固定相与流动相.
固定相与流动相
3. 流动相选择
在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。 采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂， 若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。 也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使 保留时间缩短。 常用溶剂的极性顺序： 水(最大) > 甲酰胺> 乙腈> 甲醇> 乙醇> 丙醇> 丙酮>二氧六环> 四氢呋喃> 甲乙酮> 正丁醇> 乙酸乙酯> 乙醚> 异丙醚> 二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫 化碳>环己烷>己烷>煤油(最小)
2018/10/20
4. 选择流动相时应注意的几个问题
（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累 积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。 （2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱 子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。 （3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并 在柱中沉积。 （4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测 器时，流动相不应有紫外吸收。
2018/10/20
4. 空间排阻分离固定相
（1）软质凝胶 葡聚糖凝胶、琼脂凝胶等。多孔网状结构； 水为流动相。适用于常压排阻分离。 （2）半硬质凝胶 苯乙烯-二乙烯基苯交联共聚物，有机凝胶； 非极性有机溶剂为流动相，不能用丙酮、乙醇等极性溶剂 （3）硬质凝胶 多孔硅胶、多孔玻珠等； 化学稳定性、热稳定性好、机械强度大，流动相性质影响 小，可在较高流速下使用。 可控孔径玻璃微球，具有恒定孔径和窄粒度分布。
2018/10/20
５. 手性固定相
生物、药物分子和天然有机 产物的分离。 环糊精（CD） 结构：
流动相和固定相的定义
流动相和固定相的定义《流动相和固定相，化学世界里的奇妙伙伴》嘿，大家好呀！今天咱来聊聊一个化学里挺有意思的话题——流动相和固定相。
你说这流动相啊，就像是个到处溜达的活泼小子。
为啥这么说呢？你想啊，它老是在那管道或者体系里欢快地流淌着，一刻也停不下来。
它带着样品们在它的“溪流”里畅游，带着它们到处闯荡，一会跑到这，一会跑到那。
这个流动相啊，可调皮着呢，一会儿快，一会儿慢，但就是因为它这么能折腾，才能帮我们把样品中的各种成分给分离开来。
而那固定相呢，则像个沉稳的大哥，老老实实地待在那里。
它一动也不动，坚守着自己的岗位，任凭流动相带着样品在它面前跑来跑去。
固定相就像是个战场，而样品们就是战士，在这个战场上与固定相展开一场“斗争”。
有的样品和固定相关系好，就容易被固定相抓住；有的呢，和固定相不咋亲密，就容易被流动相带走。
它们俩可真是一对绝配的好搭档。
流动相负责动，固定相负责静，一动一静，配合得那叫一个默契。
就好像是一场精彩的舞蹈表演，流动相是那灵动的舞者，带着样品们跳出各种花样；而固定相则是那坚实的舞台，默默地支撑着一切，让舞蹈能够顺利地进行。
有的时候我就想啊，如果没有了流动相，那固定相就只能干等着，啥也干不了，而样品们也只能原地踏步；要是没有了固定相呢，流动相带着样品瞎跑，也分不出个所以然来。
所以说啊，它们俩缺一不可，这就是化学世界里的奇妙之处。
在我们的实验过程中，选择合适的流动相和固定相那可太重要了。
如果选错了，那结果可能就会变得一塌糊涂，就像搭配衣服一样，要是搭配错了，那可就成笑话啦！而且啊，我们还得根据不同的样品和实验目的，来调整这俩家伙的特性，这就像是给它们穿上不同的“衣服”，让它们以最适合的状态来迎接挑战。
总之呢，流动相和固定相就是化学世界里非常重要的一对小伙伴。
