常用实验大小鼠采血方法及其对实验动物福利的影响
2019年1月
第29卷一第1期
中国比较医学杂志
CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE
January,2019
Vol.29一No.1
杨健莉,刘佳,郑志红.常用实验大小鼠采血方法及其对实验动物福利的影响[J].中国比较医学杂志,2019,29(1):90-94.
Yang JL,Liu J,Zheng https://www.360docs.net/doc/608543382.html,parison and analysis of blood sampling methods from rats and mice [J].Chin J Comp Med,2019,29(1):90-94.
doi:10.3969/j.issn.1671-7856.2019.01.016
[基金项目]国家自然科学基金(2015408002)三
[作者简介]杨健莉(1989 ),女,学士学位,专业:实验动物学三E-mail:yangjianli0603@https://www.360docs.net/doc/608543382.html,
[通信作者]郑志红(1969 ),女,教授,研究方向:实验动物转基因与基因敲除研究三E-mail:zhihongzheng@https://www.360docs.net/doc/608543382.html,
常用实验大小鼠采血方法及其对
实验动物福利的影响
杨健莉,刘一佳,郑志红?
(中国医科大学实验动物部,沈阳一110122)
一一?摘要?一近些年大量的文献对实验大小鼠采血方法进行了比较研究,以探究出最适合的采血方法,从而获得
高质量的血液样本三本文主要介绍了几种实验大小鼠常用的采血方法,及不同采血方法对动物福利的影响,为选择最适的采血方法提供相关的理论依据,提高实验效率,降低实验影响三
?关键词?一实验大小鼠;采血方法;实验动物福利
?中图分类号?R -33一一?文献标识码?A一一?文章编号?1671-7856(2019)01-0090-05
Comparison and analysis of blood sampling methods from rats and mice
YANG Jianli,LIU Jia,ZHENG Zhihong ?
(Department of Laboratory Animal Science,China Medical University,Shenyang 110122,China)
一一?Abstract ?一Recently,many studies have compared different methods for blood collection from experimental rats and mice to determine the most suitable method to obtain high-quality blood samples.This review introduces several blood collection methods commonly used in rats and mice,and their effects on animal welfare.This will provide a theoretical basis for selecting the most suitable method of blood collection to improve experimental efficiency and reduce the impact on
experimental results.
?Keywords ?一experimental rats and mice;methods of blood collection;laboratory animal welfare
一一实验大小鼠的使用在哺乳动物实验中约为
75%左右[1],主要应用于药代动力学二毒理学二行为学二遗传学以及肿瘤学等领域,对实验大小鼠进行血液采集是实验操作过程中重要的实验操作,不同的采血方法对动物组织损伤程度二采血间隔及采血量要求等各不相同;那么选择适合的采血方法,获得高质量的血液样本,是获得良好动物实验数据的基础三本文主要介绍几种大小鼠常用的采血方法,对采血量的确定二采血频率
的选择及不同采血方法对动物福利的影响进行阐述,为实验者在操作过程中选择合适的采血方法提供依据三1一常用的采血方法
依据采血位点不同实验大小鼠常用的采血方法可分为鼠尾采血二眼眶采血二颈静脉采血二隐静脉采血二面部采血二心脏采血和腹主动脉采血;下面分别对不同的采血方法要点及应用进行介绍三
1.1一鼠尾采血
鼠尾采血主要包括尾尖采血二鼠尾刺血和尾静脉穿刺采血,适用于少量多次采血三尾尖采血又称剪尾采血,一般可采集血量:大鼠0.3~0.5mL,小鼠
0.1~0.2mL;剪尾长度:小鼠不超过1mm,大鼠不超过2mm,最长剪尾长度均不超过5mm;所采集血液为动静脉混合血,不适用于老龄鼠[2]三鼠尾刺血常用于大鼠,一般可采集血量0.01~0.05mL三尾静脉穿刺采血可采集血量:小鼠0.1~0.15mL,大鼠0.1~2mL;常规方法选择使用注射器采血,操作时应注意抽拉速度,避免因为抽拉过快致使血管内呈负压,阻止血液流出,为此实验人员将原有的注射式采血针进行改进,即选用真空采血管进行血液采集[3],有效的避免了使用注射器抽取血液因抽拉不均匀而产生的风险三
从动物福利角度出发鼠尾采血应优先选择用于需血量较少的连续多次采血,如血常规或血糖的动态监测等[4]三
1.2一眼眶采血
眼眶采血是大小鼠常用的采血方法,采血量一般大鼠0.4~0.6mL,小鼠0.2~0.3mL,适于多次重复采血三采血后需要一段的组织修复时间,一般同一眼眶重复采血至少需要10d的组织修复过程,否则会对采血量产生一定的影响[5]三大鼠眼眶采血常规方法即选用毛细玻璃管进行内眦取血,采血时选择使用无菌的毛细玻璃管,可以有效降低眼周感染和眼部损伤,同时也应保证毛细管周围的平滑度从而将眼损伤降至最低[6]三一些文献表明眼眶的多次取血会引起组织学改变,使动物临床表现异常,出现不适[7],从而对动物的昼夜节律性有一定的潜在影响,甚至最终导致动物死亡[2]三然而也有研究显示重复进行眼眶采血对动物的昼夜节律性没有影响[8],可用于进行眼眶组织的长期研究[9]三眼眶采血因其风险性,英国实验动物 3R 国际中心(简称NC3RS)[10]建议眼眶采血应用于终末期实验的采血,或动物处于全麻状态下,且无其他可替代方法,并提供合理的科学依据三
1.3一颈静脉采血
颈静脉采血一般可采集血量为大鼠2~2.5 mL,小鼠0.3~0.5mL三颈静脉采血一般无需麻醉,直接从穿刺点进针采集血液[11],但是此种方法要求操作者技术娴熟,而且由于动物未麻醉和相应的器械固定,动物容易挣扎,增加进针难度,易使动物产生应激反应造成皮下出血;对此杨萍等人[12]选择麻醉后使用一次性真空采血管进行采血,该方法操作
简捷二创伤小二采血量大,;但是多次大量采血时,由
于动物长时间处于麻醉状态,易损坏动物神经系
统,且一次性真空采血导管不适宜重复使用,此时
套管技术的应用大大弥补了重复采血多次进针的
不足,最大限度的降低了动物的痛苦以及不适感,
通过此种方法可连续采集到血液样本0.25mL[13];同时可以对大鼠血流动力学数据进行实时的检测,
有效的应用于啮齿动物脓毒血症的模型中[14]三颈静脉采血所采集的血液质量较高,单次采血一次可采集全身循环血量的15%,常应用于药代动力学研究,尤其颈静脉套管技术的不断应用,为连续多次采血提供了便利三
1.4一隐静脉采血
隐静脉采血常用于大小鼠的少量血液采集,单
次采血的安全采血量为动物体重的0.5%,间隔一
天多次采血采血量为动物体重的0.05%,隐静脉采
血无需麻醉,待动物固定后,后腿外侧区域剃毛后
暴露采血点,采血针刺入采血点,即可获得血液样
本;隐静脉采血常用于药代动力学研究,以及生化
指标和血液计数的检测等[15];由于在穿刺部位形成的痂可在后期轻轻擦掉,因此可从原来的穿刺点连续取样[16]三
隐静脉采血操作简单,因其静脉位置表浅,穿
刺准确性较高,操作过程无需麻醉,消除了麻醉剂
对实验结果的影响,有文献研究表明隐静脉采血可
作为眼眶采血的替代方法用于相关实验研究[17]三1.5一面部静脉采血
面部静脉采血主要适用于成年小鼠,一般可采
集血量约0.2~0.5mL,常用采血位点为面静脉和颞
