心肌缺血-再灌注损伤大鼠心电图变化机制的研究
益气化瘀方对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠保护作用机制研究
益气化瘀方对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠保护作用机制研究【摘要】目的：探讨益气化瘀方对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠的保护作用。
方法：观察不同剂量益气化瘀方对冠状动脉结扎法复制的大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的保护作用。
结果：益气化瘀方高、中剂量组梗塞区心肌面积及重量均显著降低，与缺血再灌注模型组比较均有显著性差异(p<0.01)。
益气化瘀方低剂量组梗塞区心肌面积及重量均降低，与缺血再灌注模型组比较有统计学意义(p<0.05)；益气化瘀方高剂量组mmp9及tnf-α含量明显降低，sod 活性明显增加，与缺血再灌注模型组比较均有显著性差异(p<0.01)。
益气化瘀方中剂量组mmp9及tnf-α含量降低，与缺血再灌注模型组比较均有统计学意义(p<0.05)；sod活性明显增加，与缺血再灌注模型组比较有显著性差异(p<0.01)。
益气化瘀方低剂量组sod活性增加，与缺血再灌注模型组比较有统计学意义(p<0.05)。
结论：益气化瘀方对大鼠心肌缺血再灌注损伤有明显的保护作用，为其临床应用提供了进一步的实验室依据。
【关键词】益气化瘀方；心肌缺血再灌注损伤；超氧化物歧化酶；肿瘤坏死因子-α；基质金属蛋白酶- 9本文旨在探讨益气化瘀方对大鼠缺血再灌注模型中的超氧化物歧化酶（sod），基质金属蛋白酶（mmp9），肿瘤坏死因子（tnf-α）以及该方对缺血再灌注所致心肌梗塞程度等指标的影响，初步观察了益气化瘀方对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠的保护作用并对其作用机制进行了初探，为该方在保护急性心肌缺血再灌注损伤的临床应用提供了实验依据。
1 材料与方法1.1材料1.1.1动物sd大鼠40只，雄性，180～220 g，购自南方医院动物中心，合格证号：scxk(粤) 2004-2005。
1.1.2药物益气化瘀方由田七10g，丹参20g，土鳖虫10g，仙鹤草15g，五爪龙15g组成；上方煎煮两次，药液浓缩成每毫升相当于0.6g生药的浓度，供灌胃用。
心肌缺血再灌注损伤的研究进展
30中国处方药 第18卷 第4期·综述·心肌缺血指心脏血流灌注减少，心脏供氧不足，心肌能量代谢异常，无法支持心脏正常工作。
随着人们生活方式的变化，我国心肌缺血患病率逐渐升高，且呈现出年轻化趋势，严重威胁患者生命健康[1]。
再灌注是治疗心肌缺血的重要方式，可恢复心脏缺血区域血流，但部分缺血的心肌细胞出现功能异常，甚至死亡，形成心肌缺血再灌注损伤。
部分研究认为心肌缺血再灌注损伤可能与氧自由基生成、细胞内钙离子过载、炎症反应等有关[2-3]，但具体机制仍有待探究。
同时，需了解心肌缺血再灌注损伤的治疗策略，以指导临床治疗。
故本文以心肌缺血再灌注损伤的发生机制、治疗策略为主作一综述，报告如下。
1发生机制心肌缺血再灌注损伤的发生可能为多种机制作用所致，如炎性反应、氧化应激、线粒体膜通透性转换孔开放、细胞内钙超载、生理pH值快速恢复等。
1.1炎性反应急性心肌梗死早期，中性粒细胞受中性粒细胞趋化物吸引，进入梗死区域，24 h内中性粒细胞迁移至心肌组织。
中性粒细胞可造成血管阻塞，加快氧自由基释放、酶降解。
实验研究发现，心肌缺血再灌注过程中，通过抑制中性粒细胞，可缩小心肌梗死面积[4]。
但临床上，抑制中性粒细胞无法缩小心肌缺血再灌注患者心肌梗死面积。
产生上述研究差异的具体机制不明。
1.2氧化应激心肌缺血再灌注刚开始时，会产生氧化应激反应，介导心肌细胞死亡、心肌损伤。
实验研究发现，急性心肌梗死后，氧自由基清除能力下降，而恢复供氧、供血后，短时间氧自由基大量生成[5]。
氧自由基可引起脂质过氧化，损伤膜磷脂，破坏心肌细胞膜，还会阻碍线粒体氧化磷酸化，影响能量合成，灭活NO，导致中性粒细胞粘附于血管壁。
此外，氧自由基加快中性粒细胞趋心肌缺血再灌注损伤的研究进展张凯（天津市滨海新区大港医院心血管内科，天津 300270）【摘要】再灌注是治疗心肌缺血的常用方法，可有效挽救患者生命，但会对心肌组织造成损伤。
因此，了解心肌缺血再灌注损伤的发生机制，寻找方法减轻再灌注损伤是心血管内科研究的重要内容。
心肌缺血再灌注损伤介绍和实验设计
心肌缺血再灌注损伤介绍和实验设计Ⅰ.心肌缺血再灌注损伤：它是指缺血心肌组织恢复血流灌注时，导致再灌注区心肌细胞及局部血管网显著的病理生理变化，这些变化共同作用可促使进一步的组织损伤。
那这里的关键词就是缺血心肌组织。
那为什么会产生缺血的心肌组织呢？这就与临床上的疾病有关了。
一些心脏疾病，比如急性心肌梗死、冠心病等他们会使心脏发生缺血的症状，其基本的生理过程就是心肌缺血。
Ⅱ.心肌缺血的危害：心肌缺血：指单位时间内的冠脉血流量减少，供给组织的氧量也减少，缺血必定存在缺氧表明缺血缺氧。
心肌缺血比单纯性心肌缺氧无血流障碍要严重，因为前者除了缺氧的影响之外，缺血组织也不能获得足够的营养物质又不能及时清除各种代谢产物带来的有害影响。
一、心肌缺血的原因主要分为两种情况：1是冠脉血流量的绝对不足。
这种情况是由自身疾病产生的，主要包括冠状动脉阻塞，冠状动脉痉挛。
2是冠脉血流量的相对不足：包括供氧降低或耗氧增加，比如高原高空或通风不良的矿井吸入氧减少；肺通气或换气功能障碍，可致血氧含量降低红细胞数量和血红蛋白含量减少等。
二、缺血对心肌的危害主要包括以下几个方面：1是心肌收缩能力降低。
2是导致心肌舒张功能降低。
3是心肌组织的血流动力学发生改变，比如说血流的阻力增加等。
4是心肌电生理的变化，比如说静息点位降低，传导速度减慢；室颤阈降低等。
5是导致心肌形态学的改变。
当然还有其他的危害，在这里就不一一列举了。
由于心肌缺血存在这么多的危害，临床上针对这一疾病采取了再灌注治疗方法，但随之而来的又是另外一个临床问题：缺血再灌注损伤。
下面具体介绍一下心肌缺血再灌注损伤。
心肌缺血再灌注损伤英文缩写为MIRI，最早由詹宁斯等于1960年提出，发现其临床表现为再灌注心律失常、心肌顿抑、心肌能量代谢障碍等现象。
随后又有学者在临床手术中也证实了这一观点，发现在冠脉搭桥术完成后，心肌坏死进一步加重的现象。
接着布朗沃尔德教授在1985年提出了这样一个观点：心肌再灌注是一把双刃剑，既可以损伤心肌也能保护心肌。
大鼠心肌缺血_再灌注损伤模型的改进与评价
第6卷 第4期解剖科学进展V o l16 N o14 2000年PRO GR ESS O F ANA TOM I CAL SC IEN CES2000大鼠心肌缺血 再灌注损伤模型的改进与评价王淑侠 兰小莉1 王吉文2 裴著果(中国医科大学第二临床学院核医学科 沈阳110003) 摘要 大鼠心肌缺血 再灌注损伤是模拟人类心梗及溶栓再通治疗,研究缺血预适应机制,评价抗心律失常药物疗效常用的动物模型。
本文在传统造模方法的基础上进行了一定的改进,采用在压管下加一小垫片的方法,减少了传统推管法对心表面的机械损伤,方法简便,冠脉阻断确实。
结果:大鼠左冠状动脉主干缺血30′,再灌120′,危险区 左室重量比为55%±5%,坏死区 危险区为58%±6%(N=10)。
心肌酶谱结果:CK4301±251u l,CK2M B2288±328u l,LDH2329±216u l,A ST371±57u l(N=5)。
关键词 心肌再灌注损伤;大鼠;模型,T TC染色法 阻断冠状动脉造成急性心肌梗塞并在预定时间内恢复血供予以再灌注是模拟人类心梗及溶栓再通治疗常用的实验研究方法。
大鼠以其冠脉侧支循环缺乏、心肌坏死出现早、心律失常发生率高、重复性、稳定性好、费用低廉而成为制作该疾病模型[1],特别是硕、博士研究生进行课题实验首选的实验动物。
笔者在进行心肌缺血预适应机制的研究中,参照以往文献记载的方法[2～4],并根据本实验室条件,对该模型的制作方法进行了一定的改进,现报告如下:1 材料与方法111 材料健康雄性W istar大鼠,体重240～350g(由中国医科大学实验动物部提供);N i Hon Konden型心电图机(上海KOND EN医用电子仪器厂);小动物呼吸机(浙江医科大学医学仪器实验厂);自制简易血压计(由24号套管针、三通开关、U形管内装水银,管旁边附有直尺做刻度组成);红四氮唑(T TC)由上海第三试剂厂生产;批号970924用前以011M1PH714的磷酸缓冲液配成1%溶液;伊文斯兰(Evan s B lue)瑞士F luka公司出品。
落新妇苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及机制
落新妇苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及机制Δ陈兴华 1＊，韩露 2，贡鸣 3，张继倬 1 #（1.首都医科大学附属北京世纪坛医院心脏外科，北京 100038；2.首都医科大学附属朝阳医院医学研究中心，北京 100020；3.首都医科大学附属北京安贞医院心外科，北京 100029）中图分类号 R 965 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2023）10-1193-07DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2023.10.08摘要 目的 探究落新妇苷（AST ）对大鼠心肌缺血再灌注损伤（MIRI ）的影响，以及可能的作用机制。
