(推荐)《细胞化学染色》PPT课件
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2细胞化学染色-2010
髓过氧化物酶染色 （MPO或POX）
• 方法一 Washurn联苯胺法 • 原理：当细胞中存在具有活性的髓过氧
化物酶时，能分解底物H2O2释放新生态 氧，将联苯胺氧化成联苯胺蓝，后者与 亚硝基铁氢化钠形成稳定的蓝色颗粒定 位于胞浆中。
• 试剂：
• 1. 联苯胺溶液 0.3g联苯胺溶于99ml 88%～95%的乙醇溶液中，加360g/L亚硝 基铁氰化钠饱和溶液1ml，储存于棕色瓶 中，可保存8个月。
Ⅱ级 ++ 胞浆呈棕色片状沉淀， 小到中等颗粒约占胞浆面积 的50%～75%。
Ⅱ级 ++ 胞浆呈棕色片状沉淀，小 到中等颗粒约占胞浆面积的50% －75%。
• Ⅲ级 +++ 胞浆充满棕黑色沉淀， 分布均匀，中到大颗粒占胞浆面 积的75%－100%。
Ⅲ级 +++ 胞浆充满棕黑色沉淀， 分布均匀，中到大颗粒占胞浆面 积的75%－100%。
• ⒋真性红细胞增多症、骨髓纤维化、再生障碍性贫血 时增高，PNH时常减低。
• 5.某些肿瘤的鉴别诊断，如骨肿瘤、消化道肿瘤的肿瘤 细胞碱性磷酸酶常为较强阳性反应。
酸性磷酸酶染色（ACP）
• 方法一：Gomori硫化铅法 • 原理：
• 在酸性条件下（pH4.7）酸性磷酸酶能将底物（甘油磷 酸钠）水解，产生－PO43-，与Pb2+作用生成磷酸铅沉 淀，定位于胞浆中酶活性存在处，再与硫化铵作用， 生成棕黑色的硫化铅沉淀。
• 1. 固定剂 1∶9福尔马林乙醇液，即40％ 甲醛溶液（福尔马林）10ml加无水乙醇 90ml混合即得。
• 2. 苏丹黑B溶液（ 5g/L ） 0.5g苏丹黑B 粉剂溶于100ml 70%乙醇中，可用1月。
《血细胞化学染色》PPT课件
精品医学
17
精品医学
18
2.NAP积分值
计数100个成熟中性粒细胞（杆状 和分叶）,分别记录其分级情况：
精品医学
19
(-) 0分 (+) 1分 (++) 2分 (+++) 3分 (++++) 4分
阳性率 全部阳性反应细胞之和 积分值 各种阳性程度细胞的分值之和
精品医学
20
3.参考值 积分值 35-70分
（3）急性单核细胞白血病
可阳性，呈细颗粒状、弥散分布，有时 胞质边缘处颗粒较粗大。
精品医学
33
α-醋酸萘酚酯酶染色
（α-naphthol acetate esterase，α-NAE）
精品医学
34
α-醋酸萘酚
（基质液中）
【原理】
水解 α-醋酸萘酚酯酶 （细胞内）
α-萘酚
重氮盐
（坚牢蓝B）
胞浆不溶性灰黑色 或棕黑色沉淀
9
精品医学
10
【临床评价】
急性髓细胞白血病
鉴别
急性淋巴细胞白血病
精品医学
11
1. 急性髓细胞白血病
（1）急性粒细胞白血病 阳性反应
（2）急性单核细胞白血病 弱阳性反应
精品医学
12
2. 急性淋巴细胞白血病
阴性反应或阳性率< 3%(残留原粒细胞)
精品医学
13
中性粒细胞碱性磷酸酶染色
（neutrophilic alkaline phosphatase，NAP）
骨髓中贮存铁
幼红细胞内的Fe精（品细医学胞内铁）
44
【结果判断】
幼红细胞核染色为鲜红色,铁粒呈蓝 绿色。
2细胞化学染色-2010
• 4. 若出现因细胞太多，MPO反应较弱或着色不理想， 可用工作液对涂片进行再次染色，以增强染色效果。 KI的量对MPO的反应强度也有一定的调节作用。