浅静脉[18],面部采血一般无需麻醉,待动物固定,确定采血点后采血针迅速刺入,获得血液样本;面部采血可通过对面颊两侧分别采血进行重复采血,所得血样为动静脉混合血三相较于面静脉而言颞浅静脉的应用较少,因其靠近内耳,血液采集时若操作不当会损害内耳,对动物造成不可避免的压力和疼痛[19];面部取血一般不适用于与血凝相关的实验研究[20],因为会有不可控的出血过多产生,小鼠可能面临低血容量和死亡的风险[21]三
因此面部取血的主要采血位点是面静脉,其采
血量较大,且操作过程无需麻醉,操作方法简便快
捷,对动物损伤较小,但因其有不可控的出血过多
产生,所以应避免应用于与血凝相关的实验研究三1.6一心脏采血
心脏采血为无菌采血,采血量大,可采集血量大鼠1~1.5mL,小鼠0.5~0.8mL;此方法需在麻醉状态下进行,操作时,选择胸部左侧心脏博动最强处进针,缓慢回抽针筒可见血液流入针管,避免气体进入心脏研究发现不同性别的小鼠心脏采血后白细胞计数差异有显著性,雌性小鼠白细胞计数最低,提示在白细胞计数和分化的研究中,动物性别和采血部位应保持一致,确保实验数据的准确性[22]三
心脏采血所采血液为循环血液,由于其会给动物带来潜在的痛感,引起心包出血以及心包填塞等,故常用于实验终末期的动物采血[1];心脏采血中的右心室采血所得结果具有代表性,较优于其它的终末采血方法[23]三
1.7一腹主动脉采血
适用于大二小鼠实验终末期采血,可采集血量大鼠1.0~2.0mL,小鼠0.8~1.2mL;李学娟等人[24]通过动物麻醉固定后,解剖暴露腹主动脉的方式采集血液,此过程耗时30~60s三李研等人[25]将采血针进行了改良,采用真空采血管进行采血,本法较传统的腹主动脉采血法有 方便二快捷二准确二不易凝血二不易溶血 等优点三
腹主动脉采血法取血量大二不易溶血,适用于多项目检测,不损伤器官不会出现因操作不当造成气栓与瘀血等,有利于病理组织学检查,但操作比较复杂,技术性较强,应注意掌握适宜的麻醉深度,防止心跳骤停二减少出血二及大鼠躁动[26]三
综上所述,结合不同采血方法的特点,总结见表1三
2一采血方法的选择
不同的采血方法采血量不同,且对动物福利的影响也不相同,因此我们应结合实验要求选择最适合的采血方法三
2.1一采血量的选择
实验大鼠的循环血容量一般约为58~70mL/kg,小鼠的循环血容量一般约为63~80mL/kg[1],动物的采血量一般与被采血动物的体重二采血频率以及采血前是否给予补液有关系,且同种动物不同采血位点的采血量一般也不相同三每2~4周可以采集血量为循环血容量的10%,每7d可以采集循环血容量的7.5%,每24h可以采集循环血容量的1%[27]三
2.2一采血方法的选择对实验动物福利的影响
实验中应考虑不同的采血方法对动物福利的影响,在满足 3R 原则的同时,应选择对动物的疼痛二组织损伤及压力最小的采血方法,实验过程中与压力相关的福利指标通常指血清或血浆中的皮质酮水平二血糖值二生长激素或泌乳素二心率二血压以及行为学等,依据不同的实验目的可以对血液样本进行相应的福利指标检测[28]三
近些年大量文献针对不同采血方法对动物福利的影响进行了研究,Tsai等人[29]比较了大小鼠常用的五种采血方法对BALB/cO1aHsd小鼠动物福利指标的影响,结果显示在无麻醉少量采血时应选择眼眶采血,因其对动物的压力最小,颈静脉和面部静脉的采血方法对动物的压力最大,隐静脉对动物的损害最持久;Aasland等人[30]将隐静脉和尾静脉两种采血方法进行比较,结果显示尾静脉采血尤其多次采血相较于隐静脉会对动物造成更多的压力; Shirasaki等人[11]比较颈静脉穿刺和尾静脉切割两种采血方法,结果显示尾静脉切割相较于颈静脉穿刺会更易产生溶血,两种方法对动物产生的压力相似,因此颈静脉采血更适用血液变量等相关研究中的多次连续的大量采血;Holmberg等人[31]研究眼眶采血和面部采血对血友病小鼠的血液质量和动物福利影响,结果显示面部采血后FVIII小鼠会有失血过多产生,而眼眶采血仅引起了小鼠的轻微出血,且无临床致盲现象,对动物的压力较小,因此眼眶采血相较于面部采血更适用于凝血功能的检测三综上可见,隐静脉相较于尾静脉更适合多次少量的采血,颈静脉采血适合于多次连续的大容量采血,面部静脉采血由于其采血后出血的不可控性,故不适宜应用于与凝血功能相关的实验研究,但其可用于无麻醉下多次采血的其他实验研究三
3一小结
不同实验所需要检测的参数指标不同,应该根据自身的实验性质(是否涉及凝血功能等)选择合适的采血方法,避免因为选择不当致使动物出血过多,发生致盲,组织损伤等损害;选择适合的采血方法,明确实验中所需血样的特点,确定最适采血位点及采血频率,熟练的掌握各种采血方法的操作技能,从而获得良好的实验数据,最大程度的降低了对实验结果的影响三
表1一实验大小鼠常用采血方法比较
Table 1一Common methods of blood collection from rats and mice
项目Items 眼眶采血Retrobulbar plexus blood sampling 鼠尾采血Lateral tail vein blood sampling 颈静脉采血Jugular vein blood sampling 面部采血Facial vein blood sampling
适应条件Adaptive conditions 重复采血;中到大量采血;保存生命
Repeated sampling;medium to large volume;keeping alive
重复采血;采血量少;
保存生命
Repeated sampling;little volume;keeping alive
中到大量采血;保存动物生命
Medium to large volume;
keeping alive
重复采血;中到大量采血;保存生命
Repeated sampling;medium to large volume;keeping alive
适宜动物Adaptive animals
大鼠二小鼠Rats,mice
大鼠二小鼠Rats,mice
大鼠Rats
小鼠Mice
采血量Volumes 大鼠Rats 0.4~0.6mL 小鼠Mice 0.2~0.3mL
大鼠Rats 0.3~0.5mL 小鼠Mice 0.1~0.2mL
大鼠Rats 2.0~2.5mL 小鼠Mice 0.3~0.5mL
小鼠Mice 0.2~0.5mL
是否麻醉Anaesthesia or not
是Yes
否No
否?No
否No
血液清洁度Cleanliness of blood
污染少Less pollution 污染少Less pollution 污染少,清洁度高
Less pollution,high cleaning degree
污染少Less pollution 血液类型Blood type 静脉血Venous blood 动脉血/静脉血/混合血Arterial blood /Venous blood /Mixed blood
静脉血Venous blood 混合血Mixed blood
项目Items 心脏采血Cardiac puncture blood sampling 腹主动脉采血Abdominal aortic blood sampling 隐静脉采血Saphenous vein blood sampling 适应条件Adaptive conditions 大量采血;无需保存
动物生命
Large volume;no need
to keep alive
大量采血;无需保存
动物生命
Large volume;no need
to keep alive
重复少量采血;保存生命
Repeated sampling;little volume;keeping alive
适宜动物Adaptive animals
大鼠二小鼠Rats,mice
大鼠二小鼠Rats,mice
大鼠二小鼠Rats,mice
采血量Volumes 小鼠Mice 0.5~0.8mL 大鼠Rats 1.0~1.8mL
小鼠Mice 0.8~1.2mL 大鼠Rats 1.0~2.0mL
大鼠Rats 0.5~0.6mL 小鼠Mice 0.02~0.10mL
是否麻醉
Anaesthetizing or not 是Yes
是Yes
否No
血液清洁度Cleanliness of blood
清洁度高
High cleaning degree 污染少Less pollution 污染少Less pollution 血液类型Blood type
动脉血/静脉血
Arterial blood /Venous blood
动脉血Arterial blood
静脉血Venous blood
注:?表示颈静脉套管技术除外,套管技术需在麻醉的情况下进行三
Note.?Except for the jugular cannula,which should be performed under anesthesia.
