的原理是基于其内部的色谱柱，其内部结构可以细分为装载柱、色谱柱和联接管。

样品通过色谱柱时，每种组分将被一步一步地分离出来，直到达到检测器，最后数据将被转换为电子信号，并通过数据处理软件进行分析和处理。

三、特点1. 高效HPLC技术的一大优势在于其高效性，使用HPLC技术可以在更短的时间内分离出更多的物质成分，从而提高分析效率。

2. 精准由于高速逆流色谱仪的高分辨率和灵敏度，其能够分离出复杂物质的成分，从而提供更加准确的结论。

3. 多种检测方式高速逆流色谱仪可使用不同类型的检测器，如紫外检测器、荧光检测器等，可以检测多种类型的化合物成分。

4. 适用范围广高速逆流色谱仪不仅适用于小分子化合物的分离和检测，也可以用于生物大分子、天然产物、有机和无机化合物等物质的分离和检测。

四、应用高速逆流色谱仪广泛应用于化学、生命科学、环境科学、食品科学等领域，其准确性和高效性为这些领域的研究和实践提供了重要的技术支持。

1. 化学在化学领域中，高速逆流色谱仪通常在合成新药物、分离小分子化合物、分析毒物、研究反应机理等方面有着广泛的应用。

2. 生命科学高速逆流色谱仪在生命科学领域可以用于分析蛋白质、氨基酸、核酸和多糖等生物大分子，可以检测蛋白质含量和组成，研究生物大分子的三维结构，为分子生物学、细胞生物学和基因工程研究提供技术支持。

高速逆流色谱

高速逆流色谱百科名片高速逆流色谱仪(High-speed Countercurrent Chromatography，简称HSCCC)，于1982年由美国国立卫生院Ito博士研制开发的一种新型的、连续高效的液液分配色谱技术.目录[隐藏]简介原理发展史应用领域色谱仪构造特点分配系数溶剂体系和溶液系统简介原理发展史应用领域色谱仪构造特点分配系数溶剂体系和溶液系统∙影响分离效果的因素∙技术发展∙研究热点及发展趋势高速逆流色谱[编辑本段]简介高速逆流色谱(high speed countercurrentchromatography，简称HSCCC)是一种液-液色谱分离技术，它的固定相和流动相都是液体，没有不可逆吸附，具有样品无损失、无污染、高效、快速和大制备量分离等优点。

由于HSCCC与传统的分离纯化方法相比具有明显的优点，因此此项技术己被广泛应用于中药成分分离、保健食品、生物化学、生物工程、天然产物化学、有机合成、环境分析等领域。

我国是继美国、日本之后最早开展逆流色谱应用的国家。

张天佑等在国内首先自行研制了分析型和制备型的高速逆流色谱仪，对我国中药功能成分的分离制备取得了显著成果。

上海同田生化技术有限公司生产的高速逆流色谱仪，分离中药成分纯度达到99%，可用于HP LC检测标准样。

高速逆流色谱（high-speed countercurrent chromatography ，HSCCC ）是20 世纪80 年代发展起来的一种连续高效的液—液分配色谱分离技术，它不用任何固态的支撑物或载体。

它利用两相溶剂体系在高速旋转的螺旋管内建立起一种特殊的单向性流体动力学平衡，当其中一相作为固定相，另一相作为流动相，在连续洗脱的过程中能保留大量固定相。

由于不需要固体支撑体，物质的分离依据其在两相中分配系数的不同而实现，因而避免了因不可逆吸附而引起的样品损失、失活、变性等，不仅使样品能够全部回收，回收的样品更能反映其本来的特性，特别适合于天然生物活性成分的分离。

高速逆流色谱仪原理特点及应用

高速逆流色谱仪原理特点及应用气路管路、进样器、注射器的清洗清洗气路连接管时，应首先将该管的两端接头拆下，再将该段管线从色谱仪中取出，这时应先把管外壁灰尘擦洗干净，以免清洗完管内壁时再产生污染。

清洗管路内壁时应先用无水乙醇气路管路、进样器、注射器的清洗清洗气路连接管时，应首先将该管的两端接头拆下，再将该段管线从色谱仪中取出，这时应先把管外壁灰尘擦洗干净，以免清洗完管内壁时再产生污染。