方法 将SD 雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组（复方丹参片240 mg/kg ）和AST 低、高剂量组（30、90 mg/kg ）以及AST 高剂量+缺氧诱导因子1α（HIF-1α）抑制剂组（AST 90 mg/kg+2-甲氧基雌二醇15 mg/kg ），每组25只。
除假手术组外，其他各组大鼠均建立MIRI 模型，灌胃或腹腔注射相应药物或生理盐水，连续28 d 。
测定各组大鼠血清中心肌肌钙蛋白I （cTnI ）、肌酸激酶同工酶（CK-MB ）含量，测量心肌梗死体积比，观察心肌组织病理形态变化、心肌细胞凋亡率和心肌组织线粒体的超微结构，测定心肌组织中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）、丙二醛（MDA ）含量和超氧化物歧化酶（SOD ）活性以及HIF-1α、腺病毒E 1B 相互作用蛋白3（BNIP 3）、肌球蛋白样Bcl-2结合蛋白（Beclin 1）的表达，并计算微管相关蛋白轻链3（LC 3）Ⅱ与Ⅰ的比值（简称“LC 3Ⅱ/Ⅰ”）。
结果 与模型组比较，阳性对照组和AST 低、高剂量组大鼠的心肌组织无明显肿胀，心肌纤维排列整齐，心肌梗死体积比和cTnI 、CK-MB 、TNF-α、IL-6、MDA 含量以及细胞凋亡率均显著降低（P ＜0.05），SOD 活性和HIF-1α、BNIP 3、Beclin 1蛋白表达量以及LC 3Ⅱ/Ⅰ均显著升高（P ＜0.05）。
桂枝甘草汤干预心肌缺血再灌注损伤大鼠心律失常的作用机制
桂枝甘草汤干预心肌缺血再灌注损伤大鼠心律失常的作用机制王艳1,高原2,3,朱明军2,3,唐进法2,3,李彬2,3,王贺2,3,曹英杰2,3,崔琳2,3,王小晓2,沈思2摘要目的:探讨桂枝甘草汤(GGD)干预心肌缺血再灌注(I/R)损伤大鼠心律失常的作用机制㊂方法:建立心肌I/R损伤大鼠模型,随机分为对照组㊁I/R组㊁GGD低剂量组㊁GGD高剂量组㊁美托洛尔组㊂观察并记录心肌I/R心律失常发生率和持续时间,进行心律失常评分;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌钙蛋白I(cTnI)水平,分光光度法测定Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶水平,苏木精-伊红(HE)染色法观察心肌组织的病理学改变,免疫组化法检测心肌缝隙连接蛋白43(Cx43)表达,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测磷酸化Cx43(p-Cx43)和Kir2.1蛋白表达㊂结果:与对照组比较,I/R组大鼠室性期前收缩(VPC)次数明显增多,室性心动过速(VT)及心室纤颤(VF)的持续时间明显延长,心律失常评分增加,CK-MB和cTnI 明显增高,而Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性㊁p-Cx43和Kir2.1蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.01);与I/R组相比,GGD低剂量组㊁GGD高剂量组和美托洛尔组CK-MB和cTnI降低,Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性增高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与I/R组相比,GGD高剂量组和美托洛尔组VPC发生次数减少,VT及VF持续时间缩短,心律失常评分降低,p-Cx43和Kir2.1蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)㊂结论:GGD可能通过改善Cx43的表达㊁提高Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性及上调Kir2.1蛋白表达,从而发挥改善心肌I/R损伤大鼠室性心律失常发生的作用㊂关键词心肌缺血再灌注;心律失常;桂枝甘草汤;缝隙连接蛋白43;实验研究d o i:10.12102/j.i s s n.1672-1349.2023.21.007Effects Mechanism of Guizhi Gancao Decoction on Arrhythmia in Rats with Myocardial Ischemia/Reperfusion InjuryWANG Yan,GAO Yuan,ZHU Mingjun,TANG Jinfa,LI Bin,WANG He,CAO Yingjie,CUI Lin,WANG Xiaoxiao,SHEN SiHenan University of Chinese Medicine,Zhengzhou450000,Henan,ChinaCorresponding Author GAO Yuan,E-mail:******************Abstract Objective:To explore the effects mechanism of Guizhi Gancao Decoction(GGD)on arrhythmia in rats with myocardial ischemia-reperfusion(I/R)injury.Methods:The myocardial I/R rat models were established and randomly divided into4groups:control group,I/R group,GGD low-dose group,GGD high-dose group,and Metoprolol(Met)group.The incidence and duration of myocardial I/R arrhythmia were observed and recorded,and arrhythmia score was performed.Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)method was used to determine serum creatine kinase-MB(CK-MB)and cardiac troponin I(cTnI).Na+-K+-ATPase and Ca2+-Mg2+-ATPase levels were detected by spectrophotometry.Hematoxylin-eosin(HE)staining was used to observe the pathological changes of myocardial tissue.The expression of myocardial connexin43(Cx43)was detected by immunohistochemistry.Phosphorylated Cx43(p-Cx43) and Kir2.1protein expression were detected by Western Blot.Results:Compared with control group,the number of ventricular premature contractions(VPC),the duration of ventricular tachycardia(VT)and ventricular fibrillation(VF),arrhythmia score,CK-MB and cTnI significantly increased,while Na+-K+-ATPase and Ca2+-Mg2+-ATPase activities,p-Cx43and Kir2.1protein expressions decreased in I/R group,the differences were statistically significant(P<0.01).Compared with I/R group,the CK-MB and cTnI reduced, and Na+-K+-ATPase and Ca2+-Mg2+-ATPase activities were increased in GGD low-dose group,GGD high-dose group,and Met group,the differences were statistically significant(P<0.05or P<0.01).Compared with I/R group,the occurrence of VPC in GGD high-dose group and Met group was decreased,the duration of VT and VF was shortened,the arrhythmia score was decreased,and the protein expressions of p-CX43and Kir2.1were increased,the differences were statistically significant(P<0.05or P<0.01). Conclusion:GGD may improve the development of myocardial ischemia-reperfusion ventricular arrhythmia in I/R rats by improving Cx43expression,enhancing Na+-K+-ATPase and Ca2+-Mg2+-ATPase activities,and upregulating Kir2.1protein expression. Keywords myocardial ischemia/reperfusion;arrhythmia;Guizhi Gancao Decoction;connexin43,Cx43;experimental study心肌缺血再灌注(I/R)损伤是指在急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)发生后,药物或机基金项目国家自然科学基金青年基金项目(No.81503435);河南省中医管理局国家中医临床研究基地科研专项(No.2018JDZX058);河南省中医药科学研究专项课题(No.2022ZY2009);河南省中医药科学研究专项课题(No.20-21ZY2097);河南省中医药科学研究专项课题(No. 2022ZY1021)作者单位 1.