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收稿日期 2018-08-29
实验动物采血指南
实验动物采血指南 采血方法的选择，决定于实验的目的所需血量以及动物种类。凡用血量较少的检验如红、白细胞计数、血红蛋白的测定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破组织取毛细血管的血。当需血量较多时可作静脉采血。静脉采血时，若需反复多次，应自远离心脏端开始，以免发生栓塞而影响整条静脉。例如，研究毒物对肺功能的影响、血液酸碱平衡、水盐代谢紊乱，需要比较动、动脉血氧分压、二氧化碳分压和血液pH值以及K+、Na+、CI-离子浓度，必须采取动脉血液。采血时要注意：⑴采血场所有充足的光线；室温夏季最好保持在25-28℃，冬季，15-20℃为宜；⑵采血用具有采用部位一般需要进行消毒；⑶采血用的注射器和试管必须保持清洁干燥；⑷若需抗凝全血，在注射器或试管内需预先加入抗凝剂. 不同动物采血部位与采血量的关系
(一)小鼠、大鼠采血法 1.割(剪)尾采血当所需血量很少时采用本法。固定动物并露出鼠尾。将尾部毛剪去后消毒，然后浸在45℃左右的温水中数分钟，使尾部血管充盈。再将尾擦干，用锐器(刀或剪刀)割去尾尖0.3-0.5cm，让血液自由滴入盛器或用血红蛋白吸管吸取，采血结束，伤口消毒并压迫止血。也可在尾部作一横切口，割破尾动脉或静脉，收集血液的方法同上。每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取血0.1ml，大鼠0.3～0.5ml。 2.鼠尾刺血法大鼠用血量不多时(仅做白细胞计数或血红蛋白检查)，可采用本法。先将鼠尾用温水擦拭，再用酒精消毒和擦拭，使鼠尾充血。用7号或8号注射针头，刺入鼠尾静脉，拔出针头时即有血滴出，一次可采集10～50mm3。如果长期反复取血，应先靠近鼠尾末端穿刺，以后再逐渐向近心端穿刺。 3.眼眶静脉丛采血采血者的左手拇食两指从背部较紧地握住小鼠或大鼠的颈部(大鼠采血需带上纱手套)，应防止动物窒息。当取血时左手拇指及食指轻轻压迫动物的颈部两侧，使眶后静脉丛充血。右手持续接7号针头的1ml注射器或长颈(3～4cm)硬质玻璃滴管(毛细管内径0.5-1.0mm)，使采血器与鼠面成45℃的夹角，由眼内角刺入，针头斜面先向眼球，刺入后再转180度使斜面对着眼眶后界。刺入浓度，小鼠约2～3mm，大鼠约4～5mm。当感到有阻力时即停止推进，同时，将针退出约0.1-0.5mm，边退边抽。若穿刺适当血液能自然流入毛细管中，当得到所需的血量后，即除去加于颈部的压力，同时，将采血器拔出，以防止术后穿刺孔出血。若技术熟练，用本法短期内可重复采血均无多大困难。左右两眼轮换更好。体重20-25g的小鼠每次可采血0.2-0.3ml；体重200-300g大鼠每次可采血0.5-1.0ml，可适用于某些生物化学项目的检验。 4.断头取血采血者的左手拇指和食指以背部较紧地握住大(小)鼠的颈部皮肤，并作动物头朝下倾的姿势。右手用剪刀猛剪鼠颈，约1/2-4/5的颈部前剪断，让血自由滴入盛器。小鼠可采用约0.8～1.2ml;大鼠约5-10ml。 5.心脏采血鼠类的心脏较小，且心率较快，心脏采血比较困难，故少用。活体
常用实验动物
常用实验动物 1、小鼠 喜欢群居，怕热，高温容易中暑 雌雄性小鼠交配后10~12小时，在雌性小鼠阴道口会形成白色的阴道栓 主要解剖学特性 消化系统：食管内壁有角质化鳞状上皮，利于灌胃；有胆囊；胰腺分散，色淡红，似脂肪组织。 生殖系统：雌性小鼠为双子宫型，呈“Y”形，卵巢不予腹腔相通，无宫外孕。 骨髓为红骨髓，无黄骨髓，终身造血。 皮肤无汗腺。 小鼠常用品种、品系 １. 近交系小鼠 C3H：1975年从美国引进，野生色毛； ? C57BL/6：1975年从日本引进，黑色毛； ? BALB/c：Bagg1913年获得小鼠白化株，经近亲繁殖20代以上育成，毛色为白色； ? DBA：分为DBA/1和DBA/2两个品系，1977年由美国实验动物中心引进，毛色均为浅灰色。 2、封闭群小鼠 ①KM小鼠：我国使用量最大的远交种小鼠，白色，抗病、适应力强，繁殖、成活率高。 ②ICR：1973年由日本国立肿瘤研究所引入我国，白色，其显著特点是繁殖
力强。 ③LACA ：1973年由英国实验动物中心引入我国，白色。其实是小鼠改名而成。 ④NIH ：由美国国立卫生研究院培育，白色，繁殖力强，幼仔成活率高，雄性好斗 3、突变系 1、裸鼠：第11对染色体上的裸基因（nu）导致无毛裸体、无胸腺 2、SCID小鼠：第16对染色体上的Scid隐性基因突变基因导致T、B淋巴细胞联合免疫缺陷．外观与普通小鼠差别不大，被毛白色，体重发育正常 3、快速老化模型小鼠：4~6月龄以前与普通小鼠的生长一样，4~6月龄以后迅速出现老化症状。如心、肺、脑、皮肤等器官老化，出现骨质疏松和老化淀粉样变。侏儒症：比正常小鼠体型小，缺少生长素和促甲状腺素，用于内分泌研究。小鼠在医学、生物学的应用 1、重组近交系小鼠将双亲品系的基因自由组合和重组产生一系列的子系，是遗传分析的重要依据，用作基因定位及其连锁关系的研究 2、提供自然的动物模型 2、大鼠染色体数2n=42 喜独居，喜啃咬，性情较凶猛、抗病力强，对新环境适应力强，但对环境刺激、炎症反应敏感。强烈噪音可引起食仔或抽搐；湿度低于40%易发生环尾巴症。行为表现多样，情绪反应敏感，易接受通过正负强化进行的多种感觉指令的训练雌性2.5月龄达到性成熟，具有产后发情、产后妊娠的特点。寿命2.5～3年。解剖学特征
良好的实验动物给药和采血(包括途径和体积)规范指南
A Good Practice Guide to the Administration of Substances and Removal of Blood,Including Routes and Volumes 良好的实验动物给药和采血(包括途径和体积)规范指南 Karl-Heinz Diehl1, Robin Hull2, David Morton3, Rudolf Pfister4, Yvon Rabemampianina5, David Smith6,*, Jean-Marc Vidal7 and Cor van de V orstenbosch 8 1Aventis, PO Box 1140, D35001 Marburg, Germany 德国马尔堡市35001区1140信箱安万特公司 2N I B S C, Blanch Lane, South Miimms, Potters Bar, Hertfordshire EN6 3QG 英国赫特福德郡EN6 3QG波特斯巴镇South Miimms布兰奇道英国国家生物制品检定所 3The University of Birmingham, Medical School, Edgbaston, Birmingham B15 2TT 英国伯明翰市B15 2TT艾吉马斯顿伯明翰大学医学院 4Novartis Pharma AG, CH-4002 Basel, Switzerland 瑞士巴塞尔CH-4002诺华制药公司 5Centre de Recherche Pfizer, Etablissement d’Amboise, Z1 Poce′-sur-Cisse-BP 159 37401 Amboise Cedex, France 法国Amboise Cedex Z1 Poce′-sur-Cisse-BP 159 37401 Etablissement d’Amboise 辉瑞研究中心 6AstraZeneca R&D Charnwood, Bakewell Road, Loughborough, Leics LE11 5RH 英国莱斯特郡LE11 5RH拉夫堡市贝克韦尔路Charnwood阿斯利康研究中心 7Aventis, 102 Route de Noisy, 95235 Romainville Ce′dex, France 法国Romainville Ce′dex 95235 Noisy路102号安万特公司 8N V Organon, PO Box 20, 5340 BH Oss, Netherlands 荷兰BH Oss5340 20号信箱欧加农公司 Key words: blood volumes; blood removal; administration substances; laboratory animals; refinement. 