清洗管路内壁时应先用无水乙醇进行疏通处置，这可除去管路内大部分颗粒状堵塞物及易被乙醇溶解的有机物和水分。

在此疏通步骤中，如发觉管路不通，可用洗耳球加压吹洗，加压后仍无效可考虑用细钢丝捅针疏通管路。

如此法还不能使管线畅通，可使用酒精灯加热管路使堵塞物在高温下炭化而实现疏通的目的。

用无水乙醇清洗完气路管路后，应考虑管路内壁是否有不易被乙醇溶解的污染物。

如没有，可加热该管线并用干燥气体对其吹扫，将管线装回原气路待用。

假如由分析样品过程判定气路内壁可能还有其它不易被乙醇溶解的污染物，可针对实在物质溶解特性选择其它清洗液。

选择清洗液的顺序应先使用高沸点溶剂、而后再使用低沸点溶剂浸泡和清洗。

可供选择的清洗液有萘烷、N、N—二甲基酰胺、甲醇、蒸馏水、丙酮、乙醚、氟里昂、石油醚、乙醇等。

对进样器（包含汽化室）的清洗应以疏通为先导。

通常在进样器中的堵塞物是进样隔垫的碎片，样品中被炭化了的高沸点物，对这些固态杂质可用不锈钢捅针疏通，然后再用乙醇或丙酮冲洗。

为了使清洗更彻底，可选用2：1：4的H2SO4/HNO3/H2O混合溶液先对进样器清洗，然后再用蒸馏水，最后再用丙酮或乙醇清洗。

清洗完后烘干，装上仪器通载气半小时，加热到120℃待几小时后即可正常工作。

在拆装进样器时需注意不要碰断加热器引线或使引线碰到外壳；测温元件也应在装回进样器之后，按原先测温点装回。

通常测温元件和进样器加热体是紧密接触的，如距离过大将会造成过高的汽化温度。

注射器使用前可先用丙酮清洗，以免玷污样品，但可以还是用待注射样品对注射器自身做一二次清洗。

高速逆流色谱

而且由于被分离物质与液态固定相之间能够充分接触，使得样品的制备量大大提高，是一种理想的制备分离手段。

它相对于传统的固—液柱色谱技术，具有适用范围广、操作灵活、高效、快速、制备量大、费用低等优点。

目前HSCCC 技术正在发展成为一种备受关注的新型分离纯化技术，已经广泛应用于生物医药、天然产物、食品和化妆品等领域，特别在天然产物行业中已被认为是一种有效的新型分离技术；适合于中小分子类物质的分离纯化。

我国是继美国、日本之后最早开展逆流色谱应用的国家，俄罗斯、法国、英国、瑞士等国也都开展了此项研究。

美国FDA 及世界卫生组织（WHO ）都引用此项技术作为抗生素成分的分离检定，90 年代以来，高速逆流色谱被广泛地应用于天然药物成分的分离制备和分析检定中。

逆流色谱原理：1.逆流色谱是20世纪50年代源于多极萃取技术（非连续性）但是多极萃取设备庞大复杂、易碎、溶剂体系容易乳化，溶剂耗量大，分离时间长。

2.20世纪70年代，出现了液滴逆流色谱（DCCC）特点：（1）流体静力学原理（Hydrostatic equilibrium system，HSES）（2）分离时间过长、连接处容易出现渗漏等3.20世纪70年代出现了离心分配色谱仪（Centrifugal partition chromatography，CPC）特点：（1）基于流体静力学原理（Hydrostatic equilibrium system，HSES），利用公转产生的单一力场（2）连接处较多而且容易出现渗漏，清洗维护复杂4．20世纪80年开始出现了现在的高速逆流色谱，可称为最先进的逆流色谱特点：（1）基于流体动力学原理（Hydrodynamic equilibrium system，HDES）（2）通过公转、自转（同步行星式运动）产生的二维力场，保留两相中的其中一相作为固定相（3）通过高速旋转提高两相溶剂的萃取频率，1000rpm旋转时可达到17次/s频率的萃取过程。

