HPLC手性流动相添加剂法拆分药_省略_收载三种含N手性药物及其机制探讨_周颖

盐酸维拉帕米是以外消旋形式使用的手性药 物，其对映体之间有较大的立体选择性的药动学和 药效学差异。S-（ － ） - 维拉帕米延长 PR 间期的药 理作用为同浓度 R-（ + ） - 维拉帕米的 10 ～ 20 倍， 而 S-（ － ） - 维拉帕米的清除率大约为 R-（ + ） - 维 拉帕米的 2 倍。而马来酸氯苯那敏、磷酸氯喹手性 化合物的生理或毒理方面尚未有报道。
氯喹、马来酸氯苯那敏、盐酸维拉帕米 3 个含 N 碱性药典品种对映体在 RP-HPLC 系统中的拆分方法并探讨其机制。方法 色
谱柱为 Alltima C18 （ 4. 6 mm × 250 mm，5μm） ； 流动相： 乙腈-水（ 含磺丁基醚-β-环糊精、磷酸二氢钠，用磷酸调 pH 值至 2. 5） ； 检 测波长： 332、264、278 nm； 流速： 0. 8 mL·min －1 ； 柱温： 25 ℃ 。结果 磷酸氯喹、马来酸氯苯那敏、盐酸维拉帕米可在上述色谱
基金项目： 国家“十二五”重大专项创新药物研制综合大平台 （ 2012ZX 09301-002-001） ； 科技基础性工作专项 2011IM030200 作者简介： 周颖，女，硕士研究生 研究方向： 药物分析 * 通讯作者： 王琰，女，研究员，硕士生导师 研究方向： 药物分析和药物代谢
Tel / Fax： （ 010） 63165238 E-mail： wangyan@ imm. ac. cn
条件下分别与其对映体得到分离，同时考察手性流动相添加剂的种类和浓度、pH、缓冲盐的种类和浓度、有机相的种类和比
例、柱温对药物对映体拆分效果的影响，选择了最佳的手性分离条件并对其分离机制作了探讨。结论 SBE-β-CD 作为一种手
性添加剂，用于手性流动相 RP-HPLC，可拆分含 N 碱性的手性药物，其手性分离效果明显优于天然环糊精（ β-CD） 及衍生化的
磷酸氯喹对照品（ 中国食品药品检定研究院， 批号： 100421-200401） ，盐酸维拉帕米对照品（ 中国 食品药品检定研究院，批号： 100223-200102 ） ，马来 酸氯苯那敏对照品（ 中国食品药品检定研究院，批 号： 100047-200606 ） ； 磺 丁 基 醚-β-环 糊 精、β-环 糊 精、羟丙 基-β-环 糊 精 （ 北 京 奇 松 生 物 科 技 有 限 公 司） ； 甲醇，乙腈，三氟乙酸（ 色谱纯） ； 磷酸二氢钾， 磷酸二氢钠（ 分析纯） ； 85% 的磷酸（ 分析纯） ； 娃哈 哈纯净水。
1 仪器与试药 日本 Shimadzu 公司 UFLC 色谱系统（ SIL － 20A
XR 自动进样器，DGU － 20A3 脱气机，LC － 20A XR 泵，CTO － 20 AC 柱温箱，SPD － M20A 紫外可变波 长检测器，CBM － 20A 液相系统控制器） ，PB － 10 型 pH 计 （ Satorius 公 司 ） ，ARA520 型 电 子 分 析 天 平 （ Ohaus 公司） ，XS105 型电子分析天平（ Mettler Toledo 公司） 。
ZHOU Ying1，2 ，HUANG Min1 ，WANG Yan1* ，ZHANG Qi-ming2 （ 1. State Key Laboratory of Bioactive Substances and Func-
tions of Natural Medicines，Institute of Materia Medica，Chinese Academy of Medical Sciences ＆ Peking Union Medical College，Beijing 100050，China； 2. National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products，Beijing 100050，China）
中国药学杂志 2012 年 7 月第 47 卷第 13 期
Chin Pharm J，2012 July，Vol. 47 No. 13 ·1069·
图 1 三种手性药物的化学结构式 Fig. 1 Structures of the 3 chiral drugs
《美国药典》33 版有收载，《日本药局方》15 版无收 载，各相关药典均无所涉品种手性拆分的检测项。
环糊精（ CD） 及其衍生物是手性分离分析中常 用的手性添加剂，磺丁基醚-β-环糊精（ SBE-β-CD） 为修饰后带负电的环糊精衍生物，除疏水作用外，其 带负电荷，与在酸性条件下含 N 碱性手性药物的带 正电荷 N 原子上发生静电相互作用，并且衍生化后 其水溶性得以增强。
研究表明，SBE-β-CD 作为手性流 动 相 添 加 剂 对手性药物，特别是含 N 碱性药物，有良好的拆分 效果［1］。周彩菊等［2］以 SBE-β-CD 对马来酸氨氯地 平进行拆分。孙文芳等［3］以 SBE-β-CD 为手性流动 相添加剂，在 C18 柱上成功分离了盐酸昂丹司琼对映 体。关瑾等［4］研究发现，只有 SBE-β-CD 可以使兰 索拉唑对映体达到基线分离。盐酸维拉帕米以手性
磷酸氯喹为 4-氨基喹啉类，对疟原虫红细胞内期 裂殖体起作用，可能系干扰了疟原虫裂殖体 DNA 的 复制与转录过程或阻碍了其内吞作用，从而使虫体由 于缺乏氨基酸而死亡。马来酸氯苯那敏片是组织胺 H1 受体拮抗剂，能对抗过敏反应（ 组胺） 所致的毛细 血管扩张，降低毛细血管的通透性，缓解支气管平滑 肌收缩所致的喘息。盐酸维拉帕米又名异搏定、戊脉 安，为钙通道阻滞剂。近年来用于治疗高血压、心绞 痛、心律失常、脑血管病、手指血管痉挛、腹痛、食道失 弛缓症、偏头痛、肺动脉高压和预防早产。
HPLC 手性流动相添加剂法拆分药典收载三种含 N 手性药物及其机制 探讨
周颖1，2 ，黄敏1 ，王琰1* ，张启明2 （ 1. 中国医学科学院 北京协和医学院药物研究所，天然药物活性物质与功能国家重点实验室，北京