河南中医药大学(郑州450000);2.河南中医药大学第一附属医院(郑州450000);3.河南省中药安全评价与风险防控工程研究中心(郑州450000)通讯作者高原,E-mail:******************引用信息王艳,高原,朱明军,等.桂枝甘草汤干预心肌缺血再灌注损伤大鼠心律失常的作用机制[J].中西医结合心脑血管病杂志,2023,21 (21):3901-3907.械的早期再灌注在挽救缺血心肌的同时,会进一步导致心肌细胞功能障碍和组织损伤[1]㊂其中,心律失常是心肌I/R损伤的重要临床表现,以室性心律失常最为常见,严重者可发生恶性室性心动过速(ventricular tachycardia,VT)和心室纤颤(ventricular fibrillation, VF),是造成病人猝死的重要原因㊂细胞内钙超载和心肌能量代谢障碍是诱发心律失常的重要原因,而Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶在维持细胞钙稳态及能量的产生和利用方面起重要作用[2-4]㊂心肌I/R发生时Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性降低,导致心脏电活动的不稳定性和传导异常,增加心律失常发生率[5-6]㊂心肌细胞间信号传递的结构基础是缝隙连接(gap junction,GJ),在心脏电传导活动中发挥着重要的作用[7-8]㊂缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)则是心肌细胞间缝隙连接的主要连接蛋白,在心肌I/R状态下其表达含量和自身磷酸化状态的改变造成心肌细胞间电脱偶联,导致电冲动传导异常和心律失常的发生和持续[9-10]㊂桂枝甘草汤(Guizhi Gancao Decoction,GGD)温阳益气,是治疗心悸的基础方,出自汉代张仲景‘伤寒论“,原文记载: 发汗过多,其人叉手自冒心,心下悸,欲得按者,桂枝甘草汤主之 ㊂临床研究表明,GGD对不同类型心律失常具有较好疗效[11-12]㊂现有研究提示,GGD能够通过减轻钙超载㊁清除氧自由基㊁抑制炎症反应和细胞凋亡等机制对I/R心肌具有保护作用[13-14]㊂本研究通过构建大鼠心肌I/R损伤模型,从分子生物学层面研究GGD通过改善Cx43表达对心肌I/R致心律失常的影响及相关机制,为其减轻心律失常的临床治疗提供实验证据㊂1材料与方法1.1动物Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠90只,体质量250~300g,购自河南省实验动物中心,动物许可证号为SCXK(豫)2017-0001㊂1.2药品及试剂GGD浸膏(按照原著药量比例:即桂枝㊁甘草按2ʒ1的比例制备;1g浸膏相当于9g生药)由河南中医药大学第一附属医院提供㊂琥珀酸美托洛尔缓释片(Met)购自阿斯利康制药有限公司;血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)㊁肌钙蛋白I(cTnI)检测试剂盒(批号: M3U4S6G5BR㊁78C8ABFAJY)购自Elabscience Biotechnology Co.,Ltd;Na+-K+-A TP酶㊁Ca2+-Mg2+-A TP酶试剂盒(批号:TF4X7MBJWY㊁24NWU56XV9)购自Elabscience Biotechnology Co.,Ltd;大鼠Cx43免疫组化试剂盒(批号:15386-1-AP)购自武汉三鹰生物技术有限公司; Kir2.1多克隆抗体(批号:B7301)㊁磷酸化Cx43 (p-Cx43)多克隆抗体(批号:B7101)购自ImmunoWay Biotechnology Company;辣根过氧化物酶(HRP)标记山羊抗鼠二抗(批号:B0101)㊁HRP标记山羊抗兔二抗(批号:20000258)购自武汉三鹰生物技术有限公司;甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)抗体(批号:43929)购自GeneTex㊂1.3方法1.3.1造模方法建立大鼠心肌I/R模型[15],末次给药1h后,所有大鼠用10%水合氯醛(300mg/kg,腹腔注射)麻醉后,仰卧位固定,连接PowerLab持续描记心电图Ⅱ导联㊂于颈部正中切开行气管插管并通过动物呼吸器辅助呼吸,在胸骨左缘第3肋与第4肋间间隙进行开胸手术,暴露心脏,用6-0号带针缝合线于左前降支(肺动脉圆锥与左心耳交界)处穿线,将一直径3mm的乳胶管垫于结扎线与血管之间,系紧缝合线,进行心肌缺血30 min,然后取出垫扎乳胶管,进行再灌注120min㊂对照组只穿线不结扎㊂缺血模型成功标准:结扎部位以下心肌组织变暗㊁发绀,心电图ST段明显抬高㊂再灌注模型成功标准:缺血区心肌发绀消失㊁逐渐变红,抬高的ST段逐渐回落>50%㊂1.3.2分组及给药方法将90只大鼠随机分为对照组㊁I/R组㊁GGD低剂量组㊁GGD高剂量组和美托洛尔组,每组18只㊂GGD 低剂量组㊁GGD高剂量组分别给予1.8㊁3.6g/kg的GGD灌胃,每天1次,连续14d;美托洛尔组给予美托洛尔9.5mg/kg灌胃,每天1次,连续14d;对照组及I/R组给予相同体积生理盐水㊂因麻醉或手术失败导致大鼠意外死亡,各组存活大鼠数量分别为对照组18只,I/R组㊁GGD低剂量组㊁美托洛尔组各15只,GGD 高剂量组14只㊂1.3.3心电图指标及评分方法观察再灌注后室性期前收缩(ventricualr premature contraction,VPC)㊁VT或VF的发生率和持续时间,并进行心律失常评分㊂根据1984年伦敦Lambeth会议确定的评分标准[16]:0分为无心律失常; 1分为持续时间ɤ10s的VT或其他心律失常,无VF; 2分为持续11~30s的VT或其他心律失常,无VF;3分为持续31~90s的VT或其他心律失常,无VF;4分为持续91~180s的VT或其他心律失常,和(或)少于10s的可逆性VF;5分为持续超过180s的VT或其他心律失常,和(或)超过10s的可逆性VF;6分为不可逆性VF㊂1.3.4心肌组织Na+-K+-ATP酶㊁Ca2+-Mg2+-ATP 酶水平的测定采用分光光度法检测心肌组织Na+-K+-ATP酶㊁Ca2+-Mg2+-ATP酶的含量㊂制备心肌组织匀浆,用考马斯亮蓝和光谱法测定蛋白含量,比色定磷法测定, Na+-K+-ATP酶㊁Ca2+-Mg2+-ATP酶按照试剂盒的说明书进行测定㊂1.3.5血清CK-MB㊁cTnI水平测定采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定血清CK-MB㊁cTnI水平含量㊂再灌注120min后腹主动脉取血,静置30min后,以2000r/min离心15min(取上清液)㊂按照ELISA试剂盒步骤测定血清中CK-MB㊁cT nI含量㊂1.3.6心肌组织的病理学观察HE染色法观察心肌组织病理形态学改变㊂再灌注120min后取出心脏,用冷的磷酸缓冲盐溶液(PBS)冲洗㊂取心肌组织转移至4%甲醛中浸泡,乙醇脱水,石蜡包埋切片(5μm),用苏木精-伊红(HE)染色,在200倍放大镜下观察心肌组织的变化㊂1.3.7心肌组织Cx43表达的测定采用免疫组化法检测心肌组织Cx43表达㊂取心肌组织转移至4%甲醛中浸泡,乙醇脱水,石蜡包埋切片(5μm),脱蜡和抗原修复后,加3%的H2O2阻断内源性过氧化物酶,加一抗(1ʒ100),加酶标二抗,进行二氨基联苯胺(DAB)显色,苏木精复染,脱水和封片,镜检拍照显微镜下观察㊂1.3.8心肌组织中p-Cx43和Kir2.1的蛋白表达采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法测定心肌组织中p-Cx43和Kir2.1的蛋白表达㊂提取心肌组织总蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳,转移至聚偏二氟乙烯膜,用脱脂奶粉封闭后,分别加p-Cx43抗体(1ʒ1000)和Kir2.1抗体(1ʒ1000),与GAPDH一抗(1ʒ1000)平行进行孵育过夜,TBST冲洗,加HRP标记羊抗兔免疫球蛋白G(IgG)或HRP标记的山羊抗鼠IgG为二抗(1ʒ2000),孵育1h,应用化学发光试剂显色,使用Image J图像分析软件分析各蛋白条带的吸光度,蛋白表达水平以目的蛋白条带IOD值/GAPDH的IOD 值表示㊂1.4统计学处理采用SPSS16.0For