• 5.碘化钾法MPO染色阳性颗粒易溶于水，应避免用水 冲洗。
• 1. 固定剂：1∶9甲醛乙醇液，即40%甲醛溶液 10ml加无水乙醇90ml混合即得。
• 2 . 磷酸盐缓冲溶液：0.067mol/L pH5.8。
• 3. KI溶液：500mg碘化钾溶于50ml 蒸馏水中。
• 4. 氧化MB溶液：500mg亚甲蓝（Methylene blue）溶于100ml 50%甲醇中，待完全溶解后， 加30% H2O2 50μl。
积的l00%，甚至遮盖胞核。
• 每例的血片，均计数100个中性粒细胞（杆状核及分叶核 粒细胞），求出NAP阳性细胞的百分比(阳性率)，并按 酶活性的强弱不同，求得阳性指数(积分)。
0级 0 胞浆呈原色，无颗粒。
Ⅰ级 + 胞浆呈浅灰色，细小蓝 黑色颗粒占胞浆面积的25%～ 50%。
Ⅰ级 + 胞浆呈浅灰色，细小蓝 黑色颗粒占胞浆面积的25%～ 50%。
• ⒋真性红细胞增多症、骨髓纤维化、再生障碍性贫血 时增高，PNH时常减低。
• 5.某些肿瘤的鉴别诊断，如骨肿瘤、消化道肿瘤的肿瘤 细胞碱性磷酸酶常为较强阳性反应。
酸性磷酸酶染色（ACP）
• 方法一：Gomori硫化铅法 • 原理：
• 在酸性条件下（pH4.7）酸性磷酸酶能将底物（甘油磷 酸钠）水解，产生－PO43-，与Pb2+作用生成磷酸铅沉 淀，定位于胞浆中酶活性存在处，再与硫化铵作用， 生成棕黑色的硫化铅沉淀。
Ⅳ级 ++++ 胞浆充满深黑色致密的 团块状沉淀，甚至遮盖胞核，中 到大颗粒占胞浆面积的l00%。
• 5.碘化钾法MPO染色阳性颗粒易溶于水，应避免用水 冲洗。
• 1. 固定剂：1∶9甲醛乙醇液，即40%甲醛溶液 10ml加无水乙醇90ml混合即得。
• 2 . 磷酸盐缓冲溶液：0.067mol/L pH5.8。
• 3. KI溶液：500mg碘化钾溶于50ml 蒸馏水中。
• 4. 氧化MB溶液：500mg亚甲蓝（Methylene blue）溶于100ml 50%甲醇中，待完全溶解后， 加30% H2O2 50μl。
积的l00%，甚至遮盖胞核。
• 每例的血片，均计数100个中性粒细胞（杆状核及分叶核 粒细胞），求出NAP阳性细胞的百分比(阳性率)，并按 酶活性的强弱不同，求得阳性指数(积分)。
0级 0 胞浆呈原色，无颗粒。
Ⅰ级 + 胞浆呈浅灰色，细小蓝 黑色颗粒占胞浆面积的25%～ 50%。
Ⅰ级 + 胞浆呈浅灰色，细小蓝 黑色颗粒占胞浆面积的25%～ 50%。
• ⒋真性红细胞增多症、骨髓纤维化、再生障碍性贫血 时增高，PNH时常减低。
• 5.某些肿瘤的鉴别诊断，如骨肿瘤、消化道肿瘤的肿瘤 细胞碱性磷酸酶常为较强阳性反应。
酸性磷酸酶染色（ACP）
• 方法一：Gomori硫化铅法 • 原理：
• 在酸性条件下（pH4.7）酸性磷酸酶能将底物（甘油磷 酸钠）水解，产生－PO43-，与Pb2+作用生成磷酸铅沉 淀，定位于胞浆中酶活性存在处，再与硫化铵作用， 生成棕黑色的硫化铅沉淀。
Ⅳ级 ++++ 胞浆充满深黑色致密的 团块状沉淀，甚至遮盖胞核，中 到大颗粒占胞浆面积的l00%。
《细胞化学染色》课件
、切片或裂解样品，确保样品处
标记染色剂
2
于最佳状态以获得清晰的染色结果。
选择适当的染色剂，与细胞内的目标
分子发生特异性反应。
3
洗涤