100050； 2. 中国食品药品检定研究院，北京 100050）
摘要： 目的 采用磺丁基醚-β-环糊精（ SBE-β-CD） 作为手性流动相添加剂，以反相高效液相色谱技术（ RP-HPLC） ，建立了磷酸
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固定相拆分及毛细管电泳手性拆分的方法曾有报 道［5-6］，马来酸氯苯那敏曾有以手性固定相拆分的报 道［6］、磷酸氯喹尚未见关于手性拆分的研究。上述 3 种手性化合物尚未见以 HPLC 手性流动相法拆分 的研究。
本实验首次建立了用 RP-HPLC 结合 SBE-β-CD 该手性流动相添加剂拆分上述 3 种药典品种的方法， 考察了手性流动相添加剂的浓度、pH、缓冲盐的种类 和浓度、有机相的种类和比例、柱温等对药物对映体 拆分效果的影响，选择最佳的手性分离条件。探讨了 SBE-β-CD 作为手性流动相添加剂在拆分含 N 碱性 手性化合物方面具有优势，其拆分机制可能与药物分 子的构型以及分子中 N 原子的个数和位置有关。
中性环糊精（ HP-β-CD） 。
பைடு நூலகம்
关键词： 高效液相色谱法； 手性流动相； 对映体； 磺丁基醚-β-环糊精
中图分类号： R917
文献标志码： A
文章编号： 1001 － 2494（ 2012） 13 － 1069 － 05
Study on Chiral Separation of Three Drugs Collected Pharmacopoeia N-alkyl Group by HPLC Using Chiral Mobile Phase Additive and Its Mechanism
2 方法与结果 2. 1 色谱条件
色 谱 柱： Alltima C18 柱 （ 4. 6 mm × 250 mm，5 μm） ； 流动相为乙腈-水（ 含磺丁基醚-β-环糊精、磷 酸二氢钠，加磷酸调 pH 为 2. 5） ； 流速： 0. 8 mL · min － 1 ； 柱温 25 ℃ ； 进 样 量： 5 μL； 检 测 波 长： 284、 254、278 nm。 2. 2 供试品溶液的制备
在 HPLC 拆分外消旋化合物的方法中，手性流 动相添加剂法（ CMPA） 有其独特的优点，不需以手 性试剂衍生，也不需价格昂贵的手性柱，只要在流动 相中有针对性地加入少量手性添加剂，从而改变样 品中对映体在固定相与流动相之间的吸附或分配系 数，就能用普通的正相或反相柱分离。
磷酸氯喹，马来酸氯苯那敏，盐酸维拉帕米均为 常用的 3 个消旋体药物，分别收载于《中国 药 典》 2010 年版 （ 图 1） 。《英 国 药 典》2011 版、《欧 洲 药 典》7. 0 版、《美国药典》33 版、《日本药局方》15 版 对盐酸维拉帕米、马来酸氯苯那敏均有收载，磷酸氯 喹 在《英 国 药 典 》2011 版、《欧 洲 药 典 》7. 0 版、
ABSTRACT： OBJECTIVE To performe chiral separation of three pharmaceutical racemates collected in Ch． P 2010 containing N-alkyl groups，including verapamil hydrochloride，chlorphenamine maleate，and chloroquine diphosphate by using SBE-β-CD as a mobilephase additive in an HPLC system． METHODS The analysis was carried out on an Alltima C18 column． The mobile phase consisted of acetonitrile and a phosphate solution added with SBE-β-CD and NaH2 PO4 ，whose pH value was adjusted to 2． 5 by phosphoric acid． The flow rate was set at 0． 8 mL· min －1 ，and the column temperature was 25 ℃ ． The UV detection was carried out at 332，264 and 278 nm，respectively． The effects of different factors on the separation effect were investigated，including CD types （ β-CD，HP-βCD） ，SBE-β-CD concentration，pH value，oven temperature，and buffer concentration． RESULTS The established method was able to separate the three racemates and the mechanism had been discussed． CONCLUSION Three racemates can be separated on C18 column using SBE-β-CD as a chiral mobile phase additive． This method might be applied to separate various types of biologically important enantiomers which have N-alkyl groups in the chemical structure． KEY WORDS： HPLC； chiral mobile phase additives； optical enantiomers； SBE-β-CD