Windows软件进行统计分析㊂符合正态分布的定量资料以均数ʃ标准差(xʃs)表示,多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较用SNK检验㊂以P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1GGD对心肌I/R大鼠心律失常的影响用PowerLab连续监测心电图(见图1),分析再灌注期间心电图的变化,监测再灌注后心律失常发生率㊁持续时间和心律失常评分㊂结果显示,对照组大鼠在心电监测期间偶发VPC㊁手术时引起的VT,但无VF 发生;其他组大鼠均发生VPC㊁VT或VF,且以VT及VF为主㊂与对照组相比,I/R组VPC次数明显增多, VT及VF持续时间明显延长,且心律失常评分明显增高(P<0.01),表明造模成功;与I/R组比较,GGD高剂量组㊁美托洛尔组VPC的发生次数明显减少,VT及VF的持续时间明显缩短,心律失常评分明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)㊂详见表1㊂图1PowerLab连续监测心电图示例表1 各组VPC 发生次数㊁心律失常持续时间㊁心律失常评分比较(x ʃs )组别只数VPC 次数(次) 心律失常持续时间(s ) VTVF 心律失常评分(分)对照组189.88ʃ16.984.63ʃ11.200.63ʃ0.74I/R 组15425.25ʃ240.12①168.00ʃ90.79①54.63ʃ40.42①4.88ʃ0.83①GGD 低剂量组15291.50ʃ212.78116.63ʃ73.4336.75ʃ33.97 4.88ʃ0.35GGD 高剂量组14214.25ʃ209.74②79.50ʃ53.17②19.50ʃ16.75② 3.75ʃ1.49②美托洛尔组15210.63ʃ208.74②80.63ʃ75.13②18.75ʃ21.66②3.63ʃ1.51②注:I/R 组与对照组比较,①P <0.01;与I/R 组比较,②P <0.05㊂2.2 GGD 对心肌I/R 损伤大鼠血清CK -MB ㊁cTnI 水平的影响与对照组相比,I/R 组大鼠CK -MB ㊁cTnI 水平明显升高(P <0.01);与I/R 组相比,GGD 低剂量组㊁GGD高剂量组和美托洛尔组CK -MB ㊁cTnI 水平明显降低(P <0.01)㊂详见图2㊁图3㊂图2 各组血清CK -MB 水平比较(I/R 组与对照组,*P <0.01;与I/R 组比较,#P <0.01)图3 各组血清cTnI 水平比较(I/R 组与对照组,*P <0.01;与I/R 组比较,#P <0.01)2.3 GGD 对心肌I/R 损伤大鼠心肌组织中Na +-K +-A TP酶和Ca 2+-Mg 2+-ATP 酶水平影响与对照组相比,I/R 组大鼠Na +-K +-ATP 酶和Ca 2+-Mg 2+-ATP 酶活性明显降低(P <0.01);与I/R组相比,GGD 低剂量组㊁GGD 高剂量组和美托洛尔组Na +-K +-ATP 酶和Ca 2+-Mg 2+-ATP 酶活性明显升高(P <0.05或P <0.01)㊂详见图4㊁图5㊂图4 各组心肌组织Na +-K +-ATP 酶活性比较(I/R 组与对照组,*P <0.01;与I/R 组比较,#P <0.05,әP <0.01)图5 各组心肌组织Ca 2+-Mg 2+-ATP 酶活性比较(I/R 组与对照组,*P <0.01;与I/R 组比较,#P <0.01)2.4 GGD 对心肌I/R 损伤大鼠心肌组织作用的病理学改变对照组心肌细胞结构清楚,心肌纤维细胞整齐,未见明显异常;I/R 组心肌细胞排列紊乱,着色不均,心肌纤维肿胀㊁断裂;与I/R 组比较,GGD 低剂量组㊁GGD高剂量组和美托洛尔组心肌形态相对整齐,且随GGD剂量增加,心肌细胞内水肿和炎性细胞浸润明显减轻㊂详见图6㊂图6各组大鼠心肌组织病理学变化(HE染色,ˑ200)2.5GGD对心肌I/R损伤大鼠Cx43㊁p-Cx43和Kir2.1蛋白表达的影响免疫组化结果显示:对照组可见较多棕黄色Cx43蛋白表达,分布规律,呈条带状;I/R组Cx43表达明显降低,呈点状无规律分布;与I/R组相比,GGD低剂量组㊁GGD高剂量组和美托洛尔组Cx43表达明显增多,分布较规律㊂详见图7㊂Western Blot结果显示:与对照组比较,I/R组p-Cx43和Kir2.1蛋白表达下降(P< 0.01);与I/R组比较,GGD高剂量组和美托洛尔组p-Cx43和Kir2.1蛋白表达升高(P<0.05或P<0.01)㊂详见图8㊂图7免疫组化检测各组Cx43蛋白表达(ˑ400)图8Western Blot检测各组心肌组织中p-Cx43和Kir2.1蛋白水平(A为各组心肌组织中p-Cx43和Kir2.1蛋白表达条带图;B为各组心肌组织中p-Cx43和Kir2.1蛋白表达柱状图㊂I/R组与对照组比较,*P<0.01;与I/R组比较,#P<0.05,әP<0.01)3讨论GGD是张仲景治疗心悸的基础方,临床报道其具有很好的抗心律失常作用[11-12]㊂基础研究发现,GGD 不仅能改善多种实验性心律失常[14,17],还可缩小心肌I/R大鼠心肌梗死面积从而发挥心肌保护作用,其机制涉及减轻钙超载㊁抗氧化㊁抑制炎症反应和细胞凋亡,调控TLR4/NF-κB信号转导通路等多个方面[13,18]㊂李冀等[19]发现桂枝甘草汤提取物30醇组分㊁水组分能够抗氯化钡㊁乌头碱及哇巴因等诱发的心律失常,机制可能与减少心肌细胞L型Ca2+㊁Na+通道电流及延长心肌细胞动作电位时程(APD)和抑制动作电位幅度(APA)有关㊂GGD乙酸乙酯部位的30%乙醇洗脱组分与肉桂酸协同对小鼠心律失常有一定的保护作用[20]㊂GGD及各组分含药血清均有抑制钙离子通道作用,该作用与钙离子阻滞剂相同[18]㊂本研究通过建立大鼠心肌I/R模型,探讨GGD对Cx43蛋白表达㊁Na+-K+-ATP酶活性㊁Ca2+-Mg2+-ATP酶活性㊁Kir2.1蛋白表达的影响㊂心肌梗死病人发生心肌坏死㊁细胞膜通透性增加,使心肌细胞中CK-MB㊁cTnI等心肌损伤标志物大量释放入血,其升高水平与心肌细胞损伤程度关系密切[21-22]㊂本研究结果显示,I/R组大鼠血清CK-MB和cT nI水平较对照组明显升高,GGD药物组血清CK-MB和cTnI水平明显降低,HE染色结果也进一步表明GGD 药物组较对照组可减轻心肌损伤程度,提示GGD药物组可改善大鼠心肌I/R损伤㊂心肌I/R致心律失常的发生机制主要包括氧自由基堆积㊁钙超载㊁能量代谢障碍等几个方面㊂Na+-K+-A TP 酶又称钠泵,其功能为水解ATP酶产生能量逆电化学梯度跨膜转运Na+和K+,维持细胞内外Na+㊁K+离子浓度梯度,Ca2+-Mg2+-ATP酶即为钙泵,可跨细胞膜主动将Ca2+转运到细胞外并主动摄取Ca2+从胞质中进入肌浆网㊂Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶在维持细胞内钙稳态方面发挥着重要作用㊂当心肌I/R 损伤发生时,心肌细胞能量代谢障碍,ATP生产减少, Na+-K+-ATP酶活力下降,细胞内Na+增多,K+减少,激活Na+/Ca2+交换使胞内Ca2+浓度增高,同时, Ca2+-Mg2+-ATP酶活性也下降,不能将胞内过多的Ca2+排出或摄入肌浆网,导致钙超载,诱发心律失常[23-25]㊂本研究结果表明,GGD药物组Na+-K+-ATP 酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性明显升高,有利于维持细胞内钙稳态,改善心肌细胞能量代谢,从而达到拮抗心肌缺血再灌注心律失常的作用㊂缝隙连接通道分布于心肌细胞闰盘处,主要由3种连接蛋白构成,包括Cx40㊁Cx43㊁Cx45,其中心室肌的连接蛋白以Cx43为主,其正常表达及分布是保证心肌细胞间电耦联活动和协调心肌舒缩功能的关键因素[26]㊂生理状态下,Cx43有磷酸化和去磷酸化(Np-Cx43),但仅p-Cx43构成有功能的缝隙连接通道[27]㊂在心肌I/R损伤发生时,Cx43蛋白将表现脱磷酸化,间隙连接处的结构和功能变化,导致心肌组织阻力增加,导电性降低;间隙连接处的电性断开,导致电冲动的传导变慢,电活动合并,最终导致严重的室性心律失常㊂缝隙连接处的结构和功能变化,导致心肌组织阻力增加㊁电导性降低,出现缝隙连接的电脱耦连现象,导致电冲动传导变慢和折返性电活动的发生,最终导致严重的室性心律失常[28-29]㊂IK1的主要组成为Kir2.1,由KCNJ2基因编码,在维持细胞静息电位及钾离子电位平衡调节中发挥重要作用,是构成心肌细胞动作电位复极末期的主要电流通道之一[27,30]㊂在心肌缺血再灌注期间,心肌组织Kir2.1蛋白表达下调引起IK1下降,导致静息膜电位去极化,延长了动作电位时程,增加了心律失常风险[31-32]㊂本研究结果表明,I/R 组Cx43蛋白的分布明显降低,p-Cx43和Kir2.1蛋白表达水平下降,GGD高剂量组㊁低剂量组Cx43表达明显增多,并在一定程度上逆转了p-Cx43和Kir2.1蛋白表达的下调,这可能是GGD改善心肌I/R心律失常的相关机制㊂综上所述,GGD可减少VPC的发生次数,缩短VT及VF的持续时间,改善心律失常评分,其减轻心律失常的相关机制可能与改善Cx43的表达和磷酸化状态㊁提高Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性及上调Kir2.1蛋白表达水平有关㊂通过提高ATP 酶的活性,改善细胞能量代谢,维持心肌细胞内钙稳态,恢复细胞间缝隙连接蛋白功能与IK1电流,从而缩短动作电位时程与复极化进程,降低激动传导速度不均一,消除或减少折返电活动的发生,达到抑制心律失常的作用㊂参考文献:[1]NERI M,RIEZZO I,PASCALE N,et al.Ischemia/reperfusion injuryfollowing acute myocardial infarction:a critical issue for clinicians and forensic pathologists[J].Mediators of Inflammation,2017, 2017:1-14.