高效液相色谱手性流动相添加剂法拆分佐匹克隆对映体
手性药物高效液相色谱拆分方法研究进展
这种 固定相主要 有蛋 白质类 、环糊精 类、多糖及其衍生物 类、冠醚等。其中，以环糊精类 目前应用较 多，同时 Ｃ 分子 Ｄ 上的手性中心也能选择性地与对映体作用 。 目前 ，以 １． Ｄ 应 ３Ｃ 用最多。不同的环糊精 的空腔大小不 同， ｎ． Ｄ 适于分离小分 Ｃ 子药物对 映体 ， ｙ． Ｄ 适于分离大分子药物， Ｂ． 对形成包 Ｃ ＣＤ
合 物 有 最 佳 大 小 的 空腔 ， 适 用 于 大 多数 对 映体 的 位 阻 和 电子 特
对 美西律进行柱前手性衍生化 ，建立了美西律对 映体在人血 清 白蛋白中的测定方法 。
２ＣＰ Ｍ Ａ法 Ｃ Ａ 法是将手性选择剂添加 到流动相 中，利用手 性选择 ＭＰ 剂 与药物消旋体中各对映体 结合 的稳定常数不 同，以及 药物 与 结合物在 固定相上分配的差异 ，实现对 映体的分离 。此法 的优 点在 于：不需对样品进行衍 生化 ，可采用普通 的色谱柱 ，手 性 添加剂 可流出，也可更换 ，同时添 加物 的可变范 围较 宽，使用 比较方便 。 目前常用的手性流动相添加剂 有：环糊精（ ） ＣＤ 及其 衍 生物 、配位 基手性选择剂 、手性 离子对添加剂 、蛋 白质 、大 分 子抗生素 。 ２１ ． 配体交换型手性添加剂 此类添加剂多为氨基酸及其衍生物与二价金属 离子铜 、锌 、 镍等 结合 ，以适当浓度分布于流动相 中，然后外消旋体共 同形 成 非 对 映 的配 位 络 合 物 进 行 拆 分 。
手性药物 高效液相 色谱拆分 方法研 究进 展
李 亚捷
【 中图分类号 】Ｒ ８【 ９ 文献标识码 】Ａ 【 文章编号】１ ７— ７ ３ （０ ０ ９ ０ １－ ２ ６２ ３ ８ ２ １ ）０ — ０ ２ ０
手性色谱法
阿替洛尔最佳色谱条件及色谱图
流动相：正己烷-乙醇-二乙胺 –冰醋酸 (80:20:0.1:0.1，v / v / v / v) 流速：0.6mL· min-1 柱温：20℃ 检测波长：230nm
二、手性流动相添加剂法 （一）拆分原理 1.流动相中手性试剂与对映体形成非对映 配合物，在固定相中保留时间和分配不同而 拆分。 2.手性试剂吸附在柱上形成动态的手性固 定相，对映体与之作用不同而拆分。
手性HPLC法
利用手性固定相或含手性添加剂的流 动相分离、分析立体异构体的色谱法。
直接法 手性固定相法(使用手性柱) 手性流动相添加剂法(非手性柱)
间接法—手性衍生化试剂法(非手性柱)
一、手性固定相法
• • • • • • • • • 纤维素手性固定相 淀粉手性固定相 环糊精手性固定相 刷型手性固定相 大环抗生素手性固定相 手性配体交换色谱 蛋白质类 冠醚类 合成手性聚合物类
2.大环抗生素手性固定相（利托菌素、万古霉素、替考拉宁、利 福霉素） 3.蛋白质手性固定相（α—酸性糖蛋白，AGP；人血清白蛋白。 HAS；牛血清白蛋白，BSA：纤维素二糖水解酶） 特点：
(1)操作条件苛刻。（2）适用范围广。（3）主要在反相条件下
分离，流动相为近似生理条件的缓冲溶液和有机溶剂。
有关分离实验
（二）优点
1.使用常规色谱柱;2.手性添加剂选择范围宽；3.可在柱后收集纯
异构体。 （三）缺点 1 .手性添加剂消耗大；2.拆分方法的建立比较困难；3.系统平衡 时间长；4.拆分制备时需分离手性添加剂。 （四）常用的手性添加剂 离子对试剂，配体交换试剂，蛋白质，环糊精及冠醚包合试
剂和手性氢键作用试剂
（二）常用的手性衍生化试剂
1.手性羧酸类（酰氯，黄酰氯，酸酐和氯甲酸酯） 用于衍生手性醇，胺，氨基酸 2.手性胺类( 苯乙胺，二甲氨基萘乙胺和対硝基苯乙胺) 用于羧酸,N-保护氨基酸和醇类药物
手性拆分柱法用于佐匹克隆对映体的拆分
手性拆分柱法用于佐匹克隆对映体的拆分
杨丽萍;陈咏梅;张津枫
【期刊名称】《天津药学》
【年(卷),期】2006(18)6
【摘要】目的:建立佐匹克隆对映体的反相高效液相色谱拆分方法.方法:使用Chiralcel OD手性柱分离佐匹克隆对映体,考查了不同流动相组分、流动相中乙腈含量、pH值、柱温和流速对手性拆分结果的影响,优化了佐匹克隆手性拆分的液相色谱条件.结果:找到了反相高效液相色谱拆分佐匹克隆对映体的最佳色谱条件.结论:本法可用于测定合成右旋佐匹克隆过程中对映体过量(ee)和右旋佐匹克隆中手性杂质的含量[1].