关键词：血容量；采血；给药；实验动物；简化 This article is the result of an initiative between the European Federation of Pharmaceutical Industries Associations (EFPIA) and the European Centre for the Validation of Alternative Methods (ECV AM).Its objectives are to provide the researcher in the safety evaluation laboratory with an up-to-date, easyto-use set of data sheets to aid in the study design process whilst at the same time affording maximum welfare considerations to the experimental animals. 该文章为欧盟制药工业协会(EFPIA)和欧洲替代动物实验方法验证中心(ECV AM)之间的初步结果。其目的在于为安全性评价实验室的研究者提供最新的易于使用的数据库以帮助研究设计过程，同时最大可能地考虑到实验动物的福利。 Although this article is targeted at researchers in the European Pharmaceutical Industry, it is considered that the principles underpinning the data sets and refinement proposals are equally applicable to all those who use these techniques on animals in their research, whether in research institutes,universities or other sectors of industry. The implications of this article may lead to discussion with regulators, such as those responsible for pharmacopoeial
项目二十七 常用实验动物的接种和采血方法
项目二十七常用实验动物的接种和采血方法 一、接种方法 (一) 皮下注射 皮下组织疏松的部位都可皮下注射。一般小鼠在腹部两侧，豚鼠在腹部或大腿内侧，家兔取背部，大腿内侧或耳根部皮下注射。注射部位消毒后，左手提起皮肤，右手持注射器将针头水平刺入皮下，针头摆动无阻力，说明已进入皮下，慢慢注入，注射部位随即隆起。注射完毕，用棉球压住针刺处，再拔出针头。小鼠注入量一般为0.2～0.5ml。家兔或豚鼠注入量为0.5～1.0ml． (二) 皮内注射 先将动物注射部位的毛剪去，消毒，然后左手绷紧皮肢，针头斜面向上，紧贴皮肤表层刺入，然后向上挑起再稍刺入，缓慢注射。若注入皮内，注射部位马上有小泡隆起。皮内注射量一般为0.1～0.2ml。 (三) 肌内注射 应选择肌肉发达、无大血管通过的部位。一般多选臀部、大腿内侧或外侧。针头直接刺入肌肉，回抽针栓如无回血即可注射。家兔等大动物注射量不超过2ml。 (四) 腹腔注射 小白鼠腹腔注射时，用右手拉鼠尾，左手食指和拇指捏住脑背部皮肤，翻转鼠体，把鼠尾和一侧的后腿夹于小指和无名指之间，使动物处于头低位，使内脏移向上腹，右手持注射器在下腹部左侧或右侧刺入皮下，沿皮下朝头部方向进针0.5～1.0cm，再以45°角刺入腹腔，此时有落空感，回抽无肠液，尿液或血液即可缓缓注入。家兔等较大动物注射，应先固定，于腹部腹中线旁侧1cm处进针。小鼠注射量一般为0.5～1.0ml，家兔或豚鼠为5ml。 (五) 静脉注射 1．家兔将家兔固定，用酒精棉球轻轻按摩耳翼，压迫耳根部静脉，使耳缘静脉扩张。用左手拇指与中、食指抓住耳尖部，从耳尖部边缘静脉平行进针，试推进少量注射液，如果觉得没有阻力，局部也没有隆起，表示已进入静脉，将注射液缓缓注入。若失败，再逐步向耳根部移位重新注射。注射完毕，用棉球压住针眼处，拔出针头。注射部位一般选用耳外缘静脉，易固定，表浅；耳内缘静脉深，不易固定，故不常用。 2．小鼠于尾部两侧静脉注射。固定小鼠使尾巴露出，置45℃～50℃温水浸泡1～2min，使尾部静脉扩张。取出尾巴，擦干消毒，在末端1/3或1/4处用左手捏住尾巴，右手持注射器，针头与静脉平行缓慢进针，试注入少许注射液，如无阻力，皮肤不发白，表示针头刺入静脉，否则应更换部位重扎。注射时多选用4 1/2# 针头。最大注射量为0.5ml。 二、采血方法 (一) 小鼠采血方法 1．断尾采血将小鼠固定，露出尾巴，用手轻揉或浸泡于45℃温水中数分钟或用酒精棉球涂擦，使尾血管充血。将鼠尾擦干，用剪刀剪去尾尖1～2mm。然后用手指从尾根部向尾尖捋，血即从断端流出。采血结束后消毒止血。此法采血每只小鼠可采十余次，每次可采血约0.1ml。 2．眼眶后静脉丛采血左手抓注鼠耳间头部皮肤，将头按在桌面或鼠笼上，轻压颈部两侧，引起头部静脉血液回流困难，使眼球充分突出，眶后静脉丛充血。右手持长为7～10cm 玻璃滴管(毛细管端内径1～1.5mm，长约1cm)或7# 针头的1ml 注射器，在内眼角与眼球之
药理实验中对动物的给药体积与采血体积控制
药理实验中对动物的给药体积与采血体积控制 本文由wyj摘要翻译 本文是2001年由欧洲制药工业协会联合会 (The European Federation of Pharmaceutical Industries and Associations ，EFPIA)和欧洲替代方法验证中心（European Centre for the Validation of Alternative Methods，ECV AM)联合发布的关于对动物不同途径给药或采血时所能充许的给药体积和采血体积指导原则。动物包括小鼠、大鼠、兔、狗、猴、豚鼠，给药方法包括po、ip、im、sc、一次性iv、缓慢静注、静脉点滴等的一般给药体积、最大充许给药体积、给药速度等，采血包括各种动物的最大充许采血量和恢复时间等。是一部实用、全面而又难得的指导原则，相信对从事药理、毒理研究者及其他动物实验工作者有一定的帮助。 下面的节选由wyj摘要翻译，原文见欧洲联盟欧洲制药工业协会联合会,A Good Practice Guide to the Administration of Substances and Removal of Blood, Including Routes and Volumes(2000). J. Appl. Toxicol. 