它们相互合作，为我们带来了许多有趣的实验现象和成果。
我们可得好好珍惜它们，让它们在化学的舞台上继续绽放光彩呀！希望我这接地气的解释，能让大家对流动相和固定相有更深刻的理解和认识，下次再见到它们的时候，会有一种熟悉和亲切的感觉哦！。
HPLC中固定相和流动相
HPLC中固定相和流动相在色谱分析中，如何选择最佳的色谱条件以实现最理想分离，是色谱工作者的重要工作，也是用计算机实现HPLC分析方法建立和优化的任务之一。
以下是填料基质、化学键合固定相和流动相的性质及其选择。
一、基质（担体）HPLC填料可以是陶瓷性质的无机物基质，也可以是有机聚合物基质。
无机物基质主要是硅胶和氧化铝，无机物基质刚性大，在溶剂中不容易膨胀；有机聚合物基质主要有交联苯乙烯-二乙烯苯、聚甲基丙烯酸酯，有机聚合物基质刚性小、易压缩，溶剂或溶质容易渗入有机基质中，导致填料颗粒膨胀，结果减少传质，最终使柱效降低。
1、基质的种类：1）硅胶硅胶是HPLC填料中最普遍的基质。
除具有高强度外，还提供一个表面，可以通过成熟的硅烷化技术键合上各种配基，制成反相、离子交换、疏水作用、亲水作用或分子排阻色谱用填料。
硅胶基质填料适用于广泛的极性和非极性溶剂。
缺点是在碱性水溶性流动相中不稳定。
通常，硅胶基质的填料推荐的常规分析pH范围为2～8。
硅胶的主要性能参数有：①平均粒度及其分布。
②平均孔径及其分布，与比表面积成反比。
③比表面积：在液固吸附色谱法中，硅胶的比表面积越大，溶质的k值越大。
④含碳量及表面覆盖度（率）：在反相色谱法中，含碳量越大，溶质的k值越大。
⑤含水量及表面活性：在液固吸附色谱法中，硅胶的含水量越小，其表面硅醇基的活性越强，对溶质的吸附作用越大。
⑥端基封尾：在反相色谱法中，主要影响碱性化合物的峰形。
⑦几何形状：硅胶可分为无定形全多孔硅胶和球形全多孔硅胶，前者价格较便宜，缺点是涡流扩散项及柱渗透性差，后者无此缺点。
⑧硅胶纯度：对称柱填料使用高纯度硅胶，柱效高，寿命长，碱性成份不拖尾。
2）氧化铝具有与硅胶相同的良好物理性质，也能耐较大的pH范围。
它也是刚性的，不会在溶剂中收缩或膨胀。
但与硅胶不同的是，氧化铝键合相在水性流动相中不稳定。
不过现在已经出现了在水相中稳定的氧化铝键合相，并显示出优秀的pH稳定性。
色谱分析—柱色谱(分析化学课件)
柱色谱应用
（五）分子排斥色谱 （size- exclusion chromatography） 原理：按分子大小分离。小分子可以扩散到凝
胶空隙，由其中通过，出峰最慢；中等分子只能通 过部分凝胶空隙，中速通过；而大分子被排斥在外 ，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰。
全部在死体积前出峰； 可对相对分子质量在100-105范围内的化合物按 质量分离。
柱色谱应用
（三）离子交换色谱（ion-exchange chromatography） 原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应； 固定相：阴离子或阳离子离子交换树脂； 流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子离子 交换树脂作固定相，采用碱性水溶液； 阳离子交换：R-SO3H+M+ =R-SO3 M+H + 阴离子交换：R-NR4OH+X-=R-NR4 X+OH应用：离子、可离解的化合物、氨基酸和核酸等。
柱色谱应用
1.吸附剂 吸附剂为多孔性微粒物质。常用的有硅胶、氧化铝、聚酰胺和大孔吸附树脂等。 需满足以下条件： ❖具有较大的吸附表面和吸附中心； ❖与样品、溶剂和洗脱剂均不发生化学反应； ❖不能被溶剂或洗脱剂溶解； ❖粒度均匀，且有一定的粒度。
柱色谱应用
（1）硅胶 适用于酸性或中性物质 （2）氧化铝 碱性氧化铝 pH 9.0～10.0 适于分析碱性、中性物质 中性氧化铝 pH＞7.5 适于分析酸性碱性和中性物质 酸性氧化铝 pH 4.0～5.0 适于分析酸性、中性物质 （3）聚酰胺 氢键作用，氢键能力↑强，组分越后出柱。 注：吸附剂含水量越大，活性级别越高，吸附活性越低，吸附能力越弱。
柱色谱应用
A
B
C
D
柱色谱应用
液相色谱的固定相与流动相
不同流动相的特点
有机溶剂
常用的流动相之一，适用于分 离非极性化合物。
水
