疟原虫镜检操作流程
疟原虫镜检技术操作规范
疟原虫镜检技术操作规范疟原虫镜检是诊断疟疾、确定虫种及发现传染源的重要手段和方法，具有严格的操作程序和技术要求，为了统一方法、规范程序、提高血检质量，特制定本操作规范。
一、血片制作（一）所需器材载玻片玻片3张（1张作载玻片，1张作推片，1张作采血后滴于玻片备血用）采血针采用一次性采血针。
玻片盒存放50或100片玻片的木质或塑料盒。
皮肤消毒液、棉签或酒精棉球75%的酒精、安尔碘、碘伏等皮肤表面消毒剂。
记号笔用于玻片上书写血检病人基本信息。
（二）操作步骤1、载玻片基本信息登记取1张载玻片，首先用目测法将载玻片从右（磨砂处为右）到左等分成6格，接着用记号笔在第1、2格即（磨砂处）写下血检病人基本信息：编号、姓名、制片日期结果（镜检结束后补写）。
载玻片上信息应与血检登记表中的项目对应。
如图12、采血采血部位为手指末端或耳垂，婴儿可从拇趾或足跟取血。
用消毒剂消毒取血部位皮肤后，以一次性采血针迅速刺入取血部位1～2mm 深，约挤出1-2滴血，滴于玻片上（以备涂制厚薄血膜用）。
3、涂制血膜用推片的左下角刮取玻片上的血液4～5μl，涂于载玻片的第三格（靠近磨砂侧），由里向外一个方向旋转2～4圈，涂成直径为0.8～1.2cm的圆形厚血膜；再用该角沾取血液1～1.5μl血置于载玻片的中心点即（第四格前缘中点）；接着用干棉球或卫生纸擦净推片角上的血渍；最后用推片的下缘置载玻片的中心点（1～1.5μl血液处），当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，使两玻片保持25°～35°角，从右向左迅速推成舌状薄血膜，即（薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部）。
如（图1）、（图2）疟原虫镜检涂制血膜方法示意图2薄血膜厚度应以红细胞之间互相接触而不相互重叠为佳，（直观透过玻片能清晰看到报纸上的字）；厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5～10个白细胞为宜。
二、固定（一）所需器材1、甲醇2、器具玻璃棒、吸管（二）操作步骤薄血膜固定薄血膜晾干后，用玻璃棒沾取或用吸管吸取少量甲醇平铺于薄血膜上，起固定薄血膜作用，（注意不能固定厚血膜）。
7疟原虫及虫卵显微镜检查
粪便水洗沉淀法
肝吸虫卵
大小：最小虫卵（30×20μm） 形状：芝麻、西瓜子 颜色：淡褐色
卵壳厚薄：较厚，疣状突起
卵盖：肩峰突起 卵内含物：梨形毛蚴
肺吸虫卵
大小：比受精蛔虫卵大 形状：椭圆、多态 颜色：金黄色 卵壳厚薄：厚薄不均 卵盖:大、倾斜 卵内含物：卵细胞、 卵黄细胞
文本内容
姜片虫卵
大小：最大的虫卵 形状：长椭圆形 颜色：淡黄色 卵壳厚薄：薄、均匀 卵盖：较小 内含物：卵细胞、 卵黄细胞
疟原虫显微镜检查
张永海 2014.6
病原学检查---厚薄血膜法
2
血涂片制作及染色 1．材料 ：载玻片，消毒棉球，酒精，剪刀，蜡笔，吸 管，蒸馏水，培养皿，姬氏或瑞氏染液，缓冲液等。 方法：薄血膜加厚血膜 厚血膜涂片： 优点：检出率高，用于定性。 缺点：不易鉴别虫种 薄血膜涂片： 优点：容易辨认虫种 缺点：易漏检。
虫卵显微镜检查
粪便检查法
生理盐水涂片法
基本原理：生理盐水作为粪便的稀释剂 ，使病原 体在等渗环境下保持原有形态和活力以利于观察。 适用：产卵量较多或较大的寄生虫。
实验材料：载玻片、盖玻片、竹签、滴管、大便 杯生理盐水、显微镜。
生理盐水涂片法--步骤
1）滴一滴生理盐水在载玻片中央。
2）用竹签取米粒大小的粪便，在生理盐水中混 匀，其厚度能透过粪膜隐约辨认玻片下的字迹为 宜，注意去除粪便渣滓。一般在低倍镜下检查， 镜检顺序，由上至下，由左至右，不要遗漏。如 发现可疑物再转高倍镜观察，加盖玻片 。
棉拭子法
试剂：生理盐水、饱和盐水 （2）仪器：棉棒、载玻片、试管、青霉素小瓶 （3）操作步骤 ①将棉签浸入试管中的生理盐水中，取出时拧去过 多的水滴。 ②清晨排便之前在肛门周围擦拭。
疟原虫实验室镜检-课件(1)
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以下照片在一般发热病人血片中是观察不到的
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寄生的红细胞
染色后，寄生的红细胞溶解，轮 廓消失，但有时尚留下一“影子” 或小点。
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实图
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混合感染
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谢谢!