21, 15–23 (2001) 第一部分：动物实验中的给药体积与给药速度 一、一般给药体积与速度 对于各种给药途径的最大给药体积，取决实验动物种属和制剂性质。一般推荐给药最大容积为见附表（（欧洲联盟欧洲制药工业协会联合会,2000）。 特殊给药途径每次的给药体积(英国药业会，1995）：每眼0.01 ml；⑥直肠0.5 ml/kg；⑦阴道：大鼠0.2 ml，兔1 ml；⑧吸入2 mg/L；⑨鼻：猴或犬每鼻孔0.1 ml。 表1各种给药途径的给药体积及可能的最大给药体积a （欧洲联盟欧洲制药工业协会联合会,2000） 给药途径与体积 (ml/kg, except b ml/site)d 动物种属 Oral sc ip im iv (单次) iv (缓慢注射) 小鼠10 (50) 10 (40) 20 (80) 0.05b (0.1)b 5 (25) 大鼠10 (40) 5 (10) 10 (20) 0.1b (0.2)b 5 (20) 兔10 (15) 1 (2) 5 (20) 0.25 (0.5) 2 (10) 犬 5 (15) 1 (2) 1 (20) 0.25 (0.5) 2.5 (5) 猴 5 (15) 2 (5) C (10) 0.25 (0.5) 2 c 狨猴10 (15) 2 (5) C (20) 0.25 (0.5) 2.5 (10) 小型猪10 (15) 1 (2) 1 (20) 0.25 (0.5) 2.5 (5) 说明: a:给非水溶液后，确定再次给药时间时应考虑前次药物是否已被吸收。肌肉内注射每天不能 超过2次。皮下注射每天限制在2~3个部位，前述皮下注射部位，不包括弗氏佐剂的使用。
常见动物实验中实验动物的选择
常见动物实验中实验动物的选择 一、药理学研究中的选择 1、临床药物代谢动物学研究：首选动物及性别，应尽量与药效量或毒理学研究所用动物一致。 药物动力学参数测定：最好使用犬、猴子等大动物，可在同一动物上多次采样。药物分布实验：大、小鼠较方便。药物排泄试验：一般首选大鼠，胆汁采集可在乙醚麻醉，胆管插管引流。 2、一般药理研究 主要药效作用以外广泛药理作用的研究。动物：小鼠、大鼠、猫、犬等性别不限。 3、作用于神经系统的药物研究： 促智药：成年大小鼠一般应用幼年、老年鼠。 镇静催眠药：成年小鼠便于分组。 抗痛药：成年大小鼠，以雄性为宜。 镇痛药：需在整体动物上进行，常用成年小鼠、兔，也可用豚鼠、犬等，雌雄兼用。 中枢性肌松药：小鼠、猫。 解热药：首选兔。兔：品种、年龄、室温、动物活动情况等不同，对发热反应速度和程度有明显影响，应按药典规定进行。 神经节传导阻滞影响药物：首选猫，最常用的是颈神经节，因其前后部易于区分。 4、心血管系统的药物研究： 抗心肌缺血药：狗、猫、兔、大小鼠。 抗心率失常药：豚鼠。小鼠不便操作。 降压药：狗、猫、大鼠。不宜用兔：外周循环对外界环境刺激极敏感，血压变化大。 治疗心功能不全药：狗、猫、豚鼠、兔。一般不用大鼠。 降血压药：大鼠、兔。模型动物：遗传性高脂血症WHHL兔。 抗动脉粥样硬化药：一般用兔、鹌鹑。 抗血小板聚集药、抗凝血药：大鼠、兔，个别也可用小鼠。 5、呼吸系统药物： 镇咳药筛选：首选豚鼠，对化学刺激或机械刺激都很敏感。猫：生理条件下很少咳嗽，可用于刺激喉上神经诱发咳嗽，在初筛基础上进一步肯定药物的镇咳作用。犬：适用于观察药物的镇咳作用持续时间。 兔：对化学、电刺激不敏感。大小鼠：实验可靠性差。 支气管扩张药：常用豚鼠：气道平滑肌对致痉剂药物反应敏感。大鼠：某些免疫和药理学特点与人类较近。 祛痰药：一般用雄性小鼠，兔、猫。 6、消化系统药物： 胃肠解痉药：大鼠、豚鼠、家兔、犬等，雌雄均可。 催吐、止吐：犬、猫、鸽等。兔、豚鼠、大鼠，无呕吐反射，故不选用。 7、泌尿系统药物： 利尿、抗利尿药：雄性大鼠或犬为好。 8、内分泌系统药物：
常用实验大小鼠采血方法及其对实验动物福利的影响
2019年1月 第29卷一第1期 中国比较医学杂志 CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE January,2019 Vol.29一No.1 杨健莉,刘佳,郑志红.常用实验大小鼠采血方法及其对实验动物福利的影响[J].中国比较医学杂志,2019,29(1):90-94. Yang JL,Liu J,Zheng https://www.360docs.net/doc/608543382.html,parison and analysis of blood sampling methods from rats and mice [J].Chin J Comp Med,2019,29(1):90-94. doi:10.3969/j.issn.1671-7856.2019.01.016 [基金项目]国家自然科学基金(2015408002)三 [作者简介]杨健莉(1989 ),女,学士学位,专业:实验动物学三E-mail:yangjianli0603@https://www.360docs.net/doc/608543382.html, [通信作者]郑志红(1969 ),女,教授,研究方向:实验动物转基因与基因敲除研究三E-mail:zhihongzheng@https://www.360docs.net/doc/608543382.html, 常用实验大小鼠采血方法及其对 实验动物福利的影响 杨健莉,刘一佳,郑志红? (中国医科大学实验动物部,沈阳一110122) 一一?摘要?一近些年大量的文献对实验大小鼠采血方法进行了比较研究,以探究出最适合的采血方法,从而获得 高质量的血液样本三本文主要介绍了几种实验大小鼠常用的采血方法,及不同采血方法对动物福利的影响,为选择最适的采血方法提供相关的理论依据,提高实验效率,降低实验影响三 ?关键词?一实验大小鼠;采血方法;实验动物福利 ?中图分类号?R -33一一?文献标识码?A一一?文章编号?1671-7856(2019)01-0090-05 Comparison and analysis of blood sampling methods from rats and mice YANG Jianli,LIU Jia,ZHENG Zhihong ? (Department of Laboratory Animal Science,China Medical University,Shenyang 110122,China) 一一?Abstract ?一Recently,many studies have compared different methods for blood collection from experimental rats and mice to determine the most suitable method to obtain high-quality blood samples.This review introduces several blood collection methods commonly used in rats and mice,and their effects on animal welfare.This will provide a theoretical basis for selecting the most suitable method of blood collection to improve experimental efficiency and reduce the impact on experimental results. ?Keywords ?一experimental rats and mice;methods of blood collection;laboratory animal welfare 一一实验大小鼠的使用在哺乳动物实验中约为 75%左右[1],主要应用于药代动力学二毒理学二行为学二遗传学以及肿瘤学等领域,对实验大小鼠进行血液采集是实验操作过程中重要的实验操作,不同的采血方法对动物组织损伤程度二采血间隔及采血量要求等各不相同;那么选择适合的采血方法,获得高质量的血液样本,是获得良好动物实验数据的基础三本文主要介绍几种大小鼠常用的采血方法,对采血量的确定二采血频率 的选择及不同采血方法对动物福利的影响进行阐述,为实验者在操作过程中选择合适的采血方法提供依据三1一常用的采血方法 依据采血位点不同实验大小鼠常用的采血方法可分为鼠尾采血二眼眶采血二颈静脉采血二隐静脉采血二面部采血二心脏采血和腹主动脉采血;下面分别对不同的采血方法要点及应用进行介绍三