[2]NI M K,RUAN L,ZHANG C T.Antiarrhythmic peptide AAP10prevents arrhythmias induced by protein kinase C activation in rabbit left ventricular wedges[J].International Heart Journal, 2015,56(2):234-238.[3]TAKESHI A,TAKASHI N,ICHIRO H,et al.Acetylcholinesuppresses ventricular arrhythmias and improves conduction and connexin-43properties during myocardial ischemia in isolated rabbit hearts[J].Journal of Cardiovascular Electrophysiology,2015,26(6):678-85.[4]王友群,戴德哉,李靖,等.缺血预处理对大鼠心肌Na+,K+-ATP酶和Ca2+,Mg2+-ATP酶活性的影响[J].基础医学与临床,1997, 17(6):60-64.[5]吴丹.急性心肌梗死后缺血再灌注性心律失常发病机制及预防的研究进展[J].中西医结合心血管病电子杂志,2019,7(8):42-43.[6]陈礼学.急性心肌梗死行直接经皮冠状动脉介入治疗术后再灌注心律失常的临床分析[J].中国临床医生杂志,2017,45(10):48-50.[7]ZHAO 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心肌缺血再灌注损伤的机制研究进展
• 文献综述 •63心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemic reperfusion in j ury ，MIRI ）指心肌缺血恢复血流供应后，造成代谢功能障碍及结构损伤加重的现象[1]。
MIRI 是临床上常见的疾病，其病理过程与冠状动脉血管形成术，冠状动脉重建术，心脏移植等术后并发症密切相关[2]。
MIRI 涉及的机制复杂，尚有待更深入的研究阐述。
近年来，由于电生理学、基因组学和蛋白组学等技术的应用，对MIRI 机制的研究也获得了一定的进步，其主要机制概述如下：1 氧自由基与MIRI自由基（free radical ），又称游离基，指在外层电子轨道上具有不配对的单个电子、原子、原子团或分子的总称[3]。
由机体内氧诱发化学性质活泼的自由基称为氧自由基，包括羟自由基和超氧阴离子。
生理状态下自由基存在较少，在细胞缺血时，其氧自由基清除能力下降[4]。
当组织恢复血液供应时，触发氧自由基“爆增”并累积，攻击自身和周围细胞，造成损伤[5]。
自由基损伤细胞膜，致其结构破坏造成心肌酶溢漏；自由基氧化破坏机体蛋白，改变蛋白酶表面结构使功能受损；自由基诱导遗传物质DNA 、RNA 断键或破损，影响核酸正常功能[6]。
自由基可导致心律失常，心肌损伤，细胞凋亡等事件[7]。
2 炎症反应与MIRIMIRI 发生时心脏组织内皮结构受损触发功能障碍，而中性粒细胞趋集、黏附血管内皮是炎症“级联”反应的诱发阶段[8]。
激活的中性粒细胞合成释放肿瘤坏死因子、IL-1、IL-6 等炎症介质，介导其他炎症细胞共同攻击心肌组织[9]。
此外，白细胞浸润在MIRI 中涉及的主要机制为，MIRI 使细胞膜受损和膜磷脂降解，具有很强趋化作用的白三烯等代谢产物增多，使更多白细胞循环浸润，对心肌细胞造成多次损伤。
MIRI 时，心肌缺血细胞生成大量的促炎介质如补体C 5a 、LPS 、IL-8等，激活并诱导心肌细胞多种黏附如ICAM-1，ICAM-2等分子表达[10]。
染料木素对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究
氧化 、 衰老 、 真 菌 、 制 真 菌 活性 及 酪 氨 酸蛋 白 抗 抗 抑 激酶 活性 的功 能 。２ ０ ０ ９年 １～ ７月 ， 我们 针对 Ｇ ｎ ｅ 对心 肌缺 血再灌 注损 伤 的保 护作 用及 机制进 行初 步 探讨 。
１ 材料 与方 法
１１ 实验 动物 ．
动物 Ｓ 大 鼠 ４ Ｄ ０只 ， 质量 （２ 体 ２０± Ｇ ｎ由沈 阳药 科 大 学 植 化 室 提 ｅ
经舌 下静脉 注人 等体 积溶 剂 ， 扎 ４ ｉ 结 ０ｒｎ后恢 复 供 ａ
血 ６ ｉ ０ ｍ ｎ造成在 体缺 血再 灌注 。 １４ ｌ导联 Ｅ Ｇ Ｔ波 幅度 变化 值 ． Ｉ Ｃ
１ 、０ ３ ｉ ０ ２ 、０ｒ ｎＴ波 幅度值 。 ａ
造 模 成功 后 记 Fra bibliotek录全 程 Ⅱ导联 Ｅ Ｇ， Ｃ 观察 实验各 组 结 扎前后 ０ １５ 、、 、
山东 医药 ２ １ ００年第 ５ ０卷第 ４ ０期
染 料 木 素对 心肌 缺 血再 灌 注损 伤 的 保 护作 用 及 机 制 研 究
李 洪亮 ， 程齐来 ， 曾 靖
（ 南 医学 院 ， 西赣 州 ３ １０ ） 赣 江 ４ ０ ０
摘要 ： 目的
研究染料木素（ ｅ ） 大鼠心肌缺 血再灌注损伤 的保护作用 ， Ｇ ｎ对 并进一步 阐明其机制 。方法
北京 中 山生 物技术 公 司产 品 。取 上述石 蜡标 本相 应 部 位 的 连 续 切 片 各 ３张 ， 常规 脱 蜡 至 水 ， Ｂ ｌ 、 以 ｃ－ ２
（ Ｋ） 丙 二 醛 （ Ａ） 超 氧 化 物歧 化 酶 （ Ｏ 含 量 ， 定 心 肌 损 伤 程 度 。 免 疫 组 化 法 检 测 Ｂ ｌ 、 ａ 、 ａｐ ｓ一 Ｃ ， ＭＤ 及 Ｓ Ｄ） 确 ｃ一 Ｂ ｘ Ｃ ｓａｅ３蛋 ２
远端缺血预处理对心衰大鼠心肌缺血再灌注损伤后心电图及心肌细胞形态的改变
远端缺血预处理对心衰大鼠心肌缺血再灌注损伤后心电图及心肌细胞形态的改变摘要：分析远端缺血预处理对心衰大鼠心肌缺血再灌注损伤后心电图及心肌细胞形态的改变。
方法：建立SD大鼠心衰模型、远端缺血预处理（Remote Ischemic Preconditioning，RIPC）模型，成功入组SD大鼠19只，分为：正常（n=5）、心衰（n=7）、RIPC（心衰+RIPC，n=7）三组，均行心肌缺血再灌注损伤后观察缺血30min过程中三组SD大鼠ECG的变化，再灌注2h后观察三组心肌细胞的形态学改变。
结果：阻断后3-5min内，三组大鼠心电图ST段均显著抬高，与阻断前相比差异显著（P<0.01），30min达到峰值；与心衰组比较，RIPC组缺血期ST段抬高速度减慢、幅度降低（P<0.01）。
三组心肌HE染色：正常组心肌横纹较清晰，少量肌束断裂，大部分细胞膜完整，胞浆轻度混浊，轻度嗜伊红染，大部分细胞核膜清晰，少量红细胞渗出，中度炎细胞浸润。
心衰组：心肌横纹消失，肌束断裂，大部分细胞膜不完整，胞浆混浊，嗜伊红染色加深，部分细胞核溶解、消失或呈碎片状，间质充血，大量红细胞渗出及炎细胞浸润。
RIPC组：心肌横纹尚清晰，少量肌横纹消失、肌束断裂，大部分细胞膜完整，胞浆中度混浊，中度嗜伊红染，少量细胞核溶解，细胞间质充血，少量的红细胞渗出及中度炎细胞浸润。
结论：RIPC能显著降低心衰心肌缺血期的心律失常的发生率和程度和减轻心衰心肌细胞损伤的数量及程度，进而起到保护心肌作用。
关键词：远端缺血预处理；心力衰竭；缺血再灌注；心肌保护远端缺血预处理（RIPC）对心肌缺血/再灌注（Ischemic / Reperfusion I/R）损伤的保护作用，是近年来学界研究的热点。
临床上大多数心外科手术患者术前已处于不同程度的心力衰竭状态，打而心力衰竭是影响手术成败和远期效果的重要因素。
尽管有多种药物和方案可以改善心功能，但均无法主动加强心肌对I/R损伤的耐受力。
《2024年五味子乙素对大鼠急性心肌缺血的作用及机制研究》范文
《五味子乙素对大鼠急性心肌缺血的作用及机制研究》篇一一、引言急性心肌缺血是一种常见的心血管疾病，其主要由冠状动脉供血不足、冠状动脉阻塞等原因导致。
由于这一病症对患者的心血管健康造成了严重的威胁，因此对有效的治疗方法的需求尤为迫切。
五味子乙素是一种常见的药用成分，近年来有研究指出其在多种生理过程中展现出有益的效果。
本研究的目的是探索五味子乙素对大鼠急性心肌缺血的作用及潜在机制。
二、材料与方法1. 材料本实验选用的五味子乙素来自国内某制药公司的产品，大鼠急性心肌缺血模型通过结扎冠状动脉的方式建立。
实验所使用的所有试剂和仪器均符合实验要求。
2. 方法我们首先建立大鼠急性心肌缺血模型，然后通过分组，分别给予五味子乙素和安慰剂治疗。
在给药后，我们通过心电图、血液生化指标和病理学检查等方法，对大鼠的心肌缺血情况进行评估。
三、五味子乙素对大鼠急性心肌缺血的作用1. 心电图分析实验结果显示，五味子乙素治疗组的大鼠在给药后，其心电图的ST段变化程度明显低于安慰剂组，这表明五味子乙素具有改善心肌缺血症状的作用。
2. 血液生化指标分析五味子乙素治疗组的大鼠在给药后，其血液中心肌酶（如CK-MB、TnI等）的水平明显低于安慰剂组，这表明五味子乙素具有保护心肌细胞，减少心肌损伤的作用。
3. 病理学检查病理学检查结果显示，五味子乙素治疗组的大鼠心肌细胞的损伤程度明显低于安慰剂组，进一步证实了五味子乙素对大鼠急性心肌缺血的治疗效果。
四、五味子乙素的作用机制研究根据实验结果和文献报道，我们认为五味子乙素可能通过以下机制对大鼠急性心肌缺血发挥作用：1. 抗氧化作用：五味子乙素具有强大的抗氧化能力，可以清除自由基，减轻氧化应激对心肌细胞的损伤。
2. 抗炎作用：五味子乙素可以抑制炎症反应，减少炎症因子对心肌细胞的损害。