常用于分离极性化合物，具有 良好的溶解性。
缓冲溶液
用于调节样品的酸碱度，对某 些化合物有选择性。
如何选择合适的固定相和流动相
1 样品特性
根据样品的性质选择合适 的固定相。
2 分离需求
根据对目标化合物的选择 性需求，选择合适的流动 相。
液相色谱的固定相与流动 相
液相色谱是一种重要的分析技术，其中固定相扮演着关键的角色。
固定相介绍
液相色谱中的固定相是一种材料，通常填充在色谱柱中。 固定相可以根据其化学性质和粒径大小进行选择。
流动相介绍
流动相是在液相色谱过程中对样品进行携带的溶剂。 流动相的选择会影响分离的选择性和分辨率。
液相色谱的工作原理
液相色谱通过固定相和流动相之间的相互作用将样品分离。 不同组分在固定相上的相互作用力不同，导致不同程度的保留和分离。
不同固定相的特点
反相色谱柱
常用于分离非极性化合物，具有较强的保留和分离能力。
离子交换色谱柱
适用于分离带电离子化合物，具有良好的选择性。
大小排除色谱柱
可分离不同分子大小的化合物，常用于生物分析。
3 分析目的
根据分析的目的和需要， 综合考虑选择合适的固定 相和流动相。
案例分析
例如，当分析复杂的生物样品时，可以使用离子交换色谱柱和缓冲溶液作为流动相，以实现对带电离子的有效 分离。 根据需要，还可以选择具有不同化学性质的固定相，以进一步提高分离效果。
液相色谱的固定相与流动相
不同固定相的选择与优势
C18
适用于中极性非极性化合物，适用于医药化 学等领域。
手性
可以实现大量手性化合物的分离，广泛应用 于制药、医药等领域。
芳香族
由于分子间的π-π堆积作坊，固定相表面可 以容纳一定分子体积。主要用于分离芳香族 或含芳香族结构物质。
离子交换
适用于分离具有离子性的化合物和混合物。
常见的流动相
液相色谱的固定相与流动 相
液相色谱（Liquid Chromatography）是一种高效、分辨率较高、适用于大多 数分子的分离技术。本文将介绍液相色谱的固定相和流动相。
固定相的介绍
作用
固定相是固定在色谱柱中的一种材料。它的 主要作用是提供一个分离的平台。
种类
常见的固定相有C18、C8、芳香族、离子交 换、手性等，不同的固定相分离作用不一样。
选择因素
在选择固定相时需要考虑分离物的化学性质 和分子结构，以及分离柱的长度和直径等。
优势
固定相具有高分离效率、高分离分辨率、操 作简单、时间短、试剂消耗小等优点。
流动相的 按一定比例调配而成。
种类
常见的流动相种类有水、有机 溶剂、盐酸等，不同种类的流 动相适用于不同的分离柱。
3 环境领域
4 化工领域
适用于环境污染物分析、有机化合物测定、 微量元素测定等。
分离和纯化有机化学品、研究石油化工原 料和煤化学反应机理等。
总结与展望
液相色谱是一种高效、分辨率较高的分离技术，应用领域较广。未来液相色谱技术将更好地结合质谱， 等离子体及纳米技术，应用的领域将更加广泛和深入。
作用
流动相可以作为分离物在色谱 柱中移动的载体，通过改变流 动相的性质，对分离物产生分 离作用。
高效液相色谱固定相和流动相
高压液相色谱HPLC培训教程(六)IV．固定相和流动相在色谱分析中，如何选择最佳的色谱条件以实现最理想分离，是色谱工作者的重要工作，也是用计算机实现HPLC分析方法建立和优化的任务之一。
本章着重讨论填料基质、化学键合固定相和流动相的性质及其选择。
一、基质（担体）HPLC填料可以是陶瓷性质的无机物基质，也可以是有机聚合物基质。
无机物基质主要是硅胶和氧化铝。
无机物基质刚性大，在溶剂中不容易膨胀。
有机聚合物基质主要有交联苯乙烯-二乙烯苯、聚甲基丙烯酸酯。
有机聚合物基质刚性小、易压缩，溶剂或溶质容易渗入有机基质中，导致填料颗粒膨胀，结果减少传质，最终使柱效降低。
1．基质的种类1）硅胶硅胶是HPLC填料中最普遍的基质。
除具有高强度外，还提供一个表面，可以通过成熟的硅烷化技术键合上各种配基，制成反相、离子交换、疏水作用、亲水作用或分子排阻色谱用填料。
硅胶基质填料适用于广泛的极性和非极性溶剂。
缺点是在碱性水溶性流动相中不稳定。
通常，硅胶基质的填料推荐的常规分析pH范围为2~8。
硅胶的主要性能参数有：①平均粒度及其分布。
②平均孔径及其分布。
与比表面积成反比。
③比表面积。
在液固吸附色谱法中，硅胶的比表面积越大，溶质的k值越大。
④含碳量及表面覆盖度（率）。
在反相色谱法中，含碳量越大，溶质的k值越大。
