反义核苷酸技术
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Lipofectamine® RNAiMAX Reagent
cells
siRNA
Dilute Lipofectamine® RNAiMAX Reagent in Opti-MEM® medium
Dilute siRNA in Opti-MEM® medium
Add Diluted siRNA to Diluted Lipofectamine® RNAiMAX Reagent (1:1 ratio)
检测方法： 基因表达谱芯片
脱靶效应
影响因素
siRNA浓度 转染试剂 1、针对同一靶基因设计2条以上抑制效率 在70％以上的不同siRNA序列，分别进行 如何尽量避免？ 实验 2、采用不同转染试剂进行实验
一、RNAi基本概念及相关作用机制 二、siRNA序列设计及制备；脱靶效应 三、siRNA转染过程相关问题
Add siRNA-reagent complex to cells
1、多设计几条siRNA 序列，以筛选最特 异、 最有效的siRNA序列
2、阴性对照
siRNA序列设计注意事项
3、阳性对照 4、siRNA荧光标记
1、化学合成法
siRNA制备方法
2、体外转录法 3、Dicer/RNaseⅢ酶 解
定义：
指siRNA转染中的非特异反应，这不仅包 括siRNA序列，还包括转染试剂本身或其他相 关因素对转染细胞的其他相关基因发生非特异 性的表达变化，从而导致假阳性和假阴性。
方法： 化学方法，电转化 脂质体类 转染试剂 非脂质体聚合物类 EntransterTM 系列(EntransterTM-R) siRNA转染 1、细胞数量 2、siRNA浓度 3、血清 转染过程相关问题 4、抗生素 5、转染后换液 6、转染条件优化 7、RNAi检测方法
lipofectamineTM 2000和RNAiMAX
反义核酸技术
一、RNAi基本概念及相关作用机制 二、siRNA序列设计及制备；脱靶效应 三、siRNA转染过Βιβλιοθήκη Baidu相关问题
RNA干扰(RNA interference，RNAi)是双链RNA特异性地结合到 与之序列互补的mRNA上，导致mRNA降解，从而介导转录水平基因表 达抑制。
一、RNAi基本概念及相关作用机制 二、siRNA序列设计及制备；脱靶效应 三、siRNA转染过程相关问题