3. 改善微循环：五味子乙素可能通过改善微循环，增加心肌的血液供应，从而改善心肌缺血的症状。
五、结论本研究通过实验证实了五味子乙素对大鼠急性心肌缺血具有明显的治疗作用。
医学实验报告范文分享与指导
医学实验报告范文分享与指导实验名称: 大鼠心肌缺血/再灌注模型的建立及评价实验目的:本实验旨在建立一种可靠的大鼠心肌缺血/再灌注 (I/R) 模型，并评价该模型的可行性和角质酸蛋白 (KAP) 在心肌保护中的作用。
实验材料和方法:1.实验动物: 使用8-10周龄的健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠。
2.心肌缺血/再灌注模型建立: 在麻醉下，通过结扎左冠状动脉 (LAD) 在大鼠心肌上建立缺血模型，缺血30分钟后开放结扎使之再灌注。
3.实验组设定: 分为正常对照组、缺血组和角质酸蛋白处理组 (5只大鼠/组)。
4.观察指标: 测定心肌组织坏死面积 (MI)、血清肌酸激酶同工酶(CK-MB) 水平和心肌组织中超氧化物歧化酶 (SOD) 活性。
5.数据统计: 采用SPSS统计软件对数据进行单因素方差分析(ANOVA) 和Tukey's多重比较。
6.伦理考虑: 确保本研究符合动物实验道德规范和法规。
实验结果:1.心肌缺血/再灌注模型的建立: 缺血30分钟后再灌注2小时，观察到明显的心肌受损现象。
2.角质酸蛋白处理的效果评价:2.1 角质酸蛋白处理组的MI显著低于缺血组 (P<0.05)，显示其具有一定的心肌保护作用。
2.2 角质酸蛋白处理组的CK-MB水平显著低于缺血组 (P<0.05)，显示其在减少心肌损伤中的有效性。
2.3 角质酸蛋白处理组的SOD活性显著高于缺血组 (P<0.05)，显示其具有抗氧化作用。
3.统计结果表明，角质酸蛋白处理组的心肌保护效果明显优于缺血组。
讨论与结论:本实验成功建立了大鼠心肌缺血/再灌注模型，并验证了角质酸蛋白在心肌保护中的重要作用。
KAP处理可显著减轻缺血再灌注损伤，降低MI和CK-MB水平，提高SOD活性。
因此，我们推测角质酸蛋白可作为一种潜在的心肌保护剂。
然而，进一步的研究仍需开展，以探索其具体的作用机制和潜在的临床应用价值。
心肌缺血预处理联合后处理在大鼠心肌缺血-再灌注损伤过程中的保护作用
文 献标 识 码 ： Ａ
文 章 编 号 ：６ ２ ３ ９ ２ ０ ）２ ｌ ｌ Ｏ ｌ ７ —１ ４ （０ ９ ０ —０ ８ — ２
２ 结 果
心肌缺血一 灌注损伤 （ Ｒ ） 防治在心脏外科手术 中占 再 ＭＩ Ｉ的 有极其重要的地位， 由于 其 重 要 性 ， 何 对 其 进 行 有 效 的 防 治 成 如
组 ： 断 ５ ｍｉ 冉 灌 注 ５ｍｉ 循 环 ３次 ， 次 阻 断 ３ ｎ 再 通 阻 ｎ， ｎ。 再 ０ ｍｉ ，
与 ］Ｒ 组 相 比 ， ）Ｐ＜ ０ ０ ， ）Ｐ ０ ０ ／ １ ．５２ ＜ ．１
２４ 电镜超微结构 ．
Ｉ Ｒ组 心 肌 细 胞 明 显 水 肿 ， 小 节 明 暗带 ／ 肌
为众 多专 家学 者 研 究 的热 点 。 当今 心 肌 缺 血 预 处 理 和 缺 血 后 处 理 是 两种 最 常用 而有 效 的心 肌保 护方 法 。 本 实 验将 两 种 方 法 相 结 合 ， 过 建 立 大 鼠 ＭＩ Ｉ 型 ， 通 Ｒ 模 观察 其 对 室 性 心 律 失 常 的 发 生 率 、 灌 注 末 丙 二 醛 （ ｌｎ ｉ ｄ ｈ ｄ ， Ａ） 含 量 及 心 肌 含 再 ｍａ ｄａ ｅ ｙ ｅ ＭＤ次 后 再 灌 注 ｌ ０ ｍｉ 。 ０Ｓ阻 ０ｓ循 ２ ｎ １ ２ 模 型 的 制 作 鼠冠 状 动 脉 阻 塞 和 再 灌 注 模 型 ， 要 步 骤 如 ． 主
下 ： ２ 乌 拉 坦 腹 腔 麻 醉 。气 管 内 插 管 ， 胸 时 用 人 工 呼 吸 用 ｏ 开 机行 人 ＿ ［呼 吸 ， 气 量 （ ． 潮 １ ０～ １ ５ ｍＬ／ ｇ。 气 频 率 ． ） １０ 通 ０
大鼠心肌缺血／再灌注损伤基因表达谱特征的初步观察
具体见操作 手册 。紫外分光及 电泳检测 显示获 得高质量 的总
ＲＮＡ 。
胞外 基质 、细 胞骨 架蛋 白、转 录 因子 、Ｄ Ａ损伤修 复基 因 、 Ｎ 凋亡 相关 蛋 白及核糖体蛋 白等相关编码基 因。结论 ： ｃ Ｎ 用 ＤＡ 表达谱 芯片分析心肌缺血／ 再灌 注后基因表达 ， 能快速筛选 出 再灌 注损 伤相关基 因，为临床 上更 有效地预防缺血／ 再灌 注损 伤提 供根据。 ［ 关键词 ］ 大 鼠；基因表达 ； 缺血／ 再灌注 ［ 中图分类号 ］ Ｒ ４ ． ５２２ ［ 文献标识码 ］ Ａ
１２ ２ 实验过程 ．．
双链 ｃ Ｎ Ｄ Ａ的合成 ： 常规合成 第 １ 按 条链
ｃ Ｎ 并 在第 １ Ｄ Ａ， 链合 成 的管 中加上 第 ２链 反应 试剂 ， 匀 ， 混 稍 离心 ，１ ￣ 置 ２ ｈ ６Ｃ放 ；加 ２ Ｌ １ｕ ４ Ｄ Ａ ｐｌ ｒｓ ， ［ ０ ］Ｔ Ｎ ｏ ｍｅ ｅ ｙ ａ
１℃放置 ５Biblioteka ｎ ６ ｉ；加 １ Ｌ０ ５ｍ ｌＬＥ Ｔ ０ ． ｏ Ｄ Ａ，一 ０ ／ ２ ℃保存 。纯
化 双链 ｃ Ｎ ｈｓ ｏｋＧ ｌ Ｐ Ｇ）酚／ Ｄ Ａ Ｐ ａｅＬ ｃ ｅｓ（ Ｌ － 氯仿抽提纯化ｃ Ｎ Ｄ Ａ，
并 用 Ｒ ａｅｆ ｅ ｎ ． ｅ 水重新溶解 沉淀 的 ｃ Ｎ 。生物 素标记 ｃ Ｎ ｓ ｒ Ｄ Ａ Ｒ Ａ
脱 、 色、扫描芯片 ： 染 杂交 １ ６ｈ后 ， 从芯片中取出杂交液装入 新 的离 心管 ，一 ０Ｃ长时 间保存 ，ＷａｈＢ ｅＡ充满芯 片。 ８￣ ｓ ｕ ｒ ｆ
床上心肌 缺血／ 再灌 注损伤 的分子生物 学机制 提供 １２ ３ 芯 片检 测 芯片 结果 采 用 Ａ ｙ ｔｘ扫描 仪 进 行 扫 ．． ｆ ｍｅ ｉ ｒ 根据 。 描 ， ｃｏｒ ｙＳ ｉ５ １ Ｍｉ ａｒ ｕｔ ． 软件读 取 、处 理数 据 ，分析 再灌 注 即 ｒ ａ ｅ
大鼠心肌缺血再灌注模型的建立
阻 断冠 状动脉 ， 缺 血期 心 电图 的改变 主要 表现 为
Ｑ Ｒ Ｓ波 突然 增 高 ， 增宽 ， 房 室传 导 阻 滞 （ ａ ｔ ｒ ｉ ｏ ｖ ｅ ｎ ｔ ｒ ｉ ｃ ｕ —
ｌ ａ ｒ ｂ ｌ ｏ ｃ ｋ ， Ａ Ｖ Ｂ ） ， 室性 早搏 （ ｙ ｅ ｎ — ｔ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ａ ｒ ｐ ｒ ｅ ｍａ ｔ ｕ ｒ ｅ ｂ ｅ ａ ｔ ， Ｖ Ｐ Ｂ） ， 阵 发 性 室性 心 动 过 速 （ ｖ ｅ ｎ ｔ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ａ ｒ ｔ ａ ｃ ｈ ） ｒ ｃ ａ ｒ ｄ ｉ ａ ，
皮下 组织 及肌 肉 ， 暴露气管 ， 在 气 管 作 一倒 “ Ｔ ” 型切 口， 插 入气 管 插 管 ， 气管插管 与呼吸机相连 （ 潮 气 量
司） 、 心 电 图机 （ 麦森医疗器械 ） 、 眼科剪 、 持针器 、 小 拉钩（ 自制 ） 、 乌拉坦 （ Ｕ ｒ ｅ ｔ ｈ ａ ｎ ｅ ） （ 北 京 环 宇 世 纪 化 学 科 技有 限公 司 ） 、 硝 基 四氯 唑 兰 （ Ｎ Ｂ Ｔ） （ 上 海 研 拓 生
物科 技 有 限公 司 ） 。
动 脉血 流 ， 造 成 心 肌 缺血 。再 灌 注 时将 棉 签 棒 从 Ｐ Ｅ
管 中拔 出 ， 使 冠状 动脉再 通 即可 。
１ ． ４ 指标 观 察
心电图 改 变 ： 阻断冠 状动脉血 流， 造 成 缺 血
１ 材 料与 方 法
ｎ 后， 使冠状动脉再通 ， 再灌 注 １ ２ ０ ｍ ｉ ｎ ， 期 间观
脏 缺血 后重 新得 到灌 注后 ， 心 肌 细胞 能量 代谢 障碍 及 结构 破 坏反 而加 重 的现 象 称 为 心 肌 缺 血 再 灌 注 损 伤 （ ｉ ｓ ｃ ｈ ｅ ｍｉ ａ — ｒ ｅ ｐ ｅ ｒ ｆ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ） １ － ２ ］ 。在实 验室 ， 对 心 肌 缺 血 再 灌 注损伤 的 机制 、 治疗 等方 面 的研 究是 通过 建立 动 物 模 型 实现 的 。其 中 ， 大 鼠冠 状 动脉 侧 支 循 环 较 少 ， 容 易建 立 比较稳 定 的缺 血再灌 注 模 型 ， 并且 所 需实 验仪 器简 单 ， 成本 较低 ， 是 实 验 中较 常选 用 的动 物 。本 实 验 主要介 绍 了大 鼠心 肌 缺 血 再 灌 注 损 伤模 型 的制 备
20-HETE诱导ROS产生加重心肌缺血再灌住损伤
20-HETE诱导ROS产生加重心肌缺血再灌住损伤摘要】目的：分析2-羟二十万四烯酸（20-HETE）诱导心肌细胞内活性氧（ROS）产生,加重心肌缺血再灌注损伤的机制。
方法：选取Wistar成年雄性大鼠，离体心脏缺血前灌流20min平衡，行30min全心缺血，再经15min灌注。
将浓度30mM的20-HETE加入KH液内，查看其给大鼠心脏功能造成的影响。
对照组KH液内仅加入对应浓度乙醇。
测定两组ROS、脂质过氧化及心肌组织Nox2 mRNA表达情况。
结果：观察组荧光强度明显高于IR对照组（P＜0.05），经统计，20-HETE（30nM）荧光强度相较于对照组上升21%；观察组蛋白质羟基化产物水平比对照组升高（20.0±3.1）%，NOX2亚基mRNA表达比对照组升高（76.3±2.6）%。
结论：20-HETE导致心肌缺血再灌注损伤加重可能和激活Nox2氧化酶，致使其衍生ROS水平增加有关。
【关键词】心肌缺血再灌注损伤；2-羟二十万四烯酸；活性氧【中图分类号】R453 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2015）10-0071-02缺血再灌注损伤指的是心肌缺血恢复灌流之后功能、结构并未改善，反而受到严重损伤的现象，多发生在脑溶栓、血管搭桥、心肌梗死治疗之后[1]。