【总页数】3页(P7-9)
【作者】杨丽萍;陈咏梅;张津枫
【作者单位】天津天士力集团化学制药研究所,天津,300402;天津天士力集团化学制药研究所,天津,300402;天津天士力集团化学制药研究所,天津,300402
【正文语种】中文
【中图分类】R9
【相关文献】
1.高效液相色谱法手性拆分N-叔丁氧羰基-3-羟基-1-金刚烷甘氨酸对映体 [J], 丁徐中;黄金;王普
2.β-环糊精用于毛细管电泳拆分佐匹克隆对映体的研究 [J], 剧崙;黄碧云;袁牧;季
红
3.高效液相色谱法手性拆分和测定药片中华法林钠对映体 [J], 王惠;王喜萍;双亚洲;李来生
4.HPLC-MS/MS法手性拆分泮托拉唑钠对映体及大鼠血浆中药代动力学研究 [J], 袁艳娟;刘晶;邵卿;乔红群
5.高效液相色谱法手性拆分(2-戊基-3-苯基-2,3环氧丙烷基)二苯基磷酸酯对映体[J], 王舒;韦思平;王力;陈碧琼;张春;王钦;杜曦
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手性药物色谱拆分法研究发展
5.1 间接拆分法
[1]Zukowski J,De Biasi V,Berthod A. Chiral
等特点，并具在手性分离方面与高效液相色谱、
间接拆分法[8]虽需进行衍生化反应，但生 separation of basic drugs by capillary elec－
气相色谱相互补充，在光学纯药物的制备方面 成的非对映体异构体，物化性质不同,可用常规 trophoresis with carboxymethylcyclodextrins [J].J
的技术，它以高压电场为驱动力，以毛细管为分 - NHCO- 基团。苯环的取代基的性质，数目及位 [11]LI Bing，SHI Jie -hua，YANG Gen -sheng，.
离通道，依据样品中各组分间电荷及质量的差 置对手性化合物的拆分影响很大[11]。蛋白质类 Cellulose-based chiral stationary phase in high
副作用。因此手性药物拆分近年来引起人们的 D- 10- 樟脑磺酸胺作为手性离子对试剂添加到 是很广泛；GC 法对于药物的沸点要求严格，故
广泛关注。目前，手性药物的拆分主要有化学拆 流动相中，在硅胶 GF254 薄层板上分离了两种芳 GC 应用范围有限；CE 法和 TLC 法检测灵敏度
分法、结晶法、生物拆分法和色谱法等等，其中 香醇胺类药物对映体拉贝乐尔和倍它乐克，并 较低，有待研究提高发展；HPLC 法因手性固定
也有其局限性，如检测灵敏度不足，重现性差等 磺酰基 - 1,2- 二苯基乙二胺，研究了流动相中 对甲基苯磺酰基-1,2-二苯基乙二胺在卵类粘
[6]。
有机调节剂的种类和含量等色谱条件对拆分结 蛋白柱上的手性拆分[J].色谱,2003, 21(4): 407.
高效液相色谱手性流动相法拆分酮基布洛芬对映体
高效液相色谱手性流动相法拆分酮基布洛芬对映体
杨青;唐瑞仁;曾莎莎
【期刊名称】《分析试验室》
【年(卷),期】2007(26)8
【摘要】以Lichrospher C18为分析柱,将β-环糊精、2,6-二甲基-β-环糊精、2,3,6-三甲基-β-环糊精分别作为手性流动相添加剂,系统地研究了R,S-酮基布络芬对映体在HPLC系统中的拆分。
建立了以2,3,6-三甲基-β-环糊精为手性流动相添加剂分离R,S-酮基布络芬对映体方法。
【总页数】3页(P84-86)
【关键词】高效液相色谱;手性流动相添加剂;对映体分离
【作者】杨青;唐瑞仁;曾莎莎
【作者单位】中南大学化学化工学院
【正文语种】中文
【中图分类】O657.7
【相关文献】
1.高效液相色谱手性流动相添加剂法拆分佐匹克隆对映体 [J], 叶祥喜;宋燕西;陈旭涛;季有知;孙璐璐;吴小倩;杜春燕
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3.高效液相色谱手性流动相添加剂法拆分愈创甘油醚对映体 [J], 翟明翚;韩爽;王颖;陈志伟;苏立强
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直链淀粉手性固定相高效液相色谱法拆分比索洛尔对映体
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第 ６期
李
芳， ： 等 直链淀粉手性 固定相高效液相色谱法拆分比索洛尔对映体
・６ ７ ７・
１ 实 验 部 分
１ １ 仪 器 与 试 剂 ．
表 ２ 流动 相 中 乙醇 比例 对 Ｂ Ｐ对 映 体 分 离 的 影 响 Ｓ