去除多余的染色剂，减少非特异性背
显微镜观察
4
景染色。
使用显微镜观察和记录染色后的细胞 结构和染色结果。
细胞化学染色的应用领域
1 病理学研究
方法
包括直接染色、间接染色和特殊染色等方法， 根据目的和需求选择适当的方法。
技术
需要合适的实验步骤和条件，包括样品制备、 染色剂选择和显微镜观察。
常用的细胞化学染色方法
伊纳尔反应
用于检测脱氧核糖核酸(DNA)的存在和分布。
酸性磷酸酶染色
用于检测酸性磷酸酶活性和酶的分布。
特殊染色
用于检测细胞中特定结构或分子的存在和分布，如免疫组化染色。
结论及展望
细胞化学染色是一种强大的技术，帮助我们深入了解细胞结构与功能。未来， 随着技术的不断发展和创新，细胞化学染色将在多个领域继续发挥重要作用。
细胞化学染色
细胞化学染色是一种通过特定染色剂使细胞内的化学成分显现的技术。它在 细胞研究和诊断中起着重要的作用，帮助我们更好地了解细胞的结构和功能。
细胞化学染色的定义
目的
通过染色剂将细胞内的特定化学成分显现出 来，例如核酸、蛋白质、多肽等。
原理
染色剂与细胞内化学成分之间的特异性反应， 例如酶活性、酸碱性和亲和性。
通过染色剂对病理变化 进行观察和鉴定，辅助 诊断和治疗决策。
2 细胞生物学研究
了解细胞结构和功能， 探索细胞内分子的表达 和相互作用。
3 药物研发
评估药物对细胞内目标 分子的作用和影响，辅 助药物研发过程。
标记染色剂
2
于最佳状态以获得清晰的染色结果。
选择适当的染色剂，与细胞内的目标
分子发生特异性反应。
3
洗涤
去除多余的染色剂，减少非特异性背
显微镜观察
4
景染色。
使用显微镜观察和记录染色后的细胞 结构和染色结果。
细胞化学染色的应用领域
1 病理学研究
方法
包括直接染色、间接染色和特殊染色等方法， 根据目的和需求选择适当的方法。
技术
需要合适的实验步骤和条件，包括样品制备、 染色剂选择和显微镜观察。
常用的细胞化学染色方法
伊纳尔反应
用于检测脱氧核糖核酸(DNA)的存在和分布。
酸性磷酸酶染色
用于检测酸性磷酸酶活性和酶的分布。
特殊染色
用于检测细胞中特定结构或分子的存在和分布，如免疫组化染色。
结论及展望
细胞化学染色是一种强大的技术，帮助我们深入了解细胞结构与功能。未来， 随着技术的不断发展和创新，细胞化学染色将在多个领域继续发挥重要作用。
细胞化学染色
细胞化学染色是一种通过特定染色剂使细胞内的化学成分显现的技术。它在 细胞研究和诊断中起着重要的作用，帮助我们更好地了解细胞的结构和功能。
细胞化学染色的定义
目的
通过染色剂将细胞内的特定化学成分显现出 来，例如核酸、蛋白质、多肽等。
原理
染色剂与细胞内化学成分之间的特异性反应， 例如酶活性、酸碱性和亲和性。
通过染色剂对病理变化 进行观察和鉴定，辅助 诊断和治疗决策。
2 细胞生物学研究
了解细胞结构和功能， 探索细胞内分子的表达 和相互作用。
3 药物研发
评估药物对细胞内目标 分子的作用和影响，辅 助药物研发过程。
《细胞化学染色》课件
瘤的诊断和分类。
细菌和真菌鉴别
染色技术可以用于鉴别不同类型的 细菌和真菌，对于感染性疾病的诊 断和治疗具有重要意义。
寄生虫鉴定
染色技术可以帮助鉴定寄生虫种类 ，对于寄生虫病的诊断和治疗具有 指导作用。
生物学研究中的应用案例
细胞凋亡研究
染色技术可以用于观察细胞凋亡 的过程，有助于研究细胞死亡的
机制。
准确性