近年来有研究[2]发现，兔和犬等动物心脏缺血再灌注后，20-HETE在冠状静脉血管内的水平显著升高，当对其生成加以抑制后，可促使心肌缺血再灌注损伤后的功能显著恢复。
也有研究人员[3]通过对大鼠体心肌缺血再灌注试验发现，20-HETE可诱导心肌细胞凋亡，其过程是在ERK1/2信号通路介导之下发生的。
从这一结果可以看出，20-HETE和心肌缺血再灌注损伤的发生有一定关联，其具体作用机制目前的研究还较为少见。
为分析其作用机制，笔者选取56只雄性大鼠，展开动物实验分析，报道如下。
1.资料与方法1.1 一般资料选取Wistar雄性成年大鼠56只，所有大鼠均来自我市某大学基础医学院实验动物中心。
缺血再灌注损伤
缺血-再灌注损伤机体组织器官正常代谢、功能的维持，有赖于良好的血液循环。
各种原因造成的局部组织器官的缺血，常常使组织细胞发生缺血性损伤（ ischemia injury ），但在动物试验和临床观察中也发现，在一定条件下恢复血液再灌注后，部分动物或患者细胞功能代谢障碍及结构破坏不但未减轻反而加重，因而将这种血液再灌注后缺血性损伤进一步加重的现象称为缺血再灌注损伤（ ischemia-reperfusion injury ）。
用低氧溶液灌注组织器官或在缺氧的条件下培养细胞一定时间后，再恢复正常氧供应，组织及细胞的损伤不仅未能恢复，反而更趋严重，这种现象称为氧反常（ oxygen paradox ）。
用无钙溶液灌流大鼠心脏后，再用含钙溶液进行灌流时，心肌细胞的损伤反而加重，称为钙反常（ calcium paradox ）。
缺血引起的代谢性酸中毒是细胞功能及代谢紊乱的重要原因，但在再灌注时迅速纠正缺血组织的酸中毒，反而会加重缺血再灌注损伤，称为 pH 值反常（ PH paradox ）。
第一节缺血－再灌注损伤的原因及条件一、原因（一）、组织器官缺血后恢复血液供应如休克时微循环的疏通、冠状动脉痉挛的缓解、心脏骤停后心脑肺复苏等。
（二）、动脉搭桥术、 PTCA 、溶栓疗法等血管再通术后，心脏外科体外循环术、器官移植及断肢再植等。
二、条件并不是所有缺血的组织器官在血流恢复后都会发生缺血 - 再灌注损伤，但许多因素可影响其发生发展和严重程度，常见的原因有：（一）、缺血时间缺血时间的长短与再灌注损伤的发生与否相关，缺血时间过短或过长都不易发生再灌注损伤。
例如：大鼠心肌缺血 2min 以内或 20min 以上进行再灌注，不易发生再灌注损伤；狗心肌缺血 15min 以内或 40min 以上进行再灌注，再灌注损伤不易发生，缺血 15-20min 再灌注，心肌再灌注损伤的发生率高达 25%-50% 。
（二）、侧支循环缺血后侧支循环容易形成者，因可缩短缺血时间和减轻缺血程度，不易发生再灌注损伤，如肺脏。
吡格列酮保护大鼠心肌缺血再灌注损伤机制的研究
维普资讯
中华老 年心 脑 血管 病 杂志 ２ ０ ０ ８年 ７月 第 １ ０卷 第 ７期
Ｃ ｉ ｒ ｔＨｅｒ ｒｉ ｓ ｉ，ｕ ２ ０ ， ｌ ０Ｎｏ７ ｈｎＪＧｅｉ ｒ ａｔＢａｎＶｅ￣ｌ ｓＪｌ ０ Ｖｏ １ ， ． ａ Ｄ ８
６ ，ｓｈ ｍｉ— ｅ ｅｆ ｓｏ ｒ ｕ 一 ６ ， ｉｇ ｉ ｚ ｎ ｒ ａｅ ｒ ｕ （ 一 ６ ， ｉｇ ｉ ｚ ｎ ０ ） ｉｃ ｅ ａｒ ｐ ｒｕ ｉｎ ｇ ｏ ｐ（ ） ｐ ｏ ｌ ａ ｏ ｅ ５ ｍｇ ｔｅ ｔ ｄ ｇ ｏ ｐ ｔ ） ｐｏ ｌ ａ ｏ ｅ １ ｔ ｍｇ ｔｅ ｔ ｄ ｇ ｏ ｐ （ 一 ６ ｎ ｉ ｇｉａ ｏ ｅ２ ｒ ａ ｅ ｒ ｕ （ 一 ６ ． ｆ ａ ｔ ｒｏ ｅ ｃ ｎ ｉｇ ｒ ａｅ ｒ ｕ ）ａ ｄ ｐｏ ｌ ｚ ｎ ０ ｍｇ ｔｅ ｔｄ ｇ ｏ ｐ ｔ ） Ｌｅｔ ｎ ｅ ｉｒｄ ｓ ｅ ｄｎ
・ ３ ・ ５ ７
基 础 研 究 ．
比 列 酮 保 护 大 鼠心 肌 缺 血 再 灌 注 格 损 伤机 制 的研 究
王浩， 叶平 ， 宗斌 ， 李 李泱 ， 曹泽玲 ， 琳 王
摘 要 ： 探 讨 吡 格 列 酮保 护 大 鼠 心肌 缺 血 再 灌 注 损 伤 的 机 制 ， 察 细胞 外信 号调 节 激 酶 １ ２ Ｅ Ｋ１２ 、 氧 诱 目的 观 ／ （ Ｒ ／）低
导 因子一 ａ ＨＩ－ａ 表 达 的 变化 。方 法 将 Ｓ 大 鼠 ３ ｌ （ Ｆ ｌ） Ｄ Ｏ只 随机 分 为 ５组 ： 手 术 组 ， 血 再 灌 注 组 ， 格 列 酮 ５ｍｇ 假 缺 吡
SDG膳食干预对去卵巢大鼠心肌缺血再灌注损伤的抑制作用及机制研究的开题报告
SDG膳食干预对去卵巢大鼠心肌缺血再灌注损伤的抑制作用及机制研究的开题报告题目：SDG膳食干预对去卵巢大鼠心肌缺血再灌注损伤的抑制作用及机制研究研究背景：心肌缺血再灌注损伤（I/R）是心血管疾病中常见的并发症，其发生机制复杂，包括氧化应激、炎症反应、细胞死亡等多个方面，其治疗难度较大。
从很多研究中发现，膳食中的饮食纤维和抗氧化物质能够对于心血管疾病产生协同作用，有望降低心肌损伤的发生率。
种子素葡聚糖(SDG)是亚麻籽中富含的天然组分，具有明显的抗氧化、抗炎症和免疫调节等功能，因此有望用于心血管疾病的预防和治疗。
本研究将探讨SDG膳食干预对去卵巢大鼠心肌缺血再灌注损伤的抑制作用及机制。
研究内容：1. 建立去卵巢大鼠模型，进行心肌缺血再灌注损伤模拟。
2. 将大鼠分为两组，其中一组为SDG膳食干预组，另一组为对照组。
3. 分别收集两组大鼠的心肌组织样本，进行光镜学分析和心肌细胞损伤指标的检测。
4. 进行心肌细胞凋亡、氧化应激和炎症反应等相关指标检测。
研究目的：1. 探讨SDG膳食对于心肌缺血再灌注损伤的抑制作用。
2. 确定SDG膳食对于心肌细胞凋亡、氧化应激和炎症反应的影响。
3. 探讨SDG膳食对于心血管疾病的预防和治疗的潜在机制。
预期结果：1. SDG膳食能够有效抑制心肌缺血再灌注损伤的发生和发展。
2. SDG膳食能够降低心肌细胞凋亡，减轻氧化应激和炎症反应。
3. 研究结果将为心血管疾病的预防和治疗提供新的理论和实践依据。
研究方法：1. 建立去卵巢大鼠模型，进行心肌缺血再灌注损伤模拟。
2. 将大鼠分为两组，其中一组为SDG膳食组，另一组为对照组。
根据饮食喂养10周。
3. 收集两组大鼠的心肌组织样本，进行光镜学分析。
4. 分离心肌细胞，对比两组细胞凋亡率、氧化应激和炎症反应等相关指标。
研究意义：1. 本研究探讨了一种全新的膳食干预方法，为心血管疾病的预防和治疗提供新的策略。
2. 研究将为SDG在心血管疾病的应用提供新的实验证据。
心肌缺血再灌注损伤研究进展
心肌缺血再灌注损伤研究进展心肌缺血再灌注损伤是一种常见的心血管疾病，主要由冠状动脉阻塞导致心肌供血不足，进而引发心肌损伤。
随着医疗技术的不断发展，人们对心肌缺血再灌注损伤的认识也在逐步深入。
本文将从心肌缺血再灌注损伤的基本概念、研究现状、研究局限性和未来研究方向等方面进行综述，以期为相关研究提供参考和启示。
心肌缺血再灌注损伤是指由于冠状动脉阻塞导致的心肌缺血，当阻塞血管再通或侧支循环建立后，缺血心肌得到再灌注，但此时心肌反而受到进一步的损伤。
这种损伤主要是由于再灌注后氧自由基产生过多、钙离子内流、中性粒细胞浸润等多种因素共同作用所致。
心肌缺血再灌注损伤的主要临床表现为心律失常、心力衰竭和猝死等。
近年来，心肌缺血再灌注损伤的病理生理机制研究取得了较大进展。
研究发现，再灌注后氧自由基的大量产生是导致心肌损伤的主要因素之一。
同时，钙离子内流、中性粒细胞浸润等也在一定程度上加剧了心肌损伤的程度。
细胞凋亡、自噬等细胞死亡过程也在心肌缺血再灌注损伤中发挥重要作用。
流行病学研究发现，心肌缺血再灌注损伤在心血管疾病患者中普遍存在，且其发生与患者的年龄、性别、血脂水平、高血压等疾病状态密切相关。
研究还发现，吸烟、饮食不健康、缺乏运动等不良生活习惯也会增加心肌缺血再灌注损伤的风险。
对于心肌缺血再灌注损伤的诊断，目前主要依赖于心电图、超声心动图、核磁共振等影像学检查手段。
同时，心肌酶学、炎症因子、氧化应激指标等实验室检查也在一定程度上有助于心肌缺血再灌注损伤的诊断和评估。
心肌缺血再灌注损伤是心血管疾病中一个重要的病理过程，其发生机制复杂，受到多种因素的影响。
目前，关于心肌缺血再灌注损伤的研究已经取得了一定的进展，但在流行病学研究和临床诊断方面仍存在一定的局限性。
未来，随着科学技术的发展和对心肌缺血再灌注损伤机制的深入了解，我们将有望发现更加有效的预防和治疗策略，以降低心肌缺血再灌注损伤的发生率和致死率，提高患者的生活质量。
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心肌缺血-再灌注损伤大鼠心电图变化机制的研究王彦;赵英男;邹丽琳;许莹平;王冬梅;赵赫男【摘要】[目的]探讨大鼠心肌缺血再灌注损伤过程中,氧自由基及心肌细胞凋亡与缺血再灌注性心律失常的关系.[方法]建立大鼠心肌缺血-再灌注模型,对比缺血期与再灌注期的心律失常发生率及平均持续时间、ST段改变、心肌丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力、心肌细胞凋亡情况.[结果]缺血期房室传导阻滞、室性早搏及室速的发生率分别为7.5%、15%及10%;再灌注后分别为30%、67.5%及32.5%,与缺血期相比,再灌注后上述指标均明显增高.室速的平均发作时间由缺血期的(40±14)s上升到(495±103)s(P<0.01);再灌注后室颤平均持续时间为(198±22)s.再灌注后心肌MDA含量高于缺血组(P<0.01),且有逐渐递增趋势;心肌SOD活力较缺血组降低(P<0.01),再灌注120 min后下降趋缓.再灌注组心肌细胞凋亡明显高于缺血组(P<0.05).缺血再灌注损伤过程中,心律失常发生率与SOD活力变化呈负相关,与MDA值变化及心肌细胞凋亡变化均呈正相关.[结论]氧自由基及心肌细胞凋亡很可能是造成心肌缺血再灌注后心律失常的重要因素.【期刊名称】《大连医科大学学报》【年(卷),期】2010(032)002【总页数】6页(P160-165)【关键词】心肌缺血再灌注;心肌凋亡;心电图;氧自由基;再灌注性心律失常【作者】王彦;赵英男;邹丽琳;许莹平;王冬梅;赵赫男【作者单位】大连医科大学附属第二医院,实验中心,辽宁,大连,116027;黑龙江省疾病预防控制中心,黑龙江,哈尔滨,150023;大连医科大学,临床医学2005级7年制,辽宁大连116044;大连医科大学,临床医学2005级7年制,辽宁大连116044;大连医科大学,机能学实验室,辽宁,大连,116044;大连医科大学,病理生理学教研室,辽宁,大连,116044【正文语种】中文【中图分类】R544.1急性缺血心肌的血流得以恢复后出现的心律失常被称为缺血再灌注性心律失常(reperfusion arrhythmia，RA)。