实验动物采血完全指南
实验动物采血完全指南 凡用血量较少的检验如红、白细胞计数、血红蛋白的测定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破组织取毛细血管的血。当需血量较多时可作静脉采血。静脉采血时，若需反复多次，应自远离心脏端开始，以免发生栓塞而影响整条静脉。例如，研究毒物对肺功能的影响、血液酸碱平衡、水盐代谢紊乱，需要比较动、动脉血氧分压、二氧化碳分压和血液pH值以及K+、Na+、CI-离子浓度，必须采取动脉血液。采血时要注意：⑴采血场所有充足的光线；室温夏季最好保持在25-28℃，冬季，15-20℃为宜；⑵采血用具有采用部位一般需要进行消毒；⑶采血用的注射器和试管必须保持清洁干燥；⑷若需抗凝全血，在注射器或试管内需预先加入抗凝剂. １．取少量血 ａ．尾静脉大鼠、小鼠 ｂ．耳静脉兔、狗、猫、猪、山羊、绵羊 ｃ．眼底静脉丛兔、大鼠、小鼠 ｃ．舌下静脉兔 ｄ．腹壁静脉青蛙、蟾蜍 ｅ．冠、脚蹼皮下静脉鸡、鸭、鹅 ２．取中量血 ａ．后肢外侧皮下小隐静脉狗、猴、猫 ｂ．前肢内侧皮下头静脉狗、猴、猫 ｃ．耳中央动脉兔 ｄ．颈静脉狗、猫、兔 ｅ．心脏豚鼠、大鼠、小鼠 ｆ．断头大鼠、小鼠 ｇ．翼下静脉鸡、鸭、鸽、鹅 ｈ．颈动脉鸡、鸭、鸽、鹅 ３．取大量血 ａ．股动脉、颈动脉狗、猴、猫、兔 ｂ．心脏狗、猴、猫、兔 ｃ．颈静脉马、牛、山羊、绵羊 ｄ．摘眼球大鼠、小鼠
采动物品种最大安全采血量(ml) 最小致死采血量(ml) 小鼠0.2 0.3 大鼠 1 2 豚鼠 5 10 兔10 40 狼狗100 500 猎狗50 200 猴15 60 1.割(剪)尾采血当所需血量很少时采用本法。固定动物并露出鼠尾。将尾部毛剪去后消毒，然后浸在45℃ 左右的温水中数分钟，使尾部血管充盈。再将尾擦干，用锐器(刀或剪刀)割去尾尖0.3-0.5cm，让血液自由滴入盛器或用血红蛋白吸管吸取，采血结束，伤口消毒并压迫止血。也可在尾部作一横切口，割破尾动脉或静脉，收集血液的方法同上。每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取血0.1ml，大鼠 0.3～0.5ml。 2.鼠尾刺血法大鼠用血量不多时(仅做白细胞计数或血红蛋白检查)，可采用本法。先将鼠尾用温水擦 拭，再用酒精消毒和擦拭，使鼠尾充血。用7号或8号注射针头，刺入鼠尾静脉，拔出针头时即有血滴出，一次可采集10～50mm3。如果长期反复取血，应先靠近鼠尾末端穿刺，以后再逐渐向近心端穿刺。 3.眼眶静脉丛采血采血者的左手拇食两指从背部较紧地握住小鼠或大鼠的颈部(大鼠采血需带上纱手 套)，应防止动物窒息。当取血时左手拇指及食指轻轻压迫动物的颈部两侧，使眶后静脉丛充血。右手持续接7号针头的1ml注射器或长颈(3～4cm)硬质玻璃滴管(毛细管内径0.5-1.0mm)，使采血器与鼠面成45℃的夹角，由眼内角刺入，针头斜面先向眼球，刺入后再转180度使斜面对着眼眶后界。刺入浓度，小鼠约2～3mm，大鼠约4～5mm。当感到有阻力时即停止推进，同时，将针退出约0.1-0.5mm，边退边抽。若穿刺适当血液能自然流入毛细管中，当得到所需的血量后，即除去加于颈部的压力，同时，将采血器拔出，以防止术后穿刺孔出血。若技术熟练，用本法短期内可重复采血均无多大困难。 左右两眼轮换更好。体重20-25g的小鼠每次可采血0.2-0.3ml；体重200-300g大鼠每次可采血 0.5-1.0ml，可适用于某些生物化学项目的检验。 4.断头取血采血者的左手拇指和食指以背部较紧地握住大(小)鼠的颈部皮肤，并作动物头朝下倾的姿 势。右手用剪刀猛剪鼠颈，约1/2-4/5的颈部前剪断，让血自由滴入盛器。小鼠可采用约0.8～1.2ml; 大鼠约5-10ml。 5.心脏采血鼠类的心脏较小，且心率较快，心脏采血比较困难，故少用。活体采血方法与豚鼠相同。 若做开胸一次死亡采血，先将动物作深麻醉，打开胸腔，暴露心脏，用针头刺入右心室，吸取血液。 小鼠约0.5-0.6ml；大鼠约0.8-1.2ml。 6.颈动静脉采血先将动物仰位固定，切开颈部皮肤，分离皮下结缔组织，使颈静脉充分暴露，可用注 射器吸出血液。在气管两侧分离出颈动脉，离心端结扎，向心端剪口将血滴入试管内。 7.腹主动脉采血最好先将动物麻醉，仰卧固定在手术架上，从腹正中线皮肤切开腹腔，使腹主动脉清 楚暴露。用注射器吸出血液，防止溶血。或用无齿镊子剥离结缔组织，夹住动脉近心端，用尖头手术
常用实验动物的种类与应用
常用实验动物的种类与应用 了解常用的实验动物的种类与应用范围，对组织实施实验研究有着不可低估的作用。当确立了实验研究题目及目标后，选择合适的实验动物对进行必要的研究是一项重要的工作。现将机能学实验教学中常用的动物用途简介如下： 一、家兔 家兔品种很多，目前我国实验用的家兔主要有以下三种。 1．中国本兔又称白家兔，毛色多为纯白，红眼睛，是我国长育的一种品种，成年兔体重1.5～3.5 kg。 2．青紫兰兔（山羊青兔或金基拉兔）毛色银灰色，成年兔体重2.5～3.5 kg. 3．大耳白兔（日本大耳白兔）毛色纯白，红眼睛，两耳长大，血管清晰，便于静脉注射和采血，成年兔体重4～5 kg. 家兔常用于机能学实验教学的各项实验中，如直接记录呼吸、血压、泌尿调节、减压神经放电、膈神经放电、观察药物对心脏的影响、了解心电图的变化、中枢神经兴奋药实验、药物对肠平滑肌的影响、药物中毒及解毒，复制许多病理过程和疾病，如水肿、炎症、电解质紊乱、酸碱平衡紊乱、失血、出血性休克、DIC、肺癌、动脉粥样硬化、高脂血症、心律失常、慢性肺心病、慢性肺动脉高血压、肺水肿、肝炎、胆管炎、阻塞性黄疸、肾性肾小球肾炎、急性肾功能衰竭。由于家兔体温变化比较敏感，也常用于研究发热、解热药和检查致热源等。 二、小白鼠： 小白鼠能用于药物的筛选，半数致死量的测定，复制许多病理过程和疾病，如水肿、炎症、缺氧、多种癌、肉瘤、白血病、多种传染病、慢性气管炎、心室纤颤等。 小白鼠做实验动物有以下特点： 1．小白鼠是实验室最常用的一种动物，价格低廉，便于大量繁殖，对动物实验同种、纯种、性别和年龄的要求，比较容易满足，生活条件也容易控制。因而只要符合实验要求，应尽量采用。它特别适用于需要大量动物的实验，容易满足统计学的要求。如药物的筛选，半数致死量的测定和安全实验，用于药物的效价比较及抗癌药的研究等。小白鼠也适用于避孕药的实验。 2．小白鼠对许多疾病有易感性，因而适用于研究下列疾病。如血吸虫病、疟疾、流感、脑炎等病。小白鼠的纯种品系很多，每系有其独特性，对某些疾病易感。如C1HA系，对癌瘤敏感，C5a系则抗癌；因此，纯系小白鼠广泛应用于各种肿瘤的研究。 3．当研究指标主要是观察组织学，特别是观察电镜下的结构时，应用小白鼠的器官较小，可节省人力、物力。如用于研究慢性气管炎时肺的变化。 4．小白鼠具有发达的神经系统，能应用于复制神经官能症模型。 5．小白鼠对外界环境适应性较差，不耐冷热，经不起饥饱，比较娇嫩；因此，做实验时要耐心细致，动作要轻，不然会干扰实验结果。 三、大白鼠： 大白鼠常用于复制许多病理过程和疾病，如水肿、炎症、缺氧、休克、DIC、胆固醇、肉芽肿、心肌梗塞、肝炎、肾性高血压、各种肿瘤等。 大白鼠做实验动物有以下特点： １．大白鼠与小白鼠相似，便于大量繁殖，对动物实验同种、纯种、性别和年龄的要求，比较容易满足，生活条件也容易控制，适合于需要大量动物，而当小白鼠不能满足实验要求时。如：不对称亚硝酸胺口服和胃肠道外给药，能诱发大白鼠食道癌，而在小白鼠则很少引起食道癌；因而，在这种情况下，采用大白鼠较为适合。