染色结果是否准确反映 了细胞内物质的分布和
含量。
重复性
染色结果是否具有可重 复性，即多次实验结果
是否一致。
特异性
染色方法是否能够特异 性的标记目标细胞或组
织。
敏感性
染色方法能否检测到低 浓度的目标物质。
染色结果的解读与解释
01
02
03
04
了解染色原理
熟悉染色方法的原理，有助于 正确解读染色结果。
识别阳性信号
能够识别出染色结果中的阳性 信号，并判断其强弱和分布情
况。
排除干扰因素
排除非特异性染色、背景干扰 等因素对结果的影响。
比较不同样本
将染色结果与正常或已知样本 进行比较，以判断其差异和意
义。
染色结果的应用与推广
科学研究
染色结果可以为科学研究提供 数据支持，帮助揭示细胞生物
学行为的奥秘。
临床诊断
细胞化学染色的种类与 特点
常用细胞化学染色的种类
酸性品红染色
用于显示RNA，常 用于鉴别细胞质。
苏木精染色
用于显示细胞核， 常用于观察染色体 。
福尔根染色
用于显示DNA，常 用于鉴别细胞核。
甲基绿染色
用于显示DNA，常 用于观察染色体。
伊红染色
用于显示RNA和糖 原，常用于鉴别细 胞质和糖原。
细菌和真菌鉴别
染色技术可以用于鉴别不同类型的 细菌和真菌，对于感染性疾病的诊 断和治疗具有重要意义。
寄生虫鉴定
染色技术可以帮助鉴定寄生虫种类 ，对于寄生虫病的诊断和治疗具有 指导作用。
生物学研究中的应用案例
细胞凋亡研究
染色技术可以用于观察细胞凋亡 的过程，有助于研究细胞死亡的
机制。
准确性
染色结果是否准确反映 了细胞内物质的分布和
含量。
重复性
染色结果是否具有可重 复性，即多次实验结果
是否一致。
特异性
染色方法是否能够特异 性的标记目标细胞或组
织。
敏感性
染色方法能否检测到低 浓度的目标物质。
染色结果的解读与解释
01
02
03
04
了解染色原理
熟悉染色方法的原理，有助于 正确解读染色结果。
识别阳性信号
能够识别出染色结果中的阳性 信号，并判断其强弱和分布情
况。
排除干扰因素
排除非特异性染色、背景干扰 等因素对结果的影响。
比较不同样本
将染色结果与正常或已知样本 进行比较，以判断其差异和意
义。
染色结果的应用与推广
科学研究
染色结果可以为科学研究提供 数据支持，帮助揭示细胞生物
学行为的奥秘。
临床诊断
细胞化学染色的种类与 特点
常用细胞化学染色的种类
酸性品红染色
用于显示RNA，常 用于鉴别细胞质。
苏木精染色
用于显示细胞核， 常用于观察染色体 。
福尔根染色
用于显示DNA，常 用于鉴别细胞核。
甲基绿染色
用于显示DNA，常 用于观察染色体。
伊红染色
用于显示RNA和糖 原，常用于鉴别细 胞质和糖原。
《细胞化学染色检验》课件
样本的保存
样本应保存在适当的温度 和湿度条件下，以确保其 质量和稳定性。
结果的准确性
操作的规范性
在细胞化学染色检验中，应遵循正确的操作步骤和规范，以确保 结果的准确性。
仪器设备的校准
使用的仪器设备应在有效期内进行校准，以确保其准确性和可靠性 。
结果的解读
检验结果应由专业人员进行解读，避免误判或漏判。同时，应定期 对结果进行复核和验证，以确保结果的准确性和可靠性。
目的
细胞化学染色检验主要用于诊断疾病、研究细胞生物学特性、评估治疗效果等 。
历史与发展
历史
细胞化学染色检验技术自19世纪末开始发展，经历了多个阶段，包括手工染色、 半自动染色和全自动染色等。
发展