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小于正常红细胞；裂殖子 较小，8～26个，通常8、 18个，排列不规则，疟 色素成团块状，黑褐色
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雌配子体（薄血膜）
间日疟
恶性疟
大于正常红细胞，圆形；核 小．致密，深红色，偏于一 侧，胞浆深蓝色；疟色素散 在
疟原虫检测血涂片镜检法
疟原⾍检测⾎涂⽚镜检法ICS11.020C62WS 中华⼈民共和国卫⽣⾏业标准WS/T 569—2017疟原⾍检测⾎涂⽚镜检法Microscopic examination of blood films for malaria parasites2017-08-01发布2018-02-01实施前⾔本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。
本标准起草单位：海南省疾病预防控制中⼼、江苏省寄⽣⾍病防治研究所、中国疾病预防控制中⼼寄⽣⾍病预防控制所、云南省寄⽣⾍病防治所、海南省农垦总局医院。
本标准主要起草⼈：王善青、⾼琪、汤林华、杨恒林、郑彬、胡锡敏、王光泽、李⾬春、刘莹、欧阳范献。
疟原⾍检测⾎涂⽚镜检法1 范围本标准规定了⾎涂⽚镜检法检测疟原⾍的技术规范。
本标准适⽤于各级疾病预防控制机构和医疗机构对疟原⾍的显微镜检测。
2 术语和定义下列术语和定义适⽤于本⽂件。
2.1疟原⾍Plasmodium spp疟原⾍是⼀类单细胞、寄⽣性的真核动物，是疟疾（malaria）的病原体。
寄⽣于⼈体的疟原⾍主要有恶性疟原⾍（Plasmodium falciparum）、间⽇疟原⾍（Plasmodium vivax）、三⽇疟原⾍（Plasmodium malariae）和卵形疟原⾍（Plasmodium ovale）等。
2.2⾎涂⽚ blood films将⾎液涂制于载玻⽚上制成的涂⽚。
供显微镜疟原⾍检查⽤的⾎涂⽚包括厚⾎膜涂⽚和薄⾎膜涂⽚两种。
3 仪器和器材3.1 ⽣物显微镜（100×油浸物镜、5×或10×⽬镜）。
3.2 计数器。
3.3 载玻⽚（⽆划痕⽆油污的洁净载玻⽚）。
3.4 推⽚。
3.5 ⾎⽚染⾊架。
3.6 ⾎⽚⼲燥架。
3.7 玻⽚盒。
3.8 染⾊盘和染⾊缸。
4 试剂和材料4.1 吉⽒染⾊原液。
4.2 pH7.2磷酸盐缓冲液（PBS）。
4.3 甲醇（分析纯）。
4.4 ⾹柏油或专⽤浸油（折射率≥1.5）。
疟原虫检测标准操作程序
疟原虫检测标准操作程序疟原虫检测操作程序1.目的与原理1.1 目的：检查血液中是否有疟原虫。
1.2 原理：瑞氏染色原理。
瑞氏染料中含有美蓝和XXX两种染料，前者为碱性，后者为酸性。
它们与细胞内的各种物质具有不同的亲和力，使其显现出不同的色调，以便于辨认。
根据瑞氏染色的酸碱物质染色性不同，可将疟原虫各期的形态进行清楚染色，便于观察。
高倍镜下一般可以观察到各种类型的疟原虫（如间日疟、三日疟、恶性疟），以及疟原虫的各期，如环状体（早期滋养体）、晚期滋养体、裂殖体、配子体等。
2.样本收集和贮存2.1 原始样本：全血。
2.2 标本类型：EDTA抗凝血2ml。
标本的采集应使用标准一次性采血管，充分混匀，勿震荡。
2.3 保存条件：EDTA抗凝血尽快即时检测。
2.4 病人要求：必须在发烧时采血。