⑤含水量及表面活性。
在液固吸附色谱法中，硅胶的含水量越小，其表面硅醇基的活性越强，对溶质的吸附作用越大。
⑥端基封尾。
在反相色谱法中，主要影响碱性化合物的峰形。
⑦几何形状。
硅胶可分为无定形全多孔硅胶和球形全多孔硅胶，前者价格较便宜，缺点是涡流扩散项及柱渗透性差；后者无此缺点。
⑧硅胶纯度。
对称柱填料使用高纯度硅胶，柱效高，寿命长，碱性成份不拖尾。
2）氧化铝具有与硅胶相同的良好物理性质，也能耐较大的pH范围。
它也是刚性的，不会在溶剂中收缩或膨胀。
但与硅胶不同的是，氧化铝键合相在水性流动相中不稳定。
不过现在已经出现了在水相中稳定的氧化铝键合相，并显示出优秀的pH稳定性。
2.高效液相色谱仪和固定相、流动相
光电二极管阵列检测器
3. 差示折光检测器（differential refractive index detector） 除紫外检测器之外应用最多的检测器；
可连续检测参比池和样品池中溶液的折光 指数差值。差值与浓度呈正比；
特点：
通用型检测器 ; 灵敏度低（10-7g.mL-1），不能用于痕量分 析; 对温度敏感，要求使用温度恒定; 对流动相流量变化敏感，不能用于梯度洗脱。
六、液相色谱法流动相
1. 流动相特性 2. （1）流动相的种类、配比可显著改变组
分分离状况； 3. （2）亲水性固定液常采用疏水性流动相
， 称为正相液液色谱法; 4. （3）流动相的极性大于固定液的极性，
则称为反相液液色谱 。
组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。
2. 流动相类别 按流动相组成分：单组分和多组分； 按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗
外梯度: 两台高压泵， 将两种不同极性的溶剂 按一定的比例送入梯度 混合室，混合后进入色 谱柱。
内梯度: 一台高压泵, 通过比例调节阀,将两 种或多种不同极性的溶 剂按一定的比例抽入高 压泵中混合。
讨论1
用ODS柱分析一有机弱酸混合物样品， 以某一比例甲醇-水为流动相时，样品容 量因子较小，若想使容量因子增加，较 好的办法是 A 增加流动相中甲醇的比例 B增加流动相中水的比例 C流动相中加入少量HAc D流动相中加入少量的氨水
高压泵按其性质可分为恒压泵、恒流泵两类
1）往复式柱塞泵： 恒流 泵； 易于更换溶剂，适用于梯 度洗脱但有脉冲波动，可 以加一阻尼器抑制脉冲。
2）气动放大泵： 恒压泵 液缸体积大，更换流动相 不方便，不便于梯度洗脱， 无脉冲、稳定流量的输出, 现多用于装柱。
2 液相色谱流动相和固定相的选择
• 流动相能吸附在固定相上， 造成溶质在固定相上吸附力 的减弱
• 痕量的水足以改变吸附表面活性 • 控制水含量是得到较好重现性的主要因素
16
离子交换溶剂
CONFIDENTIAL
使用缓冲溶液在一 pH 值下让样品带电 • 酸性样品：pH 必須大于 5 • 碱性樣品：pH 必須小于 5 当缓冲溶液浓度增加、溶剂强度变强， 减少保留 加入有机溶剂能改变保留特性与选择性 离子对试剂通常微短链离子
24
非极性相互作用
CONFIDENTIAL
键和官能团 (C8)
NH2
SO3-
硅胶基体
范德华力
25
极性相互作用
CONFIDENTIAL
硅胶基体
O OH H
H
O
H
O
O N
C
偶极性引力、氢键
26
离子交换相互作用力
CONFIDENTIAL
硅胶基体
OH
SO3+N
NH3+
CO2H
CO2OCON(CH3)2
17
17
等度洗脱
CONFIDENTIAL
等度洗脱不能完全分离样品 • 某些样品太复杂 • 较早洗脱出的色谱峰分离度太差 • 较晚洗脱出的色谱峰变宽或拖尾 • 考虑梯度洗脱
18
梯度洗脱
CONFIDENTIAL
梯度洗脱时流动相强度随溶剂组成的改变而增强 • 梯度洗脱广泛适用于许多复杂样品与生物、聚合物样 品的分离
CONFIDENTIAL
Immiscible Miscible
Diisopropyl ether
Tetrachloroethane Tetrahydrofuran Toluene Trichloroethane Xylene
高效液相色谱 固定相和流动相
