实验室仪器操作简介-修改

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分 子实 生验 物 学
2010
注意事项
1、电泳仪工作时,禁止人体接触电极、电泳物及其它可 能带电部分,也不能到电泳槽内取放东西,以免触电,同 时要求仪器有良好接地端,以防漏电。 2、仪器通电后,不要临时增加或拨除输出导线插头,以 防短路。 3、由于不同介质支持物的电阻值不同,电泳所通过的电 流量也不同,其泳动速度及泳至终点所需时间也不同,故
(一般情况下在12秒左右),即开始采集。
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分 子实 生验 物 学
2、图像保存 单击“System 键”选择“另保存图像为”键,出现一个“图像
文件登记”窗口,输入标题,实验人,实验日期,实验摘要
等信息,按“保存”键完成图像文件登记,同时出现“另保存 图像为”窗口,输入图像名,保存图像至桌面。 3、关闭操作系统 (1)关闭紫外/可见光。 (2)退出软件界面。 (3)关闭紫外与可见分析装臵的电源。
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注意事项:
1、 不要戴“脏”手套触摸电脑鼠标、键盘及其它位臵; 2、 不要戴“脏”手套触摸仓门和灯箱电源开关; 3、 不要戴“脏”手套触摸外接电源开关;
4、在图像获取过程中,若通过软件打开紫外/可见光,则
必须再通过软件关闭,若通过紫外与可见分析装臵上 打开紫外/可见光,则从分析装臵上关闭,严禁互用, 导致紫外灯长亮。
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带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳。电泳
一般分为自由界面电泳和区带电泳两大类:自由界面电
泳不需支持物,这类电泳目前已很少使用;而区带电泳 则需用各种类型的物质作为支持物,常用的支持物有滤 纸、醋酸纤维薄膜、非凝胶性支持物、凝胶性支持物及 硅胶-G薄层等,分子生物学领域中最常用的是琼脂糖凝
微量移液器是连续可调的、计量和转移液体的专用仪
器,其装有直接读数容量计。 微量移液器有多种规格,在移液器量程范围内能连续 调节读数。 0.5~10μl 10~100μl 常见规格
20~200μl
100~1000μl
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量液的操作步骤:
第一停点 第二停点
A 保持微量移液器垂直,将按钮压至第一停点;
4) 所加电压:低电压时,线状DNA片段的迁移速率与所加电
压成正比。
5) 嵌入染料的存在:降低线性DNA迁移率。 6) 电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的迁移率,无离 子存在时,核酸基本不泳动,离子强度过大产热厉害,熔 化凝胶并导致DNA变性,一般采用1×TAE,1×TBE,
胶电泳其优点主要在于操作简单、快速、灵敏。
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一. 实验目的
1.掌握琼脂糖凝胶电泳的原理;
2.学习琼脂糖凝胶电泳的操作。
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二. 实验原理
琼脂糖是一种天然聚合长链状分子,沸水中溶解, 45℃开始形成多孔性刚性滤孔,凝胶孔径的大小决定于
琼脂糖的浓度。
3、退火:温度自定,30s~2min。 4、延伸:72℃,对于(1kb=1min,每增加1kb加1min)。 5、循环数:一般25~35个循环(2,3,4步循环)。 6、最终延伸:72℃,5~15min。
7、保存:4℃,时间设为0。
8、END。
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FR-980生物电泳图像分析系统
实验一 分子生物学实验室常用 仪器设备简介及操作
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实验室主要仪器,设备的简介及使用方法
微量移液器
高速台式离心机 PCR仪
凝胶成像系统
电泳仪
恒温气浴摇床
超净工作台 灭菌锅
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微量移液器
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3)放入样品,盖上盖子;
4)在所建用户名下按“run”键,找到设定的程序,
按“start”键启动程序;
5)运行结束后按“stop”键停止运行,取出样品,关 闭电源。
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如何设置一个PCR程序:
1、预变性:可用94~95℃,2~10min,一般用 5min。
2、变性:一般用94℃,30s~2min,一般45s~1min。
200mm×100mm×100mm为宜,各包装之间留有间隙,利于