3.试剂3.1 瑞氏染液：3.1.1 试剂成分：瑞氏染料1.0g、无水甲醇500ml、甘油10ml。
3.1.2 配制方法：将瑞氏染料称量好后，放在乳钵中加少量无水甲醇匀速研磨至溶解。
将研磨好的染液倾倒入试剂储存瓶中，倒入无水甲醇继续研磨，反复多次，直至乳钵中无瑞氏染料沉淀为止。
配制好的染液放在37℃24小时后方可使用，放在阴凉干燥处，避光保存。
3.2 磷酸盐缓冲液PH6.4：3.2.1 脱水Na2HPO4 1份：处理方法将Na2HPO4于蒸发皿上干燥（火燃烘烤）成粉末称量。
3.2.2 无水KH2PO4 2.6份：将脱水Na2HPO4 1份和无水KH2PO4 2.6份充分混合，边研磨边混匀。
3.2.3 将上述粉末1g加溶解于500ml去离子水中，混合均匀，方可使用。
3.3 器材：载玻片、加样枪、吸头、推片器。
4.仪器显微镜OLYMPUS型号：CX21.4.1 开机前检查4.1.1 OLYMPUS显微镜：检查显微镜光路系统，目镜、物镜镜头正常，聚光器、光圈、螺旋、微螺旋调节正常。
4.2 日常维护：每日清理纤维镜表面，保持显微镜光圈、聚光器干净整洁。
疟原虫的镜检技术-制片染色
利用特异性抗体对疟原虫进行染色， 提高疟原虫的染色效果和特异性。
人工智能在疟原虫镜检中的应用
图像识别与分类
利用人工智能技术对显微镜下的疟原虫图像进行自动识别、分类和计数，提高镜 检的准确性和效率。
数据挖掘与分析
通过人工智能技术对疟原虫镜检数据进行分析和挖掘，发现数据间的关联和规律 ，为疟疾防控提供科学依据。
固定涂片时要选用适当的 固定剂，避免涂片脱落。
染色时要选用适当的染色 剂，按照染色剂的要求进 行操作，确保染色效果良 好。
镜检时要仔细观察疟原虫 的结构特征，避免误诊和 漏诊。
冲洗时要彻底去除多余的 染料和杂质，避免干扰观 察。
03
疟原虫镜检制片染色技 术
疟原虫镜检制片染色技术的原理
原理概述
疟原虫镜检制片染色技术是一种 用于检测疟原虫的病理学方法。 通过制备血液涂片，并对其进行 染色，可以观察到疟原虫的存在
疟原虫镜检技术的应用场景
在疟疾流行地区，疟原虫镜检技 术常用于对疑似疟疾患者进行快
速诊断，以指导治疗和防控。
在实验室研究中，疟原虫镜检技 术可用于研究疟原虫的生物学特 性、药物敏感性以及疫苗开发等
方面。
在公共卫生领域，该技术也可用 于监测和评估疟疾的流行趋势和
传播风险。
02
制片染色技术
制片染色技术的原理
疟原虫的镜检技术-制 片染色
目 录
• 疟原虫镜检技术简介 • 制片染色技术 • 疟原虫镜检制片染色技术 • 疟原虫镜检制片染色技术的发展趋势
01
疟原虫镜检技术简介
疟原虫镜检技术的定义
01
疟原虫镜检技术是指通过显微镜 观察疟原虫在人体内的形态、结 构和生长过程，从而对疟疾进行 诊断和研究的实验技术。
疟原虫镜检操作流程
疟原虫镜检操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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在进行疟原虫镜检之前，要做好充分的准备。
疟原虫镜检技术
•
甘油
3ml
•
纯甲醇
97 ml
• 将瑞氏染剂粉置于研钵内，加入甘油
充分研磨后，然后加入少量甲醇碾磨后倒 入有玻塞瓶中，再分次用甲醇冲洗碾钵中 的瑞氏染粉甘油液，倒入瓶中，直至洗完。 充分摇匀，一般放置一二星期后，再过滤