高压液相色谱HPLC培训教程(六)IV．固定相和流动相在色谱分析中，如何选择最佳的色谱条件以实现最理想分离，是色谱工作者的重要工作，也是用计算机实现HPLC分析方法建立和优化的任务之一。
本章着重讨论填料基质、化学键合固定相和流动相的性质及其选择。
一、基质（担体）HPLC填料可以是陶瓷性质的无机物基质，也可以是有机聚合物基质。
无机物基质主要是硅胶和氧化铝。
无机物基质刚性大，在溶剂中不容易膨胀。
有机聚合物基质主要有交联苯乙烯-二乙烯苯、聚甲基丙烯酸酯。
有机聚合物基质刚性小、易压缩，溶剂或溶质容易渗入有机基质中，导致填料颗粒膨胀，结果减少传质，最终使柱效降低。
1．基质的种类1）硅胶硅胶是HPLC填料中最普遍的基质。
除具有高强度外，还提供一个表面，可以通过成熟的硅烷化技术键合上各种配基，制成反相、离子交换、疏水作用、亲水作用或分子排阻色谱用填料。
硅胶基质填料适用于广泛的极性和非极性溶剂。
缺点是在碱性水溶性流动相中不稳定。
通常，硅胶基质的填料推荐的常规分析pH范围为2~8。
硅胶的主要性能参数有：①平均粒度及其分布。
②平均孔径及其分布。
与比表面积成反比。
③比表面积。
在液固吸附色谱法中，硅胶的比表面积越大，溶质的k值越大。
④含碳量及表面覆盖度（率）。
在反相色谱法中，含碳量越大，溶质的k值越大。
⑤含水量及表面活性。
在液固吸附色谱法中，硅胶的含水量越小，其表面硅醇基的活性越强，对溶质的吸附作用越大。
⑥端基封尾。
在反相色谱法中，主要影响碱性化合物的峰形。
⑦几何形状。
硅胶可分为无定形全多孔硅胶和球形全多孔硅胶，前者价格较便宜，缺点是涡流扩散项及柱渗透性差；后者无此缺点。
⑧硅胶纯度。
对称柱填料使用高纯度硅胶，柱效高，寿命长，碱性成份不拖尾。
2）氧化铝具有与硅胶相同的良好物理性质，也能耐较大的pH范围。
它也是刚性的，不会在溶剂中收缩或膨胀。
但与硅胶不同的是，氧化铝键合相在水性流动相中不稳定。
不过现在已经出现了在水相中稳定的氧化铝键合相，并显示出优秀的pH稳定性。
固定相与流动相课件
在食品分析中的应用
食品添加剂检测
01
色谱分离技术可用于检测食品中的添加剂和污染物，确保食品
的安全和卫生。
营养成分分析
02
通过色谱分离技术，可以分析食品中的营养成分，了解食品的
营养价值和功能。
食品真伪鉴别
03
色谱分离技术可以用于鉴别食品的真伪，防止假冒伪劣食品的
流通。
在环境监测中的应用
1 2
污染物检测
色谱柱的选择
分离度
根据待分离组分的性质和分离度 要求，选择合适的色谱柱。
固定相
根据待分离组分与固定相的相互作 用类型，选择合适的固定相材质和 粒径。
耐压性
根据色谱仪器的压力限制，选择能 承受压力的色谱柱。
色谱柱的维护与保养
清洁
使用前和使用后应清洗色谱柱， 以去除杂质和残留物。
储存
储存时应避免将色谱柱暴露在空 气中，以防止固定相干燥和污染
。
更换
当色谱柱性能下降时，应及时更 换色谱柱。
05
色谱分离技术应用
在药物分析中的应用
药物成分分离
色谱分离技术可用于分离药物中的有效成分和杂 质，提高药物的纯度和质量。
药物含量测定
通过色谱分离技术，可以精确测定药物中有效成 分的含量，确保药物质量和安全。
药物代谢研究
色谱分离技术可以用于研究药物的代谢过程，了 解药物在体内的变化和转化。
缓冲液
缓冲液是一种特殊的流动 相，常用于生物大分子和 药物的分离分析。
流动相的选择
根据待测组分的性质选择
对于不同性质的待测组分，应选择与其相容性好的流动相，以提 高分离效果。
根据分离目标选择
根据分离目标的不同，如定性分析、定量分析或制备分离，选择合 适的流动相以达到最佳分离效果。
液相色谱中固定相和流动相的概念
在液相色谱中，流动相通过样品混合物，使其与固定相发生相互作用，从而导 致样品中的成分以不同速度通过柱，实现分离。分离的过程基于样品成分在固 定相和流动相之间的相互作用和亲和性。
总体而言，液相色谱通过调整固定相和流动相的性质，使不同的化合物以不同 的速度在柱中传播，从而实现对混合物中化合物的分离和检测。
2. 流动相（Mobile Phase）： • 定义： 流动相是在液相色谱柱中流动的溶剂，它将样品与固定相 接触并推动它们通过柱，实现分离。流动相的组成和性质会对分 离过程产生重要影响。 • 性质： 流动相通常是液体，可以是有机溶剂、水或它们的混合 物，具体取决于分离的目标和所使用的固定相。例如，在反相液 相色谱中，水和有机溶剂（如甲醇或乙腈）的比例将影响化合物 的亲水性与亲油性。