(完整word版)动物免疫与动物采血实验操作规范
动物免疫与动物采血 一、动物保定 在进行动物免疫和动物采血之前，进行动物保定是非常必要的。正确的抓取固定动物是为了不损害动物健康，不影响观察指标，并防止被动物咬伤，保证试验顺利进行。下面介绍几种常见实验动物的保定方法。 1 小鼠的抓取固定方法 小鼠性情温顺，一般不会主动咬人，但取用时动作也要轻缓。抓取时先用右手抓取鼠尾提起，放在其前，爪能抓牢的物体表面稍后提，或放在实验台上，在其向前爬行时，用左手拇食指迅速提住其后颈部皮肤，把鼠体置于左手心中，将鼠尾用无名指和小指压在手掌上。右手即可进行各种操作，如注射、灌胃及其他实验操作。 如进行解剖、手术、心脏及尾部采血和尾静脉注射时，则需将小鼠做一定形式的固定，解剖手术和心脏采血等均可使动物先取背卧式（必要时先进行麻醉），再用大头针或线绳将鼠前后肢依次固定在支持物上。尾静脉采血或尾静脉注射时，可用小鼠尾静脉注射架固定；或倒放适当大小和重量的容器，把小鼠放在里面只露尾巴，这种容器能够压住尾部不让活动，同时起，到驱赶血液的作用；或把小鼠放在一黑布口袋里小鼠趋黑，向前爬动，在尾部将小口袋缩口，固定小布口袋后，可进行尾静脉采血或尾静脉注射等操作。 如只想移动小鼠，可用两手把它捧起或用右手拇指和食指的指腹抓住尾部中央将小鼠倒提起来。 2 大鼠的抓取固定方法 4-5周龄以内的大鼠和小鼠一样抓住尾部提起来，周龄较大的大鼠尾部皮肤因为容易被剥脱，所以用左手从背部中央到胸部捏起来抓住。 由于大鼠比小鼠牙尖性猛，不易用袭击方式抓取，以防大鼠在惊恐或击怒时咬伤手指，提拿时最好戴上防护手套，轻轻抓住尾巴后提起，置于试验台上，固定方法随操作目的而定。如需尾静脉取血或注射，可将大鼠固定盒内或用小黑布口袋装大鼠，使其只露尾部；如需腹腔注射或肌肉注射或灌胃，可用右手提住鼠尾，将鼠放在鼠爪能抓牢的物体表面，如铁丝笼子，稍向后拉鼠尾、鼠身被拉长，用左手贴在鼠背，捏紧头顶部和背部皮肤，即可将大鼠固定在左手中，右手可进行其他操作；如需长时间固定操作，可将大鼠四肢固定在木板上，用一根棉绳拉住两只门齿固定在头部后木板上。 3 豚鼠的抓取固定方法 豚鼠较为胆小易惊，不宜强烈刺激和受惊，所以在抓取时，必须稳、准和迅速。抓取幼小豚鼠时，用两手捧起来，成熟动物则用右手大把抓起来，用手固定，方法是先用手掌迅速扣住鼠背，抓住其肩胛上方，以拇指和食指环握颈部，另一只手托住臀部。也可用固定器固定豚鼠或将豚鼠四肢固定在木板上。 4 家兔的抓取固定方法。 家兔比较顺服不会咬人，但脚爪较尖，应避免抓伤。进行皮下、腹腔、肌肉注射或测肛温时，只须将家兔抓牢或按住就行即可，抓兔的方法是用右手把两耳轻轻地拿在手心，抓紧颈后部的皮厚处，提取兔，然后用左手托住臀部，使兔的体重大部分落在左手上，不能单提两耳，因为兔耳并不能承担全身重量，易造成疼痛而引起挣扎。单提两耳，捉拿四肢，提抓腰部和背部都是不正确的抓法。 当只对兔的头部进行操作时，如耳静脉注射、采血等，可用兔固定器固定头部，对兔进行测量血压，呼吸及手术时，可将兔固定在实验台上，四肢用棉绳固定在实验台两侧，另用一根棉绳拴住兔的两只门牙，另一端固定在实验台的铁柱上即可。
常用实验动物的采血方法简介
常用实验动物的采血方法 一小鼠和大鼠的采血方法 1、剪尾采血:需血量较少时常用此法。先将动物固定，将鼠尾浸在50℃左右温水中浸泡几分钟或用酒精棉球或二甲苯涂擦鼠尾，使尾部血管充盈，剪去尾尖1～2mm(小鼠)或3～5mm(大鼠)，便血液顺血管壁自由流入试管或用血红蛋白吸管吸取。采血结束时，伤口消毒并用棉球压迫止血。此法每只鼠一般可采血 10次以上，小鼠每次可取血0.1mL左右，大鼠可取血0.3～0.5ml。 2、眶后静脉丛采血:操作者一手固定小鼠或大鼠，拇指和食指尽量将鼠头部皮肤捏 紧，或轻轻压迫颈部两侧，使鼠眼球突出，眶后静脉丛充血，另一只手持毛细采血管，以45°从内眼角刺入，并向下旋转，感觉刺入静脉丛后，再向外边退边吸，当得到所需血量后，放松加于颈部的压力，并拔出采血器，以防穿刺孔出血。若技术熟练，此方法在短斯内可重复采血，小鼠一次可采血0.2～0.3ml，大鼠可采血约0.5ml。如只进行一次取血，可采用摘眼球法，右手取一眼科弯镊，在鼠右或左侧眼球根部将眼球摘去，并将鼠倒置；头向下，抽取血液。 3、鼠装进固定器，漏出尾巴，同1，使尾部血管充盈，作好尾部消毒，用1 ml针筒接好4号针头，穿刺尾静脉，抽取血液。 4、腋下采血：将麻醉后的小鼠仰卧固定，剪开腋下皮肤，钝性分离腋下的胸肌等组织，暴露腋下血管，剪断腋下静脉，用注射器或吸管吸血。 5、断头采血：用剪刀迅速剪掉动物头部，立即将动物头朝下，提起动物，血液可流入试管中。 6、心脏采血：切开动物胸膛，直接从见到的心脏内采血，也可剪破心脏直接用注射器或吸管吸血。 7、股动脉采血:大量取血时常用此法。需手术分离股动脉，用注射器套上针头刺入血管取血或剪断股动脉用吸管吸取血样，小鼠的一次采血量可达 0.5ml，大鼠可达2.0ml，操作时防止喷血。 二豚鼠、家兔的采血方法 1、家兔耳缘静脉采血 穿刺采血法：是家兔最常用的采血方法。具体方法同耳缘静脉注射给药。此法一次可采血5～lOml，可多次重复使用。针头不可连接注射器，直接让血液滴在有抗凝剂的试管内。 切割采血法：当兔耳部血管被充分扩张后，可用刀片割破耳缘静脉，或用注射针刺破耳缘静脉，让血液自然流出。采血穿刺和注射穿刺方向不同。采血穿刺逆血流方向行针，采血量越大，越要靠近根部行针。 2、兔耳中央动脉采血：经兔耳中央的一条较粗、颜色鲜红的动脉采血，可采到约15 ml/次血。操作方法基本与静脉采血同。由动脉末端，朝向心方向进针，取血完毕后注意止血。 3、豚鼠耳缘切割采血法:方法同兔相同。 4、心脏采血法:对豚鼠、兔、猫、狗都适用。 采血前，将动物麻醉并仰卧固定置实验台上。心前区皮肤脱毛，常规消毒。于左侧第 3、4肋间心尖博动最强处将针头垂直刺入心脏，由于心脏的搏动，血液可自动迸入注射器。如无血液流出，拔出针头后重新穿刺，不能左右来回斜穿，以免造成气胸而导致动物很快死亡。经6～7天后可重复穿刺采血。 5、体表静脉采血 （1）兔后肢胫部皮下静脉采血 将兔仰卧固定，拔去胫部被毛，在胫部上端股部扎以橡皮管，可在胫部外侧皮下，见到皮下静脉。用左手拇指、食指固定好血管，右手持，与皮下静脉平行进针，抽血有回血即可采血。采血完毕后用棉球压迫止血，因为此处
常用实验动物介绍―小鼠