应用（保存时间愈久，染色力愈佳）。
• 急用时，放置24小时后过滤也可使用。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
（2）缓冲液的配制
PH M/15 Na2HPO4 M/15 KH2PO4
(ml)
( ml)
DW (ml)
6.8
49
51
900
7.0
63
37
900
7.1
68
32
900
7.2
73
27
900
7.4
81
19
900
• 加缓冲液的PH可用试纸或0.02%酚红液测定。
• 亦可用PH7.0中性蒸馏水稀释染剂
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
可用井水、河水、泉水或雨水。为了使血膜着色较好。
• （1）两种贮备液的配制：
• 贮备液I • •
1/15M磷酸氢二钠（Na2HPO4）溶液
Na2HPO4 9.5 g 蒸馏水 1000 ml
• 贮备液Ⅱ 1/15M磷酸二氢钾 （KH2PO4 ）溶液
•
KH2PO4 9.07 g
•
蒸馏水 1000 ml
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
一、显微镜镜检用于疟疾诊断
• 显微镜镜检仍是目前广泛应用的疟疾诊断
技术(金标准）
• 主要优点
- 特异高 - 能区分虫种 - 能分期 - 能计数 - 1小时内能完成诊断程序
疟原虫镜检技术
疟原虫镜检技术血片制作与染色一、血片制作（一）所需器材1、载玻片：玻片使用前应清洗。
新玻片应先浸入有液态洗涤剂的清水中10~20分钟，然后用干净棉巾逐个擦拭，再用清水冲洗干净，晾干，最后用干净、柔软的棉巾将玻片擦亮。
用于特殊的目的时，最后可将玻片浸泡在95％酒精中5~10分钟，再将玻片擦干擦亮。
已用过的玻片应先浸泡于洗涤剂溶液中1~2天，或浸泡于煮沸的5％肥皂水中1~2小时，再移到新配置的洗涤剂溶液中1~2小时，逐个擦去玻片上旧的血膜痕迹，用清水漂洗干净，再将玻片擦干擦亮。
洗净的玻片每10~20张用白纸包好放入塑料袋内，保存于干燥环境中备用。
2、采血针：使用一次性釆血针。
3、玻片盒：为防止污染和苍蝇吸食血膜，新制作的血膜应放在玻片盒中，厚血膜放置时要保持水平，直到充分干燥。
4、75％酒精棉球：用于采血前后的消毒。
5、记号笔或铅笔：用于玻片上书写号码。
（二）采血部位及取血方法采血部位以耳垂较为合适，也可在手指末端采血，婴儿可从拇趾或足跟取血。
先用75％酒精棉球消毒取血部位后，以一次性采血针迅速刺入取血部位1~2mm深，然后用左手大拇指、食指和右手中指协同挤出血滴。
（三）涂制血膜取玻片2张，1张作载片，1张作推片（具有光滑边缘）。
用右手拇指和食指夹持推片侧缘中部，用推片的左下角刮取血液4~5μl，再用该端中部刮取血液1~1.5μl。
将左下角的血滴涂于载片的中央偏右处，由里向外划圈涂成直径为0.8~1cm的圆形厚血膜（厚度以1个油镜视野内可见到5~10个白细胞为宜）。
用干棉球抹净玻片角上的血渍，然后将推片下缘平抵载玻片的中线，当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，使两玻片保持25°～35°角，从右向左迅速向前推成舌状薄血膜，制成的薄血膜应在玻片上形成平铺的血细胞，细胞之间互相接触而不相互重叠。
每张载玻片上分别做1个薄血膜，1个厚血膜。