Ｌ 一０ Ｃ １ Ａ型 高 效 液 相 色 谱 仪 、 Ｐ －０ 型 紫 外－ Ｓ Ｄ １Ａ 可见 分光 检 测 器 （ 日本 岛 津公 司 ） Ａ ａ ｔｒ色 谱 工 ； ｎ ｓａ
HPLC法测定佐匹克隆片的含量及有关物质
HPLC法测定佐匹克隆片的含量及有关物质
董莉;陈雨
【期刊名称】《中国药品标准》
【年(卷),期】2009(010)004
【摘要】目的:用高效液相色谱法测定佐匹克隆片的含量及有关物质.方法:用C18柱;流动相:pH3.5缓冲溶液(取十二烷基硫酸钠8.1 g和磷酸二氢钠1.6 g,加水1 000 mL使溶解,用磷酸调pH3.5)-乙腈(55:45);检测波长:303nm.采用外标法测定含量,加校正因子的自身对照法测定已知杂质,自身对照法测定未知杂质.结果:佐匹克隆浓度在19.04～152.29mg·L-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9997.平均加样回收率为99.6%,RSD=0.8%(n=5).有关物质各杂质峰与主峰之间的分离度良好;结论:本方法灵敏度高,专属性强、准确可靠,适合于佐匹克隆片含量及有关物质的测定.
【总页数】3页(P288-290)
【作者】董莉;陈雨
【作者单位】大连市药品检验所,大连,116021;大连市药品检验所,大连,116021【正文语种】中文
【中图分类】R921.2
【相关文献】
1.HPLC法测定佐匹克隆片含量及含量均匀度 [J], 王铁杰;李玉兰;王玉
2.RP—HPLC法测定普伐他汀钠片含量,含量均匀度及其有关物质 [J], 林斌
3.HPLC法测定贝林司他中有关物质的含量 [J], 孙朋杰;张莉;杜超;李伟;卓秋琪
4.HPLC法测定苯丙氨酯原料药及片剂的含量和有关物质 [J], 王昕;王卫;唐素芳
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分子印迹手性拆分
速0.2 mL/min;进样体积10μL;操作
温度19～36℃ 。
（R)-和(S)-酮洛芬在印迹柱上的分离谱图
（S)-酮洛芬在印迹柱上的谱图
空白柱没有拆分能力,而制得的分子印迹聚 合物对酮洛芬的外消旋混合物显示出良好 的手性拆分能力,(S)-酮洛芬的容量因子为
9.52,选择性因子为1.52,分离度R为0.88。
盐酸克伦普罗结构式 含有一个手性中心
四、新型CSP实例
（一）分子印迹CSP：分子印迹技术又称为分子烙印， 是一种制备在空间 结构和结合位点上与某一分子(模板分子)完全匹配的聚合物的技术。以手 性药物单个对映体为模板获得分子印迹聚合物，制备出分子印迹 CSP，可 用来拆分手性药物。合成印迹分子过程如下
六、高效液相色谱手性衍生化试剂法分离手性药物 1、定义：手性衍生化试剂是在样品处理阶段为提高其分离度，使分析物 和手性衍生化试剂反应生成非对映异构体对，在常规色谱条件下实现分 离的目的。 2、手性衍生化试剂满足条件
（1）手性试剂和反应产物在化学上和手性上都很稳定。手性试剂应是光学纯且在贮存中不 发生改变。在衍生化反应中,试剂、手性药物和反应产物不应发生消旋化反应。 （2）衍生化反应生成的非对映体对在色谱分离时应能显示高柱效。 （3）手性试剂和反应产物在衍生化反应和色谱条件下应是稳定的。为了防止消旋化,反应 条件应尽可能温和简便。 （4）手性试剂应具有UV或荧光等敏感结构，方便检测。 （5）手性化合物对映体的化学结构中应具有易于衍生化的基团,如氨基、羧基、羟基等。
（二）大环抗生素类固定相
该方法将大环抗生素键合到硅胶上，并用来拆分外消旋体，此类手性固定相 通过多 作用点实现分离,可拆分羧酸、 氨基酸、 酰胺、酯类等手性药物。且具有选择性好， 色谱柱容量高， 稳定性好，可用于制备分离的特点。
HPLC手性流动相添加剂及其用于药物对映体拆分中的影响因素
HPLC手性流动相添加剂及其用于药物对映体拆分中的影响因素徐雄;宁卫红;瞿志荣;杨瑞卿;谢永荣【期刊名称】《生物化工》【年(卷),期】2018(004)005【摘要】高效液相色谱手性流动相添加剂法是拆分药物对映体的方法之一.它不需要使用手性柱也能高效分离药物对映体,且具有操作简便、应用范围广和通用性好等特点.本文综述了手性流动相添加剂的种类,其拆分药物对映体的原理及在拆分过程中的影响因素,对药物对映体的拆分具有重要指导意义.【总页数】6页(P150-155)【作者】徐雄;宁卫红;瞿志荣;杨瑞卿;谢永荣【作者单位】赣南师范大学化学化工学院,江西省高校功能材料化学重点实验室,江西赣州 341000;赣南师范大学化学化工学院,江西省高校功能材料化学重点实验室,江西赣州 341000;杭州师范大学有机硅化学及材料实验室,浙江杭州 311121;赣南师范大学化学化工学院,江西省高校功能材料化学重点实验室,江西赣州 341000;赣南师范大学化学化工学院,江西省高校功能材料化学重点实验室,江西赣州 341000【正文语种】中文【中图分类】O657.7+2【相关文献】1.