高速逆流色谱仪的优势

高速逆流色谱仪的优势高速逆流色谱（high-speed countercurrent chromatography，简称HSCCC）是一种较新型的液—液分配色谱,由美国国立健康研究院（National Institute of Health, U.S.A.）Ito博土最先研制开发后由北京市新技术应用研究所在国内开展研发和推广工作。

其原理是基于样品在旋转螺旋管内的互不混溶的两相溶剂间分配不同而获得分离，因而无须任何固体载体或支撑体，能达到在短时间内实现高效分离和制备，并且可以达到几千个理论塔板数。

与其他柱色谱相比较，它克服了固定相载体带来的样品吸附、损失、污染和峰形施尾等缺点[3]。

目前此项技术已被应用于生化、生物工程、医药、天然产物化学、有机合成、环境分析、食品、地质、材料等领域[5]。

我国是继美国、日本之后最早开展逆流色谱应用的国家，俄罗斯、法国、英国、瑞士等国也都开展了此项研究。

美国FDA及世界卫生组织（WHO）都引用此项技术作为抗生素成分的分离检定，90年代以来，高速逆流色谱被广泛地应用于天然药物成分的分离制备和分析检定中。

1. 高速逆流色谱仪原理及特点HSCCC利用了一种特殊的流体动力学（单向流体动力学平衡）现象。

具体表现为一根100多米长的螺旋空管，注入互不相溶的两相溶剂中的一相作为固定相，然后作行星运动；同时不断注入另一相（流动相），由于行星运动产生的离心力场使得固定相保留在螺旋管内，流动相则不断穿透固定相；这样两相溶剂在螺旋管中实现高效的接触、混合、分配和传递。

由于样品中各组分在两相中的分配比不同，因而能使样品中各组分得到分离。

2. HSCCC的优点HSCCC主要具有以下几个方面的优点。

2.1 应用范围广，适应性好。

由于溶剂系统的组成与配比可以是无限多的，因而从理论上讲HSCCC适用于任何极性范围的样品的分离，所以在分离天然化合物方面具有其独到之处。

并因不需固体载体，而消除了气液色谱中由于使用载体而带来的吸附现象，特别适用于分离极性物质和其它具有生物活性的物质。

高速逆流色谱仪

高速逆流色谱仪原理高速逆流色谱（high-speed countercurrent chromatography ，HSCCC ）是20 世纪80 年代发展起来的一种连续高效的液—液分配色谱分离技术，它不用任何固态的支撑物或载体。

而且由于被分离物质与液态固定相之间能够充分接触，使得样品的制备量大大提高，是一种理想的制备分离手段。

它相对于传统的固—液柱色谱技术，具有适用范围广、操作灵活、高效、快速、制备量大、费用低等优点。

我国是继美国、日本之后最早开展逆流色谱应用的国家，俄罗斯、法国、英国、瑞士等国也都开展了此项研究。

1.逆流色谱是20世纪50年代源于多极萃取技术（非连续性）但是多极萃取设备庞大复杂、易碎、溶剂体系容易乳化，溶剂耗量大，分离时间长。

2.20世纪70年代，出现了液滴逆流色谱（DCCC）特点：（1）流体静力学原理（Hydrostatic equilibrium system，HSES）（2）分离时间过长、连接处容易出现渗漏等3.20世纪70年代出现了离心分配色谱仪（Centrifugal partition chromatography，CPC）特点：（1）基于流体静力学原理（Hydrostatic equilibrium system，HSES），利用公转产生的单一力场（2）连接处较多而且容易出现渗漏，清洗维护复杂4．20世纪80年开始出现了现在的高速逆流色谱，可称为最先进的逆流色谱特点：（1）基于流体动力学原理（Hydrodynamic equilibrium system，HDES）（2）通过公转、自转（同步行星式运动）产生的二维力场，保留两相中的其中一相作为固定相程5.HSCCC分离流程图举例1．高速逆流色谱分离黄柏中的小檗碱和巴马亭1实验部分1. 1仪器与试剂HSCCC2TBE300 型高速逆流色谱仪, 深圳同田生化有限公司;HD2212C2B 核酸蛋白检测仪, 上海康华生化仪器厂;R2201 旋转蒸发器, 上海申胜生物技术有限公司;LC210A T 高效液相色谱仪, 日本岛津色谱仪器公司;氯仿、甲醇、正丁醇、乙酸均为国产分析纯, 水为重蒸水, 黄柏购于杭州胡庆余堂, 为川黄柏。