随着科技的不断进步，细胞化学染色检验技术也在不断改进和完善，如免疫组织 化学染色、荧光染色等新技术的应用，使得检测的灵敏度和特异性得到了显著提 高。
04
结果报告
将分析结果整理成报告，向相 关人员或机构提供准确的实验 数据和结论。
04
细胞化学染色检验应用
在疾病诊断中的应用
肿瘤诊断
通过细胞化学染色检验，可以观 察肿瘤细胞的形态、染色特征和 组织结构，有助于肿瘤的早期发
现和诊断。
感染性疾病诊断
某些细菌、病毒等感染性疾病会导 致细胞发生特异性改变，通过细胞 化学染色检验可以辅助诊断。
染色完成后，进行充分 的洗涤和复染，以提高
染色效果和对比度。
结果观察与解读
01
显微镜观察
使用显微镜观察染色后的样本 ，观察细胞形态、染色情况等 。
02
结果记录
对观察到的染色结果进行详细 记录，包括细胞形态、染色强 度、分布等。
03
《细胞化学染色》PPT课件 (2)
• 在酸性条件下〔pH4.7〕酸性磷酸酶能将 底物〔甘油磷酸钠〕水解，产生－
PO43-，与Pb2+作用生成磷酸铅沉淀， 定位于胞浆中酶活性存在处，再与硫化 铵作用，生成棕黑色的硫化铅沉淀。
• 试剂：
• 1.固定剂：40%甲醛溶液〔福尔马林〕。
• 2. 工作液配制：
• 蒸馏水
37ml
• 0.2mol/L pH4.7醋酸缓冲溶液 6ml
试剂：
• 1.固定剂：1∶9福尔马林乙醇液，即40％甲醛溶液 〔福尔马林〕10ml加无水乙醇90ml混合即得。
• 2.a-磷酸萘酚钠溶液：100mg a-磷酸萘酚钠溶于 100ml0.2mol/L〔pH9.1～9.7〕Tris缓冲溶液中，混 匀后4℃保存。
• 3.Tris缓冲溶液〔0.2 mol/L pH9.2〕：Tris粉〔三羟甲 基氨基甲烷〕2.43g溶于100ml蒸馏水中，加浓盐酸 0.2ml〔0.167ml〕。
Ⅱ级 ++ 胞浆呈棕色片状沉淀， 小到中等颗粒约占胞浆面积 的50%～75%。
Ⅱ级 ++ 胞浆呈棕色片状沉淀，小 到中等颗粒约占胞浆面积的50% －75%。
• Ⅲ级 +++ 胞浆充满棕黑色沉淀， 分布均匀，中到大颗粒占胞浆面 积的75%－100%。
Ⅲ级 +++ 胞浆充满棕黑色沉淀， 分布均匀，中到大颗粒占胞浆面 积的75%－100%。
• 0.15mol/L〔5%〕硝酸铅
1ml
• 0.1mol/L〔3.2%〕β－甘油磷酸钠 2ml
• 3.稀硫化铵溶液〔临用时现配〕：取硫 化铵水剂0.75ml加蒸馏水至50ml。
• 4.甲基绿溶液：1g甲基绿溶于50ml蒸馏
PO43-，与Pb2+作用生成磷酸铅沉淀， 定位于胞浆中酶活性存在处，再与硫化 铵作用，生成棕黑色的硫化铅沉淀。
• 试剂：
• 1.固定剂：40%甲醛溶液〔福尔马林〕。
• 2. 工作液配制：
• 蒸馏水
37ml
• 0.2mol/L pH4.7醋酸缓冲溶液 6ml
试剂：
• 1.固定剂：1∶9福尔马林乙醇液，即40％甲醛溶液 〔福尔马林〕10ml加无水乙醇90ml混合即得。
• 2.a-磷酸萘酚钠溶液：100mg a-磷酸萘酚钠溶于 100ml0.2mol/L〔pH9.1～9.7〕Tris缓冲溶液中，混 匀后4℃保存。
• 3.Tris缓冲溶液〔0.2 mol/L pH9.2〕：Tris粉〔三羟甲 基氨基甲烷〕2.43g溶于100ml蒸馏水中，加浓盐酸 0.2ml〔0.167ml〕。
Ⅱ级 ++ 胞浆呈棕色片状沉淀， 小到中等颗粒约占胞浆面积 的50%～75%。