以羧甲基-β-环糊精为HPLC手性流动相添加剂法分离两种手性药物对映体 [J], 刘静;董斌;丁红雨2.HPLC手性流动相添加剂及其用于药物对映体拆分中的影响因素 [J], 徐雄; 宁卫红; 瞿志荣; 杨瑞卿; 谢永荣3.HPLC β-环糊精手性流动相添加剂的研究V.甲基β-环糊精动态覆盖手性色谱固定相模型的提出 [J], D.G.Durham4.HPLC β-环糊精手性流动相添加剂的研究Ⅱ.RP-HPLC系统中β-环糊精与甲基苯巴比妥的手性选择性包合 [J], 梁宏5.HPLC β-环糊精手性流动相添加剂的研究Ⅲ.β-环糊精手性选择性包合稳定常数的简化计算及验证 [J], 梁宏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
手性药物拆分技术及分析
手性药物拆分技术及分析在药物研究和开发中，手性药物是一个非常重要的领域。
手性药物指的是分子结构中含有手性中心（手性碳原子）的化合物，左旋和右旋两种异构体具有不同的生物活性和体内代谢途径。
因此，正确地分析和分离手性药物对于药物研究和有效性的评估至关重要。
手性药物分析技术主要包括色谱法、光学活性法和核磁共振（NMR）法。
色谱法是一种常用的手性药物分析方法。
它基于手性药物的两种对映异构体在手性固定相上的不同吸附能力进行分离。
常见的色谱法包括高效液相色谱法（HPLC）和毛细管电泳法。
HPLC通常使用手性固定相柱，通过选择性地吸附左旋或右旋手性分子，实现对手性药物的分离。
毛细管电泳是一种高效的手性药物分析方法，基于对映异构体在电场中的迁移速率不同，通过毛细管中背景电解质的浓度和pH值调节来分离手性药物。
光学活性法是一种基于光学活性性质来分析和测定手性药物的方法。
光学活性手性药物由于具有旋光性，可以引起光的偏振方向发生旋转。
常用的光学活性法包括旋光仪法和圆二色光谱法。
旋光仪法是通过测定手性分子对光的旋转角度来判断手性药物的对映异构体的含量和比例。
圆二色光谱法则是测量手性分子对不同波长光的吸收性质，通过对波长的差异来判断手性药物的对映异构体。
核磁共振（NMR）是一种基于核磁共振现象来分析手性药物的方法。
NMR技术通过检测手性碳原子或核自旋的信号来确定手性药物的结构和对映异构体的比例。
通过对样品进行核磁共振实验后，通过解释谱图的峰位和峰形等信息，可以得到手性药物的分析结果。
此外，还有一些其他的手性药物分析方法，如质谱法、X射线衍射法和环光谱法等。
这些方法在手性药物分析中各有优劣，适用于不同类别和性质的手性药物。
总之，手性药物分析技术对于药物研究和评估的重要性不可忽视。
科学家们通过不断研究和发展新的手性分析技术，为新药开发和治疗提供了更可靠和准确的手性药物分析方法。
色谱技术在手性药物拆分中的应用分析
色谱技术在手性药物拆分中的应用分析色谱技术是一种基于物质在固定相和流动相间的物理化学相互作用而进行分离和检测的分析方法。
在药物分析中，色谱技术广泛应用于药物的质量控制、药代动力学研究和药物代谢等领域。
而在手性药物拆分中，色谱技术尤为重要。
手性药物是指分子具有非对称碳原子而存在两种镜像异构体（对映体），即左旋体和右旋体。
这两种对映体在药理活性、药代动力学和毒性等方面可能存在着明显的差异。
对手性药物进行拆分和分离是药物研发和质量控制中的关键环节。
在手性药物拆分中，常用的色谱技术主要包括高效液相色谱（HPLC）、气相色谱（GC）和超高效液相色谱（UHPLC）等。
这些色谱技术在手性药物拆分中的应用分析主要包括以下几个方面。
色谱技术可以用于手性药物的鉴定和纯度分析。
通过将手性药物样品与手性拆分柱相互作用，可以将左旋体和右旋体分离出来，实现对手性药物的鉴定和分析。
色谱技术还可以用于检测手性药物的不对称合成过程中是否产生了对映异构体的杂质。
色谱技术还可以用于手性药物的代谢研究。
手性药物在体内往往会经历吸收、分布、代谢和排泄等过程，这些过程可能会导致手性药物的代谢产物产生手性反映。
通过色谱技术的分离和检测，可以对手性药物及其代谢产物进行定性和定量分析，揭示手性药物的代谢途径和代谢产物的手性构型。
色谱技术还可以用于手性药物的体内和体外解离动力学研究。
通过测定手性药物的解离动力学常数和药物在体内的药代动力学参数，可以评估手性药物的药效学、药动学和体内药物相互作用等特性。
色谱技术在手性药物拆分中的应用分析为药物研发和质量控制提供了重要的支持。