液相色谱中固定相和流动相的概念
在液相色谱（Liquid Chromatography，简称 LC）中，固定相和流动相是两 个关键的概念，它们共同作用以实现化合物的分离。
1. 固定相（Stationary Phase）： • 定义： 固定相是液相色谱柱中的不动的部分，通常涂覆或填充在 柱内。这个相对于流动相而言是固定不动的。 • 性质： 固定相通常是一种固体或涂层，它的性质直接影响到分离 的选择性。不同类型的固定相对于不同类型的化合物具有不同的 选择性。例如，正相液相色谱使用亲油性的固定相，而反相液相 色谱则使用亲水性的固定相。
色谱分离原理
色谱分离原理色谱分离是一种广泛应用于化学、生物、环境等领域的分离技术，它通过不同物质在固定相和流动相作用下的差异，实现对混合物中组分的分离和检测。
色谱分离原理主要包括了几种基本的分离机制，其中包括了吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱等。
首先，吸附色谱是利用固定相对混合物中的组分进行吸附分离的一种色谱技术。
当混合物通过固定相时，不同成分与固定相的亲和力不同，因而在固定相上停留的时间也不同，从而实现了混合物中组分的分离。
吸附色谱主要适用于对极性物质的分离，例如氨基硅胶色谱、硅胶色谱等。
其次，分配色谱是利用固定相和流动相之间的分配平衡来实现混合物分离的一种色谱技术。
在分配色谱中，流动相会与固定相上的组分发生平衡，不同成分在固定相和流动相之间的分配系数不同，因而在流动相中移动的速度也不同，从而实现了混合物中组分的分离。
分配色谱主要适用于对非极性物质的分离，例如气相色谱、液相色谱等。
另外，离子交换色谱是利用固定相上的离子交换基团与混合物中离子间的相互作用来实现分离的一种色谱技术。
在离子交换色谱中，固定相上的离子交换基团会与混合物中的离子发生离子交换反应，不同离子与固定相的亲和力不同，因而在固定相上停留的时间也不同，从而实现了混合物中离子的分离。
离子交换色谱主要适用于对离子物质的分离，例如阴离子交换色谱、阳离子交换色谱等。
最后，凝胶色谱是利用固定相上的凝胶材料对混合物中分子大小的分布进行分离的一种色谱技术。
在凝胶色谱中，混合物中的分子会在凝胶孔隙中进行扩散，不同分子大小的扩散速率不同，因而在凝胶中停留的时间也不同，从而实现了混合物中分子的分离。
凝胶色谱主要适用于对大分子物质的分离，例如凝胶过滤色谱、凝胶层析色谱等。
综上所述，色谱分离原理是通过不同的分离机制实现对混合物中组分的分离和检测，吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱等是色谱分离中常用的技术手段。
在实际应用中，我们可以根据样品的性质和要求选择合适的色谱分离技术，从而实现对混合物中组分的有效分离和分析。
正相色谱常用的流动相
正相色谱（Normal Phase LC，NP）是一种常见的液相色谱分离技术，主要应用于分离有机化合物，如烃类、酚类、醛类、酮类等。
在正相色谱中，固定相通常为极性表面，如硅胶、硅藻土、玻璃珠等，流动相则通常为非极性溶剂，如正己烷、石油醚、氯仿等。
以下是关于正相色谱常用流动相的2000字解释：1. 流动相的作用与选择：流动相在液相色谱分离过程中起着至关重要的作用。
它不仅作为样品在固定相与移动相之间的传输介质，同时也能影响样品的溶解度、亲和力、扩散速度等，从而影响色谱分离效果。
在正相色谱中，常用的流动相可分为两种：极性流动相和非极性流动相。
2. 极性流动相：极性流动相是一种能够与样品分子产生相互作用，从而提高样品在固定相中的保留的溶剂。
在正相色谱中，常用的极性流动相包括醇类（如甲醇、乙醇、异丙醇）、酮类（如丙酮、丁酮）、酯类（如乙酸乙酯、丙烯酸甲酯）等。
这些溶剂的极性较高，能够增强样品分子与固定相的相互作用，从而提高分离效果。
3. 非极性流动相：非极性流动相是一种不能与样品分子产生相互作用的溶剂，能够降低样品在固定相中的保留，提高洗脱效果。
在正相色谱中，常用的非极性流动相包括烃类（如正己烷、石油醚）、卤代烃类（如二氯甲烷、氯仿）、酯类（如乙酸乙酯、丙烯酸甲酯）等。
这些溶剂的非极性较强，能够降低样品分子与固定相的相互作用，提高样品在固定相中的洗脱效果。
