高速逆流色谱仪

高效液相色谱技术的特点
操作简单易行，无需太多样品前处理 样品负载能力强，制备量大，重现性好 应用范围广操作成本低，无制备柱消耗，
后续投入较低 无需固体支撑，不存在样品的不可逆吸附
，理论回收率100%产品纯度高 适用于制备型分离 可方便地与其他分析仪器连用
HSCCC与HPLC的分离技术特征比较
（1）参比已知的溶剂体系 （2）测定分配系数即K值法 （3）HPLC扫描法 （4）薄层色谱法
HSCCC技术的应用领域
在中药现代化中的应用 在抗生素分离纯化中的应用 在异构体分离纯化中的应用 在食品行业中的应用 在化学合成中的应用 在生物领域中的应用 在发酵产物分离纯化中的应用
HSCCC在中药现代化中的应用
分离柱系统
分离系统柱是色谱仪的核心部件，柱系统 的连接方式以及柱系统内螺旋管的缠绕方 式决定了一起的分离性能。
目前柱系统的连接方式主要包括： 单柱系统 双柱系统 三柱系统
检测器
几乎所有的定量分析仪都可作为高速逆 流色谱仪的检测器。 主要包括： 紫外-可见光度检测器（UV-Vis） 傅里叶红外光谱检测器（FTIR） 薄层色谱检测器（TLC） 近年新出现质谱（MS）
自1995年以来，国外已有5本英文专著出版， 我国目前也有两本中文专著出版。
高速逆流色谱仪的设计原理
HSCCC分离原理
利用一种特殊的流体动力学现象使互不混 溶的两相溶剂(固定相和流动相)在螺旋管 中高效地接触、混合、分配和传递
其中固定相以一种相对均匀的方式分布在 一根聚四氟乙烯管绕成的螺旋管中
不同极性样品的洗脱顺序的原理
HCSSS的溶剂体系选择步骤
（1）尽可能获取足够多的有关被分离样品的 信息。
（2）选择一选择另外两种溶剂种最佳溶剂是 样品充分溶解于该溶剂中。
（3）选择另外两种溶剂。其中一种的极性比 最佳溶剂强，另一种比最佳溶剂弱，最佳 溶剂后，可以形成稳定的两相溶剂体系。
对于未知样品选择溶剂体系方法：
液体传输系统特点
流速既具有短期稳定性，又具有长期重现 性；
流速易于调节；
能传送多种实际和溶剂；
生产成本地，运行消耗少。
连接管道
因分离量以及分离规模的不同而有差异 分析性HSCCC仪： 内径为0.8 mm-1.0 mm，其中0.85 mm最为常
用。 制备型HSCCC仪：
螺旋管内径可达到2.6 mm或更大，柱体积 相应可达3 L 管材一般为聚四氟乙烯 连接方式主要为压管螺丝固定和插入链
参数
固定相 机理
溶质与固定相作用
上样量 分离效率 操作 费用 危险性
HSCCC
HPLC
液体
液-液分配（简单）
分配、吸附、离子交换、 体积排阻等（复杂
与液体固体相的整个体 在固体相与固体支撑体
积相接触
的界面相相互作用
高
中等
低
高
容易
复杂
便宜
昂贵
高速运转产生一些机械 安全 故障
HSCCC分离系统
液体传输系统
（1）将试样注入到高效逆流色谱体系之前需 对其进行必要的前处理。如稀释、溶解、 过滤。
（2）高粘度或高浓度的试样，需要先用体系 中流动相或固定相进行溶解稀释，以避免 固定相的大量流失。
溶剂体系的选择
（1）能够形成稳定的两相溶剂体系 （2）不造成样品的分解与变性 （3）足够高的样品溶解度 （4）样品在系统中有合适的分配系数值 （5）固定相能实现足够高的保留
单体化合物 指纹图谱
用于制药中间体的质 量控制
成药质量控制
指导原药材种植/ GAP基地建设
传输泵
在高速逆流色谱分离时，通常是先通过传输 泵将固定相注满分离柱管，然后在一定的转速下 将流动相泵入分离柱。待分离柱中固定相与流动 相达到平衡后，将一定量的试样通过切换阀由流 动相带入分离柱中通过流动相的连续推力实现样 品的分离。
进样阀
通过六通阀或旋转进样阀一次性注入试样。 在分离过程中试样溶液必须以完整的试样塞挤入 或插入流动相载流中再以流动相带入分离柱
流动相以一定的速度通过固定相，并按照 被分离物质分配系数的不同依次洗脱而获 得分离
混合区：在靠近离心轴
心大约有四分之一的区 域，两相的激烈混合
静置区：两相溶剂分成
两层，重相在外部，轻 相在内部
以1000转/分的速率进行旋 转，在二维力场的作用下 分离管柱内混合和传递的 频率可达到17次/S，从而 实现高效的分离
HSCCC-HPLC-DAD连用分离
HSCCC分离效果影响因素
来源硬件部分的影响，如螺旋管柱的几何 设计、柱径及柱体积等
溶剂体系
操作条件如仪器转速、方向、流动相的洗 脱方式、流速及柱温等。
分离前准备
仪器准备
（1）了解仪器的性能指标
（2）对电机进行必要的维护
（3）及时清洗分离柱管
试样准备
高பைடு நூலகம்逆流色谱仪
学号：107551300459 姓名：吴智慧
内容简介
高速逆流色谱的原理及特点 高速逆流色谱分离系统 高速逆流色谱分离效果的影响因素及分离
前准备 高速逆流色谱技术发展 高速逆流色谱技术应用
发展概况
HSCCC技术最早是由美国国立卫生院Ito博士研 制应用。
我国对HSCCC技术应用较早，HSCCC技术发展十 分迅速，在过去20-30年中，出现了一系列新 型的分离技术，积累了大量的科研成果。