通过色谱技术的分离和检测，可以实现手性药物的鉴定、纯度分析、定量分析、代谢研究和解离动力学研究，为药物的合理使用和研发提供科学依据。
如何应用高效液相色谱法进行手性药物对映异构体拆分
如何应用高效液相色谱法进行手性药物对映异构体拆分对于市场上越来越多对目标物准确定性的要求，而手性产物是其中较为重要的一部分，因此对于手性目标物的检测就显得尤为重要。
一、什么是手性导构和对映异构体？当药物分子中碳原子上连接有4个不相同的基团时，该碳原子被称为不对称碳或手性碳（中心），会导致药物分子存在异构体，如果两个异构体之间的关系如同一个物体的立体结构在照镜子，这个立体结构和它在镜子中的像互为对映异构体（对映体）。
图1是手性对映异构体的图示。
图1 手性对映异构体图示对映体具有相同的物理性质（如熔点，沸点，溶解度，折射率，酸性，密度等），热力学性质（如自由能，焓、熵等）和化学性质。
除非在手性环境（如手性试剂，手性溶剂）中才表现出差异。
对映体对偏振光的作用不同，它们的比旋光度数值相同，但方向相反。
对映体的生物活性不相同，化学反应中表现出等速率。
等量的左旋体与右旋体的混合物构成外消旋体。
从对映体中分离出单纯一个光学异构体的方法称手性拆分。
最普通的手性拆分方法是消旋旋体与光学活性相反的离子（称拆分剂）作用生成非对映体。
手性药物对映体拆分的方法主要有非色谱法和色谱法。
非色谱法（主要包括结晶法、微生物消化法等）耗时长，过程繁琐不能制备高纯度对映体，色谱法是基于把对映体的混合物转换成非对映异构体，然后利用它们在化学或物理性质上的差异进行分离。
主要包括气相色谱(GC)、超临界流体色谱(SFC)、毛细管电泳(CE)和毛细管电色谱(CEC)等。
表1罗列了色谱手性拆分的发展史。
其中高效液相色谱(HPLC)因其独特的优势成为手性分析领域最常用的一种技术。
表1 色谱手性拆分发展史二、HPLC手性拆分方法手性药物拆分法通常分为直接法和间接法两大类。
间接法和直接法的共同特点是均以现代技术为基础并引人不对称中心或光活性分子；不同的是间接法是将其引入分子溶质内，而直接法则是引人分子间。
引人手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异是手性进行光学异构体拆分的基础。
高效液相色谱法测定佐匹克隆有关物质
高效液相色谱法测定佐匹克隆有关物质李彦;李银峰;靳朝东【期刊名称】《医药导报》【年(卷),期】2012(31)7【摘要】目的建立高效液相色谱(HPLC)法测定佐匹克隆的有关物质.方法色谱柱为Welchrom-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈-0.05 mol·L-1磷酸氢二钠(pH =7.5)(35∶65)为流动相,流速为1 mL·min-1,检测波长为303 nm,柱温30℃.结果佐匹克隆的线性范围为0.003 3～0.656 4 mg·mL-1,回归方程:A=32991C+3.672 4,r=0.9999.精密度RSD=0.13％(n=6),重复性RSD=1.01％(n=6),最小检出限0.6 ng,平均收回率100.16％(RSD=1.03％).结论该方法简便,准确,专属性强,灵敏度高,可用于佐匹克隆有关物质检查.【总页数】3页(P928-930)【作者】李彦;李银峰;靳朝东【作者单位】天津中医药大学,300193;天津药物研究院分析测试中心,300193;天津药物研究院分析测试中心,300193【正文语种】中文【中图分类】R971.3;R927.2【相关文献】1.HPLC法测定佐匹克隆片的含量及有关物质 [J], 董莉;陈雨2.反相高效液相色谱法测定血清中的佐匹克隆 [J], 杨丽君;ROCHHOLZGertrud3.高效液相色谱法测定分析原料药氟胞嘧啶中有关物质的方法验证 [J], 袁拥军;张伟男4.高效液相色谱法测定分析原料药氟胞嘧啶中有关物质的方法验证 [J], 袁拥军;张伟男5.高效液相色谱法测定盐酸伐地那非原料药中的有关物质 [J], 黄美容;曹阳;黄顺旺;曹明成因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法拆分手性兽药常用的固定相综述
高效液相色谱法拆分手性兽药常用的固定相综述
刘颖;王丽娜;郭国贤;刘凯;董庆明;李廷
【期刊名称】《现代畜牧兽医》
【年(卷),期】2022()10
【摘要】兽医临床所使用的兽药大多具有手性,而且大部分手性药物以消旋体形式应用。
由于药物对映体的药理活性、作用机制等不同,故建立高效快速的兽药对映体手性分离分析方法十分重要。
高效液相色谱法(HPLC)因其快速、简单、高效、适用范围广等优点成为手性兽药分离的主要手段。
