高效液相色谱法同时测定血清中的犬尿氨酸和色氨酸

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犬尿氨酸

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一
王瑞，唐爱国
中南大学湘雅二医院检验科，湖南长沙４０１）１０１
摘要：建立了一种能同时检测血清中的犬尿氨酸（ｙｕｅｉｅＫｎ和色氨酸（ｒｐｏｈｎＴｐ）ｋｎｒｎｎ，ｙ）ｔｙｔｐａ，ｒ的高效液相色谱－
ａｅｏｉｉ（Ｈ，ｃｔｎｔｌｐ３６）ａｌｗａｅｏ．／ｎ．Ｔｅｕｔａｉｌｔｄｔｃｏｓｏｅａｅｔｒｅｔａｆｏｒｔｆ１０ｍＬｍｉｈｌｖｏｅｅｅｔｒｗａｐｒｔｄａｒ
￣ｍｏ／Ｌ．Ｔｈｅｒｃｅｅｐｅｅｆｏｍ５５１ｌｅｏｖｒｓｏｆＴｒｗｒｉｒ９．％ｔ８＋７．ｔｎｔａｙａｎｅｄｙｖａａｏ９６％ｈｅｉｒｄａｎｄｉｔｒａｒ－ｉｔｏｎｅｅ１５ｉｓｗｒ．０％ａｄ２．％，ｒｓｃｉｌ．Ｔｈｅｍｅｈｏｓｓｍｐｌｎ６５ｅｐｅｔｖｅｙｔｄｉｉｅ，ｆｓ，ａｃａｅ，ａｄｓｉａｅａｔｃｕｒｔｎｕｔｂｌｆｒｒｕｔｅａｎｙｉ．ｏｏｉａｌｓｓｎ
（Ｌ－Ｖ）ｔｅｌｙｄａＳｍｍｅｒｈｅｄＲ－８ｃｌｍｎ（５ＨＰＣＵ＋ＩｍｐｏｅｙｔＳｉｌＰＣ１ｏｕｙ１０ｍｍ．ｘ３９ｍｍｄ，ｍ）ｉ．５ｉ．ｘａｄａｍｏｉｈｓｆ１ｎｂｌｐａｅｏｍｍｏ／ｏｉｍｃｔｔ－ｃｔｃｄｓｌｔｎｃｎａｎｎ，％（／）ｅ５ｌＬｓｄｕａｅａｅａｅｉａｉｏｕｉｏｔｉｉｇ２７ｖｖｃｏ
Ｋｅｒｓｉｈｐｒｒａｃｉｕｄｃｒｍａｏｒｐｙ（Ｌ；ｕｔａｉｌｅｅｔｎ（ｙｗｏｄ：ｈｇｅｏｆｍｎｅｌｉｈｏｔｇａｈｑＨＰＣ）ｌｖｏｅｄｔｃｉｒｔｏＵＶ）；
ｔｙｏｐｎ；ｋｙｒｎｉｒｐｔｈａｎｕｅｎｅ；ｓｒｍｅｕ
通讯联系人：唐爱国，，授，士生导师，ｅ：０３）５０５。－ｉ：ｉｕｔｎ男教硕Ｔｌ（７１５５２８Ｅｍａｌａｇｏａｇ＠ｙｈｏｃｒ．ｎａｏ．ｏｃｎ基金项目：南省医药卫生科研计划课题（２００９和湖南省科技计划项目课题（５ｋ０６）湖Ｃ０５１）０ｓ３２．
色氨酸（ｒｐｏｈｎＴｐ是人体必需氨基酸之ｔｔｐａ，ｒ）ｙ
一
ｄｏｙｅａｅＩＯ）ｉｘｇｎｓ，Ｄ的催化下合成重要的中间代谢产物犬尿氨酸（ｙｕｅｉｅｙ。当机体处于细ｋｎｒｎｎ，Ｋｎ）胞免疫激活状态时，Ｔ细胞释放的一扰素可活化干
ｔｅｌｅｒｒｇｈｅｍｅｈｏｓｏ４９ｔ０￣ｍｏｌｈｉａａｅｏｆｔｔｄｗａｆｍ．ｏ４９ｎｎｒ／Ｌ．ａｈｅｄｅｅｔｏｎｌｍｉｓ０．Ｏｎｄｔｔｃｉｉｔｗａ２
．
ＡｂｔａｔＡｍｅｈｄｗａｓａｌｈｄｆｒｈｉｌｎｏｓｄｔｒｎｔｎｏｙｕｅｍｅ（ｙｓｒｃ：ｔｏｓｅｔｂｉｅｏｅｓｓｔｍｕｔｅｕｅｅｍｉａｉｆｋｎｒｎａｏＫｎ）ａｄｔｐｏｈｎ（ｒ）ｉｅｕｂｉｈｐｒｒｎｅｌｕｄｃｒｍａｏｒｐｙｕｔｖｏｅｅｅｔｎｎｒｔｐａＴｐｎｓｒｍｙｈｇｅｆｍａｃｑｉｈｏｔｇａｈ－ｌａｉｌｔｔｃｉｙｏｉｒｄｏ
紫外检测法。采用的色谱柱为ＳｍｍｅｒｈｅｄＲ — ８（５ｙｔＳｉＰＣ１柱１０ｍｍ ×３９ｍｍｄ，ｐ）流动相为１ｙｌ．ｉ．５，，．ｍ５ｍｍｏ／ｌＬ
乙酸钠一乙酸溶液（２７乙腈。Ｈ３６，含．％ｐ．）流速为１０ｍＬｍｉ。．／ｎ紫外检测波长为２５ｔ２ｉｍ。血清标本经５Ｏ体积．％（
．
ＲｉＡＮＧｇｏｕ，ＴＡｉｕ