取干净玻片及推片各一张，用右手大拇指和食指夹持推片侧缘中部，用推片的左下角刮取血液4～5μl（约火柴头大小），再用该端中部刮取血液1～1.5μl。
疟原虫操作规程
1. 实验原理应用瑞氏染色法对制备好的厚血片进行染色后在显微镜下查找疟原虫。
2. 标本采集2.1标本采集前病人准备：间日疟及三日疟患者应在发作后数小时至10余小时采血；恶性疟患者，应在发作后20h 左右采血。
2.2标本种类：全血或末梢血2.3标本要求：厚血片的溶血要及时。
3. 标本储存：厚血片的放置期限在夏季不超过48h，冬季不超过62h。
4. 标本运输：室温运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染。
6. 操作步骤6.1 在洁净玻片上，滴患者血液2滴。
6.2 用推片角将血液由内向外转涂成直径约1cm、厚薄均匀的血膜，在室温中自然干燥。
6.3 在干燥的血膜上滴加蒸馏水数滴，完全覆盖血膜，溶血数分钟。
脱去血红蛋白的血膜呈浅灰色，倾去溶血液。
6.4 不必待干，进行瑞氏染色。
6.5 干后镜检。
7. 结果判断与分析：在油镜下观察20个视野或以上才能报告“未检出疟原虫”；发现虫体后还应在薄血片上进行分类鉴别。
8. 临床意义：本实验有利于提高疟原虫的阳性检出率。
9. 操作性能：快速简便、阳性检出率高、利于人群普查初筛10. 方法局限性10.1 易受溶血不完全的影响。
10.2 经验缺乏者易受其他杂物的影响。
10.3 存在主观判断的失误10.4 不易鉴别出疟原虫的种类。
11. 参考文献中国人民共和国卫生部医政司编.全国临床检验操作规程（第二版）.1997,85-8612. 注意事项12.1 染色后，水洗时不要先倒去染液，应让清水流进染液，使沉渣冲走。
12.2 注意区别易与疟原虫混淆的其他杂物。
疟原虫镜检技术
细胞计数(国际标准) 。
白细胞疟原虫计数法
●例如 计数200 WBC中有35个疟原虫，在不知患
者白细胞数的情况下，以每微升血8 000个白细 胞计数, 由此计算出每微升血液疟原虫密度为： 35（计数的疟原虫数）÷200（计数的白细胞）x 8000（每微升血白细胞数） =1400 / μl 答：该患者的疟原虫密度为1400 / μl。
2. 原虫细胞浆呈条带状或方形
3. 成熟裂殖体呈菊花状 4. 裂殖子数通常为6-12个 5. 齐氏点（西门氏点）较少见
卵形疟原虫形态特征
1. 被寄生红细胞正常大小或略涨大，边 缘呈彗星状也称齿轮状 2. 疟原虫通常呈椭圆形 3. 薛氏点与间日疟相似
4. 裂殖子数通常为6-12
● 四种人体疟原虫都有双核和多重感染现象
red cell
A typical Plasmodium malariae presentation
Female patient, arrived from Brazil two weeks previously. Flu like symptoms since arrival.
● 间日疟原虫分布于我国大部分地区, 中部 地区病例较多 ● 病程良性, 有复发
三日疟 P.malariae
●遍及热带和亚热带地区，特别是东、西非洲，呈片状、 块状分布 ●三日疟在我国非常少见，只在南方有散在报告
卵形疟 （蛋形疟） P.ovale
● 主要分布非洲。缅甸、东南亚有散在报告 ● 在我国卵形疟消灭
P. ovale
(P.m.)
(P.o.)