色谱填料是色谱法拆分手性化合物的关键,是近年来的关注热点。
文章主要阐述了几种常见的手性固定相,按固定相材料分为多糖衍生物类手性固定相、配体交换手性固定相、大环手性固定相、分子印迹手性固定相等,为建立快速、准确、高效的手性药物拆分方法提供参考。
【总页数】4页(P93-96)
【作者】刘颖;王丽娜;郭国贤;刘凯;董庆明;李廷
【作者单位】辽宁省检验检测认证中心
【正文语种】中文
【中图分类】S859
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1.纤维素类手性固定相高效液相色谱法拆分三唑类手性化合物
2.高效液相色谱法手性固定相拆分手性药物研究进展
3.手性药物对映体的环糊精手性流动相手性固定
相高效液相色谱法拆分4.采用手性固定相高效液相色谱法拆分沙库巴曲钙的手性异构体5.手性固定相高效液相色谱法拆分右旋苯醚氰菊酯对映体
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手性药物气相、液相色谱拆分法及其在体内药分中的应用
手性药物气相、液相色谱拆分法及其在体内药分中的应用刘文华
【期刊名称】《江苏药学与临床研究》
【年(卷),期】2000(008)003
【摘要】“手性”系一种化学特征,它引起分子的不对称性。
不能与镜象体重合的称为手性分子,即对映异构体,有光学活性。
药物的构型与药理作用的关系很密切,然而人工合成品往往是外消旋体。
虽然人们力图运用不对称合成直接制备光活性化合物,但目前大多数情况下,还不可能只获得某种单旋体。
药物的消旋体引入人体后,其对映体分子均由体内具手性的蛋白质、酶和受体,以两个完全不同的分子处理。
因而,药物对映体在体内可具有不同的代谢途径和药理作用。
【总页数】3页(P9-11)
【作者】刘文华
【作者单位】江苏省药品检验所南京210008
【正文语种】中文
【中图分类】R927.1
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HPLC检测右旋佐匹克隆中的手性杂质
HPLC检测右旋佐匹克隆中的手性杂质
张旗;赵欣
【期刊名称】《华西药学杂志》
【年(卷),期】2008(23)1
【摘要】目的建立检测右旋佐匹克隆中手性杂质的方法。
方法采用RP—HPLC法，Chiral—AGP色谱柱（150mm×4．0mm，5μm）；流动相为20mmol·L^-1醋酸钠-醋酸缓冲液（pH5）；流速0.9ml·min^-1；检测波长225nm；柱温30℃。
结果佐匹克隆对映体达基线分离，右旋佐匹克隆0～20．0mg·L^-1与峰面积线性关系良好（r=0．9998）。
结论所建方法直接、简便、快速，可用于检测右旋佐
匹克隆中手性杂质。
【总页数】2页(P94-95)
【关键词】高效液相色谱法;右旋佐匹克隆;手性杂质
【作者】张旗;赵欣
【作者单位】天津大学药学院
【正文语种】中文
【中图分类】R917
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高效液相色谱手性流动相添加剂法拆分佐匹克隆对映体叶祥喜;宋燕西;陈旭涛;季有知;孙璐璐;吴小倩;杜春燕【摘要】以β-环糊精作为手性流动相添加剂,研究了佐匹克隆对映体在反相高效液相色谱系统中的拆分情况.探讨了β-环糊精浓度、流动相中甲醇含量、流动相pH 值、流动相流速及温度等因素对佐匹克隆对映体拆分的影响.通过采用单一变量法对实验条件进行考察,最终得到了佐匹克隆对映体手性拆分的最佳色谱条件.结果表明:当采用Inertsil ODS-SP(5μ.m,4.6 mm×250 mm)色谱柱,甲醇为有机相,流动相为20mmol/L磷酸二氢钾缓冲液(含15 mmol/Lβ-环糊精)-甲醇(85∶15),流速为0.8 mL/min,pH值为5.5,温度为35℃,紫外检测波长为305 nm,进样量为20 μL 时,佐匹克隆对映体得到良好分离,其对映体的保留时间分别为67.42 min和74.48 min,分离度(R)为1.62.该方法操作简单,灵敏度高,拆分效果理想,且比手性固定相法成本低,从而为佐匹克隆对映体的进一步深入研究提供了一种新方法.【期刊名称】《分析测试学报》【年(卷),期】2014(033)004【总页数】4页(P471-474)【关键词】高效液相色谱法;手性流动相添加剂;佐匹克隆;β-环糊精;对映体分离【作者】叶祥喜;宋燕西;陈旭涛;季有知;孙璐璐;吴小倩;杜春燕【作者单位】东华大学环境科学与工程学院,上海201620;东华大学环境科学与工程学院,上海201620;东华大学环境科学与工程学院,上海201620;东华大学环境科学与工程学院,上海201620;东华大学环境科学与工程学院,上海201620;东华大学环境科学与工程学院,上海201620;东华大学环境科学与工程学院,上海201620【正文语种】中文【中图分类】O657.7;TQ460.72佐匹克隆(Zopiclone)是一种安全性较高的速效催眠药，有催眠、镇静、抗焦虑和抗惊厥等作用，以及延长睡眠时间、提高睡眠质量、减少夜间觉醒和早醒次数等效果，且对呼吸系统的抑制作用极小，因而具有次晨残余作用低的特点［1］。
