脂肪乳实验(汇编)

第2章脂肪乳制备技术

一、教学要求

1．掌握生物分离科学的进展、相关项单元操作技术的基本原理。

2.掌握实验方案设计的基本原则，学会实验方案设计的基本方法。

3．熟练地实施设计方案，优化实验条件。

4．掌握所学技术、方法在药学研究中的应用。

5. 掌握实验数据的统计与处理，学会实验图表的制作方法以及实验结果分析讨论

二、教学学时

计划课内64学时，其中讲授8学时、实验研究56学时。计划课外16学时，其中文献综述10学时、以小组为单位答疑2学时，集中论文交流4学时）

三、讲授的内容

1．载药脂肪乳的组成以及在药物制剂中的研究进展。

2．脂肪乳制备的基本流程和原则。

3．各实验的基本原理，操作步骤和注意事项。

4. 标准曲线的制作方法和要求，

5．在本模块基础上开展蛋白质研究的思路和常用技术、方法。

6. 实验设计和实施的基本的基本要求、注意事项。

四、研究课题

1．氯维地平脂肪乳制剂的处方研究

2．氯维地平脂肪乳制剂的工艺优化

3. 氯维地平脂肪乳制剂的表征及质量评价

4. 氯维地平脂肪乳制剂的稳定性研究

五、主要单元操作技术与设备

1、单元操作技术：剪切乳化、高压均质、微射流

2、主要设备：高剪切分散乳化机、高压微射流纳米分散仪、高压纳米均质机、Zetasizer/Nano-ZS90激光粒度仪、全自动不锈钢立式电热蒸汽消毒器、磁力搅拌器、烘箱、真空干燥箱、分析天平、电子台秤、制冰机、、紫外-可见光分光光度计、荧光分光光度计、高效液相色谱等。

六、教学组织方式

两人一组，所有实验由学生设计方案，独立完成。

七、教学的重点和难点

1、学习的自主性加大，审核学生的实验方案、提供必要的条件。

2、讲授部分的难点是进展、制备思路、原则和常用技术、方法的学习。

3、本模块涉及的仪器特别多，技术方法多，学习难度较大，力求与理论课的对接、举一反三。

八、难点的解决办法：

1、认真备课，该讲的讲深、讲透，重点一对一答疑。

2、做好设计报告的审核，提前一个月做好仪器检修和药品的准备。

3、做好必要的单元操作示教和研究过程的现场指导。

九、相关参考书

1、孙彦，生物分离工程；

2、严希康，生化分离技术；

3、谭天伟，生物分离技术

4、李建武，生物化学原理和方法；

5、生物分离工程实验指导

2—1氯维地平脂肪乳的处方研究

材料与方法

1 实验材料

T-18basic高剪切分散乳化机（IKA）；

M100 PCE高压微射流纳米分散仪（Microfluidics，USA）；

高压纳米均质机（广州聚能生物科技有限公司）

YM50全自动不锈钢立式电热蒸汽消毒器（上海三申）；

DF-101S磁力搅拌器（郑州长城科工贸有限公司）；

Zetasizer/Nano-ZS90激光粒度仪（Malvern，英国）；

蛋黄卵磷脂（Lipoid E80，供注射用）

甘油（江西益普生药业有限公司，供注射用）

EDTA-2Na（阿拉丁）

油酸（Lipoid，供注射用）

油酸钠（Lipoid，供注射用）；

2 实验方法

通过单因素实验，以外观、粒径、粒径分布、zeta电位、游离脂肪酸等指标来评价，研究并探讨了油相、稳定剂以及抗氧剂对氯维地平脂肪乳的影响。

2.1处方组分的选择

以美国FDA批准上市的氯维地平静脉注射用脂肪乳处方为参考（见下表），在此基础上，选择对制剂影响较大的关键组分进行优化。

美国 FDA 批准上市的氯维地平静脉注射用脂肪乳处方

2.1．1油的种类和用量考察

大豆油和 MCT 是脂肪乳常用的油相，以基础处方作为基本处方，改变油相，制备氯维地平脂肪乳，考察不同油相比例对乳剂的粒径等稳定性指标的影响。

2.1.2稳定剂的种类和用量考察

油酸、油酸钠是乳剂中常用的的稳定剂，以基础处方作为基本处方，改变稳定剂的种类和用量，制备氯维地平脂肪乳，分别考察不同稳定剂及其用量对乳剂的粒径等稳定性指标的影响。

2.1.3抗氧剂的种类和用量考察

由于脂肪乳中油和磷脂均易于空气中氧气反应，所以加入抗氧剂保护。选用注射液中常用的水溶性抗氧剂硫代硫酸钠、脂溶性抗氧剂VE 以及两亲性抗氧剂硫辛酸进行对比，以基础处方作为基本处方，改变抗氧剂的种类和用量，制备氯维地平脂肪乳，然后在 60℃条件下放置 10 天，取样测定粒径、PDI、zeta 电位等各项指标，考察抗氧剂种类对氯维地平脂肪乳稳定性的影响，并进一步研究其最适合的用量。

2.1.4 EDTA-2Na 的用量

在脂肪乳的制备过程中，尤其是剪切、匀质等过程，容易引入微量金属离子，金属离子会促进油脂氧化。金属离子螯合剂 EDTA-2Na 能与微量金属离子络合，具有提高油脂抗氧化及防止变色的作用。参考相关文献以及美国 FDA 批准上市的处方选择用量 0.005%

2.2质量的评价指标及方法

2.2.1外观

氯维地平脂肪乳制剂的外观应为乳白色，均匀，流动性良好。2.2.2粒径

静脉注射用乳剂属于热力学不稳定体系，根据粒径可以判断是否符合静脉注射的要求，据粒度分布可以对制剂的均一稳定性进行预测。

不同用途的乳剂对粒径大小要求不同。综合分析多种上市静脉注射用乳剂的质量标准，对于粒径和粒度分布的要求多为用库尔特计数器或激光粒度仪测定，大多数乳粒应在 0.5 μm 以下，在大于 0.5 μm 的乳粒总数中，大于 1 μm 的乳粒数不得超过 3％，并不得检出大于 5 μm 的乳粒。

本实验过程将氯维地平脂肪乳用超纯水稀释一定的倍数，通过激光粒度仪进行粒径的测定。

2.2.3 zeta 电位

zeta 电位是连续相与附着在分散粒子上的流体稳定层之间的电势差，它是对颗粒之间排斥力强度的度量，因此 zeta 电位是衡量体系稳定性的一个重要指标。目前测量zeta 电位的方法主要有电泳法、电渗法、流动电位法以及超声波法，其中以电泳法应用最广。正负电荷符号都可以形成高 zeta 电位，即＜-30 mV 和＞+30 mV 都将视为高 zeta 电位。高 zeta 电位意味着较高的稳定性，稳定性较好的分散液具有抗凝聚性。

2.2.4游离脂肪酸

磷脂和植物油在制备、灭菌以及贮藏过程中均会水解，产生游离脂肪酸，导致脂肪乳 pH 值降低，pH 的降低显著降低磷脂的离子化程度，引起 zeta 电位的降低，从而导致脂肪乳不稳定，因此其含量反映了乳剂的稳定性。常用尼罗蓝法来测定游离脂肪酸含量，其浓度不得超过 5 mmol/L。

具体方法：（1）尼罗蓝显色剂的配制：称取尼罗蓝 0.01 g 溶解于 50 ml 水中，加正庚烷 25 ml 振摇，弃去上层正庚烷，反复操作