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第２期
王瑞，：等高效液相色谱法同时测定血清中的犬尿氨酸和色氨酸
・１１－４
相关，ｙＫｎ与Ｔｐ在血清中的含量之比是反映人体ｒ
流动相：准确吸取冰乙酸溶液、腈溶液，取乙称
ＳｍｕｔｎｏｓＤｔｒｎｔｏｆｙｕｅｉｅａｄＴｔｐａｉｌｅｕｅｅｍｔａｉｎｏｎｒｎｎｎ￣ｏｈｎｉａＫｎ
～
…Ｓｔ．ｅｍｍｙＨｉｈＰｒｏｍａｃｉｕｄＣｈｏｔｇａｈｂｇｅｆｒｎｅＬｑｉｒｍａｏｒｐｙ
前超声脱气３ｎ。０ｍｉ
供重要依据。
目前，内外科研人员主要应用高效液相色谱国
法检测Ｋｎ和Ｔｐｙｒ。由于Ｋｎ本身不能产生荧光，ｙ
干扰样品溶液：体积分数为２５用．％的高氯酸溶
液分别配制一定浓度的ＰｅＴｒ５ＨＫＮ和ｈ，ｙ，－Ｔ，ＹＡ
多种细胞中的ＩＤＯ。研究表明，ｙ、ｒＫｎＴｐ与肾脏疾
，
除了能在人体内合成蛋白质外，还可在肝、、肾脑
等组织中代谢为多种生物活性分子。在哺乳动物中，摄入的Ｔｐ绝大多数经犬尿氨酸代谢途径代谢，ｒ
２５ｎ．Ｓｒｍａｐｅｅｅｆｒｔｐｅｉｉａｅｔ．％ｐｒｈｏｉｃｄｓｌｔｏｔｅｅ．２ｍｅｕｓｍｌｓｗｒｓｒｃｐｔｔｄｗｉａ５Ｏｉｈｅｃｌｒａｉｏｕｉｎ．ｃｈｎｃｎｔｉｇｄｔｅｏｅｐｏｅｎｒｓｄｅａｄｆｎｌｎｙｅｙＨＰＣ．ＴｅｒｔｎｉｎｔｍｅｏｎｗａｒｆｅｏｒｍｖｒｔｉｅｉｕｎａｌａａｚｄｂＬｕｉｙｌｈｅｅｔｏｉｆＫｙｓ
即Ｔｐ在吲哚胺－，－ｒ２３双加氧酶（ｄｌａｉｅ２３ｎｉｏｅｎ一，－ｍ
收稿日期：０５０ —０２０ —４３
病、经精神疾病、神异常妊娠等－］３的发生发展密切
第一作者：王
瑞，，士研究生， — ｉｗａｇｕ１７１２＠１３ｃｒ．女硕Ｅｍａｌｎｒｉ９９１１６．ｏ：ｎ
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２００６年３月
Ｍａｃ０６ｒｈ２０
色
谱
ＶｏＩ４Ｎｏ．ｌ２２１０ —１３４４
ＣｉｅｅＪｕｎｌｆＣｒｍａｏｒｐｙｈｎｓｏｒａｈｏｔｇａｈｏ
高效液相色谱法同时测定血清中的犬尿氨酸和色氨酸、
稳定、可行，可应用于临床和科研工作。关键词：高效液相色谱法；紫外检测；色氨酸；犬尿氨酸；血清中圈分类号：６８０５文献标识码：Ａ文章编号：００８１（０６０ —１００１０ —７３２０）２０４－４栏目类别：研究论文
内免疫状态的敏感指标。因此，量分析血清中的定
Ｋｎ和Ｔｐ可为相关疾患的诊断治疗和基础研究提ｙｒ
乙酸钠晶体加水制成１５ｍｍｏ／ｌＬ乙酸钠－乙酸溶液（２７含．％乙腈）再用０４ｍ微孔滤膜过滤，，．５使用
分数）氯酸溶液去除蛋白质后取上清液直接进样分析测定。研究结果表明，ｙ高Ｋｎ保留时间为３５ｍｉ，性范围．ｎ线为００８— ９￣ｌＬ，低检出浓度为００￣ＶＬ回收率为９．２一３４％；ｒ．９４ｍｏ／最．２ｍｏ，０８％９．５Ｔｐ保留时间为８１ｍｉ，性．ｎ线范围为４９— ９￣ＶＬ，低检出浓度为０２ｍｏ，．４０ｍｏ最．０￣ＶＬ回收率为９．１一８６％。Ｋｎ和Ｔｐ日内、５５％９．７ｙｒ日间测定的相对标准偏差均小于４苯丙氨酸、氨酸、－％，酪５羟色胺和犬尿喹啉酸等物质对该法均无干扰。该方法简便、速、快
ｗａ．２￣ｏ／．ＴｅｒｃｖｒｅｆＫｙｒｏ９．２ｔ３４％，ｔｅｉｔａａｎｔｒｓ００ｍｌＬｈｅｏｅｉｓｏｎｗｅｅｆｍ０８％ｏ９，５ｒｈｎｒｄｙａｄｉｅ－ｎ