临床研究表明，再灌注心律失常的发生率可高达50%～80%，以室性心律失常为主，包括频发的室性自主心律、短暂的室速或室颤。
此外，还包括房室或束支传导阻滞、一过性的窦性心动过缓等。
再灌注性心律失常也具有一定的临床意义，它既可以是再灌注损伤重要的、有时甚至是唯一的临床表现，也可以作为对于缺血治疗有效、血管再通的一个证据。
但潜在致死性或致死性的RA会导致患者血流动力学受到严重影响，是缺血再灌注期患者猝死的重要原因之一。
近年来，随着心血管病的介入治疗的广泛应用，RA的发生率也逐年升高。
基于上述这些原因，RA的发生机制、临床意义及防治受到人们的高度重视[1]。
本实验利用大鼠缺血再灌注模型，通过对比缺血期及再灌注期房室传导阻滞(atrioventricular block，AVB)、室性早搏(ventricular premature beat，VPB)、室速(ventricular tachycardia，VT)及室颤(ventricle fibrillation，VF)的发生情况，探讨RA可能的发生机制。
1 材料和方法1.1 实验动物及主要试剂和仪器成年雄性SD大鼠45只(由大连医科大学动物实验中心提供)，体重250～320 g。
DW-2000动物人工呼吸机(上海嘉鹏科技有限公司)；ECG-6511心电图机(上海光电医用电子仪器有限公司)；GALIBOR流式细胞仪(美国BD公司)；DAB显色试剂盒(武汉博士德生物工程公司)；超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)试剂盒及丙二醛(malondialdehyde，MDA)试剂盒均购自南京建成生物工程研究所；原位细胞凋亡(TUNEL)试剂盒(美国Roche公司)。
1.2 动物模型建立10%的水合氯醛(3 mL/kg体重)腹腔注射麻醉，仰卧位固定，四肢皮下置针形电极，连接ECG-6511心电图机记录心电图。
待麻醉好后行气管插管，连接DW-2000动物人工呼吸机，按潮气量50 mL/kg体重；频率：60～80 times/min；呼吸比为2∶1予以呼气末持续正压呼吸。
于胸骨左侧0.5 cm、第三、四肋间做纵形切口，钝性分离肋间隙暴露胸腔，充分暴露心脏，以6～0缝线在左心耳根部下2 mm处穿线，连同硅胶管一起结扎冠脉左前降支，以同步心电图ST段抬高为结扎成功标志，形成急性心肌缺血。
排出胸腔气体，关闭胸腔。
肉眼可见缺血区域心肌发紫同时心电图提示Ⅱ导联ST段向上抬高为冠状动脉结扎成功，松开结扎线即为心肌再灌注开始。
实验分为正常对照组(只穿线不结扎，5只)；心肌缺血组(结扎冠脉20 min，10只)；心肌缺血再灌注组(结扎冠脉20 min后分别开放30 min、120 min、200 min，每点各10只)。
1.3 心电图监测及心电图观察指标大鼠固定后，连接心电图机，采用标准Ⅱ导联连续心电监测，描记结扎前、缺血和再灌注时心电图。
心律失常分析仅针对实验存活大鼠进行(从麻醉开始至实验结束)，不包括由于麻醉或者死于恶性心律失常的大鼠。
心律失常分析参照以往的报道进行[2,3]，全程记录ST段变化及心律失常的发生情况。
1.4 SOD与MDA的测定取缺血区心肌组织，切碎后用组织匀浆器制成匀浆，配成10%匀浆液，3000r/min离心15 min，取上清液待测。
MDA 测定用硫代巴比妥酸比色法(TBA)，SOD 测定用黄嘌呤氧化酶法。
所有的测定方法均按所购试剂盒说明书进行，用AVE-854C半自动生化测定仪测定。
1.5 细胞凋亡的测定TUNEL法测定细胞凋亡。
心肌组织冰冻切片，0.01 mmol/L PBS清洗；3%H2O2室温作用20 min消除内源性过氧化物酶作用；TUNEL反应液37℃作用1 h(避光)；0.01 mmol/L PBS清洗3次，每次5 min；荧光显微镜下观察；转化POD 37℃与底物反应30 min；DAB显色3 min；流水冲洗；苏木素复染20 s；流水返蓝；脱水后中性树胶封片。
阳性对照标本只加标记液，不加酶，其余各步同上。
结果分析：荧光显色后，细胞核染为绿色荧光的为阳性；DAB显色，细胞核中有棕黄色着染者为凋亡细胞，而正常细胞胞核则无棕黄色着染。
400倍高倍视野下利用Image pro plus 6.0软件进行心肌细胞计数分析。
每张切片选10个不同区域进行分析，测量各视野单位面积(567像素×567像素，72 dpi作为单位面积)内TUNEL阳性细胞数，再计算平均阳性细胞数及比例数(凋亡心肌细胞数/心肌细胞数×100%)。
1.6 统计学方法应用SPSS15.0软件进行数据统计分析。
计量资料采用表示，配对资料比较采用配对t检验；计数资料采用构成比(百分比)描述，配对计数资料采用二项分布进行统计推断；数据相关性分析采用协方差分析。
P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果2.1 心电图改变2.1.1 缺血再灌注过程中心电ST段变化：正常情况下，ST段水平维持在基线附近(0.0102±0.0013)mV，冠脉结扎后显著增高至(0.1563±0.0201)mV，与正常时比较有显著性意义，P<0.01。
再灌注后回落至(0.0639±0.0128)mV，较正常状态及缺血期差异均有显著性意义(P<0.05)，结果见图1。
图1 不同时期大鼠心电图ST变化A：正常大鼠心电图；B：缺血期心电图； C：再灌注期心电图。
柱状图显示在正常、缺血及再灌注下心电图ST段的位置。
与正常比较，★P<0.05,★★P<0.01；与缺血期比较，△P<0.052.1.2 心律失常发生情况：实验中，室速及室颤均为短阵性可逆性心律失常，其他类型的心律失常未见。
缺血期AVB、VPB及VT的发生率分别为7.5%、15%、10%；再灌注后上述指标分别为30%、67.5%及32.5%。
较缺血期相比，再灌注后上述指标均显著增高，结果见图2。
缺血期未出现室速，进入再灌注后VF的发生率为5%。
冠脉恢复血流后，室速及室颤的平均发作时间由缺血期的(40±14)s 和0 s分别上升到(495±103)s和(198±22)s，与缺血期比较，P<0.01，见图3。
缺血及再灌注过程中还记录到了阶梯现象(staircase phenomenon)，发生率分别为10%和18%，两者间差异无显著性意义，但再灌注后发生率上升(图4)。
2.2 MDA与SOD值与正常心肌相比，心肌MDA值在缺血20 min时即出现显著性增加(25.306±2.018)μmol/g，P<0.05；进入再灌注期后MDA值持续上升，较前一时间点均有显著性增高(P<0.01)，至再灌注200 min时达到最高值(73.272±3.506)μmol/g。
心肌SOD活性从缺血期开始即出现显著性下降，至再灌注200 min时下降到最低点(47.119±2.062)U/mL。
但从变化趋势看，从再灌注120～200 min时间内，变化趋势趋缓，且二者间差异无统计学意义，结果见表1。
图2 缺血再灌注过程中各类心律失常的发生率缺血期AVB、VPB及VT的发生率分别为7.5%、15%、10%；再灌注后上述指标分别为30%、67.5%及32.5%。
与缺血期相比，再灌注后上述指标均明显增高。
与缺血期比较，☆P<0.05，★P<0.01图3 缺血再灌注过程中室速及室颤平均持续时间冠脉恢复血流后，室速的平均发作时间由缺血期的(40±14)s上升到(495±103)s；缺血期未见室颤，再灌注后室颤平均持续时间为(198±22)s。
与缺血期比较，★P<0.01图4 缺血再灌注过程中心电图阶梯现象发生率A为典型的心电阶梯现象，QRS振幅呈逐渐增高—逐渐降低—逐渐增高的阶梯性变化；同时伴有ST段的高度的周期性变化。
柱状图B显示，缺血期及再灌注后发生率分别为10%和18%，二者间虽差异无统计学意义，但再灌注后发生率有所升高表1 MDA与SOD值 (n=10)MDA(μmol·g-1)SOD(U·mL-1)正常心肌18．842±1．16695．311±9．472缺血20min25．306±2．9181)79．507±8．1832)缺血20min 再灌注30min36．649±2．3952)61．504±5．2282)缺血20min 再灌注120min56．615±5．0532)50．298±3．9162)缺血20min 再灌注200min73．272±6．5092)47．119±2．062与前一时间点比较，1) P<0.05,2) P<0.012.3 TUNEL法测定缺血再灌注过程中心肌细胞凋亡TUNEL法测定细胞凋亡结果可见在荧光(FITC)染色下，凋亡心肌细胞核呈现绿色荧光，未凋亡的心肌细胞则不被染色；DAB显色后，凋亡的心肌细胞核中有棕黄色着染，见图5A～E。