佐匹克隆的化学名称为6-(5-氯吡啶-2-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-羰氧基-5，6-二氢吡啶(3，4-b)吡嗪-5-酮，其分子结构中含有1个手性碳原子，属于手性药物，目前临床上通常以消旋体给药，其结构式见图1。
但近年来的研究证明，与消旋的佐匹克隆相比，右旋佐匹克隆具有更强的药效，且药物不良反应小［2－3］。
因此，对佐匹克隆对映异构体进行拆分研究，建立快速、灵敏、分离效果好的对映体测定方法是一个具有理论和实际意义的课题。
迄今为止，关于佐匹克隆对映体拆分的方法主要为手性固定相法［4－5］。
Sangaraju等［6］采用乙酸铵和乙腈为流动相，以纤维素－三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)为固定相进行了佐匹克隆对映体的拆分;李海生等［7］采用硫酸铵和乙腈为流动相，以纤维素－三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)为固定相进行了佐匹克隆对映体的拆分;丁国生等［8］采用β-环糊精为手性固定相直接拆分佐匹克隆对映体。
手性固定相法虽然操作简单，但手性柱价格昂贵，使用寿命短，消耗大。
此外，剧崙等［9］采用β-环糊精为手性添加剂，利用毛细管电泳法对佐匹克隆对映体进行了拆分。
近年来，β-环糊精及其衍生物在高效液相色谱方面得到了越来越广泛的应用［10－15］。
本实验采用β-环糊精为流动相添加剂，以甲醇为有机相，C18柱为固定相，采用高效液相色谱法对佐匹克隆手性对映体进行拆分，并对β-环糊精浓度、甲醇比例、流动相pH值、流速和柱温等影响因素进行了优化，得到了理想的分离效果。
此方法操作简单，灵敏度高，拆分效果理想，且比手性固定相法经济。
图1 佐匹克隆的化学结构式Fig.1 Chemical structure of zopiclone1 实验部分1.1 仪器与试剂LC-20AT高效液相色谱仪(Shimadzu);SPD-20A紫外检测器;Rheodyne7725型手动进样阀;CTO-10ASvp柱温箱(Shimadzu);PHS-9V型酸度计(杭州华光无线电厂);FA1004型电子天平(上海恒平科学仪器有限公司)。
佐匹克隆(上海共价化学科技有限公司);β-环糊精(生化试剂，国药集团化学试剂有限公司);甲醇(色谱纯，上海凌峰化学试剂有限公司);磷酸、氢氧化钾(分析纯，国药集团化学试剂有限公司);磷酸二氢钾(优级纯，国药集团化学试剂有限公司);实验用水为二次重蒸水。
1.2 色谱分离条件色谱柱:Inertsil ODS－SP(5 μm，4.6 mm×250 mm);流动相:20 mmol/L磷酸二氢钾缓冲液(含15 mmol/L β-环糊精)－甲醇(85∶15，pH 5.5);流速:0.8 mL/min;紫外检测波长:305 nm;进样量:20 μL;柱温:35℃。
1.3 佐匹克隆溶液及流动相的配制精密称取佐匹克隆1.0 mg，置于20 mL容量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀后于4℃避光保存，作为储备液。
进样前经0.22 μm的微孔滤膜过滤。
流动相使用前经0.22 μm的微孔滤膜过滤并超声脱气。
2 结果与讨论2.1 磷酸二氢钾浓度的影响流动相中加入缓冲盐有调节pH值、改善峰形和分离效果的作用，当流动相中未添加缓冲盐时，色谱峰形较差且分离度不佳［16］。
本实验考察了几种无机盐的效果，发现使用磷酸二氢钾时的分离效果最佳，且在10～30 mmol/L范围内改变磷酸盐的浓度时，对映体的容量因子随盐浓度的升高而降低，分离度逐渐增大。
这是因为无机盐的存在能增加环糊精包合物的稳定性，提高手性识别能力。
同时适量的盐也有利于提高β-环糊精的溶解度。
但高浓度的磷酸盐会对色谱柱和色谱仪造成损害。
综合考虑，在保证分离度的前提下，选择磷酸二氢钾的最佳浓度为20 mmol/L。
2.2 β-环糊精的手性识别机制β-环糊精是由多个葡萄糖分子以α-1，4糖苷键相连的七元环状低聚糖化合物，其分子中空并呈“V”型圆桶状构造。