高速逆流色谱仪原理是怎样的？

高速逆流色谱仪原理是怎样的？高速逆流色谱法于1982年由美国国立卫生院Ito博士研制开发的一种新型的、连续高效的液液分配色谱技术，与其它色谱技术不同的是它不需任何固态载体，因此能避免固相载体表面与样品发生反应而导致样品的污染、失活、变性和不可逆吸附等不良影响。

同时它也具有适用范围广、快速、进样量大、费用低、回收率高等优点。

因此，己在生物、医药、食品、材料、化妆品和环保等领域获得了广泛的应用，尤其是在天然产物活性成分的分离纯化领域倍受重视。

高速逆流色谱仪原理及特点利用了一种特殊的流体动力学（单向流体动力学平衡）现象。

由于样品中各组分在两相中的分配比不同，因而能使样品中各组分得到分离。

应用范围广，适应性好。

由于溶剂系统的组成与配比可以是无限多的，因而从理论上讲HSCCC适用于任何极性范围的样品的分离，所以在分离天然化合物方面具有其独到之处。

并因不需固体载体，而消除了气液色谱中由于使用载体而带来的吸附现象，特别适用于分离极性物质和其它具有生物活性的物质。

重现性好。

如果样品不具有较强的表面活性作用，酸碱性也不强，那么多次进样，其分离过程稳定性都保持很好、峰的保留相对标准偏差也小于2%，重现性相当好。

高速逆流色谱是建立在单向性流体动力平衡体系之上的一种逆流色谱分离方法，它是在研究旋转管的流体动力平衡时偶然发现的。

当螺旋管在慢速转动时，螺旋管中的两相都从一端分布到另一端。

用某一相作移动相从一端向另一端洗脱时，另一相在螺旋管里的保留值大约50%，但这一保留量会随着移动相流速的增大而减小，使分离效率降低。

但使螺旋管的转速加快时，两相的分布发生变化。

当转速达到临界范围时，两相就会沿螺旋管长度完全分开，其中一相全部占据首端的一段，我们称这一相为首端相，另一段全部占据尾端的一段，称为尾端相。

高速逆流色谱仪介绍

e™ 分析型高速逆流色谱仪
•
利用专利的平衡和减震技术设计的分析型高速逆流色谱仪，高速旋转时保持最佳平衡，机械性能稳定，噪音低；
• •
分析型分离柱，单柱体积 30ml，分离快速，用于实验室快速分析和分离实验条件摸索；分离转速 1,500-1,800rpm,与实验室半制备型 OptiChrome 相当，可实现分离条件的直接放大；
江阴逆流科技有限公司
HSCCC-高速逆流色谱 OptiChrome™ 制备型高速逆流色谱仪
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利用专利的平衡稳定技术设计的高速逆流色谱仪，高速旋转时保持最佳平衡，机械性能稳定，噪音低；
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二/三柱制备型，OptiChrome 型单柱体积 100~340ml，柱体积 300~1000ml，优化的仪器参数实现分离转速每分钟 1200 转，离心重力场>100g，以实现高固定相保留率和高分辨率；
固定相保留低，造成固定相载提高固定相保留率，增加样量低，严重影响制备通量，样品负载量难以满足制备要求；
分离条件摸索溶剂体系繁多，分离模式灵活，提供快速的条件摸索手段繁复耗时而在半制备实验条件摸索耗时和工艺放大途径；构建逆间耗试剂耗样品，效率非常低；流色谱分离纯化数据库
HSCCC-高速逆流色谱 RCF 为离心重力场（相对离心力）, R 为公转半径，即分离柱的自转轴与公转主轴之间的距离（mm 为单位），为公转角速度（rpm，转/分钟）。
高速逆流色谱系统构成下图为常见的高速逆流色谱分离系统构成示意图：
中低压恒流泵
高速逆流色谱仪
紫外检测器
色谱工作站
溶剂
• •
制备样品量达克级；单位柱体积洗脱时间 30min，分离速度快，制备效率高；与 FastChrome™ 分析型 HSCCC 具有线性放大关系，在分析型仪器上摸索的分离体系和分离条件能够直接放大；