4. 选择性特点与应用：在选择流动相时，应根据样品的性质、分析目的以及色谱分离要求进行综合考虑。
对于极性样品，应选择极性流动相以增强样品与固定相的相互作用；对于非极性样品，应选择非极性流动相以降低样品在固定相中的保留。
此外，流动相的选择还应考虑溶剂的强度、溶解度、粘度等参数，以及溶剂与固定相的相互作用等因素。
5. 实际应用：正相色谱在实际应用中具有广泛的应用范围，如化学合成、医药研发、环境监测、食品分析等领域。
在化学合成中，正相色谱可用于分离和纯化有机化合物，如烃类、酚类、醛类、酮类等；在医药研发中，正相色谱可用于分离和纯化生物碱、氨基酸、蛋白质等生物分子；在环境监测和食品分析中，正相色谱可用于检测和分离农药残留、添加剂、有害物质等。
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3. 流动相选择
在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。 采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂， 若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。 也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使 保留时间缩短。 常用溶剂的极性顺序： 水(最大) > 甲酰胺> 乙腈> 甲醇> 乙醇> 丙醇> 丙酮>二氧六环> 四氢呋喃> 甲乙酮> 正丁醇> 乙酸乙酯> 乙醚> 异丙醚> 二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫 化碳>环己烷>己烷>煤油(最小)
7.3.1 液相色谱固定相
1. 液-液分配及离子对分离固定相
（1）全多孔型担体 氧化硅、氧化铝、硅藻土等制成的多孔球体；早期采用 100μm的大颗粒，表面涂渍固定液，性能不佳已不多见。 现采用10μm以下的小颗粒，化学键合制备柱填料。 （2）表面多孔型担体 （薄壳型微珠担体） 30 ～ 40 μ m 的玻璃微球， 表面附着一层厚度为1 ～ 2μm的多孔硅胶。 表面积小，柱容量底。
种类：硅胶、氧化铝、分子筛、聚酰胺等。种类有
限，应用面相对较窄。
结构类型：全多孔型和薄壳型； 粒度：5～10 μm。
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3.离子交换色谱分离固定相
结构类别： （1）薄壳型离子交换树脂 薄壳玻璃珠为担体，表面涂 约1%的离子交换树脂。 （2）离子交换键合固定相 薄壳键合型；微粒硅胶键合 型（键合离子交换基团）。 树脂类别： （ 1 ） 阳离子交换树脂（强酸 性、弱酸性）。 （ 2 ） 阴离子交换树脂（强碱 性、弱碱性）。
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2. 流动相类别
按流动相组成分：单组分和多组分；
按极性分：极性、弱极性、非极性；
按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。
常用溶剂： 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇
、乙腈、水。
采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流
动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。
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５. 手性固定相
生物、药物分子和天然有机 产物的分离。 环糊精（CD） 结构：
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环糊精：
空腔内壁为弱疏水性，所有 羟基在空腔的外沿呈亲水性，这 使他们能与各种极性、非极性分 子、离子形成包含化合物（主客 体配合物）。 1984年Armstrong首次将环糊精键合到二氧化硅上 用作HPLC的手性分离固定相，目前已成为十分普及的 手性固定相。 全苯基环糊精分离柱特别适合于分离氨基醇类 β阻 断剂，而其他类型手性固定相则很难分离。