组成β-环糊精的每个葡萄糖单元有5个手性碳原子，因而作为主体分子能够提供给客体分子良好的不对称环境［17］。
其手性识别机制主要是溶质手性碳原子附近的芳香环能够嵌入β-环糊精的疏水性空腔中形成包合物，而手性碳原子上的极性基团能与β-环糊精空腔开口处的手性碳原子上的羟基形成氢键，通过两对映体与β-环糊精结合的程度不同，形成非对映体络合物之间的保留差异和稳定性差异，从而实现对映体的分离。
2.3 β-环糊精浓度对分离度的影响β-环糊精浓度对手性分离起着重要作用，一般随着β-环糊精浓度的增加，手性对映体的分离度逐渐增大(见表1)。
由表1可知，当β-环糊精的浓度为8 mmol/L时，佐匹克隆对映体的分离度为0.80;当β-环糊精的浓度增至15 mmol/L时，可实现基线分离，此时分离度为1.62;继续增加β-环糊精的浓度至20 mmol/L时，对映体的分离度并未继续增大(R=1.54)，而是保持在一个相对稳定的范围内。
这是因为随着β-环糊精浓度的增加，其与佐匹克隆的作用增强，佐匹克隆对映体与β-环糊精生成的非对映体络合物保留值差异增大。
分离因子α为热力学参数，只与流动相、固定相、溶质性质及温度有关。
在本实验中，溶质、固定相、温度均保持不变，随着流动相中β-环糊精浓度的增加，分离因子逐渐增大。
但由于β-环糊精的溶解度较小，浓度过高时易从流动相中析出，损害色谱系统，且高浓度的环糊精会增大流动相的黏度，进入色谱系统后柱压的上升速度加快，不利于色谱柱的使用寿命。
因此，最终选择15 mmol/L β-环糊精对佐匹克隆对映体进行分离。
表1 β-环糊精浓度与分离度的关系Table 1 Influence of β-CD concentrationon the separationConcentration of β-CD c/(mmol·L －1) Capacity factor(kS) Capacity factor(kR) Resolution(R) Selective factor(α)8 15.76 15.05 0.80 1.04 12 15.97 15.03 1.07 1.06 15 17.23 15.50 1.62 1.11 20 18.75 16.94 1.54 1.11 2.4 流动相中甲醇含量对分离度的影响固定磷酸二氢钾浓度为20 mmol/L，β-环糊精浓度为15 mmol/L，水相pH值为5.5，改变甲醇和水相的相对含量，测定佐匹克隆对映体的保留值，并计算容量因子及分离度，结果见表2。
当甲醇的比例在13%～30%之间变化时，随着甲醇含量的降低，流动相的洗脱强度减弱，使佐匹克隆对映体与β-环糊精的作用时间延长，容量因子逐渐增大，分离度随之增大。
当甲醇含量为15%时，佐匹克隆对映体可实现基线分离，分离度(R)为1.62;增大甲醇含量时，保留时间逐渐减小，但分离度逐渐下降，当甲醇含量增至20%时，分离度(R)降至0.86;但当甲醇比例降低至13%时，分离度开始下降，这可能是由于保留时间延长，扩散作用使得峰变宽，导致分离度下降。
表2 甲醇含量与分离度的关系Table 2 Influence of methanol on the separationPercentage of methanol(%) Capacity factor(kS) Capacityfactor(kR) Resolution(R) Selective factor(α)13 17.35 16.07 1.46 1.10 1517.23 15.50 1.62 1.12 17 13.33 12.32 1.36 1.10 20 7.72 7.25 0.86 1.09 30 0 5.05 0 02.5 流动相pH值对分离度的影响在20 mmol/L磷酸二氢钾缓冲液(含15 mmol/L β-环糊精)－甲醇(85∶15)流动相体系中，用磷酸和氢氧化钾分别将其调至不同pH值，在最佳色谱分离条件下分离佐匹克隆对映体，其分离度与pH值的关系为:当流动相pH值在4.5～5.5之间变化时，随着pH值的增大，分离度逐渐增大;当pH值达到5.5时，分离度达最大值，继续增大pH值，则会导致分离度逐渐减小;当pH值为6.0时，分离度降至1.26。
这可能是由于佐匹克隆为弱酸性物质，适当的酸性条件有利于该物质的分离。
2.6 温度对分离度的影响温度对佐匹克隆对映体的分离具有显著影响。
保持其它实验条件不变，随着温度的升高，佐匹克隆对映体的分离度逐渐变小。
这是由于随着柱温的升高，β-环糊精的疏水性空腔逐渐变大，对映体与β-环糊精结合的络合物稳定性逐渐减小，降低了其手性识别作用，导致其保留时间差异减小，从而影响了对映体的分离度。