高速逆流色谱仪使用说明书

高速逆流色谱仪使用说明书
使用环境：
本产品供室内使用,环境温度在5-40℃,温度低于31℃时最大相对湿度为80%,温度为40℃时最大相对湿度线性降低至50%。

工作条件：
１额定电源电压ＡＣ２２０Ｖ／５０Ｈｚ±１０％
２额定工作电流<１.５Ａ
３最大工作电流< 5.０Ａ
３额定输入功率< 3００瓦
主要性能：
１色谱柱总容积500 ml±１０％
２最低转速200转/min
３最高转速850转/min
４额定最高工作转速８００转/min
５移动相流速20－240ml/h
６进样量（柱流量）毫克－克量级
７管路系统耐压值 1.0 Mpa
使用方法及注意事项：
1仪器应平稳地放置在稳定坚固的桌面或地上，接通电源（见图）。

2 接上流通管，泵入所需介质，检查接头是否泄露，并注意压力
不得超过1Mpa，当介质充满分离柱后方可启动机器。

3 将速度调节旋钮顺时针方向调节到最小，开启电源，缓慢的调节速度调节旋钮至所需的转速。

4 在仪器使用过程中需经常注意运行状况，如发现异常应停机检查并排除故障后方可继续使用。

5 当需要改变旋转方向时需等仪器完全停止运行后方可拨动方向开关。

6 管柱总容积由4个容积基本相同的部分组成，每部分有2个接口接流通管，分别为1、2，3、4，5、6，7、8。

单数为内圈，双数为外圈。

其中1、2，3、4在同一个柱上，5、6，7、8在另外一个柱上。

7 使用中如需减小柱体积时需注意平衡。

如只使用1/4柱体积时需在其他不用的部分注满的相同介质，并在开机时注意振动的幅度。

上海同黉机电有限公司。

高速逆流色谱仪原理特点及应用

高速逆流色谱仪原理特点及应用高速逆流色谱法于1982年由美国国立卫生院Ito博士研制开发的一种新型的、连续高效的液液分配色谱技术，与其它色谱技术不同的是它不需任何固态载体，因此能避免固相载体表面与样品发生反应而导致样品的污染、失活、变性和不可逆吸附等不良影响。

同时它也具有适用范围广、快速、进样量大、费用低、回收率高等优点。

因此，己在生物、医药、食品、材料、化妆品和环保等领域获得了广泛的应用，尤其是在天然产物活性成分的分离纯化领域倍受重视。

高速逆流色谱仪原理及特点HSCCC利用了一种特殊的流体动力学（单向流体动力学平衡）现象。

由于样品中各组分在两相中的分配比不同，因而能使样品中各组分得到分离。

重现性好。

应用领域：（1）天然产物已知有效成分的分离纯化（2）化学合成物质的分离纯化（3）中药一类、五类新药的开发（4）中药指纹图谱和质量控制研究（5）抗生素的分离纯化（6）天然产物未知有效成分的分离纯化（新化合物开发）（7）海洋生物活性成分的分离纯化（8）放射性同位素分离（9）多肽和蛋白质等生物大分子分离以及手性分离等应用范围广，适应性好。

由于溶剂系统的组成与配比可以是无限多的，因而从理论上讲HSCCC适用于任何极性范围的样品的分离，所以在分离天然化合物方面具有其独到之处。

并因不需固体载体，而消除了气液色谱中由于使用载体而带来的吸附现象，特别适用于分离极性物质和其它具有生物活性的物质。

标签:色谱仪。

高速逆流色谱

高速逆流色谱综述高速逆流色谱(High-speed Countercurrent Chromatography，简称HSCCC)，于1982年由美国国立卫生院Ito博士研制开发的一种新型的、连续高效的液液分配色谱技术。

该技术由于不需要固体支撑体，物质的分离依据其在两相中分配系数的不同而实现，因而避免了因不可逆吸附引起的样品损失、失活、变性等问题，具有传统的液-固色谱所不具备的独特优势，特别适合于天然生物活性成分的分离。

而且由于被分离物质与液态固定相之间能够充分接触，使得样品的制备量大大提高，是一种理想的制备分离手段，因此此项技术己被广泛应用于中药成分分离、保健食品、生物化学、生物工程、天然产物化学、有机合成、环境分析等领域[1]。