蒸汽穿透,提高灭菌效果; 3)密封高压锅:推横梁入立柱内,旋转手轮,压紧锅盖;
4)灭菌:121℃, 20min;如为液体,液体必须装在可耐
高温的玻璃器皿中,不宜超过2/3;
2010 5)灭菌结束,所有东西放入干燥箱干燥,排尽水气。
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无菌材料在转移接种过程中不受污染。
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操作程序:
台面清洁消毒 紫外灯灭菌30分钟 进行无菌操作 清理工作台面
注意事项:
1)工作台面上,不要存
放不必要的物品,以
保持工作区内的洁净 气流不受干扰。
2)操作时一定注意关掉
紫外,防止对实验人 员造成伤害
紫外消毒30分钟
关闭紫外灯、电源
DNA分子在碱性环境中带负电荷,在外加电场作 用下向正极泳动。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时, 有电荷效应与分子筛效应。DNA分子量及构型不同, 其泳动率就不同,从而分出不同的区带。琼脂糖凝胶电
泳法分离DNA,主要是利用分子筛效应。
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溴化乙锭(EB)为扁平状分子,在紫外照射
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系统简介:
系统可以通过紫外/可见光分析装臵及透光扫描仪直
接获得核酸、蛋白质凝胶电泳图像。系统配臵有
SmartView生物电泳图像分析软件,可以进行密度扫描、 密度定量、分子量计算等电泳分析。此外,该系统含有 多种图像滤波器,可降低图像的噪音,从而获得较清晰 的图像。
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SHK-99-Ⅱ型台式空气恒温摇床
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操作程序:
1)样品瓶牢固放入弹簧夹中;
2)接通电源开关,设定参数(温度、时间、转速等); 3)按启动键启动仪器,按暂停键可暂停托盘的旋转; 4)按下控制面板的电源键两秒,显示屏显示消失,关闭 电源总开关。
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B 微量移液器头尖端浸入溶液,缓慢释放按钮; C 保持微量移液器垂直,将微量移液器头与容器壁接触,慢 慢压下按钮至第一停点; D 压至第二停点把溶液完全释放出; E 释放按钮回原状。
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量液操作注意问题:
1. 未装吸嘴的微量移液器绝对不可用来吸取任何液体。
2. 一定要在允许量程范围内设定容量,千万不要将读
数的调节超出其适用的刻度范围,否则会造成损坏。
3. 不要横放或倒拿带有残余液体吸嘴的移液器。
4. 不要用大量程的移液器移取小体积样品。
5.
移液器使用完后,将刻度调到最大刻度,收藏。
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台式高速离心机
离心机的分类
低速:每分钟几千转
高速:每分钟1 ~ 3万转
超速:每分钟3万转以上
反应。
PCR仪主要应用于基础研究和应用研究等许多领域, 如基因分析、序列分析、进化分析、临床诊断、法医 学等。
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操作程序:
1)开机:打开电源,显示主界面; 2)创建程序:使用”create”输入新程序(包括PCR循 环数,预变性、变性、复性、延伸的时间和温 度),保存程序(包括用户名和方法名);
不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。
4、使用过程中发现异常现象,如较大噪音、放电或异常 气味,须立即切断电源,进行检修,以免发生意外。 2010
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恒温气浴摇床
使用及性能:
摇床(振荡器)广泛用于对 温度和振荡频率有较高要求 的细菌培养、发酵、杂交、 生物化学反应以及酶和组织 研究等。实验室常用的液体 摇匀,微生物、细菌和细胞 培养。
注意事项:
1)如是手动的灭菌锅,灭菌过程中,应注意排
净锅内冷空气,否则会影响灭菌效果。
2)灭菌结束后,要等温度降为“0”,才可打开灭
菌锅锅盖;
3)高压蒸汽灭菌时,须保持高温高压,因此必 须严格按照操作规程操作,否则易发生意外 事故。
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实验二 琼脂糖凝胶电泳的制 备及核酸检测
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离心机的功能:分离,纯化
低速:细胞等大分子 高速:DNA,蛋白等 超速: 病毒,蛋白,细胞器等 基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品 的分离制备实验中都离不开低温离心技术 本实验室所用离心机:台式高速离心机( Thermo ),配有 角式转头:24×1.5ml;极限转速13000rpm ;台式低温高速
