端粒-真核细胞染色体末端的一种特殊结构

端粒-真核细胞染色体末端的一种特殊结构

端粒-真核细胞染色体末端的一种特殊结构，由端粒DNA和端粒蛋白质组成,其功能是完成染色体末端的复制，防止染色体融合、重组和降解。在大多数正常体细胞，由于所谓的“末端复制问题”，端粒随每次细胞分裂而缩短。当端粒缩短到临界长度时，即会造成细胞静止或凋亡，称之为细胞衰老。

学术术语来源---

构建人端粒酶反转录酶基因腺相关病毒2载体在人髓核细胞的表达

文章亮点：

1文章创新性地通过腺相关病毒2载体将外源性人端粒酶反转录酶基因介导入髓核细胞中，以期增强髓核细胞的生物学特性，延长其在体外的传代时间及增殖能力，并保持细胞的细胞表型，即所谓的“永生化”。

2 结果显示利用腺相关病毒2可以成功构建包含人端粒酶反转录酶基因的病毒载体，腺相关病毒2-人端粒酶反转录酶能有效地转染人髓核细胞并稳定表达人端粒酶反转录酶基因的mRNA，这为腺相关病毒2介导髓核细胞永生化实验奠定了基础，为椎间盘退变性疾病治疗带来了新的希望。

关键词：

组织构建；骨组织工程；人髓核细胞；基因转染；重组腺相关病毒2；人端粒酶反转录酶

主题词：

基因；转染；端粒；聚合酶链反应

摘要

背景：动物研究显示，自体髓核细胞移植能有效修复椎间盘退变。然而髓核细胞体外增殖能力差，这就限制了其作为种子细胞在椎间盘退变性疾病治疗中的研究及应用。

目的：构建包含外源性人端粒酶反转录酶基因的腺相关病毒2载体，观察其转染人髓核细胞后人端粒酶反转录酶基因的表达。

方法：构建pSNAV2.0-pRSV-hTERT质粒并鉴定，采用AAVMaxTM包装系统进行重组腺相关病毒2-人端粒酶反转录酶载体的构建，以PCR及酶切方法验证构建的质粒，构建成功后扩增，并纯化。利用腺相关病毒2-增强型绿色荧光蛋白载体转染第1代人髓核细胞，测定最佳感染复数。参照此感染复数值，确定腺相关病毒2-人端粒酶反转录酶对人髓核细胞转染的相关感染复数；对照组采用不含外源性人端粒酶反转录酶基因的腺相关病毒2进行转染。转染后1，2，4周分别采用RT-PCR

对人端粒酶反转录酶基因mRNA水平进行半定量检测。

结果与结论：实验成功构建了腺相关病毒2-人端粒酶反转录酶载体；并获得了滴

度达2×1011v·g/mL的腺相关病毒2-人端粒酶反转录酶载体。测得腺相关病毒2-人端粒酶反转录酶载体对人髓核细胞的最佳感染复数为5×104 v·g/cell。在以1×104，5×104，1×105v·g/cell转染人髓核后，均可检测到人端粒酶反转录酶基因mRNA的高量表达。采用RT-PCR半定量检测方法，发现以转染后2周时人端粒酶反转录酶 mRNA表达量相对最高(P < 0.05)，4周时仍可见人端粒酶反转录酶基因mRNA的稳定表达。而对照组无论在何时间点均未能检测到人端粒酶反转录酶mRNA的表达。提示利用腺相关病毒2可以成功构建包含外源性人端粒酶反转录酶基因的病毒载体，腺相关病毒2-人端粒酶反转录酶能有效转染人髓核细胞并稳定表达人端粒酶反转录酶基因mRNA，此结果可能为增强髓核细胞性能提供新的策略。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程