1 高速逆流色谱原理[1-2]图.1高速逆流色谱仪利用螺旋管的自转和公转同步同向行星式运动所产生的变化离心力场将固定相保留在螺旋管中，允许流动相快速流过螺旋管并与固定相进行连续高效的混合和分配，达到一种特殊的流体动力学平衡——单向流体动力学平衡，此时在螺旋柱中任何一部分，两相溶剂都反复进行着混合和静置的分配过程，这一过程频率极高，在800rpm转速下时，混合和分配的频率可以达到13次/s。

大大提高了两相溶剂的混合效率，可以极大地缩短分离时间，这就是高速逆流色谱分离效率高的原因。

如图.1。

2 高速逆流色谱(HSCCC)的特点及与制备型高效液相色谱（prep-HPLC）的比较[3-4]目前制备出高纯度的天然产物的方法中，制备型高效液相色谱是使用最为广泛的。

与其相比，高速逆流色谱具有以下一些突出的优点。

（1）HSCCC回收率高：由于HSCCC不需要固体支撑体，避免了样品在分离过程中的不可逆吸附、分解、变性等问题。

理论上，滞留在柱中的样品可以通过多种洗脱方式予以完全回收；实验中只要调整好分离条件，一般都有很高的回收率。

粗样可以直接上样而不会对柱内固定相造成任何损害。

而prep-HPLC在样品吸附过程中会出现死吸附的现象，在制备高纯品的过程中，必然会以牺牲得率为代价，这是prep-HPLC不可避免的。

高效逆流色谱仪HPCCCC常见问题解答

高效逆流色谱仪HPCCC常见问题解答1.什么情况下需要使用高效逆流色谱H PCCC?HPCCC是一种独特的技术，可以在低压状况下实现高质量的色谱纯化分离，并且进样量大，溶剂使用量低。

在化学纯化技术方面存在着许多挑战；但是HPCCC特别适用于下列情况：z样品的溶解度不好，使用现有的其它纯化技术无法满足要求时z从未经加工的原料样品中直接提取目标组份时z产品开发过程中，涉及到多个制备级别时使用HPCCC的主要优势:z无样品损失——因为两相（流动相和固定相）都是液体，样品可以全部回收z高通量技术——液/液分配体系除了有助于增加样品的溶解度，还能加大样品负载量，实现高通量的效果z消耗溶剂少——处理相同数量的未加工原料样品，这种技术消耗溶剂量仅为（其它技术的）10%z工艺放大十分容易-——由于柱子填料容易再生，在任何条件和所有级别设备的操作中，分离条件非常容易复制。

2.高效逆流色谱HPCCC是如何发展起来的？HPCCC是从液—液萃取技术发展而来的。

通常在一个分液漏斗中，使样品溶解在两相溶剂体系中，激烈振荡，静置待两相发生分离。

由于组分在两相溶剂中的溶解度不同，目标组分就会在两相中进行分配。

待分配平衡后，从分液漏斗中移走重相，然后混合另一新的更轻相或者加入一些更重相到分液漏斗里，重复萃取过程。

目标组分将再次被分配，如此反复多次，被分离样品的纯度就会越来越高。

上述方式尽管有效，但很明显既费时又费力，因此需要对分液漏斗进行改进。

Craig发明了非连续逆流分溶装置（Craig Counter-Current Distribution Apparatus），该装置由一系列分液漏斗连接而成，两相不混溶液体在分液漏斗间有序地重复混合、倾析，最终使溶质以逆流分配的方式分离在不同的漏斗中（Droplet Counter-CurrentChromatography，DCCC），该装置由一系列通过毛细管连接的垂直管组成。

这种设计能够让其中一相，固定相(SP)保留在管中，另一相流动相 (MP)从管中流出，如果流动相相对密度大就从设备顶端泵入。

高速逆流色谱仪的知识点讲述

高速逆流色谱仪的知识点讲述
逆流色谱技术是一种应用在化学分离分析领域中的技术，其原理是用充满两相溶剂的螺旋管作为分离单元在离心力场中按一定规律运动，当被分离的混合物通过分离单元时，由于不同物质在两相溶剂中具有不同的分配特性将会产生物质的分离排列。