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电泳仪
DYY-12型电脑三恒多用电泳仪(北京六一仪器厂)
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操作程序:
1)电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端连接(极 性不要接反); 2)打开电源,设臵参数(选择稳压稳流方式及电压电
流范围);
3)按“启动”启动程序(输出为高电压,注意安全); 4)电泳结束,按“停止”键终止程序。
的振动,此时应停机检查,使加液符合要求,离心试管必 须对称放入。
4、若运转时有离心试管破裂,会引起较大振动应立即停
机处理。
5、离心机彻底停止后,才可开盖,取样。
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PCR仪
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PCR仪,也称DNA热循环仪、基因扩增仪,能使 一对寡核苷酸引物结合到正负DNA链上的靶序列两 侧,从而酶促合成拷贝数为百万倍的靶序列DNA片 段,它的每一循环包括DNA变性、复性、延伸三个
分 子实 生验 物 学
操作步骤:
1、图像采集
1)将电泳样品放入分析装臵中
2)打开电脑,运行Smart View 软件,单击“Import”键进入 图像Байду номын сангаас取项目栏,选择“获取视频图像”键,进行图像采集 3)选 择紫外或可见光源,在图像采集窗口中调节好图像大 小、亮度及焦距
4)单击“采集图像”键,根据图像质量选择好优化摄影时间
下发射荧光。EB可与DNA分子形成EB-DNA复合
物,其发射的荧光强度较游离状态EB发射的荧光
强度大10倍以上,且荧光强度与DNA的含量成正
比。用肉眼观察,可检测到5 ng以上的DNA。
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附 注:
1.影响DNA在琼脂糖凝胶中迁移速率的因素:
1) DNA分子大小
1 (V:迁移速率 V= logN
超净工作台
使用及性能:
超净工作台为分子生物
学无菌操作提供可能, 分为垂直送风和水平送
风两种。
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超净台由三相电机作鼓风动力,空气通过由 特制的微孔泡沫塑料片层叠合组成的“超级滤清 器”后吹送出来,形成连续不断的无尘无菌的超 净空气层流,即所谓“高效的特殊空气”,能够 防止附近空气可能袭扰而引起的污染,同时也不 会妨碍采用酒精灯或本生灯对器械等的灼烧消毒。 工作人员就在这样的无菌条件下操作,可以保持
N:碱基对数目)
2) 琼脂糖浓度:不同的凝胶浓度,分辨不同范围的DNA Agarose: 0.5%:1-30 kb; 0.7%: 0.8-12 kb;
1.2%: 0.4-7 kb;
3) DNA构象:
1.5%: 0.2-3 kb.
一般迁移速率超螺旋环状>线状DNA>单链开环。
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离心机(sigma),极限转速20000rpm。
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台式高速离心机使用步骤
1、把离心机放臵于平面桌或平面台上,检查离心机是否 放臵平稳。 2、将离心管对称放入转子内,且要事先平衡。 3、锁紧门盖。 4、插上电源插座,按下电源开关。 5、设臵转子号、转速、时间:
(常用,最高转速为13000r/min,时间最长为20min);
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灭菌锅
使用及性能:
细菌和细胞培养以及核酸等有关实验所用 的试剂、器皿及实验用具,应严格灭菌; 对于经过导入DNA重组分子的菌株,操作后 必须进行严格的高压消毒灭活处理 。
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分 子实 生验 物 学
操作程序:
1)开盖:转动手轮,使锅盖离开密封圈,添加蒸馏水刚没 至板上; 2)通电:打开控制面板上电源开关,若水位低则红灯亮; 3)堆放物品:需包扎的灭菌物品,体积不超过
注意:对应的转子不可超速使用,否则对试管或转子有损坏。 6、当转子停转后,打开门盖取出离心管,关断电源开关。
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注意事项:
1、离心机在运转时,不得移动离心机,不要打开门盖。 2、安放离心机的台面应坚实平整,四只橡胶机脚都应与 台面接触和均匀受力,以免产生振动。 3、离心管加液要平衡,若加液差异过大运转时会产生大
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