恶性疟 P.falciparum
● 分布热带、亚热带地区，是非洲的重要疾病 ● 我国流行区域为云南省和海南省 ● 四种疟原虫中致病力最强，无免疫力者 感染 后出现急性症状,不及时治疗可危及生命（脑 型疟）
疟原虫的镜检技术-制片染色
血膜的制作（取血时间）
❖ 现症病人和流调普查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期 疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。
❖ 疟疾典型的临床表现分前驱期、发冷（寒战）期、发热期、出 汗期和间歇期五期。
疟原虫镜检技术 ——制片与染色
主讲内容
❖厚薄血膜的制作与染色。 ❖疟原虫计数方法。
血膜的制作（所需设备）
❖ 载玻片：新玻片浸入有液态洗涤剂的清水中10-20分钟，
干净棉巾逐个擦拭，再用清水冲洗干净，晾干，最后用干 净柔软的棉巾将玻片擦亮。已用过的玻片浸泡于洗涤剂溶 液中1-2天，或浸泡于煮沸的5%肥皂水中1-2小时，再放 入新配置的洗涤剂溶液中1-2小时，逐个擦去血膜痕迹， 清水漂洗干净，擦亮。
姬氏染液的染色方法
❖ 血片干燥后,先用甲醇或无水酒精固定薄血膜（瑞氏不需固定）, 再用清水对厚血膜溶脱血红蛋白(新制作的也可直接染色)，然后 再进行染色。
注意：吸取母液时，不要晃动瓶子,以免沉淀物泛起影响染色效果。
➢ 成批血片染色：将已用甲醇固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入 3%姬氏染液稀释液（3毫升姬氏原液加缓冲液或蒸馏水97毫升， 混匀）浸没血片，同时对厚薄血膜染色30-40min（根据当地实际 情况，酌情增减染色时间），然后用清水轻轻将染液漂洗干净， 将血片标本（血膜面朝下）插于晾干板上晾干，包装，镜检。
制作血膜注意事项
❖清洗玻片片时，手指勿接触玻片表面，以免油 污使薄血膜产生空白区以及厚血膜脱落。作为推片的玻 片边缘一定要平滑，才能使推出的血膜均匀一致。
❖刚涂制的血膜要平放在标本盒内 厚血膜未干前勿
疟原虫镜检操作规程
疟原虫镜检操作规程疟原虫镜检操作规程1.标本采集1.1标本采集前病人的准备：间日疟及三日疟患者应在发作后数小时至10余小时采血；恶性疟患者，应在发作后20小时左右采血。
1.2标本种类：全血或末梢血。
1.3标本要求：厚血片溶血要及时。
2．标本运送：室温运送。
3．标本拒收标准：被细菌污染。
4．操作步骤 4.1 薄血片法：4.1.1在洁净玻片上，滴血液标本1滴，以常法推制成薄片。
4.1.2 血膜完全干燥后即可用瑞氏法染色，干后用油镜镜检。
4.2厚血片法：4.2.1在洁净玻片上，滴血液标本2滴。
4.2.2用推片将血液由内向外转涂成直径约1cm、厚薄均匀的血膜，在室温中自然干燥。
4.2.3 在干燥的血膜上滴加蒸馏水数滴，完全覆盖血膜，溶血约5分钟后倾去溶血液。
4.2.4 不必待干，进行瑞氏染色，干后镜检。
5．结果判断在油镜下观察，薄片须至少100个视野，厚血片至少20个视野，才能报告“未见疟原虫”；发现虫体后还应在薄血片上进行分类鉴别。
疟原虫胶体金法简易操作步骤原理基于双抗体夹心法工作原理，检测时，滴加5μL全血样本于试剂卡加样孔处，随之滴加4滴裂解液，裂解后的样本在毛细管效应下向上层析。
如样本中含有恶性疟原虫特异性乳酸脱氢酶（pflDH）和疟原虫乳酸脱氢酶（panLDH），将于胶体金标记物panLDH单克隆抗体反应形成复合物，在层析作用下前移，被预先固定在硝酸纤维膜上检测区的pflDH/panLDH单克隆抗体捕获，在检测区内形成1条/2条红色反应线，此时为阳性结果，如样本中无pflDH/panLDH抗原，在检测区内无红色反应线，此时为阴性反应。
步骤1.无菌采集患者EDTA-2K抗凝静脉血2ml。
1. 沿锡箔袋切口，撕开锡箔纸，取出疟原虫抗原检测卡，用铅笔或水写笔编号并做好登记。
2. 吸取5μL全血样本垂直滴加于加样孔A区，同时滴加4滴裂解液于加样孔B区。
