药物长期毒性实验设计原则

二、长期毒性试验的基本目的
1.预测受试物可能引起的临床不良反应，包括 不良反应的性质、程度、剂量-反应和时间-反应关 系、可逆性等
2.预测临床试验的起始剂量和重复用药的安全 剂量范围（下图）
Biological Response
FEL: Frank Effect Level
LOAEL: Lowest Observable Adverse Effect Level NOAEL:No Observable Adverse Effect Level LOEL: Lowest Observable Effect Level NOEL: No Observable Effect Level
如有合理的理由说明所申报的中药、天 然药物复方制剂有一定的安全性，所检查 的脏器和组织可减少为：心、肝、脾肺、 肾、脑、胃、小肠、大肠、垂 体、脊髓、 骨髓、淋巴结、膀胱、睾丸、附睾、子宫、 卵巢、胸腺、肾上腺及给药局部组织等。
Log[Dose]
3.推测受试物重复给药的临床毒性靶器官或靶组织
4.提示临床试验中需重点监测的指标
5.其它 毒作用的敏感检测指标和生物学标志 毒作用机制研究 受试物的毒物动力学和代谢研究 中毒的解救措施
三、长期毒性动物实验设计内容
1.受试物 长期毒性试验的受试物应能充分代表临床试
验受试物和上市药品，因此受试物应采用制备工 艺稳定、符合临床试用质量标准规定的样品，一 般用中试样品，并注明受试物的名称、来源、批 号含量（或规格） 、保存条件及配制方法等
3~6只。
3.给药方式 原则上应与临床拟用药途径相同。如选择其他
的给药途径，应说明理由 4.给药频率
原则上应每天给药， 且每天给药时间相同。 试验周期长 （3个月或以上）者，也可采取每周 给药6天。特殊类型的受试物由于其毒性特点和 临床给药方案等原因，应根据具体药物的特点设 计给药频率
5.给药期限
(1)空白对照：又称正常对照 (2)标准对照：又称有效对照或阳性对照 (3)组间对照： (4)自身对照：
2.重复原则
(1)足够的实验样本数：
(2)实验结果的可重复性：
3.随机原则 为了减少个体差异这种非处理因素的干
扰，应于实验前将实验动物依统计学原则 进行随机分组，以此达到尽可能降低非处 理因素的混杂效应，从而提高每组动物间 均衡性的目的。
2.实验动物
▪ 啮齿类，常用6-9周龄大鼠； ▪ 非啮齿类，常用6-12月龄Beagle 犬或猴。 ▪ 健康、体重均一，雌性应未孕，动物雌雄各半。 ▪ 当临床拟用于单性别时，可采用相应性别的动物。 ▪ 每组动物的数量应能够满足试验结果的分析和评价的需要。
一般大鼠可为雌、雄各10~30只，犬或者猴可为雌、雄各
●尿糖 ●尿胆红素 ●酮体
●潜血
●白细胞
5、系统尸解和组织病理学检查
5．1脏器系数 应对脏器进行称重，并计算脏器系数。脏器 系数=脏器湿重/动物总体重，具体见表4 表4长期毒性试验中需称重并计算脏器系数的器官
长期毒性试验中需称重并计算脏器系数的器官
●脑 ●肝脏 ●脾脏 ●肾上腺 ●睾丸 ●子宫
●心脏 ●肺脏 ●肾脏 ●胸腺 ●附睾 ●卵巢
根据药物的给药疗程确定给药期限： 单次给药：2周 ≤2周 1个月 ≤1个月 1或3个月 ≤3个月 3或6个月 ≤6个月 6或9个月
＞6个月 6或9个月
6.给药剂量
三个剂量组：高、中、低+空白组 低剂量组原则上应高于动物药效学试验的等效 剂量或预期的临床治疗剂量的等效剂量。高剂量 组原则上应使动物产生明显的毒性反应，甚至可 引起少量动物死亡（对于毒性较小的中药，可尽 量采用最大给药量）。在高、低剂量之间至少应 再设一个中剂量组。
长期接触该化合物可以引起机体危害的阈剂量和 无作用剂量。为进行该化合物的危险性评价与制 定人接触该化合物的安全限量标准提供毒理学依 据，如最高容许浓度和每日容许摄入量等。
一、试验设计遵循三原则
1.对照原则 在动物实验中，要求相比较的各组间动物的种类、 性别、年龄、体重等尽可能地一致。对照组与实 验组同等重要，两组的动物数应相等。
5.2系统尸解
应对所有动物进行尸解，尸解应全面细致，为组 织病理学检查提供参考。具体脏器、组织参见下。
脑（大脑、小脑、脑干），脊髓（颈、胸、腰 段）、垂体 、胸腺、甲状腺、甲状旁腺、食管 、 唾液腺、胃、小肠和大肠、肝脏 、胆囊* 肾脏、肾 上腺、脾脏、胰腺、气管、肺、主动脉 、心脏、附 睾、睾丸、卵巢、子宫、前列腺 乳腺、坐骨神经、 膀胱、眼（眼科检查发现异常时）*、视神经*、给药 局部、骨髓、淋巴结（包括给药局部淋巴结、肠系膜 淋巴结）
●尿素氮
●肌酐
●总蛋白
●白蛋白
●血糖
●总胆红素
●总胆固醇
●甘油三酯
●钠离子浓度
●钾离子浓度
●氯离子浓度
●肌酸磷酸激酶
4、体温、眼科检查、尿液检查、心电图检查
非啮齿类动物还应进行体温、眼科检查、尿液 检查、心电图检查等。见表3
表3 非啮齿类动物尿液分析指标 非啮齿类动物尿液分析指标
●尿液外观
●比重
●pH值 ●尿蛋白 ●尿胆原
一、毒理学的研究方法
▪ 急性毒性 ▪ 长期毒性 ▪ 特殊毒理学方法
（致突变实验、生殖毒性试验、致癌作用试 验）
长期毒性
▪ 长期毒性是指以低剂量外来化合物长期给予实验
动物接触，观察其 对实验动物所产生的毒性效应。 包括行为改变、血液、生化反应以及各器官的损 害程度等。
▪ 长期毒性试验是确定外来化合物的毒性下限，即
Biological Reቤተ መጻሕፍቲ ባይዱponse
高剂量组 中剂量组：LOAEL 低剂量组：NOAEL
Log[Dose]
7.观察指标
1.一般状况观察
在试验期间，应观察动物外观体征、行为活动、 腺体分泌、呼吸、粪便、摄食量、体重、给药局 部反应。
2.血液学指标
至少应观察红细胞计数、血红蛋白、白细胞 计数及其分类、血小板、网织红细胞计数、凝血 酶原时间等。当受试物可能对造血系统有影响时， 应进一步进行骨髓的检查。见表1
表1血液学指标
血液学指标
●红细胞计数
●血红蛋白
●红细胞容积
●平均红细胞容积
●平均红细胞血红蛋白 ●平均红细胞血红蛋白浓 度
●网织红细胞计数 ●白细胞计数及其分类
●血小板计数
●凝血酶原时间
3.血液生化检查 见表2
表2血液生化学指标
血液生化学指标
●天门冬氨酸转氨酶 ●丙氨酸转氨酶
●碱性磷酸酶
●γ-谷氨酰转移酶（非啮齿类动物）