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请选择内容
7.1 高效液相色谱的特点与仪器
7.2 基本原理与主要分离类型
7.3 固定相与流动相 7.4 影响分离的因素与操作条件选择 7.5 离子色谱法
结束
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第七章 高效液相色谱 分析法
High performance liquid chromatograph, .2 液相色谱流动相
Stationary phase and mobile phase of HPLC
第三节 液相色谱的固定 相与流动相
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4. 空间排阻分离固定相
（1）软质凝胶 葡聚糖凝胶、琼脂凝胶等。多孔网状结构； 水为流动相。适用于常压排阻分离。 （2）半硬质凝胶 苯乙烯-二乙烯基苯交联共聚物，有机凝胶； 非极性有机溶剂为流动相，不能用丙酮、乙醇等极性溶剂 （3）硬质凝胶 多孔硅胶、多孔玻珠等； 化学稳定性、热稳定性好、机械强度大，流动相性质影响 小，可在较高流速下使用。 可控孔径玻璃微球，具有恒定孔径和窄粒度分布。
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7.3.2 液相色谱的流动相
1. 流动相特性
（ 1）流动相组成改变，极性改变，可 显著改变组分分离状况。
（2）亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性 小于固定相的极性，正相，极性柱也称正相柱。 （3）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液液 色谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上 的出峰顺序相反。
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（3）化学键合固定相
化学键合固定相：应用最广、性能最佳的固定相； a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C 稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广； c. 硅碳键型： ≡Si—C d. 硅氮键型： ≡Si—N
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化学键合固定相的特点：
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4. 选择流动相时应注意的几个问题
（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累 积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。 （2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱 子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。 （3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并 在柱中沉积。 （4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测 器时，流动相不应有紫外吸收。
（1）传质快，表面无深凹陷。 （2）寿命长，化学键合，无固定液流失，耐流动相冲击； 耐水、耐光、耐有机溶剂，稳定。 （4）选择性好，可键合不同官能团，提高选择性。 （5）有利于梯度洗脱。 存在着双重分离机制：(键合基团的覆盖率决定) 高覆盖率：分配为主； 低覆盖率：吸附为主。
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2.液-固吸附分离固定相