3. 15分钟内观察显示结果，超过30分钟无临床意义。
疟原虫血涂片镜检技术规范
附件3疟原虫血涂片镜检技术规范一、吉氏液染色--光学显微镜（油镜）检查同时涂制薄血膜和圆形厚血膜，薄血膜须用甲醇固定，用吉氏染色液（Giemsa stain）进行染色。
吉氏染液用pH7.0-7.2的水配成3%的稀释液，可将血片插入染色缸内染色，或用滴管将稀释液滴在厚、薄血膜上，染色30min，若需快速染色，可在2ml水中加吉氏染液3滴，染色6min 。
对临床诊断为脑型疟者，宜用快速染色法，以便能尽快获得确诊依据。
现症患者至少检查100个厚血膜视野，带虫者应查完整个厚血膜，未发现疟原虫才判为阴性。
薄血膜可用于原虫形态鉴定。
以薄血膜中平均每100个红细胞中的原虫数，或厚血膜中平均每100个白细胞范围内的原虫数，推算每微升血中的原虫密度。
染色血片中的原虫核呈红色，胞浆呈兰色。
除环状体外，其他各期均可查见褐色的疟色素。
除恶性疟病例外，均可查见各期疟原虫。
一般恶性疟病例，仅查见环状体，或可见配子体。
但脑型疟病例，不仅原虫密度高，查见的环状体比一般的粗大，而且可查见大滋养体和裂殖体，疟色素呈黑褐色，这些特点对明确诊断很有帮助。
还有一点值得注意，在非洲感染的非重症恶性疟病例，其环状体往往比国内一般恶性疟病例所见的环状体粗大，胞浆较多，与间日疟原虫小滋养体相似，容易误判为间日疟原虫，但也不能同时查见大滋养体和裂殖体，这一点有别于间日疟原虫感染。
二、瑞氏液染色-光学显微镜（油镜）检查同时制作厚、薄血膜，用瑞氏染液（Wright stain）进行染色。
在厚血膜上加清水2-3滴溶去血红蛋白，染色效果较好。
染色时，先在薄血膜上直接加约1ml瑞氏液染色2min，然后在薄血膜上加与染液等量的水稀释，并引到厚血膜上共染5-6min。
其他参见吉氏液染色法。
三、荧光素吖啶橙染色-荧光显微镜检查要求涂制成直径为1.2-1.5cm的亚厚血膜，不宜过薄。
须用甲醇固定薄血膜，用清水溶去厚血膜的血红蛋白。
吖啶橙1g加pH6.5-7.0磷酸缓冲液100ml配制成1%吖啶橙母液。
疟原虫的镜检技术
单张血片染色：将处理好的血膜，加姬氏母液1-2滴，加中性蒸馏水15-30滴，染色30分钟左右，然后用清水轻轻将片上的染液冲洗干净，晾干镜检。
较理想的染色结果是红细胞为淡红或淡紫红色，疟原虫的胞质呈蓝色，核为紫红色，疟色素为棕褐色。
姬氏染液的染色方法
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疟原虫的镜检技术
采血时间 现症病人和流调普查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。
疟疾典型的临床表现分前驱期、发冷（寒战）期、发热期、出汗期和间歇期五期。
间日疟在前驱期相当于肝内期疟原虫发育，因原虫密度太低，镜检多为阴性。发冷（寒战）期相当于红内期成熟裂殖体涨破红细胞期，镜检多为裂殖体和环状体。
恶性疟原虫--环状体
环纤细,约为RBC直径的1/6，RBC不胀大 核1个，但2个常见，红细胞常含2个以上原虫
薄血膜间日疟大滋养体形态
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感染的红细胞：胀大褪色，出现形状大小相等、分布均匀、数目较多、鲜红色的薛氏小点。
虫体大小：较大。
胞浆：不规则，浅蓝色，出现阿米巴伪足，有空泡。
核： 红色，一个。
血膜的制作 用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂呈薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘，称厚血膜。无特殊要求的可厚薄血膜分载玻片涂制。
发热病人血片
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标本片
02