一般逆流色谱仪中，分离单元不仅围绕公转中心做公转运动，同时也做自转运动，呈行星式运动状态，分离柱数与流通管内径参数为固定不易改变，无法调节分离柱容积和更换分离柱，分离量受到严格限制。

高速逆流色谱仪是利用了一种流体动力学现象，具体表现为一根100多米长的螺旋空管，注入互不相溶的两相溶剂中的一相作为固定相，然后作行星运动；同时不断注入另一相（流动相），由于行星运动产生的离心力场使得固定相保留在螺旋管内，流动相则不断穿透固定相；这样两相溶剂在螺旋管中实现的接触、混合、分配和传递。

由于样品中各组分在两相中的分配比不同，因而能使样品中各组分得到分离。

高速逆流色谱仪取消了传统的贯通中心的中间轴。

而在自转轴上装设的螺旋管分离柱组件的β值即分离柱自转半径r与公转半径R的比值r/R可以从0.1到1之间选取，本产品β值≥0.85。

加之可通过齿轮传动比的变化实现不同转速，由此实现高效率的分配分离。

高速逆流色谱仪有四个容积相同的螺旋管分离柱分别安装在两个旋转柱上，每个旋转柱由两个容积相同的螺旋管分离柱单元组合而成，分离柱同引入、引出的流通管的接口都是可拆卸的活动接头。

两个螺旋管分离柱通过接头和引入、引出管，引至仪器外部的接点，可以用短管将多个分离柱单元串连或并连起来，形成不同的柱容积和柱长度的连接，以实现一机多用。

TBE-300B型高速逆流色谱分离仪讲解

➢高速逆流色谱仪器的装置如图 1 所示, 它的公转轴水平设置, 螺旋管柱距公转轴 R 处安装, 两轴线平行。通过齿轮传动, 使螺旋管柱实现在绕仪器中心轴线公转的同时, 绕自转轴作相同方向相同角速度的自转。
引用文献：李爱峰, 刘宁宁, 柳仁民. 高速逆流色谱原理及其在天然产物化学成分分离中的应用研究进展[J]. 理化检验-化学分册, 2008, 44(5) : 481-489.
仪器的主要性能指标和使用环境
主机管路体积：280 ml 转速范围：0-1000 rpm/min；工作转速：800-1000rpm/min 流动相工作流速：2-4 ml/min（推荐）进样圈：20ml 最大工作电压：2Mpa（20公斤力/平方厘米）电压：220+20 V ；频率：50Hz 主机尺寸：330 x 600 x 550mm ；主机重量：80Kg 使用和保存环境：高度小于海拔3000m、相对湿度小于80%、工作环境温度15-30℃ 。注意事项： ➢ 处理后的样品必须没有明显的可见颗粒。 ➢ 主机运行时，请把主机侧门锁好，以防发生意外情况 ➢ 请勿让仪器在管路没有液体的情况下长时间高速空转。
➢HPLC 法
该法是利用样品组分在有机相和水相的色谱峰面积之比测定分配系数 K 值的。具体做法如下: 将样品溶于一定体积的某一相中( 例如上相U) , 然后利用 HP LC 测定上相溶液, 得到色谱峰面积 AU1; 另外加入一定体积的另一相( 例如下相L) , 振荡, 当达到分配平衡后, 取该溶液的上相进行 HPLC 测定, 得到色谱峰面积 AU2, 如图 1 所示。对于同一组分, 其分配系数 K 可以表示如下:
➢ 利用螺旋柱在行星运动时产生的离心力，使互不相溶的两相不断混合，同时保留其中的一相（固定相），利用恒流泵连续输入另一相（流动相），此时在螺旋柱中任何一部分, 两相溶剂反复进行着混合和静置的分配过程，流动相不断穿过固定相, 随流动相进入螺旋柱的溶质在两相之间反复分配，按分配系数的大小次序，被依次洗脱