一、行为和习性 1. 小鼠胆小，易于受惊，对外界环境的改变反应敏感。受惊时,尾巴挺直并猛力甩动，如强光或噪声刺激可导致哺乳母鼠神经紊乱，发生食仔现象。 2. 小鼠在人工驯养条件下,性情温顺易于捕捉，一旦逃出笼外过夜则恢复野性，行动敏捷难以捕捉。 3. 小鼠喜欢阴暗，固定一处睡眠营巢。傍晚活动加强，夜间更加活跃，其进食、交配、分娩多发生在夜间。 4. 小鼠是典型的啮齿动物，门齿终生生长。因此小鼠有啃咬习惯，以此来磨损门齿并保持其长短的恒定。 5. 小鼠为群居动物，当群饲时，其饲料消耗量比单个饲养时多，生长发育也快。 6. 小鼠群体中性成熟的雄鼠放在一起易发生互斗。源于一窝的雄鼠或断奶后同笼饲养的雄鼠间则较少攻击。外来雄鼠常招致几只雄鼠的集体攻击。群居优势在雄性很明显，表现为群体中处于优势者保留胡须,被称为“理发师”,而处于劣势者胡须被拔光。这一现象应与因寄生虫性或真菌性皮炎所致的掉毛相区别。 雄鼠具有分泌醋酸胺臭气的特性，是小鼠饲养室内特异臭气的主要原因。 7. 小鼠对外界温度的变化特别是低温非常敏感，由于运输、环境改变而致低温可很快引起小鼠死亡。 二、解剖学特点 1. 外观 小鼠体形小，90日龄的昆明种小鼠体长为90～110mm，体重为35～55g 。近交系如615小鼠体长为85～94mm，体重为24～35g。一般雄鼠大于雌鼠。 嘴尖，头呈锥体形，嘴脸前部两侧有触须，耳耸立呈半圆形。
尾长约与体长相等，成年鼠尾长约150mm。尾有四条明显的血管,背腹面各有一条静脉，两侧各有一条动脉。尾有平衡、散热和自卫等功能。 被毛颜色有白色、野生色、黑色、肉桂色、褐色、白斑等。健康小鼠被毛光滑紧贴体表，四肢匀称，眼睛亮而有神。 2. 骨骼系统 小鼠上下颌各有两个门齿和六个臼齿，齿式为2（1003／1003）=16。门齿终生不断生长。下颌骨喙状突较小，髁状突发达，其形态有品系特征，可采用下颌骨形态分析技术进行近交系小鼠遗传质量的监测。 小鼠的脊椎由55～61个脊椎骨组成，包括颈椎7个、胸椎12～14个、腰椎5～6 个、荐椎4个、尾椎27～30个。肋骨有12～14对，其中7对与胸骨接连，其它5～7对呈游离状态,胸骨6块。前肢由肩胛骨、锁骨、肱骨（上腕骨）、桡骨、尺骨、腕骨和指骨组成。后肢由髋骨、大腿骨、胫骨、腓骨、跗骨、趾骨组成。 小鼠骨髓为红髓，终身造血。 3. 内部脏器 胸腔内有气管、肺、心脏和胸腺，心尖位于第4肋间。肺由4叶组成。 腹腔内有肝脏、胆囊、胃、肠、肾、膀胱、脾等器官。 小鼠为杂食动物。食道细长约2cm,胃分前胃和腺胃，有嵴分隔，前胃为食管的延伸膨大部分。胃容量小（1.0～1.5ml），功能较差，不耐饥饿。与豚鼠、家兔等草食性动物相比，肠道较短，盲肠不发达，肠内能合成维生素C。有胆囊。胰腺分散在十二指肠、胃底及脾门处，色淡红，不规则，似脂肪组织。肝脏是腹腔内最大的脏器，分左、右、中、尾四叶组成，具有分泌胆汁，调节血糖，贮存肝糖和血液，形成尿素，中和有毒物质等功能。 4. 淋巴系统
常用实验动物的给药途径和方法
常用实验动物的给药途径和方法 在动物实验中，为了观察药物对机体功能、代谢及形态的变化，常需将药物注入动物体内。由于实验目的、动物种类、药物剂型不同，给药途径和方法也多种多样。 一经口给药法 (一)灌胃法 此法给药剂量准确，是借灌胃器将药物直接灌到动物胃内的一种常用给药方法。 1、白鼠灌胃法：抓起小鼠，以左手拇指、食指固定头部，小指、无名指和掌心夹注尾巴，使腹部朝上，颈部拉直，右手持灌胃器，将灌胃针从鼠的口角插入口腔，从舌背沿上腭插入食道。灌胃量0.2～0.5ml/10g。 胃管可用适宜口径的硬质塑料管或磨去针头的8号注射针头弯成适当的弧度制成。 注意，操作时不要用力猛插，以免插破食道或误插入器官造成动物死亡。 2、白鼠灌胃法：左手戴上棉手套，用左手拇指和食指将大鼠头部固定，将大鼠 灌胃器沿腭后壁慢慢插入食道。灌胃针插入时应无阻力，如有阻力或动物挣扎则应退针或将针拔出，重新再插。灌胃器由注射器和特殊的灌胃针构成。灌胃量10～20ml/kg 3 兔、犬等:灌胃一般要借助于开口器、灌胃管进行。先将动物固定，再将开口器固定于上下门齿之间，然后将灌胃管(常用导尿管代替)从开口器的小孔插入动物口中，沿咽后壁而进入食道。插入后应检查灌胃管是否确实插入食道。可将灌胃管外开口放入盛水的烧杯中，若无气泡产生，表明灌胃管被正确插入胃中，未误入气管。此时将注射器与灌胃管相连，注入药液。 4、猪的胃内灌注法：给猪下鼻饲管较困难，因猪的鼻翼与上唇联合形成吻突，鼻腔内上下鼻夹与鼻中隔通道极窄，只能通过F10－12号的导尿管，F14号以上的导尿管不能插入，故一般均给猪采用经口入胃的灌胃方法。具体方法是，预先做好一矩形小木块，中间有一洞，让小猪咬住，将其固定，然后再由此洞下胃管。此种操作较为简便。 5、鸟类：包括鸽、鸡等，经口灌胃给药，可由助手将其身体用毛巾裹住固定好。实验者用左手将动物向后拉，使其颈部倾斜，用左拇指和食指将动物嘴撬开，其他三只手指固定好动物头部，右手取带有灌胃针头的注射器，将灌胃针头由动物舌后插入食管。不要象其它动物灌胃时插的太深，如动物不挣扎，插针头又很顺利，即可将药液经口或食管上端罐入胃内。罐入速度要慢。
动物实验常用采血方法
动物实验常用采血方法 1.割(剪)尾采血当所需血量很少时采用本法。固定动物并露出鼠尾。将尾部毛 剪去后消毒，然后浸在45℃左右的温水中数分钟，使尾部血管充盈。再将尾擦干，用锐器(刀或剪刀)割去尾尖0.3-0.5cm，让血液自由滴入盛器或用血红蛋白吸管吸取，采血结束，伤口消毒并压迫止血。也可在尾部作一横切口，割破尾动脉或静脉，收集血液的方法同上。每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取血0.1ml，大鼠0.3～0.5ml。 2.鼠尾刺血法大鼠用血量不多时(仅做白细胞计数或血红蛋白检查)，可采用本法。先将鼠尾用温水擦拭，再用酒精消毒和擦拭，使鼠尾充血。用7号或8号注射针头，刺入鼠尾静脉，拔出针头时即有血滴出，一次可采集10～50mm3。如果长期反复取血，应先靠近鼠尾末端穿刺，以后再逐渐向近心端穿刺。 3.眼眶静脉丛采血采血者的左手拇食两指从背部较紧地握住小鼠或大鼠的颈部(大鼠采血需带上纱手套)，应防止动物窒息。当取血时左手拇指及食指轻轻压迫动物的颈部两侧，使眶后静脉丛充血。右手持续接7号针头的1ml注射器或长颈(3～4cm)硬质玻璃滴管(毛细管内径0.5-1.0mm)，使采血器与鼠面成45℃的夹角，由眼内角刺入，针头斜面先向眼球，刺入后再转180度使斜面对着眼眶后界。刺入浓度，小鼠约2～3mm，大鼠约4～5mm。当感到有阻力时即停止推进，同时，将针退出约0.1-0.5mm，边退边抽。若穿刺适当血液能自然流入毛细管中，当得到所需的血量后，即除去加于颈部的压力，同时，将采血器拔出，以防止术后穿刺孔出血。若技术熟练，用本法短期内可重复采血均无多大困难。左右两眼轮换更好。体重20-25g的小鼠每次可采血 0.2-0.3ml；体重200-300g大鼠每次可采血0.5-1.0ml，可适用于某些生物化学项目的检验。 4.断头取血采血者的左手拇指和食指以背部较紧地握住大(小)鼠的颈部皮肤，并作动物头朝下倾的姿势。右手用剪刀猛剪鼠颈，约1/2-4/5的颈部前剪断，让血自由滴入盛器。小鼠可采用约0.8～1.2ml;大鼠约5-10ml。 5.心脏采血鼠类的心脏较小，且心率较快，心脏采血比较困难，故少用。活体采血方法与豚鼠相同。若做开胸一次死亡采血，先将动物作深麻醉，打开胸腔，暴露心脏，用针头刺入右心室，吸取血液。小鼠约0.5-0.6ml；大鼠约0.8-1.2ml。 6.颈动静脉采血先将动物仰位固定，切开颈部皮肤，分离皮下结缔组织，使颈静脉充分暴露，可用注射器吸出血液。在气管两侧分离出颈动脉，离心端结扎，向心端剪口将血滴入试管内。 7.腹主动脉采血最好先将动物麻醉，仰卧固定在手术架上，从腹正中线皮肤切开腹腔，使腹主动脉清楚暴露。用注射器吸出血液，防止溶血。或用无齿镊子剥离结缔组织，夹住动脉近心端，用尖头手术剪刀，剪断动脉，使血液喷入盛器。 8.股动(静)脉采血先由助手握住动物，采血者左手拉直动物下肢，使静脉充盈。