血膜的制作（涂片操作）
发热病人血片
涂制厚、薄血膜的位置 通常将厚、薄血膜涂在一张载玻片上。方法是将载片分为6等分，第1、2格备贴标签及编号用；厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。作为标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜各1个；门诊和发热病人血片每片1人， 涂2个厚血膜1个薄血膜， 以防血膜脱落而影响检查；
疟疾镜检程序
疟疾防治镜检程序各级医院、卫生院等医疗机构临床诊断为疟疾、疑似疟疾、不明原因的发热病人应进行疟原虫血片镜检，及时发现疟疾病人，并以带虫发病率评价流行动态和评价消除疟疾工作的真实性。
镜检工作程序：1.采血对象：临床诊断为疟疾、疑似疟疾和不明原因的发热病人(简称三热病人)。
2.化验单：临床医师开具化验单，嘱咐患者到化验室血检。
3.记：镜检人员对血检对象按照登记本要求进行登记。
4.血消毒部位：用75％乙醇对采血部位消毒，采血部位多在手指末端，也可在耳垂采血。
5.血方法：消毒部位待干后，以左手拇指和食指夹住被检者手指尖稍下方或轻轻捻转耳垂边缘，右手持一次性消毒针，迅速刺入取血部位1～2mm，然后用左手大拇指，食指和右手中指协同挤出血滴。
6.血膜制作：取清洗过的玻片2张，1张做载片，1张做推片，要求推片的一侧边缘光滑，用右手大拇指和食指夹持推片中部，用推片的左下角刮取血液4～5μL，再用该端中部刮取血液1～1.5μL.将左下角的血液涂于载片的中央偏右，由里向外划圈涂成直径为0.8cm的圆形厚血膜（厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5～10个白细胞为宜）。
用干棉球抹净角上的血渍，然后将推片下缘平抵载玻片的中线，当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，使两玻片保持25°角，从右向左迅速向前推成舌状薄血膜。
推制时速度要均匀，血滴大小，推片与载片之间夹角大小以及推片速度快慢等都可影响血膜的厚薄。
制成的薄血膜应在玻片上形成一层平铺的血细胞，细胞之间相互接触而不相互重叠。
（1）厚薄血膜的位置形状和大小将玻片划成三等分，厚血膜应位于靠右侧处，薄血膜从中间起至左格中部止。
右端空格供记录姓名、编号或贴标签。
（2）厚血膜血量为5立方毫米左右（一小滴），自内向外回转扩大，涂成直径0.8-1.0厘米大小，厚薄均匀血膜。
（3）薄血膜薄血膜血量只需1.5-1.0立方毫米左右（约半颗粒大小），涂成舌状，长约3厘米，宽约2厘米。
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疟原虫镜检血片制作与染色操作流程
1．填写登记表在“疟疾发热病人血检登记本”上为患者编号并登记其相关信息。
2．清洁玻片
3．玻片编号
用目测法将玻片分成六等分，左侧第一和等二等份用于编号。
同一患者玻片上号码应与登记本上一致。
4．采血
5．涂制厚片
（1）血量: 4～5微升
（2）位臵：玻片第三等份中央的位臵
（3）血膜大小：0.8～1.0厘米
6．涂制薄血膜
（1）血量: 1～1.5微升
（2）位臵：玻片第四至第六等份的位臵。
涂制薄血膜的血应滴在玻片中央稍偏右的位臵
（3）血膜大小：2.0厘米(宽)×2.5厘米(长)
7．吉氏染色液配制
（1）2%的吉氏染色液配制方法98毫升蒸馏水加入2毫升吉氏原液，混匀后即为2%的吉氏染色液。
也可用1支试管，按1毫升蒸馏水加入1滴吉氏原液的比例稀释染液，混匀后用于染色。
（2）注意事项2%的吉氏染色液必须现配现用。
8．吉氏染色方法
（1）待厚血膜干燥
（2）甲醇固定薄血膜
（3）待甲醇挥发干净
（4）滴2%的吉氏染液覆盖厚薄血膜，染色30分钟。
（5）取出染好的血片，连同染液在清水中轻轻漂洗一遍，洗去表面吸附的杂质。
（6）放臵干燥处晾干。
血膜面朝上，注意不要放反了。