Ⅱ级 ++ 胞浆呈棕色片状沉淀，小 到中等颗粒约占胞浆面积的50% －75%。
• Ⅲ级 +++ 胞浆充满棕黑色沉淀， 分布均匀，中到大颗粒占胞浆面 积的75%－100%。
Ⅲ级 +++ 胞浆充满棕黑色沉淀， 分布均匀，中到大颗粒占胞浆面 积的75%－100%。
• 0.15mol/L〔5%〕硝酸铅
1ml
• 0.1mol/L〔3.2%〕β－甘油磷酸钠 2ml
• 3.稀硫化铵溶液〔临用时现配〕：取硫 化铵水剂0.75ml加蒸馏水至50ml。
• 4.甲基绿溶液：1g甲基绿溶于50ml蒸馏
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【试剂】 ▪ 1%TMB ▪ 亚硝基铁氰化钠饱和溶液 ▪ 1%过氧化氢溶液 ▪ 稀过氧化氢溶液 ▪ 瑞氏染色液
▪ 【操作】 ▪ 1. 取0.1%TMB乙醇溶液lml，加亚硝基铁氰
化钠饱和溶液10ml，溶液呈淡棕黄色。 ▪ 2. 在新鲜干燥的血片上，加混合溶液0.5ml,
放置lmin后，再加稀过氧化氢溶液0.7ml， 染色6min 。 ▪ 3. 瑞氏染液复染15～20min 。 ▪ 4. 油镜镜检。
▪ 【结果】 ▪ （1）粒细胞系： ▪ 原粒细胞多呈阴性反应，也可弱阳性。
▪ 苏丹黑B染色较过氧化物酶染色更敏感， 但特异性不如过氧化物酶染色（极少数急 性淋巴细胞白血病可为阳性）。
M1-SBB(+)
M2-SBB(+)
三、过碘酸一雪夫（PAS)染色
▪ 【原理】
胞浆内存在糖原或多糖类物质（如粘多糖 、粘蛋白、糖蛋白、糖脂等）中的乙二醇 基（CHOH-CHOH）经过碘酸（periodic acid）氧化，转变为二醛基（CHO-CHO ），与雪夫(Schiff )试剂中的无色品红结 合，形成紫红色染料而沉积于胞浆中。该 反应称为过碘酸一雪夫(PAS)阳性反应。
粒逐渐增加。
▪ 早期原粒细胞一般为阴性，少数细小点状 颗粒代表线粒体被染色
▪ 晚期原粒细胞可出现阳性颗粒，其颗粒限 于胞浆的某一区域。
2. 单核细胞系 阳性，颗粒细小，分布弥散，形状不规则 。原单核细胞为阴性。 3．红细胞系、淋巴细胞系均呈阴性反应 4．尼曼一匹克细胞和戈谢细胞均为阳性 反应。
5．苏丹黑B和过氧化物酶染色临床意义相 似，主要用于急性白血病类型的鉴别。
Hale Waihona Puke ▪ 下面介绍几种常用的细胞化学染色 方法
▪ 这些方法学在白血病的鉴别诊断上 具有重要意义。
一、过氧化物酶染色（POX）
（一）四甲基联苯胺法 ▪ 【原理】 粒细胞和单核细胞的胞浆内的
髓过氧化物酶（POX orMPO）分解过氧 化氢，释放新生态氧，使无色联苯胺氧 化成蓝色联苯胺，后者进一步变成棕色 化合物沉着于细胞质内。
【结果】 细胞质内有蓝黑色颗粒者为阳性。
（－） 无颗粒沉着； （±） 颗粒细小 ，分布稀疏； （+） 颗粒较粗，局灶分布； （++） 颗粒粗大，分布较密，占胞质 1/2~2/3； （+++） 颗粒粗大，呈团块分布； （++++） 全部胞质均部满颗粒，可覆盖胞核。
▪ 【临床意义】 ▪ （1）粒系： ▪ POX主要分布在粒细胞和单核细胞内，随
▪ （5）过氧化物酶染色 ▪ 主要用于鉴别急性白血病类型， ▪ 急性髓细胞白血病多呈阳性反应，以M3和
M2型反应最强，MI和M5型反应较弱， ▪ 故有助于区别M3和M5型。 ▪ 急性淋巴细胞白血病呈POX阴性反应，故