高速逆流色谱

其中固定相以一种相对均匀的方式分布在一根聚四氟乙烯
管绕成的螺旋管中
流动相以一定的速度通过固定相，并按照被分离物质分配
系数的不同依次洗脱而获得分离
固定相的保留利用螺旋管的方向性和同步行星式运动产生的二维离心力场形成的单向性流体动力学平衡（HDES）从而实现流动相高速移，留在柱子中固定相的多少是影响样品分离效果的重要因素。一般来说，样品的分离度随着固定相保留值的增加而提高。溶剂体系中各物质的物理特性与固定相的保留值有密切关系。其中粘度对固定相的保留值的影响较大，粘度低的溶剂体系一般具有较高的固定相保留，而高粘度的溶剂系统固定相保留值相对较低，表面张力、两相之间的比重差等也可以影响样品中固定相的保留。
高速逆流色谱的工作流程
高速逆流色谱条件的选择
对用于HSCCC分离的溶剂体系应满足要求 (1) 溶剂体系不会造成样品的分解与变性； (2) 对样品有足够的溶解度； (3) 样品在溶剂体系中有合适的分配系数，一般认为分配系数在0.2～2的范围内较为合适，针对不同的仪器，在上机后根据不同的情况进行一步调试； (4) 固定相能够实现足够高的保留。
高速逆流色谱
汇报内容
一.高速逆流色谱的发展二.高速逆流色谱的原理三.高速逆流色谱的特点
一.高速逆流色谱发展
逆流色谱起源于20世纪50年代多极萃取技术
但是多级萃取设备庞大复杂，溶剂体系容易乳化，溶剂耗量大，分离时间长。
液滴逆流色谱 DCCC（20世纪70年代）
缺点：流动相流速低,每小时只有十几毫升;分离过程长,一般需要几十小时才能完成一次几个组分的分离；连接处容易出现渗漏
三.高速逆流色谱特点
不存在样品的不可逆吸附，理论回收率100%

高速逆流色谱操作

高速逆流色谱操作步骤和要点操作步骤：1 配液。

超声脱气约20 min，脱气后静置冷却至室温后泵液。

2 打开恒温水浴，将温度升至设定温度。

3 泵固定相。

以10-20 mL/min流速泵入固定相，检测器出口端流出固定相约20-50 mL后停泵。

4 平衡。

打开紫外检测器开始预热，正转转动主机至900 rpm（FWD为正转，REV 为反转），同时以3 mL/min流速泵入流动相，至出口端流出流动相且此时紫外信号稳定，体系基本己平衡。

5 进样。

以体系的上、下相溶解一定量的样品，超声溶解均匀后，在装样注射器中倒入样品溶液，将进样六通问切换至load，推排气泡后吸液至样品全进入进样圈中，将load切换至inject，检测器、工作站调零开始记录。

6 接收流分。

工作站记录，设备运行时间为如5 min，保存后采集数据，保存。

7清洗。

断开泵与主机的连接，将主机进口与气管出口连接，吹气；将主机中溶剂吹出后，泵入约50 mL清洗液，吹气，重复此过程2~3次；最后一次长时间（1小时左右直至吹干）吹气时将主机内液体吹尽。

8 关机。

操作要点：本仪器适用于有机溶剂，316L不锈钢及PTFE材料可耐受的酸碱溶液。

1 本设备可承受的压力限制为2 MPa，请勿泵入不可溶解的固体颗粒。

2 设备运行前先检查连接管路是否正确，是否紧密；检测器波长是否正确。

3 配液时溶剂应混合均匀，自然分层澄清后可超声脱气，脱气时间不宜过长，脱气后如溶剂有温热则最好冷却静置至室温后使用。

4 样品溶解可为体系上相或下相，或同时两相溶解；不可以单一的溶剂来溶解进样，以免破坏主机内的体系平衡。

5 每次做完实验请及时清洗设备，一般清洗液为甲醇、乙醇等，如体系内含有酸、碱、盐等溶剂，建议先以纯净水清洗l~2次后，再以清洗液清洗。

6 日常清洗完设备后；如需继续进行实验，请设备放置2小时后重新平衡。

7 操作中如有气泡、流失或其他异常现象，可致电上海同田生物技术有限公司技术支持部2附件1：仪器性能检验苯酚、间苯二酚的分离体系：正已烷：乙酸乙酯：乙醇：水=1：1：1.2：0.8把溶剂按比例配制好，混合均匀后分相，上相用作固定相，下相用作流动相，分别超声脱气约20 min。