为急性髓细胞和淋巴细胞白血病鉴别的重 要指标。
AML-M1
M1 - POX(+)
×
二、苏丹黑B染色
【原理】 苏丹黑B (sudan black B , SB )是一种能 溶解于脂肪中的色素染料，可使细胞内的 中性脂肪、磷脂和类固醇着色，即使细胞 内微细结构的脂类物质也能显示出来。
▪ 【试剂】 ▪ 1. 10%甲醛液。 ▪ 2. 苏丹黑B乙醇溶液
▪ 【操作】 ▪ 1．干燥血片或骨髓片在甲醛蒸气中固定。 ▪ 2．自来水冲洗。 ▪ 3．放人染色液中，37 ℃染色30~60min。 ▪ 4．用70%乙醇脱色1~2min，水洗lmin。. ▪ 5．瑞氏染液复染20~30min。
着粒细胞成熟的程度而逐渐增强，中性分 叶核粒细胞为强阳性。
▪ 嗜酸性粒细胞阳性程度最强，其阳性颗粒 比中性粒细胞粗大，有折光。
▪ 碱性粒细胞为阴性。
（2）单核细胞： 原始单核细胞为阴性反应， 幼稚单核细胞和成熟单核细胞呈弱阳性 反应，颗粒细小，弥散分布。
（3）其他细胞 淋巴细胞、浆细胞、幼红细胞、组织细 胞、巨核细胞均呈阴性反应。 （4）血小板过氧化物酶 主要定位于幼稚型巨核细胞的核膜上，可 作为原巨核细胞的一种标志物，有助于 FAB M7的识别。
【结果】
脂类呈黑色或棕黑色颗粒，定位于细胞浆中 （+） 颗粒很小，细小、稀疏，或胞质局部面积的
1/4有致密的颗粒。 （++）颗粒较少，或胞质面积的1/2出现黑色颗粒。 （+++）颗粒较密，或胞质面积的3/4出现黑色颗粒。 （++++） 颗粒极密，颗粒间无间隙。
▪ 【临床意义】 ▪ 1. 粒细胞系 ▪ 早幼粒及以下阶段随着细胞成熟，阳性颗
细胞化学染色
沧州医专医学技术系 侯振江
▪ 细胞化学染色，是一种以形态为基础，结 合运用化学或生物化学技术对血细胞内各 种化学成分作定位、定性及半定量分析的 方法。
▪ 用于研究血细胞生理、病理和化学结构；
▪ 临床上为某些血液病的诊断、鉴别诊断、 疗效观察、预后监测和发病机制的探讨， 提供重要依据。
▪ 血细胞化学染色的基本要求是在原位 显示细胞成分和结构，反应产物应是 有色沉淀物，具有一定的稳定性。
2、联苯胺法：粒细胞和单核细胞中的过氧 化物酶作用于过氧化氢，释放新生态氧， 使无色的联苯胺形成蓝色沉淀。
▪ 3、普鲁士蓝法：细胞内、外铁与酸性亚铁 氰化钾作用，形成蓝色亚铁氰化铁沉淀。
▪ 4、雪夫反应：过碘酸氧化细胞内糖类中乙 二醇基形成乙醛基，醛基与雪夫试剂作用， 使无色品红形成红色沉淀。
▪ 5、金属沉着法
▪ 其他尚有物理学方法，如脂溶性染料染色 （显示脂质）、荧光显示、放射自显影以 及体外活体染色亦常用于临床血液细胞学 诊断。
▪ （三）细胞化学定量
▪ 粗略估量，以染色反应的强弱，受色的深浅 ，人为地区别为阴性和各种程度的阳性。
▪ 百分法，只能反映细胞阳性率，不能反映受 色强弱。
▪ 积分法，是常用的半定量法，将等级估量与 百分率相结合它既反映了细胞阳性率的高低 ，又反映了细胞受色的强弱。
▪ 血细胞化学染色可显示糖原、脂类、 酶、蛋白质等。
血细胞化学染色流程
▪ （一）固定 ▪ 固定有物理法与化学法， ▪ 物理法为干燥和火焰固定， ▪ 化学法最常用的是甲醛、乙醇、
丙酮和醋酸等。
（二）显示
1、偶氮偶联法：利用人工合成的酶底物， 在酶作用下，产生分解产物，再与重氮盐 结合引起偶氮偶联，使其形成不溶性